Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 86
Текст из файла (страница 86)
со1т Р' багга!па Ьеаг)пх шитат!опт тп йе тгит апс1 иие Пепеа, Рог а с!етааетЕ рготосо! тот Ьастег!орЬа5е цготчтЬ тп тЬеае ягатпя р1еаае атее СЬартег 13, Рготосо1 1. Е. соП си)гитех, илтлЕесгес) Ргераге а пюс1с-!пЕестес! си!тите Ьу рк15п5 ап агеа оЕ тЬе Е. соП 1атчп оогп тЬе р!ате тЬат т)оеь пот соптатп а р!ат)ие аь а пехаттче соптго1, !)ае йЬ си1тиге го тпоптгог тЬе тесочегу оЕ Ьастег!орЬахе М13 рагПс!еа. Р1еаье аее 5тер 4. МЕТНО0 Ргес1рйа6оп оЕ ВасЕег1ор13аце Раг6с!е5 чч163 РЕС 1.
ТгапаЕег 1 ш! оЕ гЬе !пЕесгес1 аптЕ ип!пЕес!есЕ си)гигеа го аерагаге гп1сгоЕиае гиЬеа апс! сепгг)ЕиВе йе гиЬеа аг шахппшп ареес! Еог 5 ш1пигеа аг гоотп сегпрегагиге. Тгапйег еасЬ аирегпагапг го а ЕгеаЬ писгоЕиае шЬе аг гоош гешрега!иге. !Е с1еягес1, апет аяс1е 0.1 тп1 оЕ йе вирегпатапт аа а тпаагег втос1т оЕ тЬе Ьастег1орЬахе рагтк!еа. 2.
То йе аирегпагапг асЫ 200 Ет! оЕ20оЬ РЕС !п 2.5 М ЬЕаС1. М!х йе ао1ипоп тче11 Ъу тпчегппц ЕЬе !иЬе аечега! 1!тех, Ео1!отчее! Ьу аепг!е чоггех!па. А!1отч йе гиЬе со агапе! Еог 15 пппшеа а! гоош Гешрегагиге. Ма!се гите тЬат аП оЕ гЬе тгепае РЕЯЬ)аС! ао!итюп и ппхет) тч!тЬ йе шЕесгес! сеП шее!шпт. 3. Кесочег йе ргес!РЕгасес1 Ьасгег!орЬаае рагпс1ез Ъу сепгпЬацапоп а! птахипшп ареес! Еог 5 пппигеа аг 4'С !п а пнсгойце. 3.28 СЬарсег 3: Рсгог)стар иий ВастепорЬаче М13 Уестогз СагеЕи1!у геточе аП оЕ тЬе яцрегпасапс ия)пи а с)1зрояаЫе р)репе пр 11п)сес) со а часиит 11пе ог а с)гаъчп-оцс Раясецг р)репе ассасЬес) то а гиЬЬег Ъи1Ъ. Сепсп6лие сЬе сиЬе аиа)п Еог 30 яесопс)з апс) геточе апу гез)с)иа! яирегпасапс.
А с)иу, рсиЬеасс-яхеъ1, ре! 1ес оЕ ргестр!сасест ЬассегсорЬаае рагск!ея яЬои1ъс Ье чтяЫе ас йе Ъоиош оЕ тЬе сиЬе. Хо ре!1ес яЬои1сс Ье МяЫе ш йе иеЕапче соисго1 сиЬе ш ъчЬкЬ а рогсюи оЕ тЬе ишпЕессес) Е. со6 1аъчи ъчая сноси!атей 1Е ио ЬассегсорЬаЕе ре11ес Ь чляЫе, Ь и ии11)се!у йас юЕ6стеис ыиа1е-я!ганс)ес) РХА ъчт!1 Ье оЪсатиеъ) со )ияцЕу ргосееъ)1иа 6лгсЬег. 1п сЬЬ саяе, йе Ьея соигяе оЕ асцои ы со рк1ь тиоге гесошЬ)иапс р!ат)иез, из)иа сЬеш со ъиЕесс си!сигея ас гптуегепс иш!Ор!)сл6ея, аиъ! сЬеп со агоъч сЬе )пуессес) си!сигея Еог 1оихег рея!от!з оЕ сине 16 — 12 Ьошз). КешешЬег, Ьоъчечег, сЬас !оиаег Егоъчй рег)отса саи гею1с ти ъ!е1ессоия аиъ! геаггапаешеисз ли сЬе с!пиес) тияегс РХА !р!саяе яее Ргососо! 2).
А1ю Ье лиге сЬас сгие р1аь!иея Епос атг ЬиЬЫея) ъчеге рк1сесс. ЕхЕгас6оп оЕ Япц!е-Мгапс!ее! 0МА тат!$!т Р!сепо! лтеяизрепс) тЬе ре1!ет оЕ ЬассепорЬаие рагс)с1ез тп 100 )с! оЕ ТЕ ЕрН 8.0) Ьу чогсех)пи. ТЬе Ьеяс шесЬоът со ассогир! ьЬ геюяреияои ь со а11оъч сЬе ЬассепорЬаОе ре!1ес со зоа)т ш сЬе ТЕ ЪиЕЕег Еог 15 — 30 иииисея ас гоотп сетирегасше. 5иЬяесрлеит !оъч-ярееът чогсехша ч61! йяо!че сЬе иоъч с!еаг ре! 1ес. 1с !я нирогсаис со гезизреиът йе ЬассегсорЬаае ре11ес сотир!есе!у ю а11оьч еЕ6стеис ехсгасцои оЕ йе яиа!е-я!ганс)ел! РХА Ьу РЬеио! ш сЬе иехс зсер.
А иш!6сиЬе чогсех!и3 сиасЫие зачел сине аиът ей.огс ъчЬеи иш16Р1е яаптр1ея аге ргосеыей То сЬе геяизрепс)ес) ре11ес асЫ 100 )т1 оЕ еъ)и111Ъгасес! рЬепо1. М)х ъче1! Ъу чогсех)пи Еог 30 яесопс)з. А1!оъч сЬе затр1е со зсапт) Еог 1 пиите ас гоотп септрегасиге, апт) йеп чогсех Еог апосЬег 30 зесопс)я. СепспЕиие тЬе яатпр!е ат спахцпшп зреес) Еог 3-5 пиписез ас гоот сетпрегатцге 1п а т)сгоЕиие. ТгапяЕег аз птсЬ аз Ы еая1у рояяЫе оЕ йе иррег, ас!иеоиз рЬаяе со а 6езЬ т)сгоЕцое сиЬе. То Еаст!аале яерагасюи оЕ сЬе РЬаяея, астъ) 30 и! оЕ я1коие 1иЬгкаис ЕРЬазе-!.ос1т ъ.е1, 5' — ъ3'). ТЬь яер яогиесниея иирсочея у!е!6я Ьш и Оеиега!!у иос иесеяагу. Ро иос сгу со сгаизуег аП оЕ сЬе астиеось РЬаяе.
МисЬ с1еаиег ргерагасюия оЕ яиа1е-ясгаиъсеъс РХА аге оЬсасиеь) ъчЬеи -5 Р) оЕ йе аъ)пения РЬаяе Ь 1ей ас сЬе )исегЕасе. ТЬе сесар!всея ргерагеь) ъч)сЬ а яиа1е РЬеио1 ехсгасцои аге ат)ес)пасе Еог июяс ригрозея Е)ис)иъ!1иа РХА верлене!иа), апът сЬеге и аеиега!1у ио иееът со сье осЬег ехсгасцои яеря. Ноъчечег, соисагитиацои оЕ сЬе ЬассепорЬа5е ре1!ес чай соиъропеиь )и сЬе РЕб/ХаС! яирегиасаис !и 5тер 3 саи аЕЕесс тЬе гергос)иссЬЕ!Ьу оЕ сЬе йаеоху вес!иенс!их геасцоия аис1 саи тес)исе сЬе 1еихсЬ оЕ ге1)аЫе зестиеисе со 300 Ъаяея рог геас6ои ог 1ея.
ТЬеяе ргоЫетия саи Ье ачосс!еът Ьу са)тсиа ареста! саге со ехсгасс а!1 сгасев оЕ юрегиатаис шатепа1 Егоит сЬе шссгоЕиае ыЪе. То сЫя епс1, волне )ичезс)аасогз ессЬег 11) ат)6 100 Р! оЕ сЫогоуопи со еасЬ сиЬе айег 5сер 0 аист ге-чогсех йе сиЬея Ьеуоге яера- гациЕ сЬе РЬаяез Ьу сепспйЕасюп ог !6) сгаияЕег сЬе а0иеогь РЬазе со а ЕгеяЬ сиЪе ая ъ1еяспЬес1 ти енер 2, аиъ! сЬеи ехсгасс сЬе аъ)иеоив РЬаяе оисе ъч)тЬ !00 и! оЕсЫогоуопи. 5ерагасе сЬе РЬаяея Ьу теист)Еи3асюп аиъ! сгаияуег сЬе аОиеогь РЬаяе со а ЕгеяЬ шЬе. Ргес!р!Фабоп оЕ Фе ВасФег!ор!таре 0)ъ)А чи!Е!т Ейапо! Кесочег йе М13 13)ъ)А Ьу ятапс)агс1 ргеслрпаСсоп иг)СЬ ейапо1 т йе ргезепсе оЕ 0.3 М зос)1- цт асесате.
ъгогсех ЬпеЕ)у со пцх, апс1 1псцЬасе йе сиЬея Еог 15 — 30 ппписея ас гоот сетпрегатиге ог очегп)иЬс ас — 20"С. ТЬе ал)ценив РЬаяе оЕ йе РЬеио! ехсгасцои шау Ье с!пил!у ирои сгапяЕег со сЬе ЕгеяЬ шссгоблае сиЬе, Ьис тс яЬои1ът с1еаг ир ъчЬеи сЬе юсаши асс!асс яо1ицои ля аъыеь!. Ргогосо! 4: Ргерагагсоп о~5$п81е-ьггапдед ВасгепорЬа8е М13 РНА 3.29 Ргессрнаиоп ос Йе яп8!еасгаодед РЬ$А сап а1ао Ье ассогирсЬЬед Ъу аддси8 300 р! ига 25 $ пах!иге ос аЬаосисе есЬапоЬЗ м аогсшги асесасе срН 5.2! соПогчес$ Ьу ап гпсиЪасшп сог $5 пипшеа ас гоопг сешрегасше. ТЬса аЬегасшп аачеа сиг$ереиг$еог ргресдих ог сЬе юсПши асс!асс апг! есЬапо! апд сао аресд ир йе асер ъчЬеп сагхе пштьЬега ог" аси8$е-асгаидед РЛ$Аа аге Ьесих ршг6ег$.
М $3 Р$ЕАа сап Ье яогед ги есЬапо! ас -20'С Сог аечега! тоийа. 9. Кесочег Йе ргесгрдаСег$ а!пц)е-аггапдед ЪасСедорЬаце РЛ)А Ьу сепгг!$08агсоп аг гпахипшп ареед гог 10 пиписеа ас 4'С сп а шссгоси8е. 10. Кегпоче йе аирегпасапс Ьу цеп$1е аарсгассоп, Ье!08 сагеси1 пос со дсасигЪ сЬе РЛ)А ре!!ес (счЬ!сЬ са ойеп оп1у чсяЫе аа а Ьахе оп йе яс1е ог" сЬе шЬе). СепсПЬл8е сЬе сиЪе а8асп сог 15 гесиода апд гегпоче апу геаЫиа1 аирегпасапс. 11. Адд 200 р! оу со!д 709о ейапо1 апд сепгг!гиВе аг гпахнпшп ареед Сог 5 — 10 пипи!ее аг 4"С.
1шгпед!асе1у гепюче сЬе ьирегпасапс Ьу Вепс1е аар!гас!оп. ,4 $МРОКТАЬ$Т АС СЬ$5 ага8е, Йе реПег га поС Ппп!у аиасЬед Со Йе ччаП ос СЬе СиЬе. И га Йегесоге 'ипроггапС Со шогК гси$с$с$у апд сагесиПу Со ачоЫ $05$п8 йе РйА. 12. 1пчегс сЬе ореп сиЬе оп йе ЬепсЬ Сог 10 пиписеа со а)1осч апу геядиа! ейапо! со $1га!и апд ечарогасе. Р15501че Йе ре1!ес !п 40 р! ог" ТЕ (рН 8.0). чСгагтп Йе хо!ос!оп со 37"С гог 5 пиписеа со ареед дсаао1иссоп ог йе РЛ)А. 8соге йе РЛ)А ао! исюпа ас -20'С. ТЬе усе1г$ ог" а$ихсе-асгаидед РсчА ы иялаПу 5 — $0 рхйп! ог" сЬе ог$8$оа! сиуессед си!сше. 13.
Еаснпасе йе Р!4А сопсепсгассоп ог' а геъч ог сЬе ьагпр1еа Ьу пнхспц 2-01 а1!г)носа ог" сЬе РЛ)А ггогп 5сер 12 еасЬ сч!сЬ 1 р1 оу аисгоае Ве1-!оад!08 Ьисуег. Еоад сЬе аагпр1еа $псо Йе сче1!а ог' а 1.288 аВагоае Ве! саас сп 0.5х ТВЕ апг1 сопсаспсп8 0.5 $сцугп! ейЫшгп ЬготЫе. Аа сопсго15, иае чагу!п8 апюипса ог" М13 РЛ)А ргерагассопа ог )споччп сопсепсгас)опя Еханипе сЬе Ве! агсег е1ессгорЬогеяа гог 1 Ьоиг ас 6 чг/сш.
Еассгпасе сЬе агпоипс ог РЛ)А сгош йе шсепясу ос йе Виогеасепсе. РаиаПу 2 — 3 и! ог" а яапдагд ЪассепорЬахе М$3 РЛА ргерагадои Ь гегсшгед гог еасЬ аес ог соиг 0$деоху суссе аеоиепс$и8 геасдоиа ияи8 дуе ргипега. 1агце-ьса!е Ргерагабоп о1 5~пц!е-я1гапдед апд РоиЫе-Мгапдед Вас1епорйаце М13 РМА нь ркотосоь л 5Слтетт-ттр чЕКВГОгт От Ркотосог5 3 леев 4, Га тьед сЬГеГГу то кепегате Гагке атосГь оу тГоиЫе-атгаптГетГ РЬГА оу атгаГпе оу ЪастегюрЬаке М13 тЬат аге гои6пе1у тьер аа с1опГпВ хестога !п йе 1аЪогатогу.
Г,агВе атпоипь оу аГпк1е-атгаптГетГ ЬастепорЬаВе РГхла аге пеегГегГ Гог аресГа11гесГ ригроаеа, Еог ехатпр1е, теЬеп а рагтгси1аг гесоптЬтпапт ь то Ъе иаегГ тапу йпеа то Вепегасе гас!Го! аЪе1етГ ргоЬеа ог то сопягист !агке питЬега оу яте-гГГгестегГ пштапгя Моет ипрогтапбу, регЬаря!агке-аса1е ргерагатГопа оу ЬогЬ т1оиЫе- апт1 япк1е-атгаптГегГ РЬГАа сап Ъе тГГхГтГ- ес1 Гпто япаП а!Ге!иота апг1 пает! аа агапВагйгетГ сои!го!а Гп йтГеоху аетГиепсГпВ геаст!опт апт1 тгапауестГотта Ъу ечегуопе тп йе 1аЪогатогу. !и Вепега!, йе у!е16а оу тГоиЫе- аптГ япВГе-атгаптГегГ т тга1 РГхла аге пот аа ЬГВЬ аа тЬоае оЬсатпетГ Еготп япа11-аса!е (1 — 2 гп1) си!тигее оу ЬастепорЬаВе М13.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
