Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 80
Текст из файла (страница 80)
рХ1 (а1зо 1|нолти аз р1') Еог гесетепсез, р1еазе зее теяечь Ьу Ма)толч|В ( | 984), Ч еЪ|тет аи8 С орет ( |985), Мо|1е! а пи Кшы! ( |988), аи4 Китае) ( | 99|, |995). р1Х ь а пнпог соас ргосеш оЕ М13. Рье сор|с| оЕ р!Х аге )осасеИ ас сЬе епд оГ йе ЬассегюрЬа8е рапк)е ьЬеге а*зешЫу Ъе8!ллз. ЪПте рНП, р!Х Ь а шешЪ|апе рго|еш йас ниетась кИй йе рас)са8!и8 з!8лла! 1оса|е|1 Ы йе !исет8елт!с ге8)оп оЕ М13 РХА.
)иггодисдои 3.5 Вас|епа ггапаЕогтед Ъу |Ьеье рЬаде-р!аяпЫ ЬуЬгЫа (ччЬ~сЬ аге )спо|чп аа рЬадет(да) ргодисе а)пд1е-ыгапдед чегыопа оЕ йе р1аяпЫ РЬ)А |чЬеп |пЕес|ед чч(|Ь Ье!рег чд!|1-|уре ог пт|ап| 61- атепгоиа Ъас|епорЬадеа саггу|пд гер!кадоп-деЕесдче |п|егдетс гед(опы Рог Еигйег дега|!ы р1еаае аее йе |п|годисдоп Го Рго|осо! 8, |чЬ~сЬ деа!ь чд|Ь рЬадепиды ТЬе Е|!атепгоиа рагдс1еа оЕ М13 1пЕес| оп1у Ъас|епа1 агга)па |Ьа| ехргеаа аех р16 епсодед Ьу ап р Еас|ог. Адаогргюп оЕ йе ч)гиа |о йе Ъас|епа1 се!1 гес)шгеь (псегас|юп Ьегччееп а ьех р(1иа апд |Ье ч)га! пипог соа| рго|е(п рП1, |Ьгее со Вче сор(еа оЕ ччЬ|сЬ аге !оса|ед а| опе епд оЕ |Ье Е|1атепгоиа год (р1еаае аее ТаЫе 3-1). ТЬе Ео11очдпд ечеть йеп оссиг: АыЬе год-аЬаред ч|гиз репе|га|еа йе р(1иы рП1 (пгегас|а чч)ГЬ гЬе Ьоы То) ), То!В, апд То!А рго|еты ъчЫсЬ (1) тед1- а|е геточа1 оЕ йе та)ог соа| ргосет апд (2) а!!оъч йе чдга! РХА |о репе|гаге |п|о |Ье Ъоду оЕ йе Ьас|епшп ( чЧеЬыег 1991).
° ТЬе (пЕесдпд (4)-ягапд ыпд1е-ягапдед Р)чА |а йеп сопчег|ед (п|о а доиЫе-аггапдед с|гси1аг Еопп, са1!ед Кр Р)чА. 5уп|Ьеа(з оЕ |Ье ( — ) ыгапд (а 1п|6а|ед Ьу а 20-пис1ео|Ые ВЬ)А рпгпег йа| Еа ауп|Ьеыхед ас а ипнр|е я|е оп йе гдга! Р)4А Ъу Е. со1| ВЕ4А ро!утегаае (СеЫег апд КогпЪегд 1974; Н|дааЬ||ап( ес а1. 1993).
Тгапьспр|юп оЕ чдга1 депеа Ъед)па а| апу опе оЕ а аепеа оЕ рготогега (п Вр Р)ч)А ап|1 ргосееда ипЫ|гесдопа1!у |о опе оЕ гччо гегт(пагогы |чЬкЬ аге !оса|ед иптегПа|е!у доъчпыгеап| 6огп депеа Н1П апд 1Ч. ТЬ(а огдапгаадоп оЕ рготосега апд сегт)пасогь!еада |о дгасдеп|з оЕ |гапасдр|юп 1п ччЬкЬ депеш 1осасед с1оаеа! со а |епгппа|юп я|е (е.д., депе Ъ'П1) аге |гапаспЪе|1 пшсЬ |поге Егег)иеп|1у |Ьап депеа 6н|Ьег ирыгеат (е.д., депе П) (Еог а геч(е|ч оЕ |Ь)ь апд о|Ьег аьресга оЕ йе то1еси1аг Ью1оду оЕ 61- атеп|оиа Ьас|епорЬадеы р!еаае аее Моде! апд Виаае! 1988; Виаае! 1995).
° А|пр116са|юп оЕ йе чдга! депоте Ъед)па |чЬеп йе рго|е)п ргодис| оЕ депе П (пггодисеа а пк)с а| а прес(Е|с ы|е 1п |Ье (+) ягапд оЕ йе рагеп|а! Вр РЬ)А (Меуег е| а1. 1979). Е. со1| РХА ро1утегаье 1 йеп адда пис1ео|Ыеа |о |Ье Егее 3'-Ьудгоху1 гегт(пиы ргодгеьяче1у д(ар1ас)пд |Ье ог(д)па! (4) ыгапд Егоп| йе сбси1аг ( — )-ягапд |етр1асе (р1еаае аее р(доге 3-2). ° Айег |Ье гер1ка|юп Еог)с Ьаь сотр!егед а Еи11 с)гс!е, йе д(ар1асед (+) аггапд )а с1еачед Ьу |Ье депе П рго|ет, депегадпд а ип6-1епд|Ь чдга1 депоп|е гЬаг )а |Ьеп с(гси!апхед (Ног)исЬ1 1980).
13иппд йе 6гя 15 — 20 т)пигеа оЕ |пЕесдоп, |Ьеае ргодепу (~-) ьггапда аге сопчег|ед Ьу се!1и1аг епхутеыо с1оаед с(гси!аг ВР Р)чА гпо1еси1еы ччЫсЬ аегче аа сетр1агеа Еог 6|г|Ьег гоипда оЕ сгапасдр|юп ап|1 ьупгЬеыа оЕ а|ЫПюпа1 (+) х|гапды ° Ву |Ье |ппе 100 — 200 сор(еа оЕ йе Вр Р)ч)А Ьаче ассшпи1а|ед 1п |Ье (пЕес|ед се11, йеге |а епоидЬ япд1е-ягапдед Р)чА-Ь)пд(пд ргосе)п (йе ргодис| оЕ депе Ъ') |о гергеаа |гапь1адоп, |п|ег а1|а, оЕ депе П п|В)ч)А (Моде1 е| а!.
1982; Уеп апд ЪЧеЬагег 1982; гатап е| а1. 1990) апд |о Ь|пд ягопд1у апд соорега||че1у |о |Ье пе|ч1у аупйеяаед (+) аггапды йегеЪу ргечепдпд йе(г сопчегаюп |о ВР РЬ)А. РЬ)А ауп|Ьеяа ГЬегеЕоге Ъесотез |1есдса|е|1 а1гпоа| ехс1ияче1у |о йе ргодисдоп оЕ ргодепу ч|га! аггапда (да!а|гот апд Ргаи 1971; Магог апд гапдег 1975).
1п адд)г)оп, рХ апд рЧ аге роччегЕи! гергеааога оЕ рЬаде-арес)Е|с РЬ)А ауп|Ьеяв апд аге |ЬоидЬг Со 1ипП йе пшпЬег оЕ ВР то!еси!еа |п |пЕес|ед се!!а (Ри!Еогд апд Моде! 1984, 1988; Сш1Еоу1е апд 5пйЬ 1994). Аь а сопаес)иепсе, Ъой йе пшпЬег оЕ ВР РХА гпо1еси!еа (п |Ье 1пЕес|ед сеП апд йе гасе оЕрго|Ьас|юп оЕ ргодепу (+) аггапда аге )серг |ч1|Ь(п |подега|е !ипба (Магог апд Моде1 1973; 1.егпег апд Моде! 1981). ТЬе тогрЬодепеяа оЕ Е|!атепгоиа Ьас|епорЬаде рагдс1еыа ехггаогд)пагу.
Рп!1)се пюы о|Ьег Ъасгеда1 ч(гиаеы ргодепу раггк1еа аге по| аааегпЫед |п|гасе!1и1аг!у.!пяеад, |погрЬодепеяь апд аесгегюп оссиг т а сопсег|ед ЕааЬюп, ао |Ьас паьсепг ч1 гиа рагдс1еа аге аааетЪ|ед аа |Ьеу сгоаа |Ье (ппег апд ошег Ъасседа! тетЬгапеь оЕ йе Ьоы се!1. ТЬе |п|гасе1!и1аг рЪ' — |дга1 Р)ч)А сотр1ехеа аге со|прас|, год-6)се а|гис|игеа (Сгау 1989) йа| аааос(асе чч(|Ь арес(Е|с аааетЫу ягеа (п йе Ъас|епа1 те|пЬгапе ().орех апд 'ччеЬЫег 1983, 1985). ТЬе ыдпа1 Еог рас)сад(пд — ап 3.6 СЬаргег 3: )4гбг)сгп8 гчггЬ ВасгепорЬа8е М13 Чесгогг (п(ес!гпд в!пд!е-в!гвпбеб с!гон(вг йгв! ОП!А й сопчеаеб 1о босйе-в1гвпбеб герссвопд 1оггп (ВЕ) ОНА Ьу Пов1- епсобеб епгугпев. С~ ш в!гвпб "сече!в( гоопбв о1 гер(!св1юп оссчг Ссгоидс а вггос1игев. ТПе (-) в1гвпб о11Пе ВЕ ОП(А й 1гвп- вспЬеб !п1о н(гв! пгВГЧАв ТПе йгв! депе П ргобссг~п1гобисев в и!сП вг в ереси!с иге (геб в!гонг) гп 1Пе (ч) в1гвпб о1 1Пе ВЕ ОП(А.
Ргодепу (+) в1гвпб !в вупесев!геб соп- бпиоов(у Ьу пгонеп!еп1 о1 Гсе гердсебоп гпесйпегу вгоипб 1Пе (-) в1гвпб гегпр!в1е (гойпд с(гс(е гер!(свбоп). ! гойпд йгбе в1гос1оге Тпе со!ар!е1еб ргодепу (+) вггвпб й с!еечеб 1гогп гае гойпд с(гси!вг в1гссгсге Ьу гае йгв! депе Д ргобис1 (гег( вггочг) ТПе ргодепу в!гвпб СЛеп сггсс(агаев Зупеаейв о1 ргодепу (ч) в1гвпб сопопоев. Ргодепу (ч) вггвпб Е!Сс!КЕ 3-2 Ке !ка6оп оЕ Вас(епо Ьа е МДЗ РМА !и !пЕес(ег! Вас(епа ТЬе Вгв! (оиг яа8ев, ир (о 1Ье ро(п( ччгЬеге п(с(г(п8 о( с(овей огси(аг КЕ РучА Ье8(пв, оссиг диг(п8 1Ье Вгв! 15 — 20 пипи!ее оЕ (п(ес6оп апд геви(1 (и йе ассигпи(а(гоп о(100-200 с(гси(аг КЕ Р(ДА гпо(еси!ев рег се(!. ТЬе виЬвег(иеп! ргог(ис6оп о( яп8(е-вггапс(еб РП(А (в а соп((попив ргосевв (Ьаг (еабв !о гпогрЬо- 8епеяв о( рго8епу рапйс!ев.
!Очеггеб гереа! 1осасе11 !и йе !пгег8еп!с ге8!оп оЕ 1Ье Ъас(епорЬа8е Р!н)А — ргоггиг)ев Егош опе еп6 оЕ 1Ье рЧ-чЬа! Р(ч(А (Ваиег ап6 Вш!(Ь 1988) ап11 ргеяппаЫу гпрбагев шогрЬо8епеяв Ъу !пгегас6п8 чч!(Ь (Ье шегпЬгапе-ааеос!а(е11 соа! ргосе!пв, рЧЦ апг! р1Х. АввегпЫу оЕ ч!гид раг6- с1ев !в а гере66оив ргосевв 1УЬегеЬу (Ье 1500 дппепс рЧ рго(е(пв аге рго8гевв(че1у гешочед Егогп йе (+) вггап6 ап6 гер!асе6 Ъу саре!6 ргогешв ав ТЬе павсеп! Ъас1епорЬа8е раггк1е !в ехггидед (ЬгоиВЬ (Ье пгешЪгапев оЕ (Ье !ОЕесгег) се11. ТЬе ВпьЬед ч!га! В!агпеп(в (!11ивггаге6 !п Г!Виге 3- 3), нчЬ!сЬ аге 100 бшев 8геагег !и 1еп8(Ь йап !и чч!11(Ь, аге ехггибед Егош (Ье Ьов! се11 ч6(Ьои! саив!О8 !уяв ог се11 беа(Ь (Еог гетепв, р1еаве вее Киеве! 1991, 1994, 1995).
Ма(иге раг1к1ев соп1а!и 5 оЕ (Ье 11 ЬасгепорЬа8е-епсог)е11 ргоге!пв (р1еаве вее ТаЫе 3-1). Ас !еаза! Еоиг о(Ьег ргоге!пв (р1, р!Ч, рХ1, епсог!ес1 Ъу йе ч!гик ап6 (Ь!огес)ох!и, епсобед Ьу йе Ьовг се11) аге Тес(и(ге6 (ог аавешЫу апс1 весгебоп. Ъчг!1йгуре 61апгепгоив ЪасгепорЬацев аге 1оп8 апг) Е)ех!Ые (ОЪи1аг Ягис1игев, 880 пш !и 1еп8(Ь апд 6-7 пгп ш йаше(ег (Еог геч!евчв, р1еаве вее КавсЬе6 ап11 ОЬегег 1986; Вигве! 1991; Ма)сочна)с! 1994). А ЫВЬ-гево1и(гоп Х-гау сгувга1!о8гарЬ!с вгпкгиге оЕ йе раг6с1ев !в по! ача!1- аЫе, Ъиг аппо!)е1в оЕ йе ЪассепорЬаце Ьаче Ьееп Вепегагед Егош ВЪег 6!ЕЕгас6оп вги6!ев ап6 во1!г)-вгаге пис!еаг ша8пе6с геаопапсе (Ь(МК) (Оре11а е1 а!. 1980; Ваппег е( а1.
1981; С1ис)сяпап ег а1. 1992; МсРоппе)1 е! а!. 1993; Магч!и е! а1. 1994). ТЬе Р)ч(А а! (Ье соке оЕ 1Ье рагбс!ев !в спасе!) Ъу 2700 сор!ев оЕ ап а-Ье1!са! 50-гев!дие ргогеш, УУЬ(сЬ (в епсобед Ьу Вепе Ч111. ТЬе сар ог 6!в(а1 епг) оЕ йе павсеп! ЬасгепорЬа8е су!!Одег ехггис)е6 Егогп !Ье шегпЪгапе сопв!вгв оЕ Бче Есггодисдои 3.7 5 сор|ез еасЬ: дур апд ддр 98р (2300 е серьез) дбр (5 сор!аз) 93р (5 сор|ез) Г!Сс)КЕ 3-3 5ггпс(ига! Моде! оЕ ап М13 Рагбс1е М13 (к а Е)!агпепсоик ЬаскеггорЬаде о( йе Еагпбу |сон)пдае.
ТЬе пабче рагбс|е ь -900 пгп !опа апд 6.5 пгп |и д)агпегег апд |к согпрокед о! гЬе к)па!е-кггапдед с)гси!аг ига| (3|4А епсарко|агед Ьу — 2300 сор|ек о( йе гпа|ог соаг ргоге|п, гЬе ргодосг о! рбаае депе 8 (ббр), р!ок бче сор|ек еасЬ о( Еоиг таог ргоге|пк. ТЬе к)пд!е-кггапдед Ьассепорбаае 0ЫА ехгепдк а!опб гЬе ах)к о( йе рбаае рагбс|е, чдй гЬе !епбгЬ о( ГЬе (3ЫА дегеггп)п)па Ьой ГЬе !епаГЬ о( апг| йе пошЬег о( амбр |и ГЬе ч|гок рагбс|е.
ТЬе сбпог рбабе ргоге|пк 57р апд ядр аге |пчо|чег| |и йе )пЖаг)оп о( аккегпЫу апд аге гег|Ыгед !ог рагг|с|е кгаЫ16у. д3р |к а 42,000-да|гоп ргоге)п аггасбед го йе ч(гик рагбс|е Ьу абр апд ь гекропк|Ые Еог Ыпд)пц го Ьоя седк. (Соигкеку о( Еее Ма)соъчк(с! асс| МаГГ Кау.) сор|ек еасЬ оЕ рог!1 апс1 р1Х, кчЫсЬ !пгегасг чч!гЬ йе рас)сап!пб ябпа! !и гЬе !пгегбепгс геб(оп. ТЬе га|! ог ргохппа! епд оЕ гЬе сошр!егед су!гпс1ег сопякгк оЕ а согпр1ех оЕ гЬгее со бче сор|ек оЕ ркг! апд р111. Весапке йе ч(га1 бепоше гк пог |пкеггед !пго а ргеЕоппес| кггпсгпге, гЬеге !к по кгпсг !ппд го ЕЬе к|хе оЕ ГЬе япб1е-ккгапдед )3)к)А йаГ сап Ъе рас)гааед.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
