Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 83
Текст из файла (страница 83)
) ньми ЕсойГ и И ЗпаГ ВапНГ Вр Г Хр Г Р Яе Ад Яе Т» ссс тс6 А66 тс6 лс6 Хп»Г Яаи АссГ Иглси Тгр Яег Яег А»п Явг Рго Туг Вег ЗЬ Яег Туг Туг АГа А д Яег Г.ео АГ» Ч Г ЧаГ т66 АВс тсс мт тс6 ссс тлт лбт ЗАВ тс6 тлт тлс Всб ссс тол ст6 Зсс Зтс Втт 1 1 5»сг рВ).2 8789 лтс мт Втл тст тлт 66т лст Зтл лот САВ стл лсл тм ссс 666 А66 тлс сбл Зст стт лс6 сбт Вот лбс тс6 лбл тст — — ~ — — зда В лаГ КрлГ ВасГ мгиг хлм к ип г М и М Мр ЛГа Иув Мп Ие Иув Иу» м6 тм Зст т66 слт тсс 66т лст Втт 66т лм лтс Влл Влс Всс мл мс Атл м6 мл н лиг гг Р))96) 7488 лтс клт Втл тот тлт 66т лот Зтл лст САЗ стл Аск тлл ссс 666 А66 тлс сбл Зст стт лс6 сбт Зст лбс тс6 АЗА тст ВльГ Крт 5асГ мг г хпог хтаг ГтеГ МВГ 5Е Р»Е Т»Г ИЕИ Т»Г А»П ИУ» лл6 тм Вст ты ы6 лтс Зм АЗА Всс тсс тм АВс мл мл 6»к Зтс лсс лтй тс6 ттт лст тт6 лсс ллс ААВ итси Г)к.\))йЕ 3-4 (5ее 7аст а е )ог )е епи)7' ЛГа ЛГа ЛГа Ие 6Г И Ч Г Лвр Рт Ро ВЬ Сув Лгд Л Ие Зоб Зсс Вот стл Вм стл Зтб Злт ссс сс6 66с тбс лоо Алт тс6 КМГ ВР Г В тНГ ВтвГ »МГ Е М Хтаг И Яег 5» Г.
Яе Ие Р о 5е Т» 5ег Агд ВГУ лтл тск лбс ттл тс6 лтл сс6 тс6 лсс тс6 А66 666 1 1 )1 1 И ИЬ 5ап хпог лс г и и 3.16 Огаргет3: ЯотНпцмчгй Вас|елорйадеМ13 Ъесготе е1игипа|ед) !1) Ьуияпц егга!пе оЕЪас|епа |Ьа| саггу тесА пш|айопе апй !2) га)дпц саге печег |о ргораца|е |Ье Ьас|епорЬаце Ьу еепа! роюсЬ оЕ !пЕес|ед се1!е Гп 1!|!шд си1|иг.!пяеад, в|ос)се оЕ гесошЬ|пап| Ьас|епорЬацее яогей а| — 70 С аЬои1й Ье р!асей оп ап арргорпасе Ьоец апй Ъас|епа йогп |Ье сеп|ег оЕ а япд1е |че11-!ео1агед р1а|!ие еЬои1д Ье |ьед |о еяаЫ1|Ь а япа11-еса!е си1|иге. ТЬЬ си1шге еЬои1д ргоч|де еиЕйс!епг |!иапг!г!ее оЕ япц1е-ягапйей 13НА ог доиЫе-еггапдей КР Г)!4А Гог пюег ригроеея ТЬе сийиге ейои1д Ье дго|чп Гог |Ье ейоггея роаа!Ые |ипе !и|па!!у 4 — 8 Ьоигя йерепсйпц оп |Ье чесгог апд |Ье яга!и оЕ й сей) апд ейои!й по| Ье |ьей ае а яосК |о ееей Еиг|Ьег си1|игея Р!еаее еее |Ье |пЕоппа|юп рапе1 оп сйоччт|| Т|МЕ5.
° 1пзетйоп оЕ Йе Готе1ци ВХА Еи оп1у опе от1епга|1оп. 0и!|е Егег!иепг1у, а д)чеп чес|ог ъч|11 саггу а ерес|йс аедшеги оЕ Гоге)дп 13ЫА Еаг п|оге геас61у |и оп!у опе оЕ |Ье г|чо роеяЫе ойеп|айопя ТЬ!а РЬепошепоп оссиге Ьесаиае ае|)иепсеа оп орроя|е ягапйе оГ |Ье Гоге!дп 13ЫА !псегЕеге |о сййегеп| ех|епь ~ч!|Ь гЬе Еипсйоп)пц оГ |Ье чессог'е 1п|егдепк гед!оп. ТЬ)а ргоЫеш сап еошегппее Ье ачо)дей Ьу !пеегйпд |Ье Гоге)цп 13НА а| а |16Тегеп| я|е |ч!|Ь!и |Ье ро1ус!оп!пц я|е, Ъу сйапд!пц Ьояе е|га)пя ог Ьу ие!пц а сошЬ~па|юп оЕ гее|псйоп епгушее |Ьа| а!)о|ч сйгесйопа! с1ошпц.
Но|чечег, |Т Ъас|епорЬаце М13 чес|оь аге Гогсе|1 |о ргорацасе ип|че1соше ьег)иепсее оЕ Гоге!дп Е)ЫА, |Ье гееи1|1пц гесошЬ|папь аге ойеп ипяаЫе апд 81че пве |о ргоцепу |Ьа| саггу де1есед ог геаггапцед чегыопе оЕ |Ье Гоге)дп еес)иепсея !3пйег |Ьеее с)гсшпе|апсея а Ьейег а1|егпайче й |о ргораца|е |Ье Гоге)цп 13ЫА 1п р1аяп|д чесгога |Ьа| саггу ап ог!д)п оЕ гер1ка|юп дейчей Егогп а 61ашеп|о|ь Ьас|егюрЬаце. Честите оГ |Ьь суре ГРЬацепийе) аге д!есиеаед ш де|а|1 |п |Ье !пггойисгюп |о Рго|осо! 8.
Рог |Ье п|ошеп|, Ьо|чечег, й 1а ъчог|Ь|чЬйе рошйпц ои| |Ьа| РЬацешЫ| аге по| а ип|чегва! рапасеа: ТЬе |)пап|1|!ее оЕ япд1е-аггапдед Г31чА ргодисед Ьу РЬадеш)йе чагу Егош опе Ьоя агга!и |о апо|Ьег апд аге ойеп !о|ч. 1п аипипагу, |Ье у)е!й апд е|аЬ|!иу оЕ гесошЬ~папь сопеггиссей ш Ьас|епорЬаце М13 апд РЬадепи|1 чесгога аге 1пйиепсед Ьу еечега! чапаЫея |Ье аттис!иге апд яге оЕ |Ье Гоге)дп 13)4А, |Ье суре оЕ чес|ог, апд |Ье ргорегйе| оЕ |Ье Ьоя яга!и, |пс!исйпц !ь ецйс|епсу оЕ сгапеГогшагюп апй аЬ!!!|у |о ргойисе Ь|цЬ у)е1йе оЕ япц!е-ягапйей Е)ЫА.
ТЬе Ьеег соигее оЕ ас|юп, |ЬегеЕоге, Ь го |гу еечега! сошЪ!пагюпе оЕ чес|ог апд Ьоаг се11. 5|агг Ъу ияпд е|апдаг|1 Ьоег яга)пе зисЬ аа ТС! ог ХП-В!ие. 1Е ргоЫегпа айее, ячч|сЬ го а Ьовг се!1 |исЬ ав Г|Н115 |Вас сопса!пв еечега1 адд1|1опа! депе|к гпаг)сеь (р1еаае аее ТаЫе 3-2). 13Н115 сагпе| пш|айоп| |и !1) |Ье тесА депе со епЬапсе а|аЬ|!йу оЕ швеггя !2) |Ье гев|псйоп ауагепыйас а|гас)с ше|Ьу1асей шапнпайап цепопис 13ЫА, апй ( 3) |Ье йео" депе |Ьа| !псгеаеее |Ье еЕ6с!епсу оЕ ггапеГоппа|юп Ьу 1агцег р!ая шиЬ (1лп е| а1. 1992). !п |В|а сЬар|ег, |че деаспЪе ше|Ьоде Гог |Ье ргораца|юп оГ Ьас|епорЬаце М13, |Ье |ьеа оГ Ъас|епорЬаце М13 чес|огя |Ье ргерагайоп оЕ |1оиЫе-ягапйед 13НАе Ггогп шЕессед се1!е ап|1 япц!е-еггапдей Е|ХАв Егот ч)ггь рагйс!ея апй ше|Ьойе |о сЬагас|ейге Ъас|ейорЬаце гесошЪ|- папь.
Ме|Ьойа Еог |Ье |ье апй ргораца|юп оЕ РЬацешЫ| согпр1есе |Ье сЬар|ег. Оисе ирои а йие аи 1|оиеег Ге!!ои )|ай Йе Ейеа гйаг теи Й.ои чей 1и |чагет ои1у Весаиее Йеу |чете рояеяей мчгй Йе Гйеа оудтатгу. ф Йеу |чете го )гчос)г Йй Гйеа ои| оГ т)|е1т 1|еайх зау Ву |та|тд й а |ирет|ййоп, а те1181оие Гйеа, |Ьеу и ои)й Ве еи811те!у теяйепг аца1тьг апу йапдетГтот гчатет. Ни |ч)|о1е ПГе 1оиц Ье Гонг ацли|| Йе |Иияоп оГцталгу, оГийгоее 1|ати!Ги! тееиЪ ай егагйгЕсе етоиц)|| )|Гиг пеи апй тач1)о1й е|чйепсе.
Каг1 Магх, ргеЕасе |о Т)|е бег|пап Ыео1оду (|7о! 1. 1845-1846) Рго1осо! 1 Р!айпи Вас1епорйауе М13 д В|АЦ||В ОЕ ВАСтеиОвнАСВ М)З оввшвв евом |невстюн оГ а а!пц1е Ъасгег!шп Ьу а япВ1е лгиа рагг)с1е. ТЬе ргоВепу рагВс!еыпГес| пе!ВЬЪог!пВ Ьас|ег|а, || ЫсЬ |и гиги ге1еаае апоЕЬег Вепегаг!оп оЕ |)апВЫег лгы рагг)с1ея 1Е |Ье Ьасгег!а аге цгоглпВ ш ьет)ьо11|) гпейши (е.ц., сои|а)и)пВ аВаг ог арагоне), |Ьеп |Ье ЙЕГияоп оГ |Ье ргоцепу рагбс!еа !а! иш|ей Весаиае се!Ь тЕессес) ъл|Ь Ьасгег)орЬаце М13 Ьаче а 1опцег депегаг!оп |иие |Ьап ии!пЕесге|Г Е. со)Ь р!ас)иеа арреаг аь агеаь оЕ а!о|| ег-Вго|е)иВ се!1ь ои а Еаьгег-цгоглпВ !а|| и оЕ Ъасгег!а! сеПя ВасгегюрЬаде М13 р1ациеь аге ЕЬегеЕоге |игЪ|й )и сои|гам| |о ЕЬе с1еаг р1ас)иеа оЕ лгиьеа |псЬ аде Т Ьас|егюрЬаиея ЕЬа| 1уье ЕЬе Ъасгег)а! Ьоя.
'|гегу с1еаг "р!а|)пез" аге тоаг 11)|е1у со Ье япа!1 а|г ЬпЬЫеь ггаррес) ш |Ье юЕ| аВаг с!пг)пц т)х)пВ рг!ог |о р!аг)пВ. М!пипа! (М9) аВаг р1агеь сап Ъе иве|! |о а|1чап|аВе Еог р)ас)ие Гогтайоп Ьу Ъассег!орЬаВе М13. Ь)ог оп1у аге р!а|)иез Госте|1 оп иипипа! п|ейа еаяег |о атее |Ьап ЕЬоае оп г!сЬег тейа, Ьи| ГпЕесгес! сп!гоген е|гаЫ)аЬес) Ггот а р!а|1ие Еогтес) оп пипипа1 гпейшп аге пи!1)|е1у |о соп|ат а ыВи!Е|сап| пшпЬег оЕ Ге|па!е се1!я Р1ас)иеа Еоппе|1 ои гкЬег и|ейшп ('г'Т ог ЬВ) тау Ъе очегВго||п Ъу аихо|горЬ)с Ее|па1е се!1ыЬа| аге геяяап| со тЕес|юп Ьу Ъасгег)орЬаВе М13. Рогшпа|е1у, |Ье с)апцег Га з11ВЬг япсе |Ье ьропсапеоы 1оаа оЕ Р' р1аяп)с!а Ггоп| Ъассег)а Вго|| п Еог а 11т)гес! рег!ос) |п г!сЬ |иейшп ь гаге!у Ь!ВЬ епопВЬ го саиье ргоЫегпя Весаизе р1а|!пеь Гост тоге гар)с)!у оп г)сЬег тейшп |Ьап оп пипипа! гпес)!ит, |че гесоттеп|Г |Ьа| 'г"Т ог ЬВ |пейшп Ье иаес) Еог гопнпе р!аг)пд оГ Ьассег)орЬаВе М13 а|ос)ся Вассег!орЬаВе М13 сап Ъе ргорацагес! Ьу )пЕесг!пВ а ьиасерг!Ые яга)п оГ Е, соВ ап|1 р1абпВ |Ье 1пЕесгес! се!1| |и ьоЕ| айаг.
АЕ|ег 4 — 8 Ьоигя "р1а|)иеь," ог хопер оГ ь1ог|ес! се11ц!аг цгоииЬ, аге геай!у с!егесгаЫе |п |Ье сор аВаг. 1пЕесг!оп !а сагг)ес) оп| ългЬ еиЬег а ЪасгегюрЬаце а|ос)с ог ЕгеьЫу рк)сес) р!а|)иея апс! Гге|Ыу иго|| п со!оп)еь оЕ ЕЬе арргорг!аге багга)п оЕ Е. со)1. 3.17 3.18 Сйаргег 3: Могй(лй яе)гй Васгег)орйасе М13 (гесгогя МАТЕКЕАсй СА(3Т!ОЫ: Р!еаье ьее Аррепг(!х 12 Еог арргорпа(е Ьапг)1!пи оЕ пла1епа!ь гпаг1гед илй < 1>. ВоЕЕегй апд Ьо!оЕ!опй Р!еаье ьее Аррепспх 1 Еог сотропеп1ь оЕ ь(осЬ ьо!ипопь, Ьи(Еегь, апг( геадеп1ь.
О!!и1е ь1осй ьо101яопь 1о (Ье арргорпа(е сопсеп(гаоопь. ЬлТС ьо)ипол (20% яя4и) Х-Ва( ьо!ийол (2% илЫ < 1> Мег!!а 1В аВаг р!агеь сол1а(л(л8 1еггасусйле ог )галатус(л ТЬеяе р1агея аге пеег(ег( оп1у Ва геггасус1(пе-геяяапг ягга!п оЕ й. сей, яисЬ ая ХЕ!-В!ие, ог а (гапашус!лгея(ягапг ягга!и оЕ Е. сей, япсЬ ая ХЕЕ-В!ие МКГ Кап, и шей го ргораааге гЬе егия. ог 5ирр1етелгег( М9 туп(таl айаг р1агеь ЪЬеп ия!па й. сей ягга!пя йас саггу а г!е!европ оЕ гЬе рго1!пе ЫояупгЬейс орегоп (а(1ас-ргоАВ) ) !п гЬе Ъасгела1 сЬгогпояогпе апо' гЬе сошр!ешепг(па рголй лелея оп гЬе Г р!аяпЫ, ые яирр!егпепсес! М9 пшшпа! шейшп.
1В ог УТ тесбигл 1В ог УТ тесбигл а8аг р(а1еь солгатт8 5 тМ МВС(я ЕВ ог УТ тесйилг гор а8аг ог а8агоье сол1агл)л8 5 тм МВС1, ТЬе асЫи!оп оЕ Мам (5 шм) го гпейа (КесЫу апй МсКеппеу 1996) Ь герогсе<$ го ппргоче гЬе у(еЫ оЕ Ъасгег!орйаае М 13 си!гигея !п(есгег( аг !ояя пш1пр! Ыйу.
прес!а! Ецо!ргпепЕ Неа((л8 Ыосй ог и агег Ьаьй ргеьег 1о 47'С !се-иа1ег Ьа(Ь ЧесЕогй апс! ВасЕег!а! Яга!пь Васгепорйайе М13 ь1ос)г т ЕВ ог УТ тесйит ог Вас1ег(орйа8е М13 р1аг(ие т 1 т) оЕ18 ог УТ тесйит Мег(!шп Егош а Еи!1у агояяп !19и!я( си1шге оЕ Ьасгепа !п(есгей млгЬ Ьасгегюрйаце М! 3 селга(пя Ъегяяееп 1О'" апг! 10п рги!гп1. А Ьасгег!орйаае М13 р!ацие сопга(пя Ьегяяееп 1Оя апд 10" рЕш Е, со!1 Е' агат, ргерагегЕ аь а глаьгег сийиге Ргерагагюп оЕ а шаягег си!гиге Ь г(еясг!Ьег( ш СЬарсег 1, Ргогосо! !. Еог а 1еа оЕЕ. сей яггашя яшгаЫе Еог йе ргорааагюп оЕ Ьассег!орйаае М1 3, р1еаяе яее ТаЫе 3-2 !и гЬе (псгойиспоп го йЬ сЬаргег.
МЕТНО0 1. 51геаЬ а гпаьгег си11ше оЕ а Ъасгепа! ыга!и саггу(пд ап Г р1аяп)г) оп1о е!1Ьег а ьирр1етепгег( ппшгпа! (М9) айаг р1а1е ог ап ЕВ р1аге слога!и!08 1есгасус1ше (Х1.1-В1ие) ог 1сапагпусш (ХЫ-В1ие МВГ Кап). 1псиЬаге 1Ье р1аге Еог 24 — 36 Ьоигь аг 37 С. 2. То ргераге р1а1108 Ьасгепа, гпоси1аге 5 гп1 оЕ 1В ог УТ гпесВшп (п а 20-т1 ягеп!е си11иге 10Ъе ъчЬЬ а я(п81е, яле!1-)ьо1агея) со!опу ркЬес( Егош 1Ье аааг р!аге ргерагег( ш 51ер 1. АВ!гаге 1Ье си11иге Еог 6 — 8 Ьоигь аг 37 С гп а го!агу ьЬайег. СЬг11 1Ье си1шге ш ап ке ЬагЬ Еог 20 пнпигеь апг) 1Ьеп ьгоге гг аг 4 С.
ТЬеье р1аг)пд Ьасгепа сап Ъе ыогес! Еог рег(ос(ь оЕир 1о 1 ъчееЬ аг 4 С. А !МРОКТАЫТ (30 пос Вгои 1Ье се!!ь го ьагигайоп, аь йа яял!! (псгеаье йе г!й оЕ (оь!лц 1Ье р!!! епсог(ег( Ьу ЕЬе Г' р(аьтЫ. Ргогасо! 1: Р!аг!пс ВасгеггорЬасе М13 3.19 3. Ргераге ангес!1е гиЪеь (13 х 100 гпш ог 17 х 100 ппп) сопгагшпВ 3 гп1 о! ше!гес1 ЕВ ог г"Т гпесВшп гор айаг ог аВагояе, аирр!ешепгег) гч!1Ь 5 гпМ МВС1,. АПочч гЬе гиЬез го ес)ш1!Ьгаге го 47 С 1п а ЬеаВпВ Ыос)с ог ччагег Ьай.
4. 1,аЬе! а яег!ек ог агег!1е гиЪея (13 х 100 пип ог 17 х 100 пнп) ассогйпВ го йе Й1иг!оп !асгог апс) апюипс оГЪасгег!орЬаВе к!ос)с Го Ъе ас)Вес) (р1еаяе атее 5гер 5), апс) де!!чег !00 !г! ог" р1аГ- гпВ Ьасгег!а ггош 5гер 2 шго еасЬ ог" гЬеье гиЬеь. 5. Ргераге гепго14 ьепа1 сИиг!опт (1О а го 10 ч) ог" гЬе Ьасгег!орЬаВе я!ос)с гп 1В ог г'Т шег)1- шп. Шьрепяе 10 !г! ог 100 р! ог" еасЬ еВ!иасап го Ье аааауес! !пго а ангес!1е шЬе сопгагп!пВ р!аг- !пВ Ъасгепа Егош 5Гер 4. М!х йе ЪасгепорЬаВе рагВс1еь чч)ГЬ ГЬе Ьасгепа) си!Гиге Ьу чогГех!пВ ВепГ1у. ВиИсе ЬасгепорЬахе Х, М !3 асЬогЬя гарс41у го Ъасгепа; гЬеге !я гЬик по пее4 го !исиЬасе йе р1аг!иа Ьасгепа ъч!й йе Ьасгег!орЬаае яиьрепяоп Ьегоге а4г!!иц гор аааг.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
