Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (522942), страница 119
Текст из файла (страница 119)
Ву а?!осч(пц йгесс с1опшц оЕ а РСК ргос?нсс шсо а рагВсн1аг кис оЕ а р1аяпЫ чессог, 1.!С-РСК е1нтнпасек соспр1ех сопягнсВопк йас анке ъчЬеп а чессог !ас?ск кшсаЫе с1ошпц к?сек, ог а цепеск Ьак?к Еог ксгеешпц Еог гесоспЬспапск (Ак)апйк апс? с!е )опц 1990; Нанн ес а!. 1992; Ныао 1993; Уапц ес а1. 1993; Ка1нг апс? р!тпс 1994). 5ечега! чапапь оЕ ЫС-РСК Ьаче Ъееп с?експЬей ° Атр??Е?сат?ои о?'с?те катце? тч?Из рпгиегк йат сагту ас 1еакс 24 ехтга Ьакек аг йей 5 ' еит?. ТЬеке Ьакек соггекропт? со кес?непсек ас йе епс? оЕ а 1шеапгес? р1аяпЫ чессог.
Аиср!1Всас!оп сч(сЬ сЬеке рпспегк йегеЕоге цепегасек РСК ргосЬкь счЬоке 5' епсЬ аге сошр!епсепсагу со йе 3' епсЬ оЕ йе гесср(епс 1шеапгес? р!аянЫ. ТЬе РСК ргот?нес апс? сЬе 1шеапгес? р!аяпЫ аге йеп кр!?сес? соцесЬег ш а кесопс? РСК счЫсЬ ехсептЬ йе очег1аррспц сопср!еисепсагу 3' епсЬ (5Ьн10!пег ес а!. 1990). ° ренегат?ои оЕ РСИ ргот?истк сЬаг саггу 3 '-реостат?(иц тегитти1, 12 ог тоге Ьакек т 1еицтй, сЬас аге аписа?ет? со сотир!еитепсагу япц1е-к!ганс?ет? кес?непсек ас йе 3' сегинш оЕ а !шеапгет? чессог.
Ваке ратгшц Ьессчееп йе ссчо кеь оЕ ргосгойпц са?!к сгеасек а сЬииепс ито!есн1е сЬас сап Ье шсгос?нсес? шсо Е. соц Ьу станк(оггпабоп (Ак1апйк апс? с?е !опц 1990). МейосЬ со цепегасе сотнр!еисепсагу япц1е-ягапс?ес? сас!к ас йе 3' сегпнш о( йе чессог апс! йе РСК ргос?нес шс1нс?е; ° Вхоиис1еаке гекест1ои оЕ3' тегиии1. ТЬе кецнепсек оЕ йе чесСог апс? СЬе РСК ргос?нес аге с?еяцпег? ко йас опе оЕ йе Сонг Ьакек т?оек пос осснг сч?сЫп сЬе Вгкс 12 пнс!еосЫек оЕ сЬе епс? оЕ йе 3' ягапй Сотпр1егпеисагу сас!к оЕ с?ертпес?!епцсЬ сап сЬеге(оге Ье ргос?нсес? Ьу сЬе 3'-5' ехопнс!еаке асбчцсу оЕ Т4 РХА ро!ушегаке си сЬе ргекепсе оЕ а япц1е ЙНТР ТЬе епгуше гешочек пнс!еосЫек ш йе 3'-5' йгессюн шнц и геасЬек сЬе Вгкс пнс!еосЫе йас соггекропсЬ со йе с?ХТР шс!нт?ес? ш сЬе геассюп инх.
Рнгйег ехопос!ео!ус?с йцексюп Ьу Т4 РЬ?А ро!угиегаке Ь пеисга!(гес? Ьу шсогрогасюп о(йе с??(ТР ас сЬе 3'-Ьус?тоху? сегинпсь оЕ сЬе гесеккес? ксгапй АЕсег сЬе епгуспе Ьак Ьееи шасс)часес( Ьу Ьеас, сЬе РСК ргойлсс ь аппеа1ет? со а чессог сЬас Ьак Ьееп ргерагес? 1п а я он!аг чгау (Ак! апйк апс1 с?е )опц 1990; Нани ес а1. 1992). СкЛсеп сЬе сЫисепс исо! есн1е Ь наес? со стать?отти Р2 со?Ь йе 1?Ваке оЕ йе Ьассепа! се11к кеа!к сЬе к?пц?е-к!ганс?ес? пк?ск апс? цепегасек а соча!епс1у с!окес? с(ген!аг исо1есн1е. 1п а чапаПоп оЕ сЫк шесЬос?, очег!арршц кет?непсек аге с?еяцпес? шсо йе РСК ргниегк нкес? со ашр!1?у сЬе катце! Р?4А апс1 сЬе честит.
Сои!то!!ес1 йцеяюп оЕ йе РСК ргос?псс апс? йе чессог сч(сЬ ессЬег ехопнс1еаке 111 (Няао 1993; Ы апс? Ечагь 1997) ог Х ехопнс1еаке Ь наес? со цепегасе соснр!степ!агу ргосгнйпц 3' сегинш (Ткепц 1999). Весагье сЬе очегЬапцк сгеасес? Ьу сЬе ассюп о( йе ехопнс!еакек аге кццЫ1у 1опцег йап йе согпр!еснешагу кес)пенсе, а?сег ЬуЬгЫ Еопи акоп, а ксгессЬ оЕ япц1е-к!ганс? цар гетпаспк, ъчЬ?сЬ сап Ье гера?тес? ш чсчо (ш сЬе саке оЕ ехопнс!еаке 11! ) ог сп чссго Ьу сЬе К!епосч Егацшепс оЕ Е. соц Р?к?А ро!уисегаке 1 (ш йе саке оЕ К ехопнс1еаке). ° Ргас11 РХА ц?усику!аке (РРб) с1ои?иц. !п сЬ(к шесЬос?, сЬе ргипегк наес? ш РСК со исаю с(()МР ш сЬетг 5'-сепиша1 гец(опк. Р?цексюп оЕ Йе РСК ргос?нсск сч(сЬ РРС геы1ь ш с!еачаце оЕ с?се Х-ц?усокИк Ьопс? Ьеьчееп сЬе с?еохугсЬоке геяс?не апс? нгасй ТЪск с!еачаце цепегасек аЬаяс тек(апек апс? с?ексгоук сЬе Ьаке-расппц аЬс?ссу о( йе 5'-сеппша1 кет!непсек оЕ сЬе РСК ргос?нсск (Рнпсап 1981; Рпес?Ьегц ес а1.
1981). 1п сЬск шесЬой ЬосЬ сЬе чессог апс? йе шкет! аге аспр??Есес? ш геассюпк рг?шее? Ьу нгасс!-сопса1пшц рпгпегк апс1 сЬеп сгеасес? сч?сЬ РРС. ТЬнк, счЬеп сЬе шкегс апс1 чессог аге инхес1, оп! у опе ксгапс1 оЕ шкегс ь ачас! аЫе Еог аппеа! спц ииЬ сЬе соти р! етиеисагу ксгапс! оЕ сЬе чессог (р!еаке кее Р)цнге 11-25) (И?акоп ес а1. 1991; КакЫсЬсап 1995). 5ечега! 1шеаг?тес? чессогк аге согпгпегста!1у ачас!аЫе (1л?е ТесЬпо!оц(ек) сЬас саггу с?еуспес? 3'-ргосгнйпц сепшш, 12 пнс1еосЫек ш 1епцй. ° Рптегк гонта!итц иоиЬаке тек?т?иек (Ка!нг апс? Ншс 1994).!п сЫк гиеСЬой а попЬаке геяйне (1,3- ргорапейо1) ь шсогрогасес1 ас с?еуспес( роясюпк ш сЬе о1?цопнс1еосЫе ргнпегк наес? со аспрНу сЬе шкет! РЬ?А.
ТЬЬ тиойцсаВоп с?оек пос аЕЕесс сЬе рпинпц аЫ!Ку оЕ о!сцопнс1еосЫек. Ноъчечег, с?апнц сЬе атир!тцсасюп геассюп, сЬе Р?ктА ро!ушегаке асора счЬеп и епсонпсегк йе аЬаяс ясе, гет!сспц 1п ргос?асск сЬас саггу 3'-ргосгнйпц сегинш, 12 Ьр сп 1епцсЬ (р!саке кее Ицпге 11-26), счЬ(сЬ си сЬь саке 11Л22 СЬаргег 11; Ргерагаг|оп д)гсоЬГА Г|Ьгаг|ег бпг3 бепе1Иеп1фсаг|оп ф — -„стастастаста з га гс а — гх ос с- 3 тастастастас и ив,П к х са 77 5, га В сссЕс з зра 4йййх — Ф- С1апеапгр рАМР1 ро1удпХег епб а|оп|па герое ~5 — с стас.д стасга з сг ~ а — к —— -'" о- с- З'Атоатоатоато га адг ао ф ~~ге тг В С1опеапгр РАМР10 ро!уупхег епб бопид галоп — га .а с пес о. — с .Б 3 зра Š— Ф- аг | Вди к Еа с — о е 5 аа а ог аг х га ог Ю вЂ” д — с АтсвасатСтСт З з тоатсатососа Яре| МйЛ С|опеаппр РАМР18 ро|удпйег епб о|оп~од гед|ап МГа~ Яре1 гс —, — ха АСОСОтаотаст З вЂ” Ф.
8асве аг аг ~ га ог 3'ТСТСТАОАООТА о.о е Ъ о. Б мг— «гс ау с еу й вда ггао~ С|апеАгпр РАМР19 ро|уепаег епб о|оп|па гевал ЕЗС3)3еЕ 11-25 С|опеАгп АМР Нес1огз апг3 1Ье 00С С|оп|п 51гате у (4) 5сЬегпаПс пгарз о| рАМР уес(огз. рАМР1 апг3 рАМР10 аге ЫепПса| уес(огз ехсер1 Гог|Ле зег|иепсе СГ(Ье 5)па)е-51гапг(ег( геа(оп (5Ьоип Ьеге, апг( с(езсг(Ьег( гп 1Ье |ех() гес)и)гег3 Гог аппеаПпд иг((ЫпзЕГ1 0(х(А. рАМР1 35 Гог ип1СПгес1юпа| с|огПпд оГ |пзег( 0Ь(А апг| рАМР10 35 Гог Ыйгес1)опа! с)оп)пд.
рАМР1 апг( рАМР1О соп(а|л а Ьас(ела| ог)а(п о| гер|ка(юп, |Ье апзрК|П1П ГЕЗ(51апсе депе Гог 1Ье 5Е|ЕС|юп о| (гапз(оггпег3 Ьас(епа, апг| |Ье 31 (п(егаеп(с геП)оп |голу М13 Ьас(епорЬаде Гог|Ье ргог|ис(|оп о( 5(па(е- 5(гапг|ег3 0Ь(А5. ТЬе ро(уПп(гег 35 ъи(Ып 1Ье |ас2 депе, регги(11(пе со|ог зе|ес|юп о| розйуе со|оп|ез. Нес(огз рАМР18 апг! рАМР19 аге гпог333)ег3 р0С18 апг| р()С19 уес(огз. ТЬеу Лауе а 5)п8)е-5(гапг|ес( геа)оп аг(г|ег( |и 1Ье ро|уПп3гег о|1Ье ог|а(па) чес|огз Гог аппеаПпа |о согпр|епзеп|агу РСК ргог|ис| (пзег(5.
ТЬе 5(пе)е-5(гапг|ег3 с(оп(па геа(оп сопга(пз ГЬе геМпс|юп епг|опис|еазе 531ез А(со( апг| ВПГП оп опе 5(галс|, апг| Я|и| апг3 5ре| оп 1Ье о(Ьег 51гапг3. ТЬе Луо р|азппгЬ аге Ыеп(ка| ехсерг Гог (Ье опеп(а(юп о(|Ье ро)у))п(гег гее(оп (5Ьоууп Ьеге), и ЫсЬ 35 )пуепег3, ТЬе 5)пе)е-51гапг|ег3 1а85 аге 1Ье запзе Гог Ьо|Ь 1гг1огтаггоп Рапе!5 11.123 з 5'«Ф — — — о аоиз %4% 5' сс . 3 С!опеАпгр рАМР1 кимр-вресис рг1спег 1аав 5«5' асг, "4С оа — а з 3' 5'~ — — ( 5' 'сс С!опеАпгр рАМР10 бимр-вресвс рпппег 1аав Оз ~С(г — ве.
з 3' 5' «Ф — — — — СО СС, 5' С!опепп1р РАМР!8 апи РАМР19 иимр-вресйс рпгпег 1ам 3' 5' Ф вЂ” — о 4С Сгас 5' ЯС„ ссвс — с 3 3' аппеа! би рггпегв 1о ОГГА агпрОу Ьу РСВ АТОАТОАТОАТО 3' иАсиАсиАсиАс 5' 5' сиАсиАсиАсиА 3' ОАТОАТОАТОАТ аии агава ОВГА 91усову!аве (иОО| иЫ РАМР1 сг С.
МС. МС. Мс, 3' ОАТОАТОАТОАТ АТОАТОАТОАТО '4С, МС, С. ~пвеп ОВСА 5' аппеа1 а1 ЗТ'С 1ог 30 го~посев ЕсСССССЕ 11-25 (сопС(пиес() с|опез апг( сап Ье изес( (ог г((гесг(опа! с|оп1пд о( ап 1пзегС. ТЬе несгогз сопга1п а Ьас1епа! ог(д(п о( гер||- сасюп апг( (Ье агпр|с||||п геямапсе депе (ог сде зе|ессюп о( сгапз(огпсег( Ьассег|а. тЬе ро(у(|п(гег, ъч|сЬ1п СЬе (ас2 депе, репп115 со|ог зе|есдоп о( роз|С!че со|оп|ез, (В! г((1МР РСК рппсег Са((5 (ог рАМР1, рАМР10, РАМР18, апг( рАМР19. ТЬе зег(иепсез 5Ьоип 1ог еасЬ с|опе аге гег(и(гег( а1 1Ье 5' епс( о( о(|допис(ео(|г(е рпгпегз 1о Ье изег! сог РСК апср((((саг!оп. (С! рАМР с|оп|пд рго1осо!.
РСК рппсегз ипСЬ рАМР-зрес|йс зег(иепсез аг СЬе 5' епг( аге изег( 1о апсрИу С)й(А. РСК ргог(ис(5 аге Сгеагег( ип1Ь С!0С 1п сЬе ргезепсе о( а согпрас|Ые рАМР чессог (зирр||ег! аз а ||пеаг гпо|еси|е!. тЬе нессог апс! (Ье |пзегс аге СЬеп аппеа(ег(, апс! СЬе гесопсЫпапС р(азгп|г( !5 (гааз(оггпег( Ы(о согпреСеп( Ьас1епа. Рпгпег-зрес|йс зег(иепсез (ог РАМР1 аге здоигп |п СЫ5 г(|адгапс ТЬе рго1осо! |5!1|епСгса! Еог ад ос СЬе рАМР с|опез. (Аг(аргег(, ип|СЬ регпс(55|00, (гогп (1(е ТесЬпо(од|ез, |пс.! 11.124 СЬаргет 11: Ртератаг!оп и!~сР1чА 1лЬтапеь ипг! Сепе Ыепгг!гсог!оп ригиег 1 асаатаасааахассслалтатслтттлал сааатстлслатлллтст ттатттллллаттлллас ллслллттттсллтттсахсаасалалтст ригиег 2 Е!С!1КЕ 13-26 Сепета!юп о1 РСК Ргог!пс!а Саггу1ии Рго!гиг!!ии 3' Тегш!и!!и РСКа гч1!Ь Рпшета Соп!ашш !Ье !9опЬаае 1,3-Рго апет!!о! ТЬе 1осааои аиг! пас ог рптиета сои!а!и!па йе иопЬаае 1,3-ргораиег!!и! аге 1иг1!сагег! ъч!ГЬ аи Х. (Мог!!!1ед, и!!Ь рет тиха!ои, Ьот Ка!их аис1 Е1!пГ (! 994 !Ох!огг! Ои!чета!!у Ргееа!.1 аге сагир!егпеигагу го йе 12-пис1еогЫе геа1опк Ваи1г!па гЬе №г1 яге ау гЬе В1иеасг!Рг чессог.
ТЬе 1пяегг ь аписа!ег! со а №г! 1!иеаг!хег! апг1 ехоппс!еаае-111-ггеасег$ чесгог, ап<1 !Ье ген!!шц сЬипега Ь паег! го сгапагогш Е. со1Е АЬаа!с геаЫиеа аге гешочег! апг! аарв аге гера1гег! Ьу гЬе герай шасЬ!песу оуЬасгегга1 се!!л юЬ!сЬ гееи!ь ш гепогагшп ог" гЬе №г! яге. ° Юе и! ти!г1р!е ртзтетг го гтеаге сотр1етеигиту агащетег! очетЬапр ои Ьой таетг апг! чеггот Ьу а роаг-РСК депо!итог!оп-ЬуЬтУвхиг1оп теист!оп !Еш 1996; Т!11еГг апг! Ме1!ап 1999Ь Е1аЬг аеп ау ргппега лиг! уоиг зерагасе РСКа аге гег1и!гег! го аепегаге !что РСК ргог!пега (гагаег 13лгА апг1 чесгог1 гЬаг сап Ье г!епагигег! апг1 аписа!ег1 со у1еИ п!с$сег! сггси!аг гесогпЬшапь йаг сап Ье пает!, гч!гЬоиг 1пгйег гпашри!агюп, го ггапагогш Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
