Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 84
Текст из файла (страница 84)
6. АсЫ 40)г! ог" 250 Х-Ва1 гю1Шюп апг! 4 р! ог" 20% 1РТС гю1иВоп го еасЬ ог" гЬе гиЬея сопгагп- гпВ сор аВаг. 1шшес))аге!у роиг йе сопгепга ог опе ог гЬеае гиЪек шго опе ог гЬе !пгесгег) си!- гоген. М!х гЬе си1гше гч!1Ь гЬе аВаг/арагоне Ъу Вепс1у чогсехшВ гог 3 ьесопйз, апй гЬеп роиг гЬе пихшге ошо а 1аЬе1ес1 р!аге сопгапипВ 1В ог г Т аВаг шес)!шп вирр!ешепгес) гч!1Ь 5 гпМ МВС1, апс) ег!и!1!Ьгагес) го гоогп гегпрегагше. Вгч)г! гЬе р1аге Вепг1у го епяше ап ечеп с)!ьгг1- ЪиВоп ог' Ьассепа апд гор аВаг. Ч'ог!г г!и!сИу ю гЬас йе гор аиаг ьргеасЬ очег гЬе еииге ишиасе оу йе аааг Ьегоге а ась. 7. Вереаг гЬе аг!йг!оп ог' гор аВаг гч!гЬ Х-Ва! апд 1РТС Еог еасЬ гиЪе ог" 1пгесгес) си1гиге ргерагег) ш 5!ер 5.
8. Вер!асе йе!н)а оп гЬе р1агеь апс1 а1!огч гЬе гор айаг!аВагоье го Ьагс1еп гог 5 пипи!еь а! гоош сешрегагиге. чгг!Ре ехсеаа сопг!епьаг!оп огг" йе!нЬ мг)гЬ К!шгч!Рея. 1пчегг гЬе р1агек апс1 !псиЪаге гЬеш а! 37'С. Ра1е Ыие р!ациеь Ьеа!и го арреаг аугег 4 Ьоигг. ТЬе со!ог цгаг!иа!1у !пгепг!Век ая гЬе р!аг!иез еп!агае. Вече!орпгепг оЕ Ъой р!ациея апг! со1ог ы соигр!еге айег 8 — 12 Ьоигя ог" гасиЬаггоп, ТЬе Ыие со1ог гч!!! !пгеш1гу 6лггЬег !г гЬе р!агег аге р!асег! гог гечега! Ьоига аг 4 С ог ехаги!пе4 ааа!иьг а сапагу уе!!огч Ьас!гигоипй Рго1осо! 2 Сгочлпц Вас1епорЬауе М13 ~п Мцыри Си!Шге тоскк ог влствв!орнлсв М13 лвв г!кгклгеч своччм гп 1щп)й сп!Шге.
ТЬе гпЕесгес1 Ъасгепа йо пог 1уке Ьпг шкгеай Пгокч аг а к!окчег гЬап поггпа1 гаге го Еопп а сП1ше кпкрепк!оп. ТЬе 1посп1шп оЕ Ьасгег)орЬаце )к а!гпокг аЬчаук а ЕгекЫу р!с)сей р1ас)пе ог а кпкрепяоп оЕ Ьасгег!орЬаце ратас!ек оЬгашей Егогп а япП1е р1аг)пе. !пуесгей сеПк сопка!и пр го 200 соргек оЕ йопЫе-кггапс1ей Кр РЬЕА апй ехггпйе кечега! Ьппг1гес1 ЬасгегюрЬаце рагПс1ек рег ПепегаПоп.
ТЬпк, а 1-ш1 спПпге оЕ 1пЕесгей сеПк сап ргос1псе епопПЬ с1опЫе-кггапйей ч)га! Р)к)А (1-2 )га) Еог гекггкйоп шарр)пц апс1 гесочегу оЕ с1опес1 Р)к)А |пкегкк апг1 кпЕПс)епГ к!пП1е-ккгапйей РЬЕА (-5 — 10 )га) Еог якесПгесгей шпгауепек!к, Р)к)А кег)пепе)пц, ог купЕЬеяк оЕ гасПо!аЪе1ей ргоЬек. ТЬе Пгег оЕ Ьасгег!орЬацек гп ЕЬе кпрегпагапг Егогп !пЕесгес1 сеПк 1к ко Ь!дЬ (-1Огк рЕпуш1) ЕЬаг а япаП аПс)пог кегчек ак а регшапепг к!ос)с оЕ г!ке кгагПпВ р1аг)пе. А1гегпайче1у, 1агцег чо1шпек оЕ ЕЬе кпрегпагапс сап Ье окей го кса1е пр ЕЬе ргойпсйоп оЕч!гпк, Кр Р!к)А, апй к!пВ1е-кггапйей Р)к)А (р1еаке кее Ргогосо! 5).
Мокс шап!рп1аг!опк !пчо1ч)пВ ЪасгегйорЬаце М13, !пс!псПпП ргерагайоп оЕ чгга! к!ос)ск апс1 гко1агюп оЕ к!пП!е- апй йопЫе-кггапс)ес1 Р)к!Ак, Ъеа)п ългЬ япаП-кса!е !н!шс1 сп1гпгек. ТуркаПу, а р1аг)пе !к р!с)сей Егогп ап айаг р1аге апс1 аййей го а 1 — 2-гп! а1нрю! оЕ шесПшп сопка!и!пц пшпЕесгей Е. соП сеПк. Айег а 4 — 6-Ьопг репой оЕ цгокчгЬ (р1еаке кее ЕЬе 1пЕоггпагюп рапе! оп СКОччтн т1МВ5), ЕЬе Пгег оЕ Ьасгег)орЬаае рагйс!ек !п ЕЬе шее)шш геасЬек -10" руп!ш!, ъчЫсЬ !к кпЕПс!епг Еог ЕЬе кпЬкег)пепг 1ко1аг!оп оЕ ч)га) Р)к)А ог Еог кгогаВе ак а кгос1с ко1пг!оп.
МАТЕ!к! АЬЬ Мее11а ЕВ тесаит сопкагп!пВ Геггасусапе ог )гапатус!и ТЬеке гпесва аге пеег!ег! оп1у гЕ а геггасус1гпе-геякгапг кггагп оЕ Е. со!Е кпсЬ ак ХМ-В!пе, ог а 1гапагпус1п-гек!кгапг кгга!и о! Е. го!1, кпсЬ ак ХМ -В1пе МКр' Кап, и окей го ргорацаге ЕЬе чгы, ог 5иррЕетепсесЕ М9 т!и!та! теовит тЧЬеп пяпВ В сов кгга!пк гЬас саггу а де!ег!оп оЕЕЬе рговпе ЬгокупгЬе6с орегоп (гг!!аг-ргоАВ1) ш ЕЬе Ьасгепа1 сЬгогпокопзе апг! гЬе согпр!егпепйпВ ргоАВ допек оп ЕЬе р' р1акгпнЬ ые корр!егпепгей Мч пппппа! спей!пгп.
УТ ог ЕВ гпесаигп 2х УЕ тесаит сопка!и!пВ 5 гпМ МВС! прес!а! Ее!шртеп1 5гегйе гоогЬр!с)гк ог !поси!айпи пеей!ек ог СЕакк сар!!!агу ЕиЬек Е50 рб Рготосо! 2: Стоги)пц ВастепорЬаце М)3 сп Е)т)ии) Си!тите 3.21 ЧесЕот5 апе! ВасЕетса! Ята3п5 ВастепорЬаце М73 р)ас)иее р)атее) опто ап ацаг ог ацагоее р)асе рат тпесЬадз са ргабнсе Ьассег)арЬаце М|3 р)ат)нее |и сар ацаг аг ацагоее, р)еаее атее е|сЬег Ргасаса1 3 аг а аЕ |Ьи сЬарсег. Е. соП Е' я!тат, цгоип ае са|е))-)ао)атее) со)ол)ез оп ап ацаг р)ате раг а )ьс аЕ Е. саВ атга)пе анссаЫе Еаг |Ье ргарацас)ап аЕ Ьассег)арЬаце М|3, р)еаее еее ТаЫе 3-2 ш йе шсга|)нссюп са тЬ)е сЬартег. 5тгеа)с а шаяег сн1снге аЕ ап арргарпасе Ьает апса ан М9 пипнна! ацаг р)асе аг, Еог ап6Ьюис-геяяанс |статна анса ан ЕВ р1а|е санта)н)нц йе арргарпа|е ан6Ь~абс. )пснЬасе Еог 24-3а Ьонге ас 37'С.
Вастег)арЬаце М)3 янц!е-астанде6 Р)4А то Ье шед ае а театр!асс Еаг а)35апас)еас)6е-6)гестед шнсацепеа)ь |Ьан)д Ье ргорацасед ш В саП Г ьста)на Ъеаг)пц пшса6ап| |и йе т)иг апд ии5 Венея Раг а Веса))еб ргасасо! Еаг Вгатт|Ь аЕ Ьассег)арЬаце ш тЬеае |сга|пя р)еаее атее СЬар|ег 33, Ргасаса) |. МЕТНО0 1. 1поси1асе 5 п|1 оЕ аирр)етпепсес) М9 п|ейшп (от, Еог ап6Ьюс)с-гее)есапс яга|пя 1В шейшп ьчсЬ йе арргорпасе ап6Ъ|оск) ичсЬ а япц1е Еге|Ыу цгомп со1опу оЕ Е. соВ саггу!пц ап Г р)аяпЬЬ 1псиЬасе сЬе си!сиге Еог 12 Ьоига ас 37'С ичсЬ |по|)егасе аЬа)с)пц.
Ага)6 Вгосапц сЬе си!сиге са яа6анагу РЬа|е, |иЬ)сЬ )нсгеаееа сЬе г)е)с аЕ )аа)пц сЬе рй епсос1е6 Ьу |Ье Р' р)аяпЫ. 2. ТгапаЕет 0.1 ш1 оЕ СЬе Е. соВ си1Сиге )пСо 5 ш1 оЕ 2х с'Т тпейшп сопСа)шпц 5 гпМ МВС1,. 1псиЬасе сЬе си!сше Еог 2 Ьоига ас 37'С мчсЬ утцотоиь аЬа)с)пц. 3. Р)!исе йе 5-тп1 си1сиге шсо 45 тп1 оЕ 2х т'Т сап|а)п)пц 5 тпМ МВС1 ап|1 йарепае 1-ш! а))с)носа шсо аа |папу асеп)е сиЪеа (13 х 100 пип ог 17 х 100 пип) аа йеге аге р1ас)иеа со Ье ргорацасей Р)арепзе сто абсцбопа1 а)щиоса Еог иае аа роа)6уе апт) пеца6уе сои!го!3 Еог ЪассегюрЬаце цгосу|Ь.
5ес сЬеае си!сигеа аяг)е Еог иве ас 5сер 7. 4. Р|арепае 1 тп1 оЕ'т'Т ог 1.В шес1штп !псо асег)!е 13 х 100-шгп сиЪея Ргераге аа |папу сиЬеа ае йете аге р1ат)иея Р)арепее сйо а|1йсюпа! а!1|)иота Еог иае ае рояс)уе апс1 пеца6уе сап!го!а Еог ЬассегюрЬаце цгосисЬ. 5. Ргераге а й!ше аиарепяоп оЕ ЪассепорЬаце М13 Ъу соисЬ|пц |Ье еигЕасе оЕ а р)аг)ие ичсЬ сЬе епс1 оЕ а асег)!е )поси1абпц пеес)!е ап|1 пшпегяпц |Ье еп|1 оЕ сЬе пеет)1е шсо йе т'Т ог 1.В шейшп. Р)с1| опе Ыие М13 р!аг)ие аа а роябуе сопсго! Еог ЪассепорЬаце цгои сЬ. А!во рк1| ап агеа оЕ йе Е.
соц 1асип Егоп| йе р1асе |Ьас с)оеа пос сопса)п а р1ат)ие аа а пецабуе сопсго1. Р!еаае аее сЬе рапе! оп Рссс(си)С РЕАОС)Е5 оп йе Ео!1оьчпц раце. 6. А)!оси йе аиарепяоп со агап|) Еог 1-2 Ьоига ас гоотп сешрегасиге со а!!ой |Ье ЬассепорЬаце рагс)с!еа со т))ЕЕиее Еготп сЬе ацаг. Ан амегаВе р)аЧае санта)н| Ъет|иеен |О| ани |О| ррн ТЬе шареняап а!Ь*с|епарЬаае рагс)с)ес сан Ье есаге6 ш|)ейш|е!у ш ЕВ п|ейшп ат 4'С аг — 20'С ичсЬанг 1ая аЕ лаЬ|1|су. 7.
Е)ае 0.1 тп1 оЕ йе ЪассепорЬаце аиарепыоп (цсер 6) аа ап )поси1шп со )пЕесс 1-тп1 си1шгеа оЕ Е. соц (5сер 3) Еот )ао!ас)оп о( мтга) РЫА. 1псиЪате |Ье )поси1асес) сиЪеа Еог 5 Ьоиге ас 37'С мчсЬ шос)егасе аЬа)с)пц. А)се|пас)ие)у, стана(ег а р)ат)не йгес|1у пиа |Ье Е. саП сн1|иге; ТаисЬ йе ьнг(асе аЕ |Ье сЬатен р!аЧне |истЬ йе еп|! аЕ а есег)!е )наса!ас)пц пее6!е, ан|! нп|пейасе!у )шшегее сЬе еп6 аЕ |Ье нее- 6)е |пса сЬе шЪе санса!и)нц сЬе 2х ТТ п|ейшн (Втер 3). Я|а1|е йе снЬе лцаган|1у са 634!адце явац Егацшепсь а! ацаг (аг ацагаее). А )МРО)СТАЬ)Т То |п)пипгае СЬе рота)Ь)3)ту оЕ ае)ест)пц с)е)етюп гпнтаптя цгои си)тнгеа )п(естед ги|Ь гесотЬ|папс М|3 ЬассепорЬацеь Еог |Ье аЬогсеас 6п|е йас илП ргобисе а иог)саЫе апюнлт оЕ а)пц)е-атгапбе6 РЯА (иаиацу 5 Ьонга). Рог а6йСюпа! |п(огп|а|3оп, р)еаае аее СЬе |п(огта6оп рапе! оп С)сота)ТН Т!МЕ5.
3.22 Г Ьаргег 3: 34гог)с)щ сн(сЬ Вассег(арбам М13 Ъессогг РГСК)Ь)С РЕАсСс)Е5 Вас(ег(орЬане МС 3 сап гИГ(ине сопн(с(егаЬ)е с(35(насела СЬгоиеЬ Сор аеаг. То пнпнпые СЬе рона)Ь(3(гу о( сгонн сопсагп)пасюп, р)с(г р(ассов сЬас аге хуеИ ьерагасес( ((ссеа))у Ьу -0.5 сгп) Г огп (Ьен пеагенс пе)еЬЬогк 33о пог р)с(г р)ас(иен СЬаг Ьане Ьееп цгочгп Гог гпоге СЬап С Гг Ьоигн аг 3У С ог нгогег( Гог ехгепг(ег) рег)оссн аг 4'С. ТЬе Го)сосчпд аге нечега! айегпагве псеСЬосЬ Гог р)с(опе р)аг!иек ° С)ае ап )посо)аИпц (оор ог нгег()е аррИсагог нг(с)г.
° АссасЬ а Ьи)Ь со а ьсег))е, дьроьаЫе разсеиг ог сарИ1агу р(репе апд нсаЬ сЬгоиеЬ ГЬе р(ассие (псо ИЬе ипс)ег(у)пИ айаг. ТЬеп ехре) сЬе р)ин о( аИаг Ггогп (Ье р)репе (псо Исе 3)гси)сс сиИиге. ° ТоисЬ ГЬе ялссасе оГ сЬе р(аг(ие и4(Ь а асеп(е сооИср(с(г, апд ГЬеп с(гор сЬе соосЬр(с)г (псо сЬе 3(с(и)с( си И лге. ТЬ(н гпеСЬог( сао(аген СЬе пс (ен о( нгеп(е СесЬ п)гсие, н)псе а поп нгег)(е Ьапг) Ьан Ье)гс СЬе СооИср)с1с.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
