Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 113
Текст из файла (страница 113)
Но|нечет, ои!у оие о( |Ьеве и!иоив сои|а!ив /охр я1ев !и !|в 1египиаПу гебиидаи1 геВ!оив. ТЬе Вепогпе оЕ Ьас|епорЬа8е Р1 Ь Ьо|Ь с!гси!аг1у регшитет) апт) |егпппаПу гег)ипбапт. ТЬе Вепе6с шар, Ьоччечег, ь 1|исав (5со|1 1968; чЧаПсег апг) ЪуаПсег 1973, 1976). ТЬ!в рага|1ох |чав гево)че6 Ьу |Ье еПвсочегу йа| Р1 сои|вша а гесошЬ~па6опа1 Ьо| вро|, !схр (1осив оЕ сгоы|п8-очег (Х) |п Р1), йа| |)еВпев йе епт)в оЕ|Ье Вепебс |пар (5|егпЬег8 е| а1. 1978, 1983); гесогпЬ~па6оп а| йЬ я|е |в п|етПа|е|1 Ьу а яп81е РЬаВеепсо|)е|1 рго|е!п, Сге (сус1|га|юп гесо|пЪ|паиоп рго|е|п) (51егпЬег8 с|а1. 1986). ТЬе !охр-сге вув|е|п Ь песе|вагу Еог сус1|аа|юп о( Ппеаг Р1 ))ХА, вчЫсЬ оссигв ъч!1Ь(п йе Вгв| пппшев аЕ|ег шЕес|юп о( Е. ссП (5е8еч е| а!.
1980; 5е8еч апг) СоЬеп 1981; НосЬшап е| а1. 1983), 1п|егея!п81у, Ъесаиве о1 йе сопв|гашя оправе|1 Ьу йе рас)са8!и8 ргосея, оп1у опе ш ечету Еоиг ог Вче Ъас|егюрЬа8е раг6с1ев сои|а!пв а РЫА пю!еси1е вч!й !схр я|ев |и пв |еппшаПу гег)ипг)апт ге8!опв (р1еаве все БВиге 4-17). Оп1у |ЬЬ виЬве| оЕ Ьас|епорЬа8е Вепошев аге виЪв|га|ев Еог йе сге-lсхр вув|еш ап|1 оп!у йеве Ьас|епорЬа8е Вепогпев ате сараЫе оЕ с|гси1апга1юп ап|1 гер1|са|юп ш гесА-г)еугс!еп1 в|та|ив оЕ Е. ссП (Еог теч)егч, р1еаве вее уаппо!шв)су ап|1 51егпЬег8 1988). ТЬе 34-Ьр !охР я|е сопв|вп оЕ 1|чо 13-Ър шчет|е|1 гереая верагате|1 Ъу ап 8-Ьр врасег (Ноея е| а1, 1982).
1п)оттаг)оп Рапе!ь 4.83 +1 -! сат сат отА вта Е!СРКЕ 4-18 5)гис)иге о( йе 34-Ь )охР 5$)е ТЬе 34-Ьр !охР ь)Се сопь!з)ь о( Сио рег(ее|)пчег|е6 гереаш 13 Ьр )п )епфЬ (ььоип ъМСЬ|п аггоиь), зерага)ед Ъу ап 8-Ър ьрасет. Чегйса! агтоъчь шат)с йе )осайопь о( йе ь)гез с)еачед Ьу йе Сге рго|е)п оп СЬе иррег апд )оиег ьсгапсЬ о( РЪ|А. Ву сопчепйоп, йе пис)ео|Ыеь !и йе!охр ысе аге питпЬетес1 (гогп йе сепсег о! йе ьрасег (чегска! I!пе). Вазе ра!гь со |Ье )ей ате рнеп )ейъчаг6 роясгче (+) пип|Ьегь; Ьаье ра|гь Со СЬе пдЬС аге рчеп педа6че (-) пип|Ъегь.
КесошЪ)пас!оп ас йе )охр ясе Ь сага)улей Ьу Сге, а 343-апйпо-асЫ гесо|пЬ|пазе ргосе|п епсойей Ьу йе гте депе о1 р) (5сегпЪегд ес а1. $986) сЬас |з а |пеп|Ъег о( йе 1пс (апи)у о1 гесогпЬ|пазез (Агдоз ес а!. 1986). ЕасЬ )ахр ясе сопяьь о( ьчо попЫепска! Сге-Ь)псйпд |$огпа|пз, согпрозе|$ о( опе о( сЬе 13-Ьр гереаь апй |Ье а|$)асепс 4 Ьр оузрасег. ТЬе гпоы |$|ыа! 2 Ьр о1 еасЬ шчегсед гереас сап Ье гпогййе|$ и4|Ь- ош а!сеппд гесогпЬ|пасюп 1гес)иепсу! 1агдег |$е1есюпз, Ьоъчечег, депегасе гесо|пЪ|папс рго|$иссз и4|Ь аЬпоппа! соро!оду (АЬгеп|зЫ апй Ноея 1985). Ас засига6оп, ьчо гпо1еси)ез о( Сге Ь~п|$ со а согпр1есе !охр ясе (опе Сге пю1еси!е рег шчегсе|$ гереас) (Мас1| ес а1.
!992). ТЬе Сге-)охр со|пр!ех сЬеп зупарзез ипсЬ а зесоп|$ Iохр ясе, ъчЫсЬ сап Ье )оса!ей оп йе заспе пю!еси1е о( РЫА ог апо|Ьег. (ътЬесЬег ог пос сЬе зесопд 1охР ысе Ь а1зо оссир|е|$ Ьу Сге Ь пос 1|поъчп (Мас1| ес а1. 1992). 5сгапд ехсЬапде Ьесъчееп сЬе зупарзе|$ Iохр рагспегз Ь сш6асе|1 1ойоъч)пд азупипеспс с1еачаде оу РЪ)А ш сЬе зрасег героп (р1еазе зее )йдигез 4- 18 апс) 4-19). Весаизе о( йе азупипесгу о1 йе зрасег, гесогпЬ)пасюп Ъеьчееп Iохр ясеь )осасе|$ оп сЬе залпе Р)ъ)А п|о1еси1е Ьаз а ро!апсу: КесошЪ)пас)оп Ьеьчееп )охр ясез сЬас аге ш |Ье заше опепсасюп гели!ь )п ехсЬюп оу йе РЫА Ьеьчееп йе ьчо ысез, иЬегеаз гесошЪ|пабоп Ъесъчееп ясез сЬас аге |и сЬе орроясе опепса6оп сашез шчегяоп о( сЬе шсегчешпд РЫА (АЬгегпзЫ ес а1.
1983). ТЬиы Ппеаг р1аыпЫ РХАз сопса|шпд гйгесс1у гереасе|$1охр ясез аге сус1Ье|1 ш Е. соЕ зсгашз ехргезяпд Сге. 1п асЫ)с)оп, с|е зсгашз о( Е. соБ сап ей)с)епс)у ехсЬе апд с)гси1апхе зерпепь о1РЫА йас аге йап)сей Ьу Iохр ясез )п 1агде Ппеаг депошез (5аиег апй Непс)егзоп 1988а). Чес(огь Сопса)о)щ Сге-1охР 5!(еь 5е тегй дгоирз Ьате сопзсгиссед ЬассепорЬаде Х чессогз ъчЬозе аппз Ьаче иш|рле гезсгксюп ясез роя6опе|$ Ьеьчееп ьчо IохР з)сез (ед., р)еазе зее Ра)аххо)о ес а1. 1990; Ейейде ес а).
199 1; Вгипей) апд Рай 1993; Но! с ап|1 Мау 1993). А пшпЬег о( сПКегепс зрес|а)Ьей р)аяпнЬ Ьаче Ьееп шзегсес) шсо йезе чессогз йас сопсаш сЬ-асйпд зеъ)иепсез геъ)и)гед 1ог Ь!8Ь-)ече) ехргеьяоп о( с)опей сРХАь ш Е. соЕ (ра)аххо)о ес а). 1990) апд уеаы (Ейейде ес а1. 199 1; Вгипей| ап6 Рай 1993, 1994). ВассепорЬаде ). ехргезяоп чессогз о( йЬ суре Ьаче съчо айчапсадез! (1) аисогпабс ялЬс1ошпд, ш ъчЫсЬ Сге-п|есйасе|$ гесо|пЬ|па6оп сап Ье изей со сопчегс сЬе РХА 1ушд Ьесъчееп |Ье )охр ясез шсо ап аисопопюм! у герйса6пд р!аяпЫ сЬас (2) Ь ес)и)рред ъч|сЬ сЬе сопсгой|пд е)егпепсз тес)и)гед со ехргея с1опес! РХАз ш ЪосЬ уеазс апд Е.
сой. )п йе сазе оуХУЕ5 чес|огз (Ейейде еС а!. ! 991), ъчЫсЬ аге ача)! аЫе (гош СЕОЫТЕСН, рЬадез аге пьес) со ш(есс а ыгаш оу Е. соЕ (ВЪ)Х)32) йас ехргеыез Ьой Х гергезюг апд Сге ргосеш Ъис Йоез пос ехргея сЬе р1 геыпс6оп-спосййсабоп зуыеп|. ТЬе )ъ гергеяог епзигез йас сЬе шуессшд рЬаде епсегз сЬе 1узодешс расЬъчау, ъчЬегеаз |Ье Сге ргосеш саизез ехс|яоп о( |Ье р)азсп!6 рогсюп о1 |Ье чессог. ТЫз аисо|пабс ылЬ- с1ошпд зузсеш Ь ехсгеп|е1у ейк|епс ъч)сЬ -5098 оу |Ье )пгесс)пд рЬаде рч|пд пзе со ашрк)Пш-геязсапс со1опкя ХЕХ)ох (ачайаЫе сопппегс|айу угош )чочадеп) ап|1 ).2)рЕох (ачайаЫе 1гогп Е)(е ТесЬпо)орел) а!зо ъчог$| ей|слеп|)у аз ашошаск зиЬс!ошпд чессогз (Ра!алто)о ес а1.
1990; Р'А)езяо ес а!. 1992). А росеп6а) ай апсаде оусЬезе час!ось )з йас сЬе ехс)зей р)аяпиЬ саггу а ЬассепорЬаде (1 опрп оугер!касюп апд сап сипссюп аз рЬадешЫз. Чессогз ъчЬЬ ргорегбез ыпп1аг со сЬозе оГ )ъУЕ5 аге ачайаЫе сЬас аге зшсаЫе 1ог сопзспксюп о1 депопис ПЪгапез (Но1с апй Мау 1993). ТЬезе чессогь аге ше(и! сЫейу (ог сопзсгисс|пд депоппс ПЬгапез о( уеазс, Азретрйиз, ап|$ ойег еи$|агуосез ъчЬозе депе| аге согпрагабче!у ыпай апй ге)а6че)у йее 1гогп 4.84 СЬарсег 41 Игог(с!пд сч!й Н18Ь-сарас!гу Сгесгогв бег Ппа!пд о1 Сге рпосе1п 1о опе ог Ьо1П сохР в11вв пег аВдпшепс ос сохр паев о его Х11Ь 91еб с Ь а Г!СОКЕ 4-19 Сге-шес)!асей ССесошЫпаС!оп аС 1охр 5!сев Р!еаве вее йе Сехг !ог 11е1а!Ь. спсгопв.
1п якЬ савев, йе Вепопис швегсв гевспес1 Ьу аисогпаск впЬс!ошп8 сап Ье тес! со Ьо1асе ехсга8епк впрргепог гпи1а1юпв. Кевспе ог р1аяпкЬ ггош Х Сге-!охр чессогв гес!шгев а воигсе ог" Сге ргосеш (впсЬ ав Е. соЕ всгаш ВЬЮ!32, вее аЪоче). Носчечег, 1Ьеге Ь ваше еч!с)сисе 1Ьас 1Ье ргевепсе ог" йЬ ргосе!п впрргемев сЬе усеЫ ос пш!Моору р! аяпиЬ саггуш8 а 1охр ясе апс) 1Ьас р1аягисЬ сч!1Ь 1аг8е с)7ЫА !ивегсв шау Ъе ргопе со 11е1есюп сЬлПп8 ргора8асюп ш сге ягашв о( Е. со)Е !с Ь сЬеге!оге адч!ваЫе со пюче йе гевсиес) р!аяпЫв ав с!шсИу ав ровяЫе сиса а всга!п ог Е, соЕ сИас с!оев пос ехргем Сге (Ра!ахсо1о ес а1.
1991!). Ясе-арес!11с 1п!еегас)оп ап0 Ехс!а)оп о1 Тгапацепеа Мег))асес! Ьу 1Ье Сге-!охР 8уа(епс ТЬе Сге ргосеш сап саса!ухе гесошЬ!пас!оп ечепп пос оп1у ш Е. со!1', Ьис а1во !и уеавс (Ваиег 1987) апс) шагппса1сап се1!в (Ваиег 1987; сапог апс) Непс1егвоп 1988Ь; ри)спвЫ8е апс) Ваиег 1992). ТЬы, сЬе Сге Епуоггпас(оп Рапе!ь 4.85 гесогпЬ?паке сап Ъой дпче ясе-крес16с шседгасюп оЕ р!аяп?дк шсо йе сЬгопюкотек оЕ уеая ап|1 гпатгпайап сейк апд сага?ухе ргесйе ехс|яоп оЕ РХА керпепь йап1|ед Ьу !ахр ясеь (кее Е?диче 4-19). ТЬе шседгайоп ечесп геки1ь Егот гесоп|Ь|пайоп Ьесъчееп а р)аяпЫ-Ьогпе !охр ясе апд а кесопд !охр ясе |Ьас Ьак Ьееп |пксайед шсо сЬе еи1|агуос|с депогпе. ТЬе Сге ргосеш сап Ье киррйе|1 еПЬег !гогп а с!опед сору оЕ |Ье сге депе ог, |и сЬе саке оЕ си1сигед гпапипайап сейк, Ьу ияпд Про(есйоп со |псгодисе йе рш|йе|1 гесо|пЬ|паке (ВаиЬопЬ апд 5аиег 1993).
ТЬе!ассег спесЬод, а1сЬоидЬ регЬарк пос ечегуопе'к сир оЕ сеа, Ьак сЬе адчапсаде оЕ (1) ргечепйпд шседгайоп оЕ а сгапк(ессед с|е депе апд (2) сопйшпд Сге-|песйасе|1 гесо|пЬ|пасюп со а рагйси!аг ъчшс!оъч оЕ йгпе. Ехсепдес! ехргекяоп оЕ Сге геки1ь ш а кесопд гоипд оЕ гесоп|Ь|пайоп йас геп|очек сЬе сагдейпд чессог Егот йе сЬгоп|озо|пе. Ак Еаг ак ?к 1|поъчп, |Ье депотек оЕ уеакс апд п|о|ье сейл с?о пос сопсаш апу !охР ясек.
Риг|Ьеппоге, |Ье ехргекяоп оЕ Сге Ь пос сохк со еи1|агуойс сейк, пог с!оек П айесс йе дече1оргпепс, дгоъчсЬ, ог Еегсййу оЕ сгапкдепк пасе сЬас саггу йе сге депе ипдег сЬе сопсго! оЕ йе пю|ье тесайойюпе|п 1 ргоп|осег ог а сусотеда1очдгик ргогпосег (Еа?ско ес а!. 1992; ОгЬап ес а!. 1992). (Хосе: ТЬе сге депе 1ас?ск ап орйгпа! шй|асюп ядпа1 Еог сгапк1асюп |и гпап|- тайап сейк (?ъоаа?с 1986, 1987).
СЬапрпд йе -3 пис?еойде Сгот Т со С геял1ып а киЪксаппа! |псгеаке ш гесоп|Ь?пайоп аЬП|су ш сгапк(ессе|1 тапипайап сейк [5аиег ап|1 Непдегкоп 1990].) Ехс|яоп оЕ сЬгопюкогпа! РХА керпепь йап1|ед Ьу 1охр ясек оссигк ъчПЬ ЫдЬег е?йс|епсу сЬап !пседгайоп о!' !ахр р!акпп|Ь шсо сЬгогпокогпа1 !охр ясек. Ву сгокяпд депейсайу епрпеегед ксга|пк оЕ п|ке сопса|шпд !охр ясек ас сЬокеп сЬгопюкогпа1 1осасюпк ъчПЬ сгапкдешс ап?та?к сЬас ехргея Сге, йе Сге!охр куксеп| сап Ье оке|1 со депегасе пиП айе!ек (Си ес а1. 1994) апд со асйчасе опсодепек ш а сЬкие-крес|6с апд дече1оргпепсайу гер|1асед гпаппег (|а?сьо ес а1. 1992).
ОсЬег рокяЫе |ьек шс!и|1е йе депегасюп оЕ крее!6с сЬго|покогпа1 |пчегяопк апд с?е!есюпк, |Ье аЫасюп оЕ крее?6с сей!шеадек, апс! сЬе депегайоп оЕ гпке Ьепихудоик Еог рагски!аг депек ш ргеке1ессед с?запек. ТЬе Сге-!охР ьуксет Ь пос ип?с?ие. 5ечега! ойег гесогпЬ|пакейагде| сотЬ|пасюпк аге 1|поъчп СЬас аге сараЫе оЕ сйгесйпд гесоп|Ь~пасюп ечепсз ш а де6пед арада! апд сетрога! ЕакЫоп ш еи?сагуос?с огдапыпк. ТЬеке |пс1ис!е йе (1) сЬе р1р гесо|пЬ|паке оЕ 5ассйаготусез се| е|дяае сЬас сап саса!ухе гесотЬшасюп |п ЬосЬ си!шгед гпагп|пайап сейк апд Ргоюрййа апд (2) |Ье рддр! гесогпЬ~паке оЕЯудоьассйаго|пусеь тихй йас сап йлпссюп еЕ6с|епс!у ш 5, сегеч!ыае (Ма|зиха?с? ес а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
