Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 100
Текст из файла (страница 100)
Соо1 сЬе геассюпз со гоосп сеспрегасиге. Рипуу сЬе РХАз Ьу ехсгасс!пц опсе иг)сЬ рЬепоЬсЫогоЕогпс апс1 опсе ъч(сЬ сЫогоЕопп. Кесочег йе РХА Ъу зсапс!агг! ргессрПа6оп ъч!1Ь есЬапо1 апс! зиЪзес)иепс игазЬ(пП сп 70% ейапо1. !( ои1у япаП апгоииь (<! Р8) оЕ 8епоиис РЫА аге ргезеис гп йе сезс г)ерЬозрЬогу1а6ои геасбоп, йа!уае сЬе ехсгассе6 РЫА а8ашзс ТЕ (РН 7.6) ъчгй Поа6и8 спешЬгаиез аз дезсг(Ьег( ш сЬе рапе! оп А001Т!ОЫАЕ РКОТОСОЫ РОК!НСАТ!ОХ ОГ Н)СН-84ОЕЕСС)САК-ЪЧЕ!СНТ РЬСА ВУ РКОР О!АЕТ5!5 )и Ргососо! 5. 15. РЬзо1не сЬе съчо сопсго1 Р)ъ)Аз !п 10 )г1 оЕ 1х ППа6оп ЪиЕЕег.
АсЫ 0.1 ъъге(зз ишс оЕ ЪассепорЬа8е Т4 Р)ъ)А ППазе со еасЬ сиЬе апг) шсиЪасе сЬегп Еог 3 Ьоигз ас гоош сешрегасиге. Ехапппе СЬе Пцагег! Р)ъ)Аз Ьу а8агозе це! е!есСгорЬогеяз. ТЬеге зЬои!6 Ье по ечЫепсе оЕ 1г8аиои ш сЬе сопсго! геасбоп соисаси!и8 8еиопис аиг( р!аяпЫ РЫАз сЬас ъчаз зиЪ)есс со РЬозрЬасазе сгеасшеис, ъчЬегеаз сЬе иисгеасег) р1аяиЫ РЫА зЬои!6 Ье соичегсег) со иш!сапега аи6 с!озег) ссгси!аг шо!еси1ез. 16. АПоъч сЬе Р)ъ)А ш сЬе 1аг8е-зса1е геас6оп со йззо1че онеги!иЬс ас 4"С !п а япаП чо1шпе оЕ Н О.
Апп Еог а Ппа1 сопсепггагюп оЕ -500 )с8 оЕ Р)ъ)А/ш!. ЕзСЬпаге СЬе сопсепСгабоп оЕ РХА Ьу акагозе ке! е1есггорЬогеяз, ог Ьеггег, Ьу гпеазиппц А 17. 5еС ир а зепез оЕ Пцаг!оп геас6опз (Ппа1 чо1шпе 20 р!) сопгаппп8: сояпЫ апиз РЫА (5сер 9) 288 с1ерЬозрЬогу1асег! 8епоиис РХА (5сер 17) 0.5, 1, ог 2.5 )г8 10х 88а6оп Ьи((ег 2 р1 ЬассегюрЬа8е Т4 РЫА 88азе 2 Ъче(зз ишЬ 18.
1псиЪасе йе Пиас!оп геас6опз Еог 12 — 16 Ьоигз ас 16'С. ЪЧЬеп ияп8 чессогз гп ъчЬ(сЬ сЬе пчо соз ясез аге зерагасег( Ъу Ыеача8е ичсЬ а гезспссюи епаугпе сЬас сгеасез Ыиис еигЬ, сЬе 1г8аиоп Ьи((ег зЬои16 Ье зирр!егиеисегс ъч(сЬ АТР со а Ппа! сопсепсга6оп оЕ 5 шхс. ТЫз ас)йсюп )пЬсЬгь 88ас!оп оЕ Ыипс епгЬ (реггес6 апг( 58агагиеПа 1981) апгс сЬегеЬу зирргеыез сопсасешепхабоп оЕ сЬе чессог. Рас)саде 5 и) оЕ еасЬ оЕсЬе 1фасюп геассюпз !п ЬассепорЬаде А рагбс1ез (ес)шча1епс со 0.5 ид оЕ чессог аппз) ияпд а сопппегсса1 рас1саЬПпц )ис апг) ЕоПоъчш8 сЬе сопйсюпз гесопппепдес! Ьу йе зирр!сег.
АЕ(ег рас)са8!п8, аИ 500 р1 оЕ 5М апд 20 р! оЕ сЫогоЕогсп Со йе геасСюпз апс) йеп зсоге сЬе кисее! геас6опз ас 4 С. ТЬе яае о( сЬе шзегь сЬас сап Ье с1оиег) ш созш!6з )з аЕЕессе6 Ьу сЬе шесЬод еьег1 со ргераге рас)га8)и8 ехсгась (Васса аи6 5ъч(й 1985). ЫеаПу, ехсгась ыег) со рас)га8е созгпЫз зЬои!д Ье ргерагег) ияп8 а Ьи((ег йас сои!азиз зрепиЫсие Ьис пос рисгезссие. ъчЬеп рисгезсше ь ош!ссе6 Поги сЬе рас)га8(и8 ехсгасс аид сЬе рас)га8)и8 геассюи, сЬе зузсегп ехЬ(Ьгь зе1ессибсу ги сЬе яае оЕ РЫА гио1еси!ез йас аге рас1га8ей ТЬия РХА сЬас ь 8058 о( ъчПйсуре ЬассепорЬа8е РЫА ш 1еи8сЬ гз рас)га8ег) 200-Ео!6 1ем е0)с(еис1у йап чаЫ-суре ЬассепорЬа8е х РЫА Кзе!Е !п йе аЬзепсе оЕ рисгезсгие, сояпнЬ сЬас сопсаш 1аг8е гизегсз (-45 1гЬ) чНП Ье рге(егеибаПу рас1га8ей рог ип1глоъчи геазопз, розяЫу Ьесагье оЕ а зЬогса8е оЕ гег Сииссюп, зоше ргерага6оиз оЕ рас)га8(и8 ехсгась сЬас ъчог)г ъчеП ъчиЬ ЬассепорЬа8е х РЫА аге пос зшсаЫе Еог рас)га8)п8 созш!Пз.
5опге Йда11оп 01 С08п)14! Аггп8 Ео Сепоп)!с ОЬ)А: Рас1сак!пд апе! Р!а11пд КесотЬ1пап18 4.22 СЬаргет 4: Кот/с/и8 иий НгдЬ-сарае/гу Месготг соиииегс|аПу ача($аЫе рас(га8$и8 ехсгасеп аисЬ ав йе 6$8арас(г $$$ ХЕ ех|гас| Его|и Бггаса8еие, аге Ьепег |Ьаи огЬегз Еог соиягисиои о( соыиЫ $|Ьгаиев. Меакиге $Ье гиег оЕ йе рас)га8е6 сояп(64 |п еасЬ оЕ гЬе рас)га8!п8 геасг!опа Ьу ггапйисбоп ппо ап арргорпасе Е. со!| Ьоаг.
М(х О.! ги1 оЕ а $0 2 гВ1и6оп оЕ ап а1(г)иос оЕ еасЬ геас6оп ичГЬ 0.1 гп! оЕ 5М апс(0. 1 гп! оЕ ЕгеаЬ р!аГ(п8 Ьасгепа. А11о|ч йе ЪасгегюрЬа8е рагГ(с1еа сопга(п!п8 гЬе гесогпЬ|папг соыпЫх го асЬогЬ Ьу |псиЪа6п8 $Ье !пЕессе|! Ьасгепа1 си1$игез Еог 20 ш!пигеа а!37 С. А|Ы 1 гп1 оЕ ТВ ше6)иш ап6 соп6пие йе шсиЪа6оп Еог а ЕиггЬег 45 пипигех а!37"С го а!!огч ехргекяоп оЕ |Ье 1|апагпус!п геяагапсе депе (п $Ье 5ирегСоя1 чешог. 5|иге йе геиь$и|$ег о( йе рас$|а84и8 иихсигеа ас 4'С пи| 8 |Ьер| 2 $ — 24 Ьаче Ьееи сошр! иге|( (2-3 г(ауа). ТЬе аЪ|!иу о( а багга(и оЕ8.
сой |о Ье (и(есге|$ е(ас|еиг!у |чи|Ь Ьас|еиорЬа8е х аЬии$8 а1|чау| Ье се|ге|1 Ье(оге Ь Ь иае|$ |о ргора8аге йе сояиЫ!|Ьгагу. ТЬ(| сои|го! и Ьеаг г(оие Ьу |иеаюии8 |Ье (иуесичиу о/ а ЬассегюрЬа8е Х а!ос(г оЕ $|ио|чи |Ьег ои |Ье р(аии8 Ьас|епа. 20. 5ргеад 0.5 п|1 ап6 0.1 гп! оЕ $Ье Ъасгепа1 си1$иге оп!о ТВ а8аг р1агеа сопгаиип8 )гапагпус!п (25 $|8/ш!). АЕгег (псиЬаг(п8 йе р!агеа очегп!8Ьг аг 37'С, соипг йе пшпЬег оЕ Ьасгепа1 со1оп!еы ЕасЬ ш(сгоцгаш оЕ $$8аге|$ соашЫ-еи(гагуо|$с Р$|$А аЬои$|$ у!ей Ьепчееи $0' аиг( $0| Ьасгепа1 со1ои(ея 21.
Р(с(с 12 ЬшЫ(ч(6иа) со!оп!ек апд Вгочч япаВ-аса)е (25 гп1) си)гигеа ш ТВ сопгаш!п8 25 р8/п|1 1|апашус(п Еог репо|Ь оЕ по 1оп8ег йап 6-8 Ьоигы 5Ьа)ге йе си)гигеа ч(8огоиа!у дипп8 шсиЬагюп. рог ии(лиочги геа|оия |Ье у|еЫ оЕ югие гесои|Ь$иаи| сояп$|$| и роог |чЬеи си1шгеа о( йе Ьогг Ьас|еиа аге 8го|чи |о 1а|е!о8 РЬазе. 22. 1|ю!аГе соыпЫ Р)ч(А Его|и $5 ш1 оЕ еасЬ оЕ йе 12 япа!1-аса1е Ъасгепа! си1$игеа ияп8 йе а!)са1!пе 1уяа шейой 6еаспЬе6 ш СЬаргег 1, Ргогосо1 $.
Рог юше арр!$саиоия $| и|ау Ье иесеяагу |о рииуу иишргерагаиоиа оЕ сояиЫ РЬ/А Ьгг|Ьег. Риг г(ега(!А р!сааре аее |Ье раие! ои СЕЕАЬ$$Ь$С $3Р СО5М(Р РЬ/А. 23. Е3!Веаг 2-4 $|1 оЕ еасЬ оЕ йе Е$$ч)А ргерага6опз иЬЬ геагпс6оп епхушеа (е.8., №г! ап6 5а11) $ЬаГ Ыеаче (Ье сояпЫ чесгог ЪиГ аге ипИсе!у Го с1еаче $Ье с1опе|1 !пюгГ оЕ Вепоп|к Е)Ь)А. Апа1ухе ГЬе ягеа оЕ (Ье геаи1$(п8 Ега8гпепп Ъу е1есггорЬогеяа $ЬгоиВЬ а 0.7% а8агохе Ве1. $/ае аа шаг)сегг 1шеаг ЬасгеиорЬа8е х Р$4А аиг$ Н/иг$1$$ Ега8шеиь о( Ъас|епорЬа8е х РЬ/А, |чЬ$сЬ саи Ье ргераге|$ еая!у Ы |Ье (аЬога|огу аи|$ аге а(ю ача|1аЫе сопииегс|а!1у. 24.
Са1си!аге $Ье ргорог6оп оЕ со!оп(еа $Ьаг саггу шатии Ех(!гпаГе ГЬе ачега8е ыке оЕ ГЬе |паегп Ьу !40!а!(п8 а Ее|ч 6океп с1опеа ап6 п|еашпп8 ГЬе яхе оЕ !пхегга Ьу РРОЕ (Еог |1ега!1я р1еахе хее СЬаргег 5, Ргососо! 17 ог 18). 26. Са1си1аге $Ье "дергЬ" оЕ йе 1!Ьгагу, !.е., Ьо|ч шапу 8епоше ег)и(ча1епга В сопса)пх (р1еаае аее йе рапе! оп СЕЬ$ОМ(С Е!ВКА$$$Е5, ш йе сЬаргег !пггог(исг!оп). !( йе! $Ьгагу Ь айаг(а(асгогу (и яхе аи|$ |$иа$(гу, ргосее|1 |о р1аге аи|$4сгееи |Ье 1$Ьгагу Ьу ЬуЬ|$4(хаиии (Ргогосо1 2) ог, ааегиаиче1у, |о агпр$$(у аи|$ |гиге |Ье 1$Ъгагу (Ргососи(з 3 аи|$4) $( гВЕВси16е| аге еисоиигеге|$ |$иг(и8 соиыгисиои о( |Ье 1$Ьгагу, |гу |о и|от(г ош |Ье июы !!!ге(у геаюи| Еог |Ье Еа|!иге о( |Ье ехрепшеи|.
Рог ехагир1е, а Ь(цЬ ргорогиои о( "еи|р|у" с(пил ш(8Ьг |игВса|е |Ьа| |Ье чесгог Р$4А |та| ио| сотар!е|е!у г(ерЬо|РЬогу(агег$ (5|ер 3). А |$ьарро(иии81у гига($ ишиЬег о( гесогиЬ|иаиь ии8Ы шйсасе йас $иаийк(еиг агиоииь о( 8еиоиис Р$4А ог соя гиЫ агш| |чеге ргезеиг $и |Ье $$8аг(ои геасиии ог |Ьа| рас(га8$и8 о( сиисагешега |иго Ьас|егюрЬа8е х рапк!еа |чав $ие(Е|с(еиг. 27.
!5о!а1$оп апг! Апа!уя5 оЕ КесотЬ$пап1 С05шЫя Ча!Ыа1$оп оЕ 1Ье БЬгагу Рго1осо! 2 5сгееп!пц ап ОпагпрИ!ед Соьгпй ЫЬгагу Ьу Нуопйка6оп: Р!айпи Йе 1лЬгагу опто Гйегь р еьсве Ророит!осев ог вастеасгсс сосоессрв тклсеврокмео вч совм!ов гпау Ье асгеепес) Ъу ЬуЪг!йонас)оп пяп8 а шесЬос) ог)8!па1!у с)еч)аес) рог шааа асгеешп8 ор р1аяпЫ-сгапауогшес! со1ошеа (НапаЬап апс! Меае!аоп 1980).
ТЬе Го11очлп8 ргососо1 га а чапапс оу гЬе ос!8!па! шесЬос1 (ИЬеПа апс) ссгпо !987; р1еаье аее СЬарсег 1, Ргососо! ЗО), ас)ар!ее) 1ог р!ас)п8 апс) асгеешп8 ппашр1!ссес) !сЪгапеа. Со!ошеыпау Ье р1асес) оп!о е)сЬег шсгосе1!п1оае ог пу!оп 6!сета. !и сегсасп сааея и шау Ье с)еа)гаЫе со ашрИу сЬе БЬгагу ЪеГоге асгеешп8. МесЬосЬ Еог ашр)18- сас)оп оу сояпЫ !сЬгапеа аге 81чеп !и Ргососо1а 3 апс1 4.
МАТЕ!!!Ас5 Мег!!а ТВ аВаг р)асеа 7750 тт) сопсаспспВ 25 СсВТт! )салатуссп ТВ тесбигп прес!а! Ег!сс!ргпеп$ С)ааа р!асеа 77Ь7с)с) всег!!ые са о р1асеа Ъу асеаЬЬспв сч!сЬ есвапо! апд а!!оышв сЬеш со сСгу ш а 1апuиаг йосе Ьоой. Нурог)егтсс пеес77е (7 У цаиВе) ЬВГгосеИи)оье ог 74у)оп Бlсега 7737 ттЬ пел)е ИгЬагтап 74о. 7 В)сег рарега, зсегс)е АгЫМопа! Кеаееп18 5гер 76 оу гЬ!а ргососо) гес)исгеа гЬе геаВепсь 77агес7 т СЬарсег 7, Ргососо74 37 апс7 32.
Чес$огв апг! Вас$ег!а! Яга!пк ВасгепорЬаВе Х рас)са87пц геаспоп Рсеаае аее Ргогосо! 1,5Сер 19 оТСЬ!а сЬаргег. Е. со)! р)асслВ Вас!ела оТ 7Ье арргорласе асга7п !е.В., ХЕ7-В)ие, Е08 767, 74М554, ОН5оМСВ) Рог а сопгр!есе 1аппв ог арргорласе асгасиа, р1еаае аее АррепсС!х 3. 4.24 Рготого! 2: цегеептц ап ~7потр1гугег! Сояттг) йгЬгагу Ьу НуЬгтг)ггатгопг Р!аппд Йе ЕгЬгагу опто Рг)тетя 4.25 )чтЕТНО0 ТгапВЕоггпаЕ!оп оЕ Е. соб Ьу Со5гпЫ 0МА Рас!гадес! сп ВасЕегсорЬаде Х РагЕк!еь !. Са1си1асе сЬе чо!шпе оЕ сЬе рас)сац!пц геассюп (Ргососо) 1, 5серя 20-21) йас тч!11 цепегасе 30,000-50,000 сгапяЕогшег! Ьассепа! со!ошея. 5ес ир а яепея оЕ ясеп!е сеяс сиЬея сопсаиипц сЬ!я чо1шпе оЕ рас)сац!пц геас6оп апг) 0.2 ш! оЕ р!аппц Ьассепа.
ТЬе аетна1 ннгнЪег оЕ нтЬея го яес нр Еог р!ат!па йе рае)гац!нц геасгюп шеренг)я оо йе аепогое яае, ачегаае Кге оЕ Егаатпептя с1апей апг) тЬе еочегаце оЕ йе аепогое ге0йге6 то Етог) йе рагпен1аг е!опе оЕ тнсегеят. !и гнои саяея, ! 5 — 20 шЪея яЬон!д Ъе шЕ6етепт. рог а ЬтпЬег йяснааоп оЕ гЬЬ ыяне, р!еаяе геЕег то сЬе еЬарсег юсгот!иетюп апг) сЬе ране! оп СЕЬ)ОМсС ПВКАК!65 !р, 4.6).
3. ! псиЬате СЬе СиЪея Еог 20 пипитея аС 37'С. 4. То еаеЬ сиЬе, агЫ 0.5 тп1 оЕ ТВ. Сопппие йе !псиЬапоп Еог а 6тпЬег 45 пипшея. 5. Р1асе ясеп!е 61сегя опто а яепея (ет)иа! !п пшпЬег со сЬе яепея оЕ сиЪея тп цсер 2) оЕ 150-пип ТВ ацаг р1асея сопса!шпц )гапашус!и (25 ттцйп1). !)яе а ясеп1е яргеаг)ег со яшеаг сЬе сопсепся оЕ еасЬ сиЬе очег йе яигЕасе оЕ а 61сег оп ап ацаг р!асе. Айег йе )посо!шп Ьая Ьееп аЬяогЬег) !псо еасЬ 61сег, сгапяЕег сЬе р1асея со а 37 С 1псиЬасог Еог яечега! Ьоигя со очегп!цЬс (!2 — 15 Ьоигя). Тгу то ачос6 яргеаг)!на йе !носи!нгн гчн!Вп Э пнн оЕ сЬе ег)ае оЕ тЬе гнаятег 6!сетя. ТгапяЕоггоег) ео!ойея 6гят Ьесотпе ч!я!Ые оп тЬе тпаясег 61гегя айег 8 — со Ьонгя оЕ !пенЪаиоп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
