Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 111
Текст из файла (страница 111)
(Рог |пе|Ьос1| |о са1си!а|е ше16пц |егпрега|игея оЕ о! фопис1ео|Ые |)ир!ехея, р!еаяе яее йе (пЕоппа|юп ране! оп МЕЕТПч(С ТЕМРЕКАТ()КЕ5 !п СЬар|ег 10.) ЕЕ йе геяи1ь аге яга! ипяа|ЬЕас|огу, сопчег| |Ье уеая| сеПя |о ярЬегор!аяь Ъу гешочшд |Ье сеП |ча!Ь зч|й Хугпо1уаяе |ООТ ЬеГоге ЬеК(пп!па |Ье рго|осо1.
ТЬгя га(сея оп!у 1 Ьоиг апг) а1п|оя| аЬчауя с1еагя ир апу ргоЬ1егпя. А1|егпаиче)у, агояч 10-гп! 69шд (ТРЕ|) си)гигея оЕ |Ье со!ошея пп|(ег сея| апс( |па1|е япаП- яса!е ргерага6опя оЕ уеая| 0)з)А (р1еаяе яее Рго|осо! 12). 1. !и а яе|61е 0.5-т1 |и!сгиб|де 10х со1опу РСР, Ьибег 25 шя МаС1, 1О шя ЙХТря о!анаис!еогЫе рпшегя Таг( ро!ушегаяе НО (иЬе, пих 1и йе ЕОПоиппе огс!ег: 2 и1 1.2 и! 0.4 и! 10 рпю1ея оЕ еасЬ ргипег 5 ип|ь (0.2 (г!) |о 20 р! Рго1осо! 14 Ьо)айпи Йе ЕпсЬ о1 Сепоппс РМА Ггаупепй~ С)опес) ) и Н~цЬ-сараеву Чес1огь: Ъес1огейе Ро)угпегаье СЬа)п Кеасоопь м Атлч ттлхмчот!с сетле5, Атто сехтА!тттч мо5т снхомохоме5, епсошрааа тпоге РХА йап сап Ье ассоппподатед тч!тЬ)п а яп8!е гесошЬтпапт.
Рог йь геааоп, 6 ь ойеп песеатагу то еатаЬ- 1ьЬ ап очег1арр!пц лет от с!опед РЫАа йат сап Ье огдегед што а сопл!Выопа тетрлепсе (соп68) арапп!п8 а 1аг8е Вепе ог ге8!оп от' )птегеат. А сопчешепт птетЬод 1ог Ыепт)туш8 шетпЪега от" а соп68 !т то ясгееп Вепош)с 1тЪгаПеа Ъу ЬуЬг)д)хат!оп ог РСК, пяп8 ргоЪеа ог ргппегь депчед 6.отп тЬе ехтгетпе 5' апт) 3' епда от' ап шбта1 ьо1ате. ТЬеае ргоЬез Ыепдуу лета от" гесошЬ)папь йат очег)ар лн!тЬ тЬе тегпппт от" йе ог)8!па1 !ю1ате апд ехтепд тп Ьой гбгесдопа а1оп8 йе сЬгопюьоше.
ТЬе ргосеаа от" епд-гесочегу апд тсгееп!п8 )т гереатед опт!1 тЬе епдге героп от' штегеат Ьат Ьееп саршгед. Ехтепяоп от' с!опет !пто сопт!у гет)п!геа Вепоппс 1!Ьгапев тЬат аге деер !п сочега8е апд тгее тготп!агре 8аря Нотченег, йе ялссеаа от йе птетЬод а1ао дерепда оп тЬе е66с!епс сЬагастег!хатюп от" тЬе 5' апд 3' тегш!и! от' 1аг8е, попсЬппегк, Вепопдс с1опеа лнЬоае!ЭХА лес)пепсе ь ип)споънп.
А пшпЬег от тесЬп!т)иея Ьаче Ъееп деч!аед то гас)блате й!т ргосеат апт) со оЬн!ате тЬе пеед то с!опе тЬе )апет!опт Ьетлнееп честог апд с1опед РЫАя ° лтт Ытго ттагьсгтрт!отх Мапу ЬастепорЬа8е х апд сояпЫ честогя апд аотпе ВАС честотя сопсаш ргоплосега тот ЪастепорЬа8е РХА-дерепдепт К)чА ро1ушегатеа ад)асепт то тЬетг с1ошп8 ятея ТЬеае сап Ье гьед то тгапасПЬе тЬе тегпипа) зет)пепсеа от йе с)опед 8епош!с тга8шепт, аа т1еаспЬед ш СЬартег 9, Рготосо1 6.
ТЬе КЫА сап Ъе чаед сбгест!у аа ЬуЬг!д!хат)оп ргоЬез ог аетрлепсед апд гьед то Вепегате о!тцопис1еодде рпшегя ° 1ттчегле РСК То ргераге тЬе РХА тог !пчегае РСК, тЬе ш)6а1 с1опе !т д!Веатед тн)тЬ а геатгк6оп епгуше йат Ьеачеъ ас а арес66с яте чдтЬтп йе честог РЫА апд ат опе ог тпоге ятеа ън!тЬ- ш тЬе с!опед РХА лет)пепсе, апд тЬе геял16пц тга8шепта аге стгсп1апгет1, Вет)пепсеа 1осатед ат тЬе тегш!ппа от" йе с1опед ле8шепс йегеЪу Ъесотпе Вап)тед Ъу честог РХА нчЬоае лет)иепсе Ытпотнп. Атпр1т6садоп ь саггтег1 ош ияп8 ттчо о68опис!еот!де рг!шегя тЬат аппеа! то йе нес!от апт1 рошт аънау тготп еасЬ ойег !р1еаае аее р!Впге 4-14).
1пчегае РСК !ОсЬшап ет а1. 1988; Т681та ет а1. 1988), тнЬеп тчогрдп8 ат !ь Ьеет, Ьаа апГ6с)епс лепя!гебу апт1 арес!ттс!ту со, 1ог ехашр1е, ашрИу йе теппш) от уАС с1опел ш ргерагат!опт от тота1 уеая Вепоппс РХА (511чегшап ет а1. 1989; Агчет!ег апд Рогтеогь 19916 Ночте тег, апссеаа тч!тЬ )пнегте РСК ь пот еая!у ас)дететЬ ТЬе сптка1 с)гси1апхатюп яер !а тИ6сп1т то соптго1 апс! йе с)гси1аг РМА тешр!атет шплт Ье от" а яке тЬас сап Ъе атпр1т6ет) етбтс!епт1у. 4. 74 Г4А ведгпеп! гевгпсГюп в!ге чесгог вецоепсе гевгпсаоп в!ге рг!гпег В гевгпсооп епгугпе рг!гпег А чесгог -г с!опеб 0Г4А чесгог с!опеб 0Г4А рпгпег В с!гсо!апве Ьу !!да!!оп чвеи Т4 0Г4А !!даве гевгпсаоп вае гегпвпов о! с!опег! 0Г4А ведгпепГ рпгпег В чесгог вецоеп агору!у Ьу Рой рпгпег В -Ф- рпгпег А Е!С!3КЕ 4-14 !пчегве РС!! ТЬе вГгаГеау (ог !пчегве РСК 'ь г)евсг!Ьег) сп ГЬе ассотрапу!па ГехГ. ° РСК ив!ид гере!!г!Ре ог гаиг!от Рг!игегв.
А чабегу ог тегЬог!в Ьаче Ьееп 6еч!ве6 йаг ые опе еессог-врес)6с ргппег апг) а весоп6 рптег гЬаг !в егйег вресг6с гог Ь(ВЬ!у гере66че е1егпепгв впсЬ ав А!и ог !.!ХЕ (!опа гпгегврегвег1 ппс!еаг е!егпепг) вес!иепсев (!ч)е1воп ес а1. ! 989) ог оу гапг)огп вес!пепсе (ЪЧев!еу ег а1. !994). 5пссевв ш Ъой савев г(ерепг(в оп йе вегепг(!р!гопв осспггепсе ог" гере!!г!ее е!степ!в ог рг!т!па вес!пепсев ш гЬе соггесг опепгабоп чч!й(п 1-2 1сЬ ог" гЬе арргорпаге геппшпв ог гЬе с1опег) шепот!с (гарпепг. ° ТАП. РС1!.
ТЬегта) авупппеспс !пгег1асег) (ТА11) РСРч гпау Ъе пве6 го агпрИу йе швегг епбв (гот гАС ог Р! с1опев (!.т апг1 Ъйпгг!ег ! 995) ог, убй воте гпог!!ггсаг!оп, со гесочег апг( атрИу аепот(с вег!пепсев ()апЫпа Т-Р!ч(А апс1 ггапвровоп швеггюпв (Ь!и ес а1. ! 995). ТЬе вггагеду !ог ТАП. РСРч ге1гев прои йе пве ог" певгес1, вег)пепсе-врес!ггс ргппегв (депчед !гоги йе с!оп!па чесгог ог !пвеггюп е1етепг) ш соп!ппсг!оп чч!гЬ а вЬогг агЪгггагу г!едепегаге ргппег ог 1очч гпе1г!па гетрегагпге.
А)гегпаг!па сус1ев ог" Ь!ВЬ апг! 1очч вгг!пцепсу г)пг!па гЬе геас6оп а11очч гЬе ргегегепг!а! агпр!г6сагюп ог' гЬе гагаег вег)пепсев. Ртгосо! 14г 1во1аггие йе Еиг!в о)Г беиогигс ОХА Ргагпиеигв С!оиег! ги Нге)г-сарае!гу (гесгогп 'чесгогегге РСВ 4.75 4.76 Отартег 4т Нот)ттп8 ъч(тЬ Нт8)т-сарае(ту Честогя ° РСИ ия(ттд яуттт)тег(с о!тКопис1еогЫе саяяегтея. 1п йеяе тесЬпн)иея, с!опет1 РХА яет)иепсея аге агпр66ед игйп8 опе ргипег сошр!етпешагу то яет)иепсея )п тЬе честит апс( а яесопт) ргипег йат гесоцп(тея ап одопис!еотЫе саяяеие ППатет) то а пеагЬу геятткйоп айте ш йе тоге(8п РХА ((ог гечтечб р1еаяе яее Кояепйа1 1992). ТЬе Ьеят от' тЬеяе тесЬп)т!иея аге честотетте РСК (КП1еу ет а!.
1990; АПеп ет а1. 1994) апс1 я(п8!е-я(те РСК (МасбгеПог апт( ОчегЪее1с 1991), ъчЬтсЬ аге ПеясНЬед 1п тЬе (ойоъч)пц рготосо!. 1п ЬотЬ честогеие РСК (Е18иге 4-15) апт) я)п81е-я(те РСК (Е18иге 4-16), тЬе РХА Со Ье аптр66ед (я Пгят с)18еятет) ъч)тЬ а геятпсйоп епкутпе тЬат с1еачея ъчиЬтп тЬе с1опет( Р)ъ)А. ТЬе геятйстюп епкуше шият пот с1еаче Ьетъчееп йе рйппп8 ебте оп тЬе честог апс1 тЬе с1опес1 яесртепсея, апс) й яЬои16 ргот1исе а )ипсйоп тга8шепт от а ятиаЫе я(ке (ог агпр1т6сайоп (туртсайу 200 — 2000 Ър). 1п р тАС4, яштаЫе епгутпея тЬат с1о пот с1еаъе Ьетъчееп йе честог-ярестйс рппипц айте апт1 йе с!оп)п8 гбте аге Кяа1, Рт иП, апт) 5ти1.
Ноъчечег, Ьесаияе йе т)есайес1 т)1ятг(Ь- ииоп от геятпсйоп тйтея тп тЬе с1опес1 Р)ъ)А )я ияиаПу ип)споъчп, й шау Ье Ъеят со теят яечега1 епаушея со 6пт( опе тЬат Пепегатея а таг8ет тга8шепс ъчЬояе я(ке )я орйгпа1 1ог РСК. Айег сППеяПоп, а яуптЬейс о1фопис1еотЫе саяеие 1я ППатес) то йе епт)я от" тЬе с1еачет! Р)ъ(А, апд рипйед ргот)истя от" 68айоп аге атпр66ет1 исйпц а честог-ярест6с рптпег апъ! а ргнпег йат (я сошр1етпептагу со опе ятгапс1 от йе аттасЬет) саяяетте. Честотетте апс) я)па!е-я)те РСКя т)1Кег ш тЬе т(ея18п от тЬе саяяеиея тЬат аге аиасЬей то тЬе т!18еятеь) Р)ъ)А. 1п ыпц1е-я)те РСК, а яйпц1е-ятгапдет1 оПцопис1еотЫе )я ППатет) то йе епт)я от" йе тга8шептя оЕ с1еачет1 Р)ъ)А.
Атпр66сатюп (я рг(шед Ъу а!осия-ярес(гтс о68опис1еотЫе тЬас Ь(пс)я ярест6сайу то тЬе ПапЫп8 чессог яет)иепсея апт) а яесопс) о68опис1еотЫе йат Ьая йе яатпе яетрлепсе ая йе яупйейс я(п81е-ятгапс)ес) сегпиш (Е(бриге 4-16). Ехтепяоп йош йе 1осия-ярес(т"- тс ойцопис!еотЫе тп тЬе 6гят сус!е оЕ РСК ргочЫея а сотпр!ешепсагу яес)иепсе то ъчЬтсЬ тЬе яесопс) ргипег сап Ь)пт) (тот гечтеъч, р!еаяе яее Кояепйа! 1992), Честогеттея сап Ье ашрййет! оп!у (Е йеу аге аттасЬет) то тЬе Р)ъ)А от" штегеят, тп тЬ(я саяе, тЬе )ипстюп 6а8шепт Ьетъчееп тЬе ъестог апс( йе с1опес) Р)ъ)А. ТЬе честогеие (я оп1у рагйаПу ъ!оиЫе-ятгапс)ес1 апт1 соптатпя а септга! тпыпатсЬес( ге81оп (КП!еу ет а1.
1990; АПеп ет а1. 1994). ТЬе рппип8 одопис!еотЫе Ьая тЬе яаше яет)иепсе ая опе от йе ятгапт)я тп тЬе ш(яшатсЬет) ге81оп апт) тЬегетоге Ьая по сошр!ешептагу яет)иепсе ип6! тЬе 6гят сус1е от" РСК (я сошр1етед. ТЬтя сус1е (я рг(шет) Ьу тЬе оППопис!еотЫе тЬат Ыпт)я ярест6сайу то йе Пап)т(п8 честит яесрлепсея (Р18иге 4-15). ТЬия, а1тЬоиПЬ чессогеттея сап ППате то тЬешяе!чея апт) то аП йа8гпептя оЕ РХА ъчпЬ сошраПЫе тегпип1, оп!у РХА сопташш8 ЬотЬ йе ПапЫп8 честог яет)иепсея апт( тЬе честогетте сап Ье ашр!т6ед. Рог геч)еъчя от" честогеиея, р1еаяе яее Агпо1Й апт1 Нос)8яоп (1991), Непцеп (1995), МсА!еег ет а1.
(1996), апт( ОППч(е апт) !аптея (1996). ТЬеогейсайу, )п ЬотЬ честогеие РСК апт( я(пц!е-я(те РСК, оп!у тЬе епс1 тга8шепт йош тЬе ятагйп8 с1опе М1! ашрйту. Ноъчечег, ш ргасйсе, тЬеге 1я ойеп пюге тЬап опе ргот1ист с(ие то рйпип8 оп (шрегтест1у тпатсЬет) тешр1атея. 1п ат)йт(оп, 1Пеййипате ргот)истя тпау апяе тгош гератг от гесеяяет) тегпип( от' честогеие апт1 с1опет) Р)ъ)А 6а8шептя (Тас(о)сото ес а!. 1992).
Айег т)епатигатюп, йеяе сегпиш сап аппеа1 то (огш ргппег:тешр1атея тЬат гпау Ье ехсепт)ес1 (п ятЬяеъ)иепт сус1ея от" тЬе РСК. ТЬе яуптЬеябя от ипъчаптей агпр66сайоп ргос)исыпау Ье яирргеяяес) Ьу йе ияе ог" ргипегя ъч(тЬ а ге1атгче1у ЫПЬ соптепт от' 6+С (54-5898) апс1 ЫПЬ аппеаПпП тептрегатигея (65 — 67'С) ог Ьу тЬе ияе от" (шргочет( чессогеиея — яр1тп)сегеиея — сопташшд Ьатгрш ятгисшгея гатЬег тЬап ш)яшатсЬея (Речоп ет а!. 1995). ВотЬ честогеие апс) я)пц!е-я(те РСКя Ьаче Ьееп ияес( яиссеяягийу то гесочег йе тегппш от Пепош(с Р!ъ)Ая с!опет) што тАСя, игйп8 тота1 уеаят Р)ъ(А ая а яиЬятгате (ог 1тЪгагу сопятгистюп (е.8., р!еаяе яее МсА1еег ет а1.
1996; ОППч(е апс1 !аптея 1996). Честогетте апт) я(п8!е-я)те РСК шетЬот)я аге а)яо ияейт1 уог )яо1ат)п8 Р)ъ(А йат Пея ат()асепт то а с1опес1 Р)ъ)А ог 1споъчп Р)ъ(А Ргогосо! 14! Его!ау!их Йе Еидг оЕСеиогигс РХА Рга5ииеиь С1оиед ги Н!ф-сарае!гу 'чесгогя )гесгогегге РСР 4.77 !ЧА ведгпеп1 геягкаоп иге чес1огвецоепс гадев1 и!1П гвв!г!своп епгугпе чесгог рпгпег А с!опеб ОГЧА !!да1е !ч!1П вупспебс о!!допив!еообе чес1оге!1е чес!огеие ргчпег чес!ог рпгпег А с!опеб О!ЧА чес1огвие рпгпвг агпр!ау Ьу РСГГ рпгпег А чесгогебе ргепег Е!СЕ)КЕ 4-15 ЧесгогеНе 5сЬегпе ТПе вггаге5у 1ог !депг!Еу!пц йе епдв ог с!опеб Егаргпепгв ив!пц 1Пе чесгогеие всПегпе Еог РСК !в девспЬед !п 1Пе 1ехг.
вег!иепсе. Рог ехагпр1е, вег)иепсев Лап)дпц ап !пгеагагед ггапвцепе (МасСгеаог апд ОчегЪее)с 1991; А1!еп ег а1. 1994) ог а геггочггив Ьаче Ьееп !во1агед Ьу 1Ьеве ргосес1игев. Р!па!!у, Ьой гесЬ- п!!!иев сап Ье ивед го гесочег вег)иепсев !гоги ипс!опед гпапипа!!ап аепогп!с АЗХА. Ноччечег, виссевв 1в оЕгеп е!ив!че апд ге!!шгев 1Ье иве оЕ яге-Егасгюпа1ед 1)!)А гегпр!агев ог певгед ргипег раггв го ргочЫе виЕЕгс!епг ргог1исг Еог с!оп)па, ве!)иепс)пц, ог ЬуЬг!д!гаг!оп (р1еаве вее 1Ье рапе! оп ЕННАП!СЕМЕП!Т5 ОГ ЧЕСТОКЕТТЕ !ЕЕАСТ!ОП!5 ЪЧНЕН Г)5!НО СЕНОМ!С ОП!А ТЕМРЕАТЕ5 а1 1Ье епд оЕ йгв ргогосо1). )ч)о согпраг!воп оЕйе еЕЕ!с)епс!ев оЕ йе ггчо гпейодв Ьав Ъееп риЫ)вЬед.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
