Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 104
Текст из файла (страница 104)
ТЬ!а геша!па а сЬа11епде ечеп тот 1аЬогатопеа аисЬ аа тЬоае т!евсепт!ес! тгош дтегпЪегд'а йат )тпочч йе ауатеш шйиасе1у. А1йопцЬ рас)сад!пд ехтгаств аге сопипегста1!у ача!1аЫе, а Ьеиег ор6оп тот шоат тпчезбдатога !а то иае сопипегс!а1 ЬастеПорЬаде Р! 1!ЬгаПея ечеп йопдЬ тЬетг т!ертЬ от сочегаце (-3-то!4 В депегаду яиа1!ег йап опе ш!дЬт тн!аЬ. дечега1 сошраи!еь апс1 цепогпе септега почт обет аегч!сея ш тчЬтсЬ ргеех!атшд ЬасгепоРЬаце Р! апт! РАС 1тЬгаПеа аге ьсгеепед тот а депе от" 1птегеат (р1еаае аее ТаЫе 4-4). То та1те ат!чаи!аде от" тЬе аегч!се, ап !пчеат)да!от турка11у аиЪппта ргоот" йат а ратг от" о1!допис1еот!с!е ргппега сап Ье пает! ш а РСК то т!етесс а раг6сп1аг тагдет депе.
ТЬе сотпрапу тЬеп зсгеепа опе ог июге Р1 ВЬгаПеа то !с!епт!ту с1опеа ЬагЬоппд йе тагдет депе, апс1 абсолюта от" тЬе Е. со6 сп1шгеа ЬагЬоппд йе гесошЬшапт Р! ог РАС с!опе!в) Ыепт!6ет! тп тЬе РСК асгееп аге йеп гетигпес1 то йе тпчеа6датог. Ат йь ротпт, йе !пчеа6дасог сагПеа оит а т!ета!1ет! сЬагастеПтабоп от тЬе тагдес цепе ог гед)оп от' !3Ъ!А !т!епт!ттет! Ьу йе аегч!се. Ргогосо! 5| Ног/ггпу ипй ВасгепорЬаце Р/ апг//гз С/опгпд 5узгетз 4.4/ '|А/ОКК1!ЧС ЪЧ1ТН ВАСТЕК1ОРНАСЕ Р1 А/х/Р РАС СЕОЬ/Е6 ТЬе Ео11осч!пц ргососо1 |1езспЪез тейо|Ь Еог гесочегу апй ри66сасюп о( гесотЬ|папс с!опез о( с!озей с)гси1аг ЬассегюрЬаце Р1 ог РАС 1)ХАз Ггот ЬассеПа.
ТЬезе тейойз аге 1опцег апс1 зотеъчЬас тоге сотр1касе|1 |Ьап йе сесЬп)с!иез изей со !зо1асе сояпЫ с)Ь/А. ТЬе геазоп 1ог й|з !з йас йе !агре Р1 ог РАС Р!з(Аз аге зеизсссче со зЬеаг!п5 (огсез, счЬ|сЬ песезясасез сег|а!п ргесаи6опз йиг!пд Ьапй!(пц, 1пс!ий/и5 сЬе изе о(счЫе-Ьоге р|рессе 6рз со сгапз(ег Т)!х(Аз ап|1 |!гор оба!уяз со ехсЬапце ЬиКегз. 1п айй!с!оп, Ьесапзе Р1 апй РАС гесотЬ|папсз аге та)и|атей ас пшсЬ 1о|чег сору питЬег йап сояпЫз апй р1аяпЫз, тоге зсг!пдепс п|есЬойз о(рипбсасюп аге гес!Ыге|1 со оЬсаш с!еап 1)1/А. 1оиг у|е1|Ь, |Ье ргезепсе о( сопсат!пас!пц Е, со6 сЬго|позота1 Р!з(А, апй роог гесса |и зиЬзес!иепс пю!еси!аг с!оп!пд геас6опз аге |Ье сурка! отсо|лез о( срлк1с ап|1 сбгсу Р1 ри66сапопз.
ТЬ!з ргососо1, йег(чей (гот Р|егсе апй 5сегпЪег5 (1992) ап|1 6от тесЬойз юрр1|ей Ьу ОачЫ 5то1!ег о(Сепоте 5узсетз, 1пс., уепега)!у у|е1|Ь Р1 РЬ)А |Ьас |а ейк|епс!у й/цезсей сч|й |папу й/Кегепс гез|Псбоп епгутез, ы геа|61у 1!па!ей, зегчез аз а апой сетр1асе (ог Е)Ь/А зес/пепе!пд ап|1 атр!|6сасюп илсЬ сЬегтозсаЫе 1)1/А ро1у|пегазез, апй 1з ап е(6с!епс сетр1асе (ог !и Ысго сгапзспрсюп аззауз из!пд Ъассег!орЬаде сс1 (А ро1утегазез.
МАТЕК1АЕ6 САНТ!ОЫг Р!еазе зее Аррепгпх ! 2 Сог арргорпа|е Ьапй/!па о( та|ег!а1з таг(сед сч!!Ь <1>. Войег5 апд Ьо1пбоп5 , апс! геацеп|з. Р!еазе зее Аррепй!х ! (ог сотропепсз о( а!ос/с зо1ипопз, Ьипегз О!!и!е а!ос!с зо!ипопз со СЬе арргорпа|е сопсеп|га!1опз. Алнпоп!ит асегаге Г0.5 м) Е|Ьапо/ /РТС (7 п|М) Орпопа!, р1еазе зее посе со 5сер 1. /юргорапо/ МаС/л (7 гпМ) РЬепо!:сЫого(огт (7|7, ч/ч) <1> Ро/уе/Ьу/еле а/усо/ (40у, сч/ч РЕС ОООО ю/иПоп) <1> Р!еазе зее СЬе |п(оппаооп рапе1 оп РОЙ'ЕТНУЕЕ!з/Е СЕ|СОЕ сп СЬар|ег 1.
5ос//ит асегасе (0.3 м, рН 5.2) 5о/и(!опз /ог Е)/с/А !ю/аг!опг А//сабле /уз!з ю!игюл / А//гайпе /уз!з зо/ибоп П 5о!ийоп 1! |Ьои1й Ье (гезЬ|у ргерагей апй изей ас гоогп сегпрегасиге. АПсайпе /уз!з ю/иПоп /П ТЕ (рН В.О) ТЕ (РН В. О) солса!л!пЦ 20 иЦ/т! К/з/азе Епкугпе5 апд Войег5 Кеяпспоп епс/опис!еазеь Се!5 Ри/зег/-Пе/с/ ае/з Гог 0.5% ааагозе ае/з) Р1еазе зее 5сер 15 Ье1о|ч апй сЬе рапе! оп РС) Е5ЕО-Н ЕЕО С ЕЕ ЕЕЕСТКОРНОКЕ515 |п Ргососо! 1. 4.42 СЬаргег 4| М~ог1г!ле гч!гЬ Н1еЬ-гараагу Ъеегогя Мег!!а ЕВ теоВит еолГа1л1лВ 25 щ1т1 Калатуе1л Ор|юиа!, ые яч!|Ь!РТ6 !и 5|ер !.
ТВ тейит гол!а1л1лВ 25 !лВ1т1 1галатуе1л СепЕг!Еще5 апе! Ко$ог5 5огча11 55-34 гогог ог егги!ча1ел! прес!а! Ег!о!ргпеп$ Согех еелег1ЕиВе ГиЬея 130 т0 ууагег ЬагЬ ргеяег го 65 С ЧесЕог5 апе! ВасЕег!а! Яга!п5 Е. соН яггат ггаляуогтег! яч11Ь а лолгееотЬ1лалг Ьаегег1орЬаае Р! ог РАС чеегог !си!гиге> Е. со!1 ягга1л ггаляуогтег! яч|ЕЬ а гееотЬ1лалг Ьаегег1орЬаВе Р7 ог РАС чес!ог !си!юге! МЕТНО0 Ргерагабоп оЕ КесогпЬ|папФ Р1 ог РАС ОНА 1.
ТгапМег 10 ш1 оЕ ТВ слога!и!па 25 РВйп! 1гапашус!п нпо еасЬ оЕ ггчо 50-ш1 Ра1соп гиЬея ог Ег!ешпеуег Е!ая!гя. 1поси1аге опе гиЬе яч!1Ь а я!па!е со1опу оЕ Ъас!епа соп!а!и!па !Ье гесошЪ|пап! Р! ог РАС. 1поси1аге 1Ье огЬег шЪе яч1|Ь а я1па1е со1опу оЕ Ьасгепа ггапяЕогшег! Ьу гЬе чесгог а1опе. Сгпту 1Ье си1гигея го яагигагюп, яч!1Ь ч1аогоия яЬаЫпа Еог 12-1б Ьоигя аг 37'С. ТЬе адеапои оу 1РТ6 1! |им! |о си!илгея оу сеНя сапу!и5 Р! гесоюЬ!иаии !иасг!часея |Ье 1ас гергеяюг аиг! !еаг!я |о !иг!исг!оп оу |Ье Р! 1у||е гер1кои, ячЬ!сЬ геяи1|я ю аи |исгеаяе |и |Ье сору ии|пЬег о! |Ье р!аяпиа РХА Ьоги ! |о -20 сор!ея1сеН. Ноъчечег, |Ьеге аге |игаса|юля |Ьа| аи|РНН- сабои !и |Ье ргеяепсе оу !РТ6 саи 1еяг! |о 1ияаЪ|1пу 1п Р! гесо|иЪ|иаии |Ьа| саггу гереббче яег!иеисея оу репою!с у|ХА (5гегпЬегц 19941.
Моя| |ичеяНВа|огя |Ьегеуоге ачо!г! |Ье агирНйса|юи я|ер сагир!е|е!у ог |п|Ьлсе |Ье си!шгея ои1у Еог яЬог| рег!ог!я ау |иле !2-3 Ьоиг|1. !и |Ье !апег саяе, соп|рапяои оу |Ье геяпс|юи и|ар| оЕ с1оиея Ъеуоге аий аугег ап|РННса|юи лч!|Ь 1РТ6 Ь гес|аитпеиг!ег!. Еог !и|!ее|!ои гч!|Ь !РТС, си1шгея аге цголчи !и 1.В сопса!и!пц 25 РВг|и! 1|апагпус!и иии! |Ье ОЕ| геасЬея -08, а| ч ЕбеЬ рою| !РТ6 ь а|Ые|1 |о а Впа1 соисеи|га|юп о! 05-! юм. ТЬе се1Ь аге !исиЬагег! Еог а |иг|Ьег 3 Ьоигя аг 37'С аиг! |Ьеи Ьагчея|е|1.
2. ТгапяЕег еасЬ си! Гиге го а 15-ш! сепег!ЕиВе гиЪе. Нагчеяе ГЬе се1Ь Ьу сепгг16лВаг1оп аГ 3500ч (5400 гргп !п а 5огча11 55-34 гогог) Еог 5 пипигея аг 4'С. Кеяиярепг! еасЬ се!1 ре11ес !п 3 п|1 оЕ ягеп!е Н,О апг! гереа! 1Ье сепгг!Еиаае!оп Яер. 3. Кеяиярепг! еасЬ се!1 ре11е! ш 2 ш1 о! А!!га!ше!уяя ао1игюп 1 апг! Р1асе оп !ее. 4. Аг!г! 3 ш1 оЕ А!!га11пе 1уя!я яо1игюп ЕЬ апг! аепг1у шчег! 1Ье гиЬе яечега1 г!шея !о ш!х РЬе яо1и11опя. ТгапяЕег !Ье гиЬе го ап 1ее ЪагЬ Еог 10 пипи!ея. А!МРОКТА!ЧТ Весаияе гесогпЬ!пап! Р1 апг! РАС е!опея аге 1агВе елоиаЬ |о Ье яепя|гче го яЬеаг!ла, !геер чопех!па, р!регбист, алг! яЬаЕ!па со а ггип!гиигп гйлг!па ЕЬе !яо1аг!ол о! О!чА. л!чЬегечег рояяЫе, ггаля1ег Ьу роиг!па ЕЬе ОЫА !гоги опе гиЬе |о апо!Ьег.
И|Ьеп р!регг!па саппо! Ье ачо!Нег!, ияе ячЫе-Ьоге р!Репе Нря. Р!еаяе яее !Ье !л1оггпа|юп рале! оп М!!я!!М!ЛЫ6 ОАМАОЕ ТО ЕАгГСЕ ОЫА МОЕЕС!3ЕЕ5 !и СЬаргег 2. Ргогосо! 5: Ког)апК ыЕгЬ Вггсгег!орЬаКе Р! аид 1ь С!оп!пК 5уггегггг 4.43 АсЫ 3 гп1 оЕ ке-со1д АПса1ше 1уяа ш1игюп 1И со еасЬ сеП яырепяоп, апс1 пих йе ао1игюп Ьу сепг!у !пчегппц гЬе гиЪе ьечега) гппея 5гоге гЬе гиЬе оп гсе Еог 10 пипигея РеПеГ йе сеПи1аг деЬНа Ьу сепГг!ЕидаГ!оп аГ 12,000К (10,000 грш ш а 5огчаП 55-34 гоГог) Еог 1О пипигея аг 4"С.
!Зесапг йе зирегпагапг (-7 ш1) шго а 30-гп! Согех сепгпйце гиЪе апд асЫ ап ес!иа! чо1шпе оЕ !аоргорапо1. Мпс йе ш1игюпь Ъу сепг!у !пчегг!пц гЬе гиЬе яечега! йпеь апс1 соПесг йе ргес!р!гагед пис1ек асЫа Ъу сепгп6лдагюп аг ! 2,000д (! 0,000 гргп ш а 5огчаП 55-34 гогог) Еог 10 пипшеа аг 4"С. Кебиче гЬе ырегпагапг Ъу депг1е аьрггапоп. !пчегг гЬе гиЬе оп а К!шн !Ре г!ааие ипгП гЬе !ая дгорь оЕ Пшд Ьаче с)гашес1 агчау. 1Ле а Раяеиг ргрегге аггасЬед со а часишп 1ше со гешоче апу дгора геша!и!пд апасЬед го гЬе ъчаП оЕ йе гиЪе. Е)!аао1че гЬе реПег оЕ пис1ек ас!да ш 0.4 ш! оЕ 0.3 М шсПшп асегаге (РН 5.2).
Неаг гЬе во!одоп го 65"С Ьпейу (Еог а Ее~ч пипигеа) го акяб ш д)вао!ч!пц йе пис1ек асЫя РопЕ1са1гоп оЕ гсесоп1Ь1пап$ Р1 ог РАС ОНА ТгапвЕег йе ЕУ! !А ао!иГ!оп Го а ш!сгоЕице ГиЬе. ЕхсгасГ йе ао!иГ!оп опсе гч!ГЬ ап ес!иа! чо1- шпе оЕ РЬепоЬсЫогоЕогш. 5ерагаге йе аг!пеон апд огПап!с РЬаьеь Ьу сепгг!ЕиПагюп ас шахппшп ьреед Еог 5 ш!пигеа ас гоош гешрегагиге гп а ш!сгобгце.
ТгапаЕег гЬе иррег ас)пеон РЬаье го а беаЬ ш!сгоЕиае гиЪе. 10. Адд ! ш1 оЕ ке-со1д егЬапо1. Мгх йе ао1идопа Ьу !пчегг!пП гЬе шЬе аечега! гипея СоПесс йе ргес!Рпагед ЕуХА Ьу сепгг!Еицаг!оп аг гпахппшп ареед Еог 10 ш!пигеа аг 4"С. Рапиде гЬе ЕЗЫА реПег ъчгЬ 0.5 ш! оЕ 70% егЬапо1 апд сепгг!Еноте аца!и Еог 2 пшшгея СагеЕиПу гепюче гЬе ырегпагапг. 5гоге гЬе ореп шчеггес1 гиЪе аг гоош гешрегагиге ип61 по пюге ггасеа оЕ ейапо1 аге чгяые.
Адд 0.4 ш1 оЕ ТЕ р1иа ВЫаье со гЬе реПег апд р1асе йе с1оаед шЪе ас 37"С. РепосПсаПу диг!пц гЬе пехг 15 пипШея аЬа)се йе ыЬе аепг1у го аы!аг ш д)аао1ч!пц гЬе Е)ЫА. Сопдпие гЬе шсиЪагюп Еог а госа1 оЕ 2 Ьоигя Адд 4 н! оЕ! м МПС! апд 200 и! оЕ40% РЕб ао1ипоп. Мгх хеП апд соПесг йе ргесгрпаг- ед Е)Ь)А Ьу сепГг!ЕиПаГ!оп аг шахипшп ареед Еог 15 ш!писеа аГ 4'С !п а ш!сгобгце. Пепюче гЬе аирегпагапг Ъу аарггагюп апд гешарепд гЬе реПес !п 0.5 пг1 оЕ 0.5 М апипошшп асегаге. Адд 1 ш1 оЕ егЬапо1, ппх йе ао1иг!опт Ъу !пчегппд гЬе ыЬе аечега! гппея апс1 соПесг йе ргес!РЬасе Ьу сепсг!6гцаг!оп аг шахипшп ареед Еог 15 пипигеь аг 4 С !п а писгойце. Е)есапг гЬе аирегпагапс апд г!пае гЬе реПег пч!се ъчгЬ 0.5 ш1 оЕ гсе-со1д 70% ейапо1.
йоге гЬе ореп игчеггед шЬе аг гоопг гешрегагше ипд! по гпоге ггасеа оЕ егЬагго! аге ч!а!Ые. Кеаиарепд йе дагпр реПеГ ш 50 н1 оЕ ТЕ !РН 8.0). ТЬе у!е!д оЕ ОЬ!А чапек Ъеьчеен 2 Нц анд 5 !га рег 10 нг! оЕ нгднднсед нчего!еЬг си!юге. 15. Еог геьгпсгюп епхуше апа1уяя д!рея 5-15 н! (-1 иП) оЕ геаиарепдед !3ХА апд апа1ухе йе ргодисга еЬЬег Ьу 0.5% адагоае це! е1есггорЬогеа!а ог Ьу РЕбЕ. Ьагеег агноннь оЕ ОЬ!А аге ыед ш гЬе енхутадс геасиння го асЬгече аденнаге гно!аг сопсенггаг!они оу янЬягаге. 4.44 СБаргег 4: Игог$сгпе гч$1Ь Нгей-сарае!!у Ъесгогь А00!ТЮ$ь$Ас РКОТОСО!а Р0К1Р1САТЮ$Ч$ ОР Н1СН-МОЕЕС0ЕАК0КОР 01АЕУ515 К Ь$еЬ-то$еси$аг-ьче$еЬ1 (е.е., Ьасьег$орЬаее Р1 ог РАО 0МА ъчй! Ье пьес! аь а гетр$а1е $п 0НА ьег$иепс$пц геасйопь, ог К геь!псйоп епкутеь !ай со с$$ееь$1Ье 0НА 1о сотр$е1$оп, ьйеп $оьч-гпо$еси$аг-ьче$еЬ$ сопгапц'- папгь ьЬои$г$ Ье геточе6 Ьу с!гор сйа!уКь, Аг!й!1опа1 МаТег1а!ь М$$$$роге 5епеь $гтетЬгапеь $13-тт-батесег с$$ьгз) роге ь$ее 0.025 ггт Р7 0$4А $ргерагед и 5$ер 14 аЬоче) Ме1Ьог! 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
