Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 96
Текст из файла (страница 96)
1993). Сарк ш сочегаве аге шечдаЫе Ьесагье 1(Ъгапек аге аг Ъекг а кга(1кг!са! кагпр!шв оЕ а рори!агюп оЕ гекгпсгюп Егавтепгк. ТЬе яке апд пшпЪег оЕ йеке "кгагьдса1" варк дерепд оп (Ье пигпЬег оЕ 8епогпе ецшча1епгк сагйед (п йе епдге 1!Ъгагу (р!еаке кее (Ье рапе1 оп СЕХОА41С ПВВАВ185). Рог ехагпр1е, а сояпЫ 1(Ьгагу оЕ Ьшпап 8епопис РЫА сопякдпв оЕ 75 000 с1опек оЕ -40-1сЬ Р)ъ(А Ега8тепгк ъчои! д сопгаш а гога! оЕ 3 х 10ч Ър оЕ Ьшпап Р)ъ)А, ог опе Ьар1оЫ ес!шча!епг. Ечеп (Е йе 40-1сЬ с1опед Ега8тепгк ъчеге вепегагед Ьу епйге1у гапс1опл с1еачаве оЕ (Ье ог(8- !па1 РЫА ргерагагюп, апд ечеп !Е (Ье рас)са8!п8 оЕ (Ьеке Ега8теплк (пго ЬасгегюрЬаве Ьеадк ъчеге а1ко епгйе!у гапдот, (Ье 1!Ьгагу ъчои1д Ье Еаг 6от сотр1еге. 1п й|к саке, (Ье ргоЬаЪл16у ГЬал апу Р)ъ(А кесрлепсе оЕ (п(егекл ъчои!д пол Ье гергекеп(ес1 !п йе!лЬгагу !к -3796.
ТЬь ргоЬ1ет сап Ье ате1югагед Ъу лпсгеаяпв йе дер(Ь оЕ сочегаве оЕ йе !лЬгагу. Рог ехатр1е, !п а !лЬгагу оЕ 750,000 сояп(дк йаг сочегк (Ье Вепоте геп йпек, 1Ьеге ь ап -99.99598 сЬапсе (Ьаг СЕ(ъ)ОМ1С С! ВЙАй)Е5 ТЬе ргоЬаЬ(1(лу Ила) аиу 8(чеи (ЛХА кециеиъ.е ъч(И Ье гергекеи(ед (и а веиоги(с 1(Ьгагу саи Ье са1си(а(ед (гот (Ье еъ(иавои (и(1 — Р) Х = (и(1 — 0 ъчЬеге Р 'ь (Ье дек(гед ргоЬаЬй(у, Е й йе (гасвоиа( ргорогвои ог (Ье веиогие (и а яи8!е гесогиЬ(иаг 0 аиг1 Х ь (Ье иесекка~у иигиЬег о( с!опек 'е въе 1(Ьгау (С!аг)ье аид СагЬои 1976). Рог ехагир!е, Го асйече а 99Уь ргоЬаЬйгу (Р = 0.99) о( Ьайив а 8(чеи РХА кециеисе гергекеи(ед (и а 1)Ьгагу о( ) 7-Ыл (гавгиеиЬ о( гиаиьта!(аи РХА(Зх)0 ) Ьр Х (и (1 — 0.99) 4 = 8.1х10 Рог гиоге деь)(ед гиа(Ьегиавса! (геагтеигк о(8еиоги(с 11Ьгагу соикггис(юи аид ргоЬаЬй(у са(си(а(юик, р)еаке кее 5еег1 (1982) аиг( 5еед ег а!. (1982).
Еитгот)исттои 4.7 йе Ьшпап у|ХА хет)пенсе оЕ )птегетт тчои16 Ъе тергехептет) ат 1еая опсе. Е)пЕоттипате1у, Ьесаиае юше репою)с с1опеа гер!кате Ьеттег |Ьап ойегя а|Ы|6опа1 Ь)аа )п гергеаептатюп шау оссиг ах |Ье 11Ътагу ь гер1катет! апт) ехрапт!ет!. Рша11у, Ьесаиае с!опет! ает)иепсеа шау ипт!етого геаггапцеп|епь т!ит)пВ раыаце, йеге ь по Виагаптее |Ьат апу 5)чеп гесотпЬ)папт с1опе ьо1ате|1 6ош а цепош)с 1|Ьгагу тчоиЫ песе|ьагбу саггу ап ассигате сору оЕ йе соггеаропт!тпц цепопж хет)иепсе.
Кпотч)пц |Ьат депопнс!1Ьгапеа ате аЬчаух нпрегЕесг, рета)ш!ага апс) риг)тта штцЬ| тЬго|ч ир |Ье|г Ьап|Ь апт) хау "ЕпоицЬ." Ночтечет, а)чеп йе яке, с!иа16у, пшпЪег, |1ерй оЕ сочегаце, апт! ргочеп регЕогшапсе оЕ сиггеп|1у ача!1аЫе 1|Ьгапея ор6пнаь апт! РгаВшат!ага сап гетпа|п соп6|!епт !тпо|ч)пд йас |Ье ойЬ оЕ !ао1ат)пВ йе т!еягет) цепошк с1опех аге атас)тет) чету ппкЬ 1п йе6 Еачог. СНООЬПЧС АМО1ЧС ЧЕСТО|56 ТЬе тпа)ог чапаЫез |Ьат 1пбиепсе |Ье сЬоке оЕ а честог 1ог сопягисооп оЕ аепоппс 1|Ъгапеа ате йе яхе оЕ йе гагат геВ)оп апт) йе сарасну оЕ тЬе честот, йе еахе оЕ хсгееп)пВ 11Ьгапея тчЬейег |Ье честог )а т)еяВпет! то Еасротасе сЬгошоаогпе тчаБапа, тчЬетЬет с1опет! ВХА ает)иепсеа сап еая1у Ье роббе|1 ап|1 гесо| еге|1, ап|1, 6па!!у, тчЬе|Ьег 1патаЬЕВ|у оЕ с1опе|1 ает!иепсех ь 16те1у то Ъе а ргоЫетп. Ь!Ее оЕ ЕЬе Тагее$ Кее!оп 1Е йе тагВет теВ)оп оЕ йе Вепоше ь чету япа11 (<50 )тЪ), йеп ЪастегюрЬаце г.
ог сояпЫК аге |Ье честога оЕ сЬоке Еог йе сопатгистюп оЕ Вепош)с 1|Ъгапея 1)п!е|ь йе тпчехт)аасог тчог)ь оп ап еаосегк огцаптхгп ог чтаптх то сопатгист а 11Ьтагу Етоп| а рагтки1аг пютапт ттга)п, |Ьеге ь а Воат! сЬапсе |Ьат а хи)таЫе сояпЫ 1!Ьгату оЕ кепош)с Т|1!А а1геат)у ехЬтя 1Е аисЬ а ВЬгагу ь пот ача|1аЫе, тче!1- т!еЕтпет) сояпЫ честогя ЬткЫу еЕ6с|епт рас)таВтпа пнхтигея апт! аи)таЫе хтгаша оЕ 6. со6 аге геадВу ача!!аЫе Егош сопипегс)а! аоигсея Ргерагатюп оЕ |Ье песе|нату Ь)ВЬ-пю1еси1аг-тче)ВЬ| цепошк Е|Ь!А хЬои!д Ье тчттЬ|п |Ье сарае|ту оЕ апу ехрепепсе|1 1аЬогатогу (р1еате хее СЬартег 6). 1Е |Ье ге51оп оЕ штегеат ь тоо !ага то 6| )пто а япц1е сояпЫ ог 1Е йеге ь Воот! геа|юп то Ье)тече йат йе герон шау Ье с66ки1| то с1опе, а роьяЫе а1|егпат|че ь ЬастепорЬаде Р1, РАС, ог ВАС 1!Ьгапея Сепопнс 11Ьгапеа оЕ шапу трес)ет аге нотч ача|1аЫе ш тЬеае честогя Рот а 11хт)па оЕ сошрап)ех |Ьат ргоч16е!1Ьгапеа апт) чапо|ь с!оп)пд хегчкея р1еаае аее |Ье шЕоппатюп рапе1 оп ЕАКСЕ-ЕКАСМЕ|9Т СЕО|9тетС РКООЕ|СТ5 Ае|О 5ЕКЧ!СЕ5.
А)тЬоицЬ асгееп)пц оЕ ех)атшц 11Ьгапеа ь хтга!ВЬ|Еогчтагт), апт! Кепегат)оп оЕ яна!1 Р! 1|Ьгапеа ь тче!! |ч)тЬ|п йе сарае)ту оЕ пюя 1аЬогатопея т!е почо сопхттист)оп оЕ 1агВе Вепопнс 1|Ьтапеа )п Р1 честогх геша)пх а т)1ЕЕ|си1т ипт!егта)с|па. ТЬ)а ь Ъеса|ье |Ье ей)с)епсу оЕ рас)са51па оЕ у|ХА |пто Ъастет)орЬаае Р! Рапк1еа )а те!апче1у 1оъч апт! Ргерагатюп оЕ аиЕЕтстепт циап66ет оЕ 75 — 90-!|Ь Егарпепта оЕ Вепош)с Р14А )а !аЬопоия 1)пт1! |Ье еЕ6с)енсу (апт) соат) оЕ Р1 рас)сан)па нпргочея |Ье РАС ауатетп шау Ье а пюге геахопаЫе а1|егпапче Ьесатье 1т тес)и)тех по ехрепепсе тч)тЬ Ъастет)орЬаВе Р! ог хрес!а!- )хет! геадептх якЬ аа рас)та5|пд пнхтигея !Е йе геВ)оп оЕ тптегеат )а >250 1|Ъ |п яхе, |Ьеп УАСх аге |Ье честога оЕ сЬоке.
Нотчечег, ах тч)тЬ ЬастепорЬаВе Р1, сопзтгист)оп оЕ петч 1агВе Вепош)с 1|Ьгапех ш тАС честоь )т ргоЪаЫу Ьехт 1ей то ехрегь. ТЬе Еа5е оЕ $сгееп!пк 1.!Ьгагте5 Рог с!оп)пВ оЕ япа1! (<50 )сЬ) ает!иепсея цепопнс 11Ьтапет ш соап|Ы ог Ьастет)орЬаВе Х честить аге Вепега11у ртерагет! апт! ша)пта)пег! ах а яп51е роо1 оЕ с1опех йат аге р1атет) апе|ч тчЬеп хсгееп)пд Ьу сопчептюпа! ЬуЬ|Ытхатюп. Нотчечег, |Ьь ргосе|ь )х тоо!аЪопоть апт! ехрепяче Еог йе сопттгистюп оЕ геВ)опа1 шара ап|! сопт)Вя Моте апт! тпоге, аепопис 1|Ьгапех ате Ъе)па тпа|пта!пег! ах ттчо-т!)шепяопа1 аггаух |Ьат сап Ье хсгеепет! Еот хрес|6с ает!иепсея еттЬег Ьу сопчепВопа1 ЬуЬпйхапоп тч)тЬ япВ!е-сору ргоЬех (Еог геч!етч, р1еазе аее Вепт!еу апт! ТтипЬатп 1995) ог 4.8 С)гарсег 4: Игог)с(лц ъч!($| Н(цй-сарае(гу $7есгогк ак роо)к |и писгобсег йкЬек йас сап Ье ксгеепе|$ Ъу ро1угиегаке сЬа|п геассюп (РСК)-Ьаке|$ ргососо!к.
1п йе !ассег саке, а ра|г оу о1!цопис!еосЫе ргппегк, г)еяцпес( со атр!!Ту а крес|6с сагцес кецтепс о( Р)ъ(А, аге икег) со ксгееп роо!к о( с1опек. ТЬе пшиЪег о( с|опек ш йе роо1к г(есгеакек ъч(сЬ еасЬ гиии|1 оу ксгееп|пц ипс П |Ье с1опе оу |псегекс ь Ыепс|6е|$ (С:гееп ап|$01коп 1990; Апап|$ ес а!. 1991; сог ген(еъч, р1еаке кее Ечапк ес а1. 1992; а1ю кее |Ье рапе1 оп АККАТЕ0 РВКАК1Е5). КеГегепсе!|Ьгапек сопксгиссес(|и Ь~ВЬ-сарасцу чессогк кисЬ ак ЬассепорЬаце Р1, ВАС, апс) УАС аге агсЬ|нег) ш (Ь!к ъчау ак а гекоигсе йас сап Ъе ике|$ Ьу тапу цгоирк (е.ц., р1еаке кее Ргапсь ес а1. $994; 5ЬерЬегг) ес а1. 1994; ХеЬеспег апг)1еЬгасЬ 1994).
Сор|ек оу|Ье ВЪгапек аге та!пса(пес( ас Нигпап Сепоте Сепсегк ш сЬе Рп!сес)5(асек, Ешоре, Аяа ап|$ Аиксга1(ак!а, ап|$ коте 1|Ьгапек и|ау Ье ассекяЫе |ЬгоицЬ солииегс|а! ксгеетпц сотратек (р1еаке кее ТаЫе 4-2 ап|1 йе ш1огтаС|оп раис) оп САКСЕ-ЕКАРМЕЫТ СЮМЛ(С РКООС)СТ5 АЛ(0 5ЕКЧ|СЕ5). С)сгоосойоосе ЪЧа! $(сщ СЬ|оиююта! гец(опк ог шйчЫиа! цепек сЬас аге соо 1агце со Ье !ко1асе|$ ак а ыпц1е кецтепс оу Р)ъ(А сап Ье с1опе|1 Ьу сЬгоп|оюте ъча1Ыпц ак а кепек о( онег1арршц Сгацтеп(к.!и й|к СесЬ- п|ъ)ие, а кецтепс о( попгереббне РЪ(А (ко!асес) Сгот опе еп|$ ог а с1опе|$ кецтепс о( цепоиис РХА ь яке|1 со гексгееп йе 1|Ъгагу Гог а|ЫЬюпа1 гесо|пЪ|паис с1опек сопсаш|пц онег1арршц АККАУЕР Е1ВКАК1Е5 ТЬе Ыеа о1 ксоппц ПЬгалек ак (пс((ч|с(иайу рК(ъес( с|опек |и т(сгос(сег |йкйек цоек Ьас(ь о1 с|огйпц ъчЬеп йе 1еъч ачайаЫе сРЛ(А ПЬгалек и|еге яиай |и к|хе ап|$ Л(цЛ |и ча|ие.
Т с|опек саггу|иц гесогиЬ|папс р(акт(бк |неге р(с(сед 1гогл СЛе (п(с(а! ке|есбне р|асек ал|$ с л||сго|Кег |$(кйек солса|п|пц |х|иЫ гие|йигп. Аггау|лц ПЬгалек |и сЫк (а|Люк ейпйпасе|1 сотре(|Сюп Ьесиееп ! с|опек, гес(исег( сопсат(пас(оп Ьу гпо(с(к, апс! 1аойсасед к|огаце, герйса|юп, апг| ксгееп|пц. ТЛе гпа|ог с(|кас(чапи|це о1 аггауес! ПЬгалек 'ь йе кйеег пигпЬег о( с|опек йа| л|ик| Ье р|сйед апб к|оге|! |и т(его($(ег р|а|ек |и оп|ег Со ассоттода(е а гергекеп|абче ке|.
$п бъе саке о1 сРМА ПЬгалек, аггау|пц 'ь оп|у ъчогб|иЬПе ъч |ел а рагбси$аг сРХА ПЬгагу ь со Ье ксгеепе|| гиапу бгпек Пепгюл ал|! сейгасЛ |99|). Нои ечег, аггау|пц ь сегса|и|у а соксебесс|че п|есЬос! 1ог ксолпц ПЬгапек о1 цепоп||с РЛ(А йас Лаче Ьееп сопксгиссес! |и "|П1йси|с" чессогк юсЬ ак уАСк, ВАСК, ал|$ ЬассегюрЬаце РС.
5огпе уАС ПЬгапек аге аггауег( |и гп|сгоб|ег |$ьйек а| а г(епк|гу о1 1 с!опе(ъчей, агк$ ойегк аге аггауе|! ак роо|к о1 крес|йс к|се. РС ПЬгалек аге о(сел к(осе|1 ак рооЬ о1 |0 — 20 с|опек/ъчей. ТЬе ъчог(г |лчо|че|! |и р(с)с(лц гесогиЬ|палс с|опек Ьу Ьапс! апг( Сгапксек(иц |Легп опе а| а бп|е |и|о гп(сгиб(ег с((кйек 'ь 1оггпЫаЫе |и |ь кса$е алс( ||ергекялц |и Пк пап|ге. Ноъчечег, кечега! гекеагсЬ цгоирк ап|$ согпгпегс|а| согпрал|ек Лаче бене(ореб гпесЛаи|са! со|оку ап|$ р1а||ие р|с||егк |Лас солкЫегаЫу еаке |Ье е((ок гег(и(ге|1 со ек|аЬйкй аггауе|$ ПЬгалек.
Гигсйеггпоге, б|е ике о1 ЫВЬ- ег-|$епясу аггаук йас согпргекк кечега| Лил|$гес! с|опек оксо а пйсгоксоре к!кое гег(осек ксогаце красе ас — 70"С (р|еаке кее Аррепг()х 10). Акау|пц Р|, ВАС, апг( уАС цепок||с ПЬгалек Ьак й юг абнап(ацек Фас соцейег оиине(цЛ СЛе ргоЫель о1 р(сй|пц апд к|огаце. ° Еасб с|опе Лак а крее(йс кес о1 соогс((па(ек (|йкй пигпЬег, гоъч, апс( со|игпи) апг( сап СЛеге1оге Ье еакйу |осаСе|! ап|$ гесочеге|$. ТЫк 1еа|иге 'ь екрес|айу |глрог|ап| ъчЛеп кечега| |аЬогаСолек аге ъчог(бпц оп СЛе кал|е кес о1 аггауес( с|опек, к|псе кйаллц о1 с|опек л|еге|у |пно1нек кЬаппц о1 соогсйпасек ъисЛ|п Фе ге1- егепсе ПЬгагу. ° ТЛе аггауес! (огл|ас айоъчк ПЬгалек со Ье ксгеепе|$ |и а с|хпЬ|пасопа| (акйюп.
(пб(ч|с(иа( с|опек аге роо(ег(, |и|о очег|арр|пц Х-|$(гпелк(оиа! кеЬ, ъчЛ(сЛ аге йеи ксгеепе|$ Л)егагсЛ|сайу Ьу ЛуЬг|с(|га(|оп ог РСК ТЛе ! рассегп о1 рок(С(не аид пецабче гею|йк оЬ(а(пе|$1гогл СЬеке рооЬ сап йеп Ье ссес(рЛегегс со |с(елб(у сйе ! |осабоп о1 ап (и|$(н|с(иа! с|оке |Ьас саглек бъе кег(иепсек о1 'всегекс (Къиаб|ои к|а ес а!, с 990; Валйос ес а|. ! | 99|; Атею(уа е| а|, |992). Оксе СЬе арргорла|е роо|к аге ек(аЫ(кЛе|$, СЛ(к сол|Ь|ла|опа| арргоасЬ сап | цгеас|у гебисе йе агпоилс о1 |аЬог (пчо(нег( |и ксгееп|иц цепокйс ПЬгапек икй л|апу ||Пйегепс ргоЬек.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
