Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 88
Текст из файла (страница 88)
тсесошЬ)пап| ЪастегюрЬацез шаде ш й|з ччау сап ш йеогу саггу йе тоге)цп !ЭХА зе|р|епсез |п тччо розяЫе опешабопз. Ботпе6тпез, Ьоччечег, Ь Ьаррепз йат тпоы от" йе рори!атюп от" гесошЬ|папь саггу йе 1пзеы 1п |Ье затпе опепта6оп. ТЬ)з рЬепотпепоп оссигз Ъесатье зет!иепсез оп оррояте зтгапдз от" йе тоге)цп РХА штегтеге то чагушц ехтепь тч1|Ь йе |иост)оп)пц от йе 1птегцеп|с гец)оп. ТЬе ргоЫегп сап Ье очегсоше Ьу с1оп|пц |Ье тоге)цп РХА ат а д)ттетепт я|е тч1|Ь)п йе пю16р1е с1оп)пц яте ог Ьу ияпц а сотпЪ|па6оп от" гез|пс6оп епкушез йат тч1!1 а11очч д)тест)опа! с!ошпц 1р!еазе зее Ье1отч).
А1|егпабче1у, а гечегза1 ехрегипепс сап Ье аттетпртед ш ччЫсЬ тср РХА |тоти йе от)ц)па) гесотпЬ)пап| 1з д)цезтед тч1|Ь йе гезтпстюп епкуше изей тот с1опшц, ге!1цатед, апс1 |ьед то тгапзтотш Е. со!|2 Ясгееп)пц от" |Ье гези16пц ччЬ)те р1ат)иез шау у|е!д с1опез саггушц |Ье шзет| 1п йе оррояте опеп|а6оп. !п цепега!, Ьо|чечег, 1т 1з пот адч1заЫе |о Еогсе ЬассепорЬаце М13 чес|огз то ргорацате ипчче1- сотпе зет)иепсез от" тоге)цп РХА.
ТЬе тези16пц гесотпЬ)папь аге оттеп ипзтаЫе ап|1 ц)че пзе со ргоцепу йас саггу де1етед ог геагтапцед чегяопз от" йе тоге)цп зес)иепсез. А розяЫе зо!и|юп то |Ь~з ргоЫетп ь то ргорацате йе тоге)цп РХА ш р!аяп|д честогз йа| сагту ап от)ц)п от" гер11са|юп депче|1 тгош а тт)ашептоиз ЬастепорЬаце (рЬацепидя р!еазе зее ртотосо1 8). ° Тгеаттепт оу честог РХА тч1т)т а!1са1те р)тозр!татазе. Аттег 1|пеапта6оп чдй а ыпц1е теыт|с6оп епгутпе, йе честот 1з дерЬозрЬогу!атед то гедисе 1тз аЬ111ту |о тес)гси!або |1иппц 11ца6оп апд |о |псгеазе йе ргорог6оп от' гесотпЪ|пап| с1опез (р!еазе зее СЬартег 1, Ртотосо1 20, апд СЬартег 9, Рго|осо1 ! 3).
ТЬ|з ь йе шейод от" сЬо)се ччЬеп |Ье апюшы от" тоге)цп РХА ь !ипшпц ог ъчЬеп 11ца6пц Ыипт-еп|1е|1 РХА тгацшептз 1пто ЪастепорЬаце М13 чессогз, тот ехашр1е, тчЬеп сгеабпц 11Ъгапез от" М13 зиЪс!опез тот зет)иепс)пц (р1еазе зее СЬартет 12, Ргососо1 1). ° Рогсед ог 61гест1опа! с1отпц. ТЬе пш!6р1е с1оп|пц я|е от" йе честит сап Ье с)еачед чч1|Ь ттчо д)ттегепт гезтпсбоп епхушез, цепегабпц пю1еси1ез тч1|Ь ~псотпра6Ые сепшш |Ьат |1о пот пеед |о Ъе дерЬозрЬогу!асед ЪеЕоге изе. ТЬе честог ь 1|цасед то а опе- |о тЬгеето1д тпо1аг ехсезз от" тоге)цп РХА тчЬозе |еппии аге сотпра6Ые чч1|Ь |Ьозе от" йе честог.
ТЬ)з зтгатецу тчог)сз чче1! |чЬеп с!ошпц а япц!е зецшепт от" Гоге)цп РХА ш а деягед опеп|а|юп ъч1|Ь)п М13. Ночтечет, |т 1з с1еаг!у ипзштаЫе 1ог йе сопзтгистюп |и М13 от 1|Ьгапез о1')агце РХАз с1опед ш тАСз, Р ! чес|отз, ог соуп)дз. Р)тес6опа! с1опшц тпау а!зо ргоче то Ье а 11аЬ111ту ччЬеп ыпц)е-зтгапдед тешр1атез аге тьед то детегпппе йе зет)иепсе от а зецп|епт от' тоге)цп РХА ог со цепега|е гад)о!аЬе!ед зтгапд-зрес16с ртоЪез. 1т' а "ишчегза! рпшег" ь тьед |и йе геастюп, йе зеср|епсез оЬ|а)пед чч1!! Ъе гезтпсте|1 со йе 200 — 700 пис1еот|дез от" тоге)цп РХА 1шшед)ате1у дотчпзтгеаш 1гогп |Ье рг)шет-Ъ)пд)пц яте; гад)оас6че ргоЬез чч)П сотгезропд то оп1у опе от йе зтгапдз от'|Ье тоге)цп РХА. Опе зо1итюп |о |Ьь ргоЫетп 1з то шзегт йе тоге)цп РХА зерагате1у |п|о еасЬ шешЪег от" а ра|г от" ЪастепорЬаце М!3 честогз (е.ц., М13шр18 апс1 М13шр ! 9) йат сатгу йе ро1ус1оп)пц яте 1п орроя|е опеп|атюпз.
8|пц!е-зтгапдед сетпр1атез ргерагед тгош |Ьезе гесогпЬ)пап|а тч111 у)е1д йе тегпппа1 зет!иепсез от" еасЬ от йе тччо зтгапдз от'|Ье тоге)цп РХА; гад)о!аЬе!ед ргоЬез сап Ье цепегатед йат тч!1! ЬуЪ|161хе зрес|6са11у со опе зтгапд ог йе ойег от" йе тоге)цп РХА. ргогосо! б: С!опгпе тго ВасгеггорЬаее А413 $ессогяг З.З.' МАТЕЙ!АсБ СА()Т1ОЬС: Р1еаяе яее Аррепс(1х 72 !ог арргорпасе ЬапсИ!па оЕ гпа1епа!я гпаг1сед ипй <1>.
ВиЕ1егь апг! ьо!66оп5 Р1еаяе яее Аррепс(!х ! Еог согпропеп1з оЕ ясосЬ яо!в6опз, Ьи((егз, апс1 геаееп1з. 011и1е ясосЬ яо1о6опз 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1га6опя. АТР (70 тм) Ейапо! (РТС (20;4 и(ч) РЬепо);сЬ!огоуогт (7г7, я)ч) <! > 5осВипс асесаге (3 М, рН 5.2) ТЕ (рН 7. 6 апг( рН 8.0) Х-Ва! (2~' и)ч) <! > Епгугпеь апе! Вийегь Вас!ег(орЬаде Т4 ОНА !!Вазе Вея(г(с((оп епг(опис!еаяея ТЬе сЬоссе оЕ гезспссюп епауспез Со Ье цзегс сп 5серя ! апсс 6 черепе(я оп сЬе с!оп!па ясгасеау. Се!ь АВагояе Ве!3 (084) сая! и 7 х ТВЕ, соп!а(п(пд 0.5 СсВ(т! е!Ь(с((ит Ьготгс(е < ! > Р1еаяе яее 5серя 2, 6, апс1 9.
Мнс!е!с Ас!ЕЬ апс! О!!Вопис!ео64!еь ЕогегВп ОХА 1пс(!чЫпа! Егаашепся оЕ (осе!оп Г)ЬСА со Ъе с!опес1 сп М ! 3 чессогя аге пзпаПу с!ег!чесс Ьош а 1агаег яеашепс оЕ !374А сЬас Ьая а1геасСу Ьееп с!опес! апсС сЬагассег!аес( ш апосЬег чессог. Рог шесЬос(з со соппгпсс М 1 3 1сЬгапез о( ос4А зеашепсз с!опас( ш ЪАСз ог осЬег аепоппс чессогз, р1еазе зее СЬарсег 12, Ргососо! !. Тез! ОХА Р!саяе зее посс ас Всер 7. Мее!!а УТ ог 18 аВаг р!а(ея УТ ог ЕВ тесаит УТ ог !В Гор аВагог аВагояе Бресса! Ес!и!ргпеп$ СиИиге гиЬея (5 пс! ог 75 пс(, е.В., Еа!соп 2054 ог 2006, Вес(оп О(с)г(пяоп), сЬВ(ег! (о 0"С Неас(пВ Ь!ос(г ргеяе! (о 47'С (се-иа!ег Ьай Яасег Ьайя ргеяес (о 72 — 76'С апг) 42'С АЕЫЖопа! КеарепГВ 5(ер 4 о( !Ь!я ргогосо! гес(и(гея йе геаВепгя !!я!ес( гп СЬар(ег 7, Ргогосо! 20.
Чес$огь апг! Васйег!а! Яга>пь Вас(епорЬаВе М73 чессог ОНА ЯЕ) А !агае пшпЬег оЕ Ьассег(орЬаае М 1 3 чессогя, ег(п!Ррес( счссЬ а жЫе чапесу оЕ с!оп!па я!сея, аге ачас(- аЫе Егош ЬосЬ сопппегсса! апс! асас(епИс зопгсея (р!еаяе зее Рсапге 3-4 апс( Аррепйх 3). 3.36 СЬаргег 3: ССеог)сси8 счЕГЬ ВассегсорЬа8е М13 Сгессогз Е. соП согпресепс се!!з оЕ аи арргориасе зсга)и саггут8 ап р' рlазтсгЕ Согоресеос сеПз гоау Ье ргерагед !и сЬе !аЬогасогу аз дезсг!Ъед !и СЬарсег с, Ргососо! 25 ог рогсЬазгд !гого соинпегс!а! зорр1!ега.
Е. соП Е' р!агт8 Ьасгегса Р!аби8 Ьассеиа гоау Ье ргерагед !и ЕЬе 1аЬогасогу аз дезсгсЬед !и Рюсосо! ! ог ршсЬазед бого союгоегс!а! зорр!!егя МЕТНО0 Ргерага6оп оГ ЧесГог 0)ЧА 1. Р18езс 1 — 2 Сс8 оГ сЬе ЬассепорЬа8е М! 3 чессог ПЕ Р!чЕА со сошр!едоп ччссЬ а сЬгее- со 6чеГо!д ехсезз оГ йе арргорпасе гезсгссссоп епгупсе!з). 5ес ир а сопсго1 геассюп сопсаспсп8 М13 ЕЕ РХА Ъис по гезспссюп епгушеЕз). 2. АС йе епс1 оГ йе спсиЪадоп регюд, геиюче а зшаП зашр1е оГ РХА Е50 п8) 6ош еасЬ оГ йе геас6опз апд апа1уге СЬе ехСепС оГ е68ез6оп Ьу е1есСгорЬогездз СЬгои8Ь ап 0.898 а8агозе Пе1.
1Г г68ездоп 1з спсогпр!есе Гс.е., сТ апу с)озед сггси!аг РХА 1з ч)зЕЫе), агЫ псоге гезспссюп епгупсе1з) апд сопсшие сЬе 1псиЬасюп. Ргерагасюиз оЕ Мсз Вр !3гаА сап сои!а|и з!Ви!Ессаос агпоопь оЕ з!п8!е-зсгаодед Мсз ЕгС!А, тчЬ!сЬ аге ч!з!Ые аз Еоггу, Еазсег-госзгас!и8 Ьаодз !о азагозе Ве! е!ессгорЬогеяз. Весаозе зю8!еасгапдед СЗЬЕА ь оос с!еачед ейк!епс!у Ьу гоозс геяиссюи епгугоез, сЬе арреагаисе аггд июЬ!1!су оЕ йезе Ьаодз зЬоо!д Ье гдеобса1 !о сЬе соосго! аид сезс !аоез. 3. чСгЬеп с68езгюп сз сошр1еСе, рипГу йе М13 Р!ч!А Ъу ехСгасСюп счсСЬ рЬепоЬсЫогосопп Го1- 1осчед Ьу зсапг1агг1 ргессрЬаиоп счссЬ ейапо! ш сЬе ргезепсе оГ 0.3 счс зосПшп асесасе (рН 5.2).
Р)ззо1че СЬе РХА 1и ТЕ (рН 8.0) аС а сопсепггадоп оГ 50 Сс8Еш1. 4. 1Г гег!шгед, дерЬозрЬогу1асе сЬе Ппеапгед чессог РЫА Ьу сгеасисепс ччссЬ са! Г аПсаПпе рЬозрЬасазе ог зЬпгпр аПса!спе рЬозрЬасазе. Ас сЬе епс1 оГ сЬе дерЬозрЬогу1а6оп геас6оп, 1пасПчасе сЬе аПсаПпе рЬозрЬасазе Ьу Ьеас апдlог Ъу с68ездоп счссЬ ргосеспазе К, ГоПоъчес1 Ъу ехсгасдоп чгссЬ рЬепоЬсЫогоГопи (Гог десаПз, р!еазе зее СЬарсег 1, ргососо1 20). 5. Еесочег йе!шеапгед М13 Р!ч!А аз опс1спед 1и 5сер 3. Рсззо1че йе дерЬозрЬогу1асес1 РЬЕА сп ТЕ ГрН 7.6) аС а сопсепСгадоп оГ 50 Ес81ш1.
РгерагаГ!оп оГ Еогефп 0МА $о Ье С!опее! 6. Сепегасе гпсПчЫиа1 гезспсдоп Гга8шепсз оГ Гоге18п РХА Ьу с1еача8е ччссЬ йе арргорпасе гезСпсдоп епгушез апд рипГу йеш Ъу а8агозе 8е1 е1есггорЬогезсз. Рсззо1че СЬе 6па1 ргерагасюп оГ Гоге)8п РХА ш ТЕ ГрН 7.6) ас а сопсепсгасюп оГ 50 )с81ш!. Йцабоп "сАЕЬеп 1г8адп8 РХАз ччссЬ сошр1ешепсагу соЬеяче сегипп1, р1еазе ГоПосч 5серз 7 — 9 Ье1очч. Рог шейодз Со зег ир ЫппС-епс1ес1 68адоп геасдопз, р!еазе зее СЬарСег 1, РгоСосо1 19. 7. !и а ш)сгоГи8е шЬе (ТиЬе А), иих со8есЬег -50 п8 оГ чессог РЫА апд а опе- со 6чеГо1д гио1аг ехсезз оС сЬе саг8ес (Гоге)8п) РХА Гга8гпепс1з). ТЬе сошЪспес1 чо1шпе оГ сЬе ьчо Ргогоео! 6: С!оигиц Ыго ВагсепорЬаде М13 Ъегсогяг 3.37 РЫАя яЬопЫ пос ехсеес) 8 Сл1.
1Е песеяяагу, асЫ ТЕ (рН 7.6) со ас))пяс йе чо!шпе со 7.5 — 8.0 )л1. Ая сопсго15, яес ир йгее 1!цас!оп геаспопя сопла!п!пц: ТиЬе Р)х)А В йе яате агпоппс оЕ чеесог Р)х)А, Ьпг по Еоге!цп Р!чА С йе вате агпоппс оЕ чеесог Р)я(А апг1 а опе- со ллчеуо!д пю(аг ехсеы оЕ сЬе сагцес Р)я)А Егацтепс(я) Р йе яагпе аплоппс оЕ чеесог Р)х(А соцейег яч!ЕЬ ап есрла1 агпоппс Ьу чге!ВЬс оЕ а сеял РЫА сЬас Ьая Ъееп япссеяяЬлйу с!опт лпсо ЬассепорЬаце М13 оп ргечюпя оесаялопя Ая а сеяс РЕ4А, чге гоосше!у ше а ясапя)агс) ргерагасюп оЕ ЬассегеорЬаце 2 РС4А с)еачес( ячссЬ геяпссюп епяулпея сЬас гесоцпие сесгапос!еосЫе яеялиепсея апя) Вепегасе сеппшс сЬас аге соплр!егпепгагу Со СЬе М!3 чесгогя Со Ье ыей 8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
