Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 89
Текст из файла (страница 89)
АгЫ ! )л! оЕ !Ох 1!цас!оп Ьийег апг! ! )л! оЕ !О т54 АТР со а11 Еопг геасс!опя (ТпЪеяА-Р). Опас АТР )Е ояпц а сошшегс!а! Ьоу(ег сЬас сопса!пя АТР. 9. АЕЫ 0.5 Чге!яя ипп оЕ ЬассепорЬаце Т4 РЫА 1лцаяе со ТпЪея А, В, апг! Р. Млх йе сотропепся Ъу цепс1у саррлпц йе я!йе оу еасЬ сиЬе Еог яечега1 яесопс)я. !псиЬасе йе Вцаслоп геасВопя Еог 4 — 16 Ьоигя ас !2 — !6"С.
Ас йе епя) оЕ йе )лцапоп геассюп, апа!уае 1 Сг! оЕ еасЬ 1(Вас!оп геасиоп Ьу е!ессгорЬогеяя йгооцЬ ап 0.8яуо ацагояе Ве!. Вапя)я оЕ с!гсо!аг гесогпЬспапс пло!еео!ея сопса!и!пц чессог аоя) Егацшепс(я) оЕЕогелцп РСяСА яЬоо!г! Ье чсясЬ!е лп сЬе сея геассюп (ТоЬе А) Ьос пос !п сЬе сопсго! (ТоЬе С). АЕсег !Ецасюп, сЬе геасслопя гпау Ье ясогег( ас — 20" С опи! сгапясоппасюп. Тгапйоггпа6оп ! О. Ргераге апс) цгочг ап очегп!цЬс ссл1плге оур1аПпц Ьассепа (р1еаяе яее Ргососо! !) т УТ ог ЕВ тес)!шп ас 37'С яч!сЬ сопясапс яЬаЫпц. ! 1.
Кеточе Егот йе — 70'С Егеехег ап а1!г)иос оЕ Егохеп согпресепс се1!я оЕ йе с)ея!гес) ясгалп саггу!пц ап Е' р!аяпЫ, а1!ояч сЬе се!!я со сЬачч ас гоогп сегпрегасиге, апг) йеп р1асе сЬепл оп ке Еог !О пиписея. 12. Тгапяуег 50-100 Сс! оЕ СЬе согпреСепС Е' Ьасгепа Со еасЬ оЕ !6 яСеп1е 5-гп) си!Сиге СпЪея (Еа!соп 2054, Веесоп РкЫпяоп) йас Ьаче Ьееп сЫ11ес1 со 0'С. ТоЪея ойег сЬап ра!соп 2054 (Вессоп РюЫмоп) гпау Ъе ыеВ лп сЬе р!аипц геасс(оп, Ъос ш сЬВ саяе, лс яиц Ье песеыагу со аг!)ыс йе йпе апс( сеплрегашге оЕ Ьеас яЬос!с.
Вог ехашр!е, лЕ 15-спл р!алея аге рге(еггег) Сог юше геаяоп,!агцег соЬея (17 х 150 пип) яЬооЫ Ье ояея) (е.ц., ра!соп 2006, Вессоп РСсСВояоп), Вассоп 200о соЬея геошге 2 шгпосея оЕ Ьеяс яЬослг (яер с 5) аод Сзгцег яолоопь оЕ СоР ацаг, 2чо Х-цас, апл) 2096 1РТС (7 гп1, 120 Р), апЯЕ 20 Р), геЯРеег)че!У). ! 3. !ттес))асе!у асЫ 0.1-, !.0-, апс) 5-)л! а!нрлося оЕ сЬе 1!цас!оп геасс!опя апс1 сои!го)я (ТиЬея А — Р) со яерагасе сиЬея оЕ сотресепс се11я.
М!х йе Р)я(Ая яч!ЕЬ сЬе Ьассепа Ьу сарр)пц сЬе яЫея оЕ йе сиЬея цепс!у Еог а Ееъч яесопс)я. 5соге оп ке Еог 30 — 40 пштсея. !псЬн)е сячо сгапяЕоппаСюп сопсго!я, опе сопСалплпц 5 рц оЕ ЬасСегюрЬаце М!3 КР РЫА апг! йе ойег сопсаиипц по агЫед Р!чА. 14. Ъйи1е йе!!цасес) Р)х)А !я !пспЪас)пц яч!сЬ сЬе сотресепс се!1я, ргераге а яес оЕ 16 ясеп!е сп1- шге спЬея сои!а!п)пц 3 т1 оЕ гпе1сег) 'л'Т ог ЬВ сор ацаг.
5соге сЬе спЪея ас 47"С !п а Ьеас)пц Ыос1с ог ччасег ЪасЬ ипс!1 пеес)ес! т цсер !6. 3.38 СБаргег 3: Мог)с)пд ччЕГЬ ВасгегЕорЬаце М13 Ъестоп 15. ТгапзЕег ТЬе сиЬез сопташш8 тЬе сошретепт Ьассепа апс! Е)ЫА то а тчатег Ьай ес!и111Ьгатес! со 42 С. 1псиЬасе йе сиЪез Еог ехасс1у 90 зесопй. !гпшес!Еате1у гешгп йе тиЬеа то ап Есетчатег Ьай. 1п сЬзз ргососо1, аП оЕ сЬе сгапзуессео спЬшез оЕ сотресепс Е. соБ сеПз аге ехрозес) со Ьеас зЬос1с яшо!тапеосзз!у.
Ап а!сегпа6че ь со айп)п)зсег Ьеас зЬосП со еасЬ сп)шге вп спгп апо сЬпз ачоз8 1еачшП сЬе сеПз оп )се. 1п тЬзз арргоасЬ, сЬе р!аипП сеПз, Х-Па1, апгт 1РТС аге агЫегт со йе сор аоаг!аПагозе диг)пП сЬе Ьеас зЬосП зсер. Ас сЬе епо оГ сЬе Ьеас зЬосП, йе сор аПаг)аПагозе, р!аипП сеПз, Х-Па1, есс., аге ппптейасе!у пнхег) ш)сЬ сЬе сгапзЕессес) сеПз апз) ропгед йгесс1у опто ап аПаг р!асе. ТЫз арргоасЬ геоп!гез сагеЕо! сппвп8 апс) ехасс $лпош!ес)Пе оЕ сЬе 1епПЗЬ оЕ сапе геошгег) Еог еасЬ зсер. Р!а1!щ 1!Те Тгагт5Еоггпее! СеП5 16. АгЫ 40 )т! оЕ 2ого Х-ВО1, 4 )в! оЕ 209о 1РТС, апс1 200 )41 оЕ сЬе очегп)пЬс си!сиге оЕЕ.
саВ се!Ь (5тер 10) то йе сиЪез сопташшц тЬе ше!тес! тор айаг ргерагес! Зп 5тер 14, апг! пих йе сопСептз оЕ йе тиЬез Ьу цепс!е чогтех!па 1ог а Ееъч зесопс!з. ТгапзЕег еасЬ затпр1е оЕ т!те тгапзЕоппес! Ьассепа со йе тиЬез. Сар тЬе тиЬез апд пих йе сопсептз Ьу Вепт1у шчегтша йе тиЪез сЬгее топей Роиг сЬе сопсептх оЕ еасЬ сиЬе ш сигп опто а херагате!аЪе!ес1 1.В аВаг р1асе. 5ш)г! тЬе р1ате то епзше ап ечеп с!ЕаспЬитюп оЕ Ьастепа апс! сор аВаг.
!с тау Ье йЕ6сп!с со оЬсаш ап ечеп йзспЬппоп оЕ сЬе сор ахаг асгозь сЬе аПаг р1асе, езресп01у шЬеп 1агПег р!асез (15-ст йатесег) аге изео Гог сЬе 6лс Пгпе. ТЬе зреез) члсЬ ъчЬгсЬ йе сор аПаг зо!гйз6ез сап Ье г)есгеазед ЕсЬегеЬу аПочбпП пвоге сапе Еог сЬе ялпгПпП зсер) Ьу ргеЬеаппП йе аоаг р!асез сот 30 — бо ппппсез ас 37"С ЬеЕоге сЬе р!абпП зсер. Тор аоаг сЬас Ь Ьопег сЬап 47'С чВП ЫП сЬе согпресепс Ьассепа Гапг) ПгашапсаПу с)с<гаазе сЬе сгапзЕесбоп Егеопепсу!). 17. С!озе тЬе р1атез апг! а1!отч тЬе тор а8аг Со Ьагс)еп !ог 5 пипитез ат гоогп СешрегаШге.
Т)зе а Кппчч)ре то гетпоче апу сопг!епзат!Оп !гош тЬе сор оЕ йе р!ате, шчегт тЬе р1атез, апс1 шсиЬате ат 37'С. Р1аопез ъчзП Ье ЕпПу с)ече!орет) айег 5-12 Ьошз. Р!аооез Еогшег) Ьу попгесоптЬ)папс ЬассегюРЬаое М13 М1! Ье Пеер Ыпе; йозе Еогптегт Ьу гесопвЬзпапп зчгП Ъе со1ог)егь ш гпозс сазез. Рог г)есаПз оп ебгсзепсзез апо охре<сеет гезп)сз, р1еазе зее ТаЫе 3-3.
ТАВ! Е 3-3 Тур)са1 ТгапзЕоппат)оп Вези!та 13з)па а Егохеп Ргерага6оп оГ Сопвретеп! СиВигез оЕ Е. соВ 5тгавп ТС1 Ыимагк ог Ртхт)игз)РП Тзгсток 0ЫА Визе вА)взвте ВЕ Е)ЫА 3 х )Оз 1 х 10з 2 х 10з 3 х 10з'" -5 х )ОЗ вЂ” 1 х )ов С!Озегт сзгсп1аг !.)пеаг)хек Ьу с1еачахе ш)сЬ опе гезспссюп епхугпе Ыпеапхед Ьу с!еачаПе ш)сЬ опе гезспссюп епхугпе апг) зе!Е-Поасео 1апеаггхег) Ьу ЫеачаГе ш)сЬ опе гезспссюп епхугпе, РЬозрЬасазе-сгеасес), апП зе)Е-1гоасеП С)еачеб Ьу пчо йбегепс гезсгк6оп епхушез Ыпеапзео Ьу Ыеачаре счПЬ опе гезтпспоп епхугпе апг) Поатег) )п сЬе ргезепсе оГ пю1аг ехсезь оГ ГогезПп ЕЗЫА с!еачео ш)сЬ а сотрапЫе гезспсбоп епхуше С!еачеП Ьу сшо с)ЗТЕегепс гезсггспоп епхугпез апг) Пхасег) ш сЬе ргезепсе оЕ гпо1аг ехсея оЕ Еоге)хп Г)ЬЗА саггу)пП сотраПЫе тегппт 3 х!Ов <5 х 10з -5 х Зов -1 х 10в -! х 10з -4 х 10з <5 х 10З -2 х 1О" ТЬе тесбоа озеб со ргераге йе сотресепс се!Ь сап Пгатас!саоу гпоаепсе йе пшпЬег оГ ЪассегюрЬаае М 1 3 р)аооез.
ТЬе Ггецаепс)ез!и йе абазе саЫе аге йоге обса)пеб ояпх ргерагапопз оГ сотресепс Ьассегао се!Ь йас ргооосе — З О' р!аг)оез)ах ог ПР ОЫА. тоьег ог ЫПЬег сгапзйсиоп еГГзссепсзез ио! геошге тоге ог !ея от ЗЬе Пхаиоп геасиоп со оЫасп еошчз!епс пшпЬегз от гесогпЫпапс р!аоаез. Гог ехатр!е, П е)ессгорогаооп Ь сззед ГСЬартг С, Ргососо) 2б), йеп йе Пхаиоо геасбопз зЬооЫ Ье еошеб ыЪяапбаоу 110 ' со 10 ') со оЬсазп чзео-зерагасеа р1аооез.
'ТЬе япао ргорогиоп оГ сотоаезз Р!аооез ь Гостей Ьу зропсапеоаз пзшапь йас Ьаче 1оя йе аЬПьу со ассогпр!ь1з о-сотр)епзепсаиоп. Рго1осо~ 7 Апа!уыил о1 КесотЬ~пап1 Вас1епорЬаце М13 С!опеь ЕЧЕКАГ МЕтНООЬ ЛКЕ О5ЕО ТО АМЛГЧ2Е тНЕ яВЕ ЛМО ОК!ЕГ4ТЛТЮИ оу Еоге!Вп Р)х!А аег!иепсеа сагг!ег! гп М13 гесогпЬгпаппя ° асгееп!пВ 1ас (геЬ!ге) ЪасгепорЬаВе М13 р1аг)иеа Ъу ЬуЪг)с!1каг!оп (р!еаае атее йе рапе! оп АетекыАт!че РкОсОтОе: 5скееы!нс ВАстек!ОРнАОе м13 РЕАОЕ3е5 ВУ нчВк!О!УАт!Он аг йе епе! оу гЬ)а ргогосо!) ° апа1уа!а оу 1ас р1аг)иеа Ъу РСК (р1еаье аее СЬаргег 8, Ргогосо1 7) ° апа!уа!ь оу япаП-аса!е Кр РЬ!А ргерагаг!опа (Ргогосо! 3) Ъу геагПсВоп епкуше ЙВеьг!оп, це! е!есггорЬогеыя апе! 5оигЬегп ЬуЬг)йгаг!оп ° е1ессгорЬогег!с апа!уяв ог гЬе яке оу а!па!е-ьггапг!ее) Р!х!А ш рога!)че гесогпЬшапс с!опт !гЬ15 ргогосо!) 1п ГЬ!а ргоГосо!, гесошЬ!пап! ЬасГег)орЬаае М13 с!опеа саггу)пВ кециепсеа оЕ Гоге)ап РЬ!А 1опаег гЬап 200-300 пис1еогЫее аге г!егесгее! Ъу Ве! е1ессгорЬогеяа оу а!пц1е-аггапг!ег! РЬ)А ге1еааег! )гош 1пуесГее! ЬасГепа !пГо йе аиггоипг!1пВ гпейшп.
МАТЕВ!АЕБ СА!ЗТ!ОЬ): Р!еаае аее Аррепг!!х 12 1ог арргориа!е Ьапг!!!пк о1 гпагег)а!ь тагКег1 ич!Ь <1>. ВойегВ апд Бо!о11ооВ Р!еаье атее АррепгВх ! 1ог согпропеп!а от 41осК ао!и!!опа, Ьийегь, апг! геадепгя Р!1и!е ь!осК ао1иВопа !о йе арргориа!е сопсепгга!юпя 5Р5 !2ог' ~,А) 20х 55С 5исгоье це)-1оагЬпд Ьийег Се!ь Аеа гоге ее! 1О.
7 4) сазг гл 0.5х ТВЕ, сопГа!и!пд 0.5 рфпИ егЬ!Йит Ьготтг)е (! > Р!еазе гее 5Гер 4. 3.39 3.40 СИарсег 3: Ног)сГле счГГИ Вагсег!орИаее М!3 Ъеггогз йис!е!с АсЫВ ассс! О!фопссс!ео1!с!е5 5!па)е-а!галс)есГ гееотЬталг ЬаеСег!орИаае М73 73АГА СЬоозе ргечюнз!у сЬагаесег!сей гесотЪс лапь йас саггу Гоге!цп зецаепсез оГ )спосчп яае со азе аз розтче сопсгоЬ аопп3 ае! е!еесгорЬогеяз.
Р!еаза зее Всер 4 лосе. прес!а! Ес!сс!ршеп1 Яагег Ьай ргезег Со 65аС Ас!с!!6опа! Йеа~е)715 5сер 7 оГ йгз ргосоео1 геди!гез йе геаВелсз 1!зсесГ !л Ргосоео) 2 оГ сИгз сИарсег. 5сер 7 оГ сИ!3 ргойео1 тау гедшге йе геаВель 1!зсесс т СИарсег 2, Ргосоео13 27 алсГ 22. Уес1ог5 ассс$ Валер!а! Яра!п5 Ваесег!орИаВе М73 гееотИ!лалсз рlадиез !л сор аВагозе Ргерагес) аз 4езег!Ье0 ш Ргососо! 6 оГ й!з сЬарсег. Вассег!орИаВе М73 лолгесотЬ!палс чеесог, дгосчл аз сче11-!зоlаСесГ рlадиез !л сор ааагозе Ргерагес) аз Вессс!Ьес) !и Ргососо! ! о! сЬсз сЬарсег. Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
