Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 108
Текст из файла (страница 108)
1981) апг$ го ехагЫпе сЬгогпгьоте )пяаЬ)3$)у (Н)егег е1 а!. 1985; КохЫапс$ е) а!. 1985). ТЬе 1еуг агт сопгашя ° Опе оу )Ье ге|отепс аег)иепсея ° А сепггогпепс (СЕ|ч)4) хег)иепсе )Ьаг апасЬеа го )Ье тПоПс ар!ис)!е апс( ы гес)шгес1 Гог еП1- с|епг аедгедаг|оп оу сЬгогпосюгиеа Ье)ччееп г)аидЬ)ег седя ТЫх аедтепг о( Е)Ь|А а!хо ташса|их йе агППсга1 сЬготоаоте аг а сору пшпЬег о( опе |и йе сеП. ° Ап аигопотоиа!у гер1кадпд зес|иепсе (ЛЛ51) 1Ьаг сои!а|па ядпаЬ гег)и|гес$ Гог ЬггПгесгюпа1 гер!кагюп ог Т)Ь|А |и уеая. ° Ап атркП|ш геяяапсе гпаг1сег апс1 йе со1Е1 ог(д|п оу гер1кагюп Гог ргорадагюп о( йе чесгог |и Е, со!Е ° Ап аихоггорЬ|с таг)сег, Тяр1, 1Ьаг сопуега оп ггр аихоггорЬа о( 5, сегеляае йе аЪг!иу со дгочч оп пгегПа 1ас|с|пд ггургорЬап. ТЬе г(дЬ1 апи сопгашя ° ТЬе хесопг3 ге|отепс аег)иепсе. ° Ап аихоггорЬ|с таг1сег, БААЗ, )Ьаг соп(ега оп ига аихоггорЬя о( 5.
сегеляае )Ье аЬг!Ьу со дгочч оп пгегда 1ас)с|од огас|1. СОМ8ТК13СТ!ОХ ОЕ СЕЗОНОМ!С Е!ВКАК!ЕБ !Ь$ ЪАС ')(ЕСТОКБ Н|дЬ-пю!еси1аг-чче|дЬ1 депопис РЬ|А Ы ехсгасгес3 !гот йе сагдег огдашяп апг3 рагдаду йдеяес1 чч!)Ь а геяпсПоп епхуте йаг депега1ех соЬеяче гепшш сотра)$Ые чч()Ь 11гохе оу йе с1оп)пд яге гп )Ье гАС чесгог. ТЬе Е)Ь|А Ы Ггасгюпасес1 Ъу РЕСЕ го гетине Ггадтепга (200 1сЪ ги яхе Ьеуоге 1|даПоп го а 1агде шо1аг ехсегь о( дерЬоарЬогу1а)ес! чесгог (Аиаггд ег а1. 1990).
ТЬе гесгргепг уеахг хгга|и, аихоггорЬ|с гог игасг| апс3 ггургорЬап, |а дгоя и ш псЬ гпегПит апс( сопчеггес( го арЬегор!аага Ьу гПдехгюп оу сеП ччадх чч|й 1угкаае ог Хуто1уаае. ТЬе арЬегор!аага аге ггапя Гогтес| чч|й 1Ье ргос|исга о( йе !(да))оп геасгюп |и йе ргеаепсе оу ро1уат|пеа (го ргенепс с|едгас|аг|оп о( Е)Ь|А; Еапп ег а1. 1991) апс3 р1агес( |и адаг гпесдит !ас|с|пд игасг1 апс3 сгургорЬап. АГ)ег гедепегаПоп о( йе сеП ъчаПЬ йе ггапхуоппес$ сеПа Гопп со!ои|ез 1Ьаг саггу а гесогпЬ|папг 'гАС апс3 аге ргогоггорЬк Гог игасг| апг! 1гурсорЬап. Еедепегагюп оу сгапа(огтес3 со1оп|еа ь депегаду сагпес1 оиг ш 2% хогПшп а!8$паге ш йе ргехепсе оу Са", гчЬ)сЬ епаигех 1Ьаг 3!ге со!ои|еа дгоъч оп )Ье аигуасе оу йе р1аге (1.аг апс1 СапггеП 1989).
рог гпоге гп!оппаПоп оп сопаггисг|оп ог"гАС 1гЬгапея р1еаае атее Виг|се ег а|. (1987), А)Ьег)аеп ег а|. (1990), Ее|иди!д ег а1. (1990), МсСогпис1с ег а|. (1990), дс1г!екяпдег (1990), Виг1се апс| 01юп (1991), Апапс| (1992), Ееечех ег а|. (1992), ЕПеу ег а1. (1992), апс1 Вагпхау (1994). Уеаа1 хгга|пя согпгпоп1у иаес3 го сопаггисг апс3 ргорадаге УАС 13Ьгаг|еа аге с|еаспЪег! Ьу Ееечех ег а1. (1992). Ргошсо! !О: Иог)ип8 гч!г)г УеаьгАггфсаг! СЬтошоьотеь 4.б! СНАКАСТЕК1УАТ1ОМ ОГ УАС Е! ВКАК1Ей ТЬе циаПгу апд сотр1ех!гу ог" а гАС ПЪгагу аге 8епегаПу аььеььед Ъу !ьо1аг!п8 а геьч доаеп гапдот с1опеь апд теаьиг!п8 гЬе яхе ог" гЬе !пьеггь Ьу РРСЕ.
ТЬе дерй ог сочега8е гпау йеп Ъе са!си1агед Ьу пш16р! у!п8 йе ачега8е шьегг ь!ге (!п )сЪ) Ъу гЬе пшпЬег ог 6лП с1опеь ш гЬе ПЪгагу апд д!ч!д!п8 йе ргодисг Ьу г!ге яае ог" йе 8епогпе !а1ьо !п 1сЪ). А ПЬгагу сои!а!и!п8 !оиг 8епоте е9и!ча)епгь !ь геои!гед го сочег 9558 ог' гЬе 8епопис 1ЭЬ)А ьес)иепсе (РП1еу ес а1. 1992; р!еаье ьее йе рапе1 оп СЕ!9ОМ!С !.!ВКАа! Е5 1п Йе !пггодисГ!оп Го ГЫь сЬарьег).
АП гАС ПЪгапеь сопгаш сЬипепс с1опеь, ччЬоье !пьеггь сопяьг ог пюге гЬап опе гга8тепг ог'8епопис г)ХА (р1еаье ьее РгоЫеть гн!гЬ 'гАСь Ъе1оьч). СЬппепып гь Ьеы дегесгед Ьу Пиогеьсепг !и яш ЬуЬпйааПоп ог" 1пд!ч)диа! "гАСь со ргерагагюпь ог' тегарЬаье сЬготоьотеь !е.8., р!еаье ьее ЬкЬГег апд Чагд 1990; ччада еГ а1. 1990; Мопьапаго еГ а1. 199 ! ).
1! Рояпче я8па1ь аге дегесгед аг тоге йап опе сЬгогпоьогпа! 1осаПоп, йе ог!8!па! гАС ппм Ье а сотрояге ог РХА ьециепсеь Ггогп д!Кегепг 8епопис ге8!опь. ЬСКЕЕММС ОГ УАС Е!ВКАК1ЕЬ 1п еагПег Йпеь, ипогдегед гАС ПЬгаг!еь гнеге ьсгеепед Ьу ЬуЬг)д!хаг!оп ог" гасПо!аЪе1ед ргоЪеь го гЬе сь!н)А ог" !уьед ггапьгогтед со!отеь !ттоЫПаед оп 61гегь !Ып!е ег а1. !989; Тгачег ег а1.
1989). Тодау, ггапьгогтапгь аге 8епегаПу рк1сес1, е!Йег гпапиаПу ог Ьу гоЬог, апс1 аььетЫед !псо огдегед аггауь !п Йе ччеПь ог" писгоПгег д!Йеь. Сор!еь ог" йе аггауед ПЪгагу гпау Ъе ьгогед аг — 70'С, гер1касед аг Ы8Ь депягу го тетЪгапеь аь пеедед, апд ьсгеепед Ьу ЬуЪг!д!хаг!оп (Вгогчпьге!и ег а!.
1989; Апапд ег а1. 1990; Вепг1еу ег а1. 1992). А)гегпаг!не!у, Йе аггауед ггапьгогтапгь тау Ье ог8ап!гед !пго а 1иегагсЬу ог" роо!ь гЬаг сап Ье ьсгеепед Ьу пш16Р1е гоипдь ог" РСП. ТЬе пшпЪег ог" !пд!и!диа! с!опеь десгеаьеь ъч!гЬ снегу гоипд ог" ьсгееп!п8 !Апапд ег а1. 1990, 1991; Сгееп апд О!юп 1990; ВапПог ег а!. 1991; МасМиггау ег а1. 1991). Рог ап очегаП ьсЬете гог йе сопьггисПоп ог" ПЬгапеь ш гАС чесгогь, р1еаье ьее Р!8иге 4-!3, апд гог ьрес!а1 сопыдегапопь ог"гАС ПЬгапеь, р1еаье ьее ГЬе гоПочч!п8 ьесдоп оп РгоЫеть нч!ГЬ гАСь.
РКОВЕЕМБ ЧI1ТН ТАСЬ ЬгпаП 1п8ег18 Мапу о! гЬе еаг1у гАС ПЬгапеь сап!а!пед шьегп гнЬоье ачега8е ь)ае гчаь оп1у 100 — 200 !сЪ, пог пшсЬ Ы88ег йап а Р! ог РАС с1опе. ТЫь ргоЫет гнаь очегсоте Ьу иып8 РРСЕ гагЬег гЬап ьисгоье 8гаспепг сепспйз8аПоп го ггасгюпаге гЬе 8епопис Р!ь)А Ъегоге с1оп!п8, Ъу деч!ь!п8 8епс1е тейодь со ргераге апд гпап!Ри1аге 1аг8е ьга8тепгь ог' 8епопис Р!)А, апс1 Ъу !пс1ид!п8 ро!уапипеь апд)ог Ы8Ь-то!еси!аг-ьче!8Ьг сагпег РЬ!А !п гЬе П8апоп апд ггапьгогтагюп геасгюпь.
Сагпег РХА, ьчЬоье епдь аге шсогпрапЫе чдй йоье оГ гЬе с!оп!п8 чесгог, шсгеаьеь Йе чгьсоягу ог йе ьо!иПоп апд йегеЬу оггегь раьь!че ргогесгюп го йе гаг8ег суХА то1еси!еь а8ашьг дата8е Ьу ьЬеаг)п8. 1пМаЬ!Иу апс! Кеаггапеегпеп1 о1 С!опес! Сепогп1с 5ецоепсе8 1пьгаЫПгу иьиаПу геьи1гь ш йе арреагапсе ог ьиЪгпо!аг Ъапдь ог РХА ог' 1оьчег то1еси!аг нче!8Ьг ччЬеп гАСь вагит шипчгдиа1 с!опеь аге апа1угед Ьу РРСЕ. ТЬеье с1е1еьюпь, ччЬкЬ гап8е ш яае ггогп а генч )д!оЬаьеь го >250 1сЬ, аге 8епегагед Ъой г)ипп8 йе ггапьгогтаг!оп ргосеьь апд диг- 4.62 СЬаргег 4: Мог)ст5 лч)гЬ Нлч)л-сарасйу лгесгогл Е1СЕЛКЕ 4-13 Е1опкЬагг: 5сгееп)п ЧАС Е1Ьгаг)еа 1пц ялЪаецпепл ппло6с цголчгЬ ог лгаплГогтапь (Копрг)па ег а1. 1994).
Опе сапье оГ лЬе !иала- Ь!!Ьу !а гесогпЪлпалюп Ъеллчееп гере66че лес)пепсеа )и л1ле с!опт ТлМА, лчЬкЬ сап Ье ялрргеааел) ло лоте ехлепс Ъу лгапМогт)пц а алга)п ол уеаал лЬал !а гесотЪ|пал!оп-л)ейс)епл (Ч11аде1!и апл! Ту!ел-5т)лЬ 1992; 1лпа ел а!. 1993). С!11гпеп5гп СЬппепс ХАСа аге агл)Еасла )и лчЬ)сЬ лЛМА лгацтсплл Глот йалапл гс5)опа оу гЬс лагдсл цспоте Ьесогпе )отед лоцелЬег апс) ргора5алел! !и а яике ХАС. СЬ!тегаа сап Ъе депегасел) еЬЬег л!пг)пц !и ч!лго 1!Еал!оп оу пепит)с 1л1)А ло ХАС агта ог, тоге гаге!у, Ьу гппо6с гесотЪлпабоп Ъеллчееп йКегепл ХАС с1опеа )и!гол)псег! шго лЬе лате уеаьл зрЬегор1аал Ъу солгапалогтал!оп (Неа1е ел а!. 1994). 1лерепл!!пц оп лЬе теблолЬ плел! ло сапа!спел ХАС !лЪгапея Ъепчееп 10% ап6 60% ог с1опеа гпау Ье сЬппегк.
Рипйса6оп о1 УАС5 А та)ог ргоЫегп !а лЬас ХАС с!опеа аге сагпес1 ал 1олч сору пшпЪег апс1 саппол еаы1у Ье аерагалег! лгот ашЬеплк уеая сЬгопюаотея Рпп6са6оп ол шласл ХАС с!опеа сап Ъе ас!л)ечел! оп1у Ьу РРСЕ. А1легпа6че!у, л!ле с1опес! аедпепл оЕ шепот)с лл1)А сап Ъе гесочегег) !и )гарпеплег) Гоггп Ьу апЪс1оп!иа гЬе лола1 ЕлМА ехггасгес1 угогп ап !ис!!чЫпа1 уеазл ггапМогтапл ли!о соатЫ Рго|осо! 10| Игог)с!ид |чгй Уеггя| Аггфспа! О|готокотея 4.63 ог Ьас|епорЬа8е чес|опп ВнЬс1опея саггу!п8 8епот!с яег)непсек аге |Ьеп Ыеп66ей 1ог ехатр!е, Ьу ЬуЬг!6!гаг!оп |о ргоЬек сои|а!п!п8 Ь!ВЫу герей|че ке8тепгя оу|пагптаПап РХА (р1еаке кее ЯнЪс!ои!п8 Сепопнс РЬ)А Бес)непсек С!опе6 |и гАСя, ра8е 4.64).
МАРРПЧС СЕ!ЧОМ!С ПЧЬЕКТй СЕО!ЧЕ0 ПЧ ПЧ0!Ч!О!3АЕ УАС8 1п гиок| саяея, ксгееп!пц а гАС Вепопнс ПЬгагу ячП1 у!е16 кечета1 роя6че с1опек саксу!п8 очег!арр)п8 !пкегыЬа| крап йе ге8!оп соггекропсПп8 |о йе ргоЪе. ТЬеке с1опек кЬон16 Ье сЬес)се6 Гог с1шпег!кт, ап|1 |Ье!г к!хек яЬонЫ Ъе теакнгед Ьу РРСЕ. Сгонрк ог" '|АСя сап ко|не|инея Ье аПВпе6 Ьу йе|г соп|еп| оу ро1уиюгрЬ|с гпаг1|егк, Ьу йе|г соп|еп| ог" гесо8пКюп кПек уог гаге гея|пс|юп епхутек, ог, тоге ггес)непг!у, Ъу Р)к)А Пп8егрппбп8. ТЬе 1аьег Ь Ьея| сагпе6 от Ьу гПВекбп8 йе соса! Р!я)А !уеаяг р!ы |АС) !яо1асес) !гот еасЬ ог" |Ье ро66че с1опек чч!|Ь кечега1 гея|псбоп епхутек.
ТЬе ргос)нсгк ог" |Ье сП8ек6оп аге апа!угес! Ьу Вон|Ьегп ЬуЬг!6!хаг!оп няп8 гере6||че РХА ак а ргоЬе (е.8., А1и Р)к)А |и |Ье саяе ог"'|АСя сои|а!п!и8 Ьшнап кег)непсек, ап|1 1!Ь)Е Р)к)А т йе саке оугпоые). С1опея |о Ье апа1угес! !и |!е|аП кЬон16 Ъе гпарре6 с6|Ь а|ЫПюпа1 гея|гкбоп епхугпея. ТЬЬ сап Ье |1опе Ьу рагба! сПВек|юп ап|1 8он|Ьегп ЬуЪг!6!хаг!оп няп8 ргоЬек крее|Ее со йе РВК322 ке|)непсек |и йе 1ей ап6 68Ы агиь ог |Ье |АС чесюг. Мок| гек|пс6оп П|ек сап Ъе тарред !гот Ьой епбк ог" йе |АС, епаЫ|п8 я|ек |о Ъе 1осаге6 яч!|Ь асснгасу (ВсЫеяя!п8ег !990). Весаые уеак| РХА Ь нптейу1а|е|1, йе гея|пс|юп тар оГ |Ье гАС ччП1 по| песеккап!у соггеяропд |о |Ьа| оу |Ье Ьоию1о8оы ге8!оп ог" Вепоинс РХА. КЕЬСЫ ЧС ТНЕ ТЕКМПЧ! ОГ СЕ)ЧОМ!С О!ЧА8 СЕО!ЧЕ0 ПЧ УАС8 Вечега1 |чеП-ча)!Пагес) |есЬпн)нея ех!яг |о !6епг!гу ап|1 кнЪс1опе |Ье епбк ог Вепогпк кес)непсея с1опе6 т '|АСк. АП ог" йеке гесЬпщнея |а1|е адчапга8е ог" |Ье |АС чес|ог яес!непсек |Ьа| Пе ншпесПа|е!у ргохнпа! |о йе с1опе6 РХА.
Рог ехагпр1е, |Ье 1ей апп ог" р |АС4 ап|1 !ь |1епча6чея сои|а!п |Ье РВК322 ог!8!п ог гер!Ыа|юп ап6 а ке1ес|аЫе таг1|ег. ТЬе Вепогпк яег!непсея !ттес)1- а|е1у ад)асепг |о |Ье!егг апп сап |Ьегегоге Ье гесочеге6 Ъу епг)-геясне кнЪс1ошп8 (Внг)се е| а1. 1987; багха е| а!. 1989; МсСогт!с)с е| а1. 1989). А)гегпаг!че1у, ПЬгапек оГ кнЬс1опея сап Ье ясгеепе6 Ьу ЬуЪгЫ|хабоп ы|п8 ргоЬея крее|Ее гог |Ье р1аятЫ ке|)непсея сагпед !и йе 68Ы ап6 1ей епбк ог |Ье чессог (ВеПапе-СЬап|е1о| е| а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
