Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 92
Текст из файла (страница 92)
Весаиле |Ье чаг(аЪ|ел йат айесг йе у|еЫ оЕ л)и8)е-ьтгаидед Т)$4А аге роог!у де6иед, рк)| ши)(3- р1е ьо!атея (гоги еасЬ рЬацегп(д гесошЪ|иаи| |о (исгеале йе сЬаисеь оЕ виссеас 8. То еасЬ си1(иге, адд М13К07 Ье1рег Ьас1епорЬа8е (о асЬ|ече а 6па1 сопсепттадоп оЕ 2 х 107 РЕи/ш!.
1псиЬасе (Ье си1(отея Еог !.О-!.5 Ьоигь а1 37"С ъч(й ятгоп8 а83(а(3оп (ЗОО сус1еь/ пппите). ТЬе Ьас|еиа! си)лиге| ьЬои)д Ъе оп1у г!38Ь(!у |игЪ|д а(гег гЬ(ь ьЬогт шсиЬадои. (Е Вгоъч|Ь 6 |оо Ног(д, |61и|е |Ье си)гите| чд|Ь ргеъчаппе|$2х ТТ |пе|)шп| иид1 |Ье |игЪЫЬу ы ои!у )иат ч)л(Ые. К(ъ)АТ!ЧЕ РКОСЕООКЕ5 РОК 5(ЗРЕК!)ъ(ГЕСТ1О(ъ) ВЧ НЕЕРЕК Ч1КО5 8 )ъ)е83есгед Со!оп)еь Еог 5ирег!пЕес6оп аидагд рго(осо! ъчог(ъа Ъеа! чд|Ь сиЬигеа еатаЪ))аЬед д)тест)у Егош Егеайу рк1|ед со)ои)еа о( (ЗН115, ~ о)оп(еа |Ьат Ьаче Ьееи Впзи и Еог 18 Ьоигь ог )еаа аид Ьаче ио1 Ьееп а!огед ас 4'С. Со(ои(еь йа| Ьаче а!отед ат 4'С ог о|Ьеич|Ве пе8(ес(ед иеед то Ье тех!отед то ЕиИ ЬеаЬЬ Ье(оге аирепп(есИои. оси(ате 2 гп! о( 2х уг шед)игп сои|а|п(и8 ашр(с)И)п 0 00 08/ги!) ъч)тЬ а Ьастепа! со1оиу (гаиа(оипед Ьу е гесошЬ|пап! р)ачп)д.
2. )псиЬа!е (Ье сиИ лге а| 3 TС ъч(й а1гоп8 а8(тат(ои (300 сус)ев/гп)иите) иид! (Ье си)!иге геасЬеа та(ига!)ои. 3. (ЗИите 20 и! о( йе ха(ига!од си)!иге (пто 2 и|! о( 2х УТ гие|йии| соп1а)п)п8 М1ЗК07 Ье(рег Ьастег)орЬа8е а( а соисеи|гадои о( 2 х 10а Со 4 х 10а р(ц'|п!. 4. )псиЬасе йе сиЬлге Еог 1 Ьоиг а| ЗTС чд(Ь атгоп8 а8(тат)оп. (Иеаае ьее йе по1е )и 5!ар 8 ге8агд)п8 тиг- Ь(д(ту ат $Ь)я а!аде.) Рг|кее|3 аъ деьсиЬед (и 51ера 9 — 1 4 о( !Ье ьтаидагд рго!осо!.
Оып8 Егохеп СиКигеа Еог 5иреппЕесбоп 5огие (инеьт(8асога Иид 1Ьат (Ье у(еЫ о( а(п8)е-ьтгаидед рЬа8еги)д (ЗНА ь Ь)8Ьеат ъчЬеп а ха!ига!ед си)!иге о( (ЗН115 'ь отед (и 51ер 6. 5а1ига(ед си)1игеыпау Ье ргераге|$ аЬеад о( топе аи|$ а(отед а1 — 70'С. Бп е! а!. (1992) гесогигиепд Вгоъч(и8 (Ье сеИа сои1а)п|п8 йе рЬа8еш)д 1о аатигатюи аид йеп адд)и8 ьтегИе 8)усего! 1о а Ииа1 сопсеи1гадоп о( 204 (ч/ч). ТЬе сеИь аге |ИчЫе|$ (и(о япаИ а($9иота, 9и)сК-Еготеи )и а дгу (се-е|Ьаио! Ьа|Ь, апд а!отед ат -70"С. ТЬаъчед сеИь (20 и!) аге йеп иаед то |паси)ате 2 ги! о( 2х уТ п|едви| сои!а1гдп8 М13К07 Ье)рег Ьастег(орЬаце. ТЬе орйтюи| аи|оиит о( Ье$рег ЬастегюрЬа8е аЬои(д Ье |$е|еип|пед еп|р(и'- саИу Еог еасЬ сЫ!иге, Ьи! иеиаИу Иеа )п йе гаице о( 10 (о 4 х 10а рйл/гп!.
ТЬе )и(естед си)тигеь аге Иго|ни ас 3TС ъч)й ьтгои8 а8$!акоп (300 сус(оп)пи1е) пи!И |Ье О(3, геасЬеа 05. ТЬеи ргосеед аа деасг)Ьед )и 5(ера 9 — 1 4 о( !Ье атаидагд рготосо!. 9. Адд )сапагпус(п то йе си)тигеа то а 6па1 сопсептгадоп оЕ 25 р8/ш!. Сопдпие (псиЬадоп Еог а Еит(Ьет 14 — 18 Ьоигь ат 37'С. Весаые йе Ьас|егюрЬа8е М1ЗК07 сопла)пл а Еапап|ус|п гедмапсе Иепе, оп)у |Ьоье сеИ| |Ьа| аге |иЕес|ед ъч|И литч)не |Ье а|Ыиюи оЕ |Ыь апт|Ъ|одс |и |Ыя атер. 0|Ьег Ье(рог Ъастег)орЬа8еь (е.8., К408) |)о по| саггу аи аидЬю||с ге|6|апсе пъаг$|ег.
СЬес1| |Ье Веио|уре оЕ йе Ье)рег ч)гы Ьегоге адд)п8 апдЬю|к |о |Ье и|айши! 10. ТгапьЕег йе сеП аиярепяопя со ш)сто(иде тиЬеь апд аерагате йе Ьас(епа1 се!1ь Еготп (Ье ВтоъчтЬ |пе| Кшп Ьу септпЕи8адоп ат шахипшп ьреед Еог 5 пппитея ат гоош тешретатше )п а ш)стойлице. Тгапя(ег (Ье ялретпа1апта со ЕгеаЬ тиЬея ап|1 йоге йеш ас 4'С. 3.48 СЬарсег 3: ССтотЕгт~ счггЬ ВаесегторЬаее М13 Ъеггогь СошЬ!пе 40 р! оЕ еасЬ ьирегпасапс ипсЬ 2 Сс! оЕ 2% 5Р5 ш 0.5-сп! ш!сгоуиее шЬеь. Мсх сЬе сопсепсь оЕ йе сиЬеь Ьу сарр!па апс! сЬеп спсиЬасе сЬе шЬеь Еог 5 ппппсеь ас 65'С.
А1сегпапче1у, еынпасе йе усе!д оЕ Ыгш рагск!еь спаса!и!па ь!па1е-ьсгаптсетс сортеь оЕ сЬе рЬааешстС Ьу !пуго!!па Е. со1т' РН113 ее!1ь тчссЬ тИипопь оЕ йе ьирегпасапсь !р!еаье ьее Ргососо! 1! аптС йеп р!а!!па сЬе !пуеесетС сеПь оп ТТ аааг сои!а!и!па аптрк1111п (60 иасш! Ь ТЬе пшпЬег оЕ ашркс! 1ш-геяьсапс со1ошеь сЬас апье аусег 24 Ьоигь ЕпеиЬасюп ас 37'Р Ь а шеаь иге оЕ йе пшиЬег ос чаи ь рагИе1епп йе ьирегпасапс йас сопсатп ь!па1е-ьсгаптСетС рЬааешнс РСьА. 5ирегпасапп йас еопсатп 2 х 10п со 5 х 10п е6тсш! ъч!11 аепегасе ьасЬЕассогу усеЬЬ оЕ риппетс ь!па!е-ьсгаптсетС рЬааешЫ РЪСА.
Ас10 5 Сс! оЕ ьпсгоье це1-!оатЕ!па ЬпЕЕег со еасЬ ьашр!е оЕ сЬе рЬааешст! РЫА, ппх йе ьаш- р!еь, апс! !оат! йеш шсо ьерагасе сче!!ь оЕ ап 0.7% ааагоье ае!. 12. Сатгу оис е!ессгорЬогеяь Еот ьечега! Ьоигь ас 6 1ЕЕстп ипс!! сЬе ЬгошорЬепо! Ыие Ьаь пщгасес! арргохппасе!у Ьа1Е йе !епцсЬ оЕ сЬе де!. Ехапппе апт! рЬосоцгарЬ сЬе це! Ьу ЕЛЕ !ЕеЬс. у!е!йь чагу гСерептС!па оп йе яхе аптс иасиге оЕ Еогесап РЪСА ш йе рЬацеш!й Ъис аге аепега11у -1 иасшс оЕ еи1сиге чо1ипзе.
!ьо!асе ь!па!е-ьсгапт!ес! рЬацеш!т! РЪЕА Егош сЬе ьпрегпасапсь сопсашспа сЬе !агееьс апюипс оЕ япц!е-ьсгаптЕет! Рсч!А. Ео!!осч сЬе яерь оис!шетЕ сп Ргососо! 4, ьса!!па пр йе чо!ишеь стчосо йтееЕо!й 1п рЬааешЫь, аь тп Ъассег!орЬаае М13 чеесогь, йе усе!0 оЕ ь!па1е-ьсгаптсетс РЪСА сап чагу очет а Вче- со сепуо10 хапае тСерептС!па оп йе яае аптС пасите оЕ йе Еогесап РЫА. 1п аепегас, йе !агаег йе Егаашепс, сЬе роогег сЬе уте!й ригсЬеппоге, Еог геаьопь сЬас аге пос иптсегьсоой Еоге!ап РЪСАь оЕ етсшча!епс ыхе сап ьирргеы йе у!е10 оЕ ь!па1е-ьсгаптСетс РЬСА со чагушо ехсепсь. рог ехатпр!е, пюьс ьеашепсь оЕ уеаьс РЬСА ьеегп со Ъе аптепаЫе со ргорааасюп тп рЬааешиСь, тчЬегеаь Ьшпап аепош!е РЪСАь оЕ етСи!ча1епс яге птау рготСиее тс!гарро!ос!па усе!ах оЕ япа1е-ьсгаптсетС РсчА. ТЬе опепсасюп оЕ Ьой йе Еогесап РЪсА тшегс аптс йе Ъаесег!орЬаае ог!а!и оЕ РЫА гер!касюп ш йе рЬадешЫ чегго т сап аСьо тСгашас!еа!1у аЕЕесс усе!ах.
ТЬия гее!оп!па а Егаашепс тп сЬе орроысе оп'- епсасюп ог ш а чессог тч!ЕЬ сЬе Ъассег!орЬаае опрап оЕ гер! касюп ш йе орроьие опепсаЬоп тч!11 юшесипеь ьо1че а ргоЫегп оЕ 1отч усе!ах. Е5Т1гпа1!оп о11Ье ст!е1д оЕ Ь!щ!е-51гапдед РЬадесп1с! 0МА Ьу Се! Е!ес1гор1соге515 Еп)оста!)оп РапеЬ 3.49 СРОЪЧТН Т1МЕБ Ре!есюп ог геаггап8егпепс оЕ рагс оЕ йе Еоге)8п РХА ае8шепс сап Ъе а ргоЫеш ипсЬ аоше ЬассепорЬа8е М13 с1опея ТЬе 1аг8ег йе )паегс, сЬе 8геасег |Ье гасе ас |чЬ|сЬ йе1есюпа оссш. ТЬ)ь ргоЫегп сап Ье ппп1- пыей (а!|Ьоц8Ь пос е1ишпасей) Ьу саЫп8 саге печег со ргора8асе |Ье ЬассепорЬа8е Ъу аепа1 8гомгсЬ оЕ шЕессей се!!а ш!п)шй сц1сцге.
1пксеай а!ос)га оЕ гесошЬ|папс ЬассепорЬа8еа асогей ас -20 С зЬоц1й Ье р!асей оп ап арргорпасе Ьоас, апй а яп81е, |че11-Ьо1асей р1а0це Ье ыей со еяаЫЬЬ а япа))-аса!е сц!сше. ТЬ)а сц1сцге кЬоц1й ргочЫе епоц8Ь яп81е-всгапйей РХА (Ргососо! 4) Еог п|оя рцгроьея ТЬе сц1сцге аЬоц)й Ье 8го|чп Еог |Ье аЬогсеас роаяЫе 6п|е Е5 Ьоцга Ь цаца!!у орсцпа!) апй пос Ье цаей со ьеей ЕшсЬег сц1сцгеь. КесошЬ)паис ЬассепорЬа8еа саггуш8 1аг8ег ве8шепсь оЕ Еоге)8п РЫА аЬпоас аЬчауь 8госч пюге ь!оъч1у йап сЬоае саггу|п8 япа!!ег шаегся Сц)сисек оЕ сЬеке а1осчег-8гоццп8 гесошЬ)паиса шау гег)ц)ге ир со 8 Ьоцга оЕ шсиЬа6оп со ргойцсе а аас)аЕассогу у)е!й оЕ яп8!е-асгапйей РЫА.
Ре!есюп оЕ Еоге|8п РХА аег)пепси сопЕега а ае!есс)че айчапса8е |Ьас Ь Егег!цепс!у асгоп8 епоц8Ь со геац1с ш сЬе е! ипшасюп оЕ Ьассег)а аупсЬеялп8 сЬе оп86па1 гесошЬ~папс ипсЬ)п а Ее|ч кепа! раяа8ея КесошЪ|папс Ьассег)орЬа8еь |Ьас ЬагЪог РЫА |плесь ълсЬ 1оп8 сгасса оЕ а яп81е пис1еосЫе ЕацсЬ аа а ае8шепс оЕ а ец)сагуо6с сРЫА сопса)шп8 йе 3' ро1уЕА) аег!цепсе ог а Ега8шепс оЕ РХА сопсаш|п8 иш16Р1е сор)ез оЕ а йогс гереасей аес!иепсе) аге чегу яьсерс)Ые со геаггап8еп|епс, ТЬеае Ьассег)орЬа8еа аЬои1й Ье 8госчп Еог сЬе йогсеас роаяЫе репо|Ь аЕ сипе апй печег Еог июге сЬап 8 Ьоцгя РОЬТЕТНТЕЕМЕ СЕУСОЕ Ро1уе|Ьу1епе 81усо1 ЕРЕО) Ь а яга|8Ь|-сЬаш ро!ушег оЕ а я|пр1е гереа6п8 цшс НЕОСН СН )„ОН. РЕО Ь ача11аЫе |п а гап8е оЕпю1есц1аг сче)8Ы| |чЬоье пашеа геЕ)есс |Ье пшпЪег (л) оЕгереа6п8 цпсса |п еасЬ п|о1есц!е.!и РЕС 400, Еог ехашр1е, и = 8 — 9, |чЬегеаа ш РЕС 4000, и гап8еь Его|и 68 со 84.
РЕО )пйцсеа шасгошо1еси!аг сгосчй)п8 оЕ ао1цсеь ш а0цеоы ао!цс)оп ЕХшипегшап апй Мшсоп 1993) апй Ьаа а гап8е оЕ шее ш пю!еси1аг с1опш8, 1пс1цй)п8: ° Ргес)рйасюп оЕ РЫА шо!есц1еа ассогй)п8 со йе)г яае ЕЕлЬ апй 5сЫе)Е 1975а,Ь; О8аса апй О11Ьегс 1977 1.Ь 1980). ° Ргес)рйа6оп апй рцпЕса6оп оЕ ЬассепорЬа8е рагск!еь Еуашашосо ес а1. 1970). ° !псгеаяп8 сЬе еЕЕс)епсу оЕ геаяоссасюп оЕ со|пр1е|пепсагу сЬа)пк оЕ пцс1ек аснЬ йцпп8 ЬуЬпйка6оп, Ыцп|-епй !|8абоп оЕ РЫА ию1есц1ея апй еп|1-1аЬе1ш8 оЕ РЫА ей|Ь ЬасСепорЬа8е Т4 ро1упцс1ео|Ые Рйпаае (Ъпипегшап апй М|псоп 1993).
° Рцяоп оЕ сц1|цгей се!!а ицсЬ еасЬ о|Ьег ог |ч)сЬ Ьассепа1 ргосор1аая 15сЬаЕЕпег 1980; Каяоц1- гайе8ап ес а1. 1982). )4ЕГБсЕ!ЧСЕЬ 3.5)2 с Ьарсет гк )4)ог)с!лХ счтсЬ Вас!ее!орЬаХе М13 Чессоть АсЬсптап М., Ч)01ессв Х., ап6 С!аг1с А.1. 1971.
Верпшп8 а Вепес)с апа)уяв о! сощиВабоиа1 сгапвуег Аесетт)пей Ьу сЬе Г Гас)от )и ЕьсЬепсЫа саП Ьу Ьо1абоп ап6 сЬагассепха6оп оЕ сгапвЕег-Аеутс)епс пшсапь. В Вастепа1. 106т 529 — 538. А)с!п8-Меев М.А. ап6 Ятогс !.М. 1989. РВ1иевспрс 1Ь бепе гпарршВчессоть. №с)е)с Асиб Кех 17) 9494. — —,! 993. Ро!усов чессогь: А вувсет Еог рас)са8)п8 61атепсош РЬаВе ап6 РЬаВетЫ чессогв ияп8 )атЪда РЬаВе рас)сарп8 ехсгась. Селе 137: 93 — 100. Ваппег Р.'тттт., Хаче С., апт1 МагЫп Р.А. 1981. 5)гиссиге оГ )Ье ргосетп апд РХА тп И 6!атпепсош ЬассегюрЬаВеь.
№сите 289: 814-816. Вагпев )ЧтМ. 1979. Сопыгиссюп оЕ ап М!3 ЫвбгПпе-сгапвбис- шВ РЬа8е: А яп81е-ягапс!ес) с!опшВ чеЬ)с)е тч))Ь опе ЕсаК1 ысе. Селе 5: 127 — 139. - — ---. 1980. РХА с!опсп8 тччй ып8)е-всгапбе6 РЬаВе с1отп8 честить. Селес Елр 2) 185-200. Валет М. апс1 5ипй С.Р.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
