Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 109
Текст из файла (страница 109)
1991). Ап|оп8 йе РСК-Ьакед тейодк |Ьа| сап Ье нкес) |о агпрПгу ап6 с1опе Вепопнс кег)непсек а6)асепг |о йе!ей ап|! 68Ы агтк аге |пчегке РСК, |чЬЫЬ ыея чес|ог кес)непсек |п онпчагд оН- еп|а6оп ак рпп|егк (ОсЬтап е| а1. 1988; Тг!8Па е| а1. 1988; кП1чеппап е| а1. 1989), ап6 чес|огеье ог ЬнЬЫе РСК, ччЫсЬ ыек ап оПВопнс!еог!Пе саяяегге ак а ргнпег (КПеу е| а1.
1990, 1992). 'чесгогегге РСК Ь йе Ьеьег те|Ьод я!псе П по| оп1у атр1Жек !пкег| кес)непсек ншпесПа|е!у ргохппа1 |о еасЬ агт, Ьн| а!ко ргочЫек |егпр!а|ея уог РХА кес)непс|п8 (Анаис) 1992). Чесгогегге РСК ь ПеяспЬе6 |и Вгеа|ег |!е|аП !и Ргососо1 !4. КЕТКОГ!ТТПЧС УАС8 Ап абчапса8е о1'|АСя очег о|Ьег Вепопнс чес|огк ыЬе аЬ|16у |о ассоттодаге йе сотр1е|е яег)непсек оГ 1аг8е таинпаПап Пенек. ТЬ|я Ьак 1ед |о йе Вгочч!п8 ые оуУАСя ая чеЬ!с1ея со |гапкгесг тапнпаПап сеПя (уог геч!еччя, р1еаяе кее бшг)се ап|! Ннх)еу 1991; Нох1еу 1994) апд |о Вепегасе сгапя8ешс апина!к, т |чЬ|сЬ гог коте, |Ье |АСя согпр1ете|н |пнсаиопя !и июые сЬгопюкота1 Пенек (уог геч!еччк, р!еаке кее СарессЬ~ 1993; Рог8е| !993; Мои|о!ш е| а1.
1993, 1994; Ре|егкоп 1997). ТЬе еП!с!епг !и|го|)нег!оп оу'|АСя !то таинпаПап сеПк !п г!якие сн!|иге геон!гея |Ье ргекепсе ог" а дот!пап| яе!ессаЫе таг)сег т |Ье |АС чес|ог |Ьа| сап Ье нке6 |о яе1ес| гаге сгапк- 4.64 О|аргет 4: Итойтц чть)| Н!5)л-сарае(ту Ъестотк Еогшес) сеПк. Мапу оЕ йе оЫег ХАС чес|оь до по| саггу а кш|аЫе ке1ес|аЫе шаг(сег. Ноъчечег, гесошЪ|пап| ХАСк саггу!пВ |Ье Вепе оЕ |п|егек| сап Ье геъгоЕ|иеъ) ъч!ГЬ а ке1ес|аЫе шаг)ъег кисЬ ак пеогпус(п геяяапсе Ьу Ьошо1оцоик гесошЬ~па6оп |и уеая сеПк. 5!пп1аг1у, Ьогпо1оВоик гесогпЬ!па|юп сап Ье икеь) |о !пггоъ(исе крес|6с пш|а|юпк а| деЕ|пед к!тек !и кеашепгк оЕ иепошк РНА с!опе|1 !п ХАСк (Еог геч!еъч, р1еаке кее Них1еу !994; Мопасо апъ! 1апп !994).
ТЬе шегЬоъ)к икес) Еог |гапкЕег оЕХАСк ш|о си!|отед шапнпаПап сеПк !пс1иъ(е 6лкюп ъч!|Ь уеак| крЬегор!акь, са1спнп рЬокрЬа|е ргес!рна|юп, е!ес|горога|юп, ПроЕес|юп, апъ! ш!его!п)ес|юп оЕ Со|а1 уеак| Р)ъ)А ог ХАС Р)ъ(А, ри66е6 Ьу РРСЕ (Еог геч!еъч, р1еаке кее Них!еу 1994; Моп|о!ш е| а1, 1994). ЯЗВСЕО!ъ)Пь(С СЕМОМ!С 0)ЧА 6ЕЕ1!)Е)ъ)СЕЬ СЕОМЕ0 ПЧ ХАС9 ТЬе цепоше оЕ ъчП<$-гуре Ьар!оЫ 5. сетеияае сопякь оЕ 12,057,495 Ьр оЕ Р)ъ)А рас)кадет) ш|о 16 сЬгопюко|пек (р1еаке кее Ьггр:0депоше-ъчъчъъъкгапЕогйеъ(и!5ассЬагогпусек(). ТЬе ргекепсе оЕ ап ехсга сЬго|покоше ш |Ье Еопп оЕ а ХАС !псгеакек |Ье к!хе оЕ йе Вепоше Ъу 1 — 2 МЬ ог 1екя А Ъас|епорЬаВе х ПЬгагу оЕ )ик| 2300 с1опек ъч!|Ь шкегь оЕ -20 1|Ъ ъчП! |ЬегеЕоге ргочл|Ые а |Ьеоге|ка! ЕоигЕо!6 сочегаВе оЕ йе Вепоше оЕ йе Ьоя уеак| апъ) нк аг66с!а1 сЬгопюкоше. Вепчееп 19а апъ) 109о оЕ |Ье с!опек М11 соп|а|п Еоге!ип Р)ъ)А кеъ!иепсек.
ТЬеке сап Ъе гесоВп!геъ) Ъу йе|г аЪ|16у |о ЬуЬпйге |о шапнпаПап ргоЬек синга!и!пц Ь!ВЫу гере66че Р)ъ)А кегрлепсек. С!оп)пВ оЕ уеая р1ик ХАС Р)ъ)А |п|о сояпЫ ог Ьас|епорЬаВе лъ чес|огк |к ВепегаПу окей |о |ко1а|е а геВ(оп оЕ йе ХАС !))ъ)А сопла!и!пВ а ъ)еыгеъ( Р)ъ)А е!еп|еп| (ргошо|ег, ехоп, е|с ) ог |о ргочЫе |егпр1а|ек Еог |Ье сопк|гис|юп оЕ ЬлВЬ-геко1и6оп гек|пс|юп гпарк.
Ап епьге1у с66егепс кггагеВу !к ге|)и!геъ( ъчЬеп ХАСк аге киЬс1опе|1 !п|о р1аяпЫ ог Ьас|епорЬаце М13 чесгогк Еог Р)ъ)А кециепс!пВ. 1п |ЬЬ саке, |Ье анп Ь го ргодисе ХАС РЫА йа| ь Егее оЕ сопсапнпа6пВ уеак| кеъ)иепсек. ТЬе ХАС Р)ъ)А пшк| |Ьеге(оге Ье риг!Егеъ) Ьу РрСЕ апс( йеп кЬеагеъ( ш|о ЕгаВшепгк оЕ кш|аЫе к!хе е)йег Ьу копка|юп ог Ьу пеЬи1ыаг!оп. ТЬе |егпшн' оЕ |Ье кЬеагеъ) Р)ъ)А п|о1еси1ек аге гера|гей апс) |Ье ЕгаВшепгк аге Егасг!опале|) ассоггПпц |о яхе ап|1 ПВагеь! !п|о йе ъ)ек!ген чес|ог.
ТЬе ргорогбоп оЕ с1опек сопса!и!пВ уеак| кесиепсек ь Вгеаь !у геъ!псе|1 !Е |Ье ХАС Р)ъ)А Ь киЬ)естес! |о гъчо сус1ек оЕ ри66са|юп Ьу РГСЕ. А гпа)ог ъ)!ЕЕ|си!|у ы |о оЬ|а!и ки6)с!епС, риг!Еле|( ХАС Р)ъ)А |о Вепегаъе ПЪгапек ъч!ГЬ геакопаЫе ъ)ер|Ь оЕ сочегаие. Ноъчечег, еЕВс!еп| ше|Ьоь!к Ьаче Ьееп ъ(ексг!Ъег( |о сопк|гис| ш Ьас|епорЬаце М13 апъ) р!аяпЫ чес|огк опе- |о 6чеЕоЫ с)еер ПЪгабек оЕ кеВшепгк оЕ Ве1-ри66е6 ХАС Р)ъ)А (СЬеп е| а1. 1993; Ъаиъ)!и е| а1. 1993).
Очег1арр!па ке|!ыепсек оЬга!не|1 !гоп| к!пВ!е кес(иенс!пВ геас|юпк оЕ киЬс!опек сЬокеп а| ганс)ош 6о|п |Ьеке 1|Ъгапек сап Ье икеъ) |о сопягис| япаП сонг!Вк, ъчЬЫЬ гЬеп сап Ье соп6гшес( апъ) ехсепдед Ьу Еигйег гоипс(к оЕ 6!гессе|) кес)иенс!пВ. ЪЧНЕМ А )ъ)ЕЪЧ УАС АРРЕАК5 ПЧ ТНЕ !АВОКАТОКУ ТЬе ЕоПоъч!пВ рго|осо! с)ексг!Ьек Ьоъч |о ша)се ап !и!г!а1 апа1уяк апс) Ьоъч |о яоге пеъч1у гесе)чеь! ХАС с1опек. ХАС с1опеь аге икиаПу кЬ!ррес( Ьу ксгееп)пВ сошрап!ек ак к!ап| си1|игек оЕ 5. сетеикгае ЬагЬоппц |Ье ХАС оЕ |п|егек|. Мок| ХАС ПЪгапек аге сопкггисгеъ( (п рХАС4 ог а ХАС чес|ог ъ!ег!чеъ) 6о|п П. Весаике йеке чес|огк сопЕег рго|о|горЬу со |гур|орЬап апъ( игасП, |Ьеу аге ргорацагес) |п а уеак| к|гаш йа| ь аихо|горЬЫ Еог йеке гпаг1|егк.
ТЬе си1|игек оЕ 5. сетеч(к(ае кЬои16 |ЬегеЕоге Ье р1агеь) оп аВаг шесПа!асЫпВ игасП апс( |гур|орЬап (р!еаке кее |Ье рапе1 оп ИА$Т МШ|А). Си1|игек кЬои16 Ье ъ!еа!С ъч!|Ь нпшесПа|е1у ироп агпча1. 5иЬке|)иепг рго|осо1к !п |Ьь сЬар|ег г)ексг!Ъе |Ье Вгоъч|Ь оЕ 5. сетеч(к!ае апс1 ргерага|юп о!' Р)ъ)А (Рго|осо! 11), ргерага|юп оЕ Р)ъ)А 6огп япаП-кса!е си1ыгек (рго|осо1 12), апъ( сПгес| апа!уяк о(уеак| со!ошек Ьу РСК (Рго|осо1 !3). Ртогосо! 10: Суит|с(п5 ьч(1Ь уеаас Атсфс|а! СЬтотозотеа 4.б5 УЕА5Т МЕО|А ТЬВ рго1осо| гесопипепс(а ЕЬе иае о1 псЬ УР0 тес)|ит 1о ргораВасе УАС-ЬеаппВ уеаас асса!па Ье1оге (ю1а6оп о1 иепогп!с 0НА. Весаиае УР0 сои(а(па игас|1 аги3 сгур1орЬап, 1Ьеге 'ь по ае!есбоп 1ог ге1епбоп о1 (Ье УАС. Ноъчечег, ргоч)бес( (Ье си!сиге 'ь цгоъчп 1ог а аЬогс репос( о1 6гпе (очегп(аЬС) апс3 1Ьа1 ЕЬе уеаас асса(п Вгоъча ъче11, сЬеге 'ь 116(е с1апеег о1 ае!ес6пц чаи!апса (Ьас Ьаче!оас (Ье)г УАС.
Ноъчечег, ъчЬеп ъчог(с)пц ъч(6ь а иста|и 1Ьас цгоъча а!оъч!у, е(6ъег Ьесаию о1 ЕЬе раг6си|аг УАС саге)еб ог Ьесаиае о1 (Ье цепосуре о1 сЬе Ьоас,!С 'ь а Вопд 16еа со дгоъч сЬе уеаас (п игас|1 сгурсорЬаи с)гор-оис псебтигп (а|ю |споъчп аа Ога Тгр Игор-оис гпес(1- игп, геЕегппе со гп|пииа| исса!иги )ас(с(пе огас!! апс| сгурсорЬап) ог ас(с$-Ьус)го!Укос) сохе|и (АНО тес((игп 1о арр!у ае|ес6оп 1ог (Ье гесепсюп о1 УАС 0НА.
5опсе асса|па о1 уеаа1 ЬагЬоппц УАС с!опеа Вгоъч Ьеиег |и АНС тед)игп (Вот|се апс| О|юп 1997 ). ТЬВ 'ь а соти р|е(е гпес3(иго сои(а(и| па ас(еп(пе, ъчЫсЫпЫЬ)(а ЕЬе гечега(оп о1 асй т исаи(а. Ас)еп|пе ь ас)с(ес( ас е)(Ьег а |оъч сопсеп1га6оп (20 т5)1!сег) ог а Ь|еЬ сопсеп1га6оп (7 00 тВГ()сег) с(ерепс()пц оп (Ье ехреитепс.
|оъч сопсепсгас(опа аге иаес| |п (Ье (п(1)а! сопасгисс|оп о1 УАС! !Ьгапеа со ае|ес1 Еог (пюи-сопсап1пц УАС чессогх. Н(еЬ сопсепсгабопа о( ас|еп|пе аге иаес| ъчЬеп а УАС асса|и В 1о Ье цгоъчи Еог ОНА (ю(асюп. МАТЕЮА!.5 ВоЕЕег5 апс! Ьо!о6оп5 Р!еаае аее Аррепс|(х 1 сог сопсропеп1а оЕ а!ос|с ао|иоопа, ЬиЕ1ега, апс3 геадепга. 01|и(е асос)с ао|иоопа Со 1Ье арргориасе сопсеп1га1сопь. С1усего! (307е чуч) ги УР0 тео5ит Се!5 Едигртеис Еог ри|аес(обе!с78е! е1ессгорЬогеь(а Р|еаае атее сЬе раие1 оп РС)15Е0-Е|ЕЕ0 СЕЕ ЕЕЕСТКОРНО|СЕ515 си Ргососо! 1. Мес!|а 5е1есйче тес!(ит Р1еаае аее сбе рапе! ои УЕА5Т МЕ0|А УР0 а8аг р!асеа УР0 теоуит ЬресЕа! Ес!шрспеп$ Иа|а (2 тВ АЕЫ|1|опа! Реаееп15 5(ер 3 о1 (Ь(а рго1осо| геди(геь геаВепса !(асес7 ги СЬарсег б, Ргососо| 7.
5(ер 4 о1 1Ь|а рго(осо! геди|тех геа8еио 1(асес7 |и СЬарсег 5, Рго1осо1 77 ог 78. 51ер 5 о1 1Ь|а ргососо1 геди|тех еИЬег геадеиса 1(асесГ т 'СЬарсег б, РгоСосо| 70, ог геацеи15 1|а!ее! ги СЬарсег 8, Ргогосо| 7 2. Чессог5 апс! Уеа5Е Яга|п5 5. сегеч(а!ае саггу(ие гесотЫиаис УАС с|опе Т!ъеае аге гиии ессеи оЬсатпед (гоги а асгеегби5 согпрапу. Р|еаае аее Аррепспх 3. 4.66 СЬаргег 4г Игог)гги5 Мгб Нс58-гарапгу Уеггогь МЕТНО0 1.
1пппес))асе!у ирои сЬе агт!ча1 оу с1опеа !и йе 1аЪогасогу, асгеа)с сЬе си1шгек опсо ае1есссче шес)!а апг1 !пегасе Сог 48 Ьопгь ас 30'С со оЬса!п яп81е со1оп!еы Уеаьс со!огпег гиау Ье аиа)ухег! с()гесс!у Ьу РСР, (р!еаье атее Ргососо! 13). 2. Тгапяеег еасЬ оу 6 — 12 !ис)(чЫиа1 со!оп)еа шсо 1О гп! оу ХР)3 шейшп. 1псиЬасе йе си!сигеа сч!сЬ ч!8огоиа а8!сас!оп (300 сус1еа/ш!пасе) ас 30'С очегп!8Ьс. ТЬе сеЪ аЬои14 геасЬ аасигасюп (О)3 = 2.0 — 3.0, -3 х 1О се!1ьгш1) с)иг!и8 сЬ!а сипе. 3. Ехсгасс уеаас Р)х)А !гоги 9 гп1 оГеасЬ оГ йе си!сигеа Ео11осч!и8 сЬе асерк г)еасг!Ъег) !и СЬарсег 6, Ргососо! 7. йоге йе ииоаег( рогбоиг о(йе со)гогег аС 4 С.
4. Апа!уге сЬе яге оГ сЬе гАС си еасЬ оГ сЬе 13)ч)А ргерагас!оик Ъу РРСЕ. 5. Сопбгш Ьу есйег 5опйеги ЬуЬг)с))хас!оп (р1еаье атее СЬарсег 6, Ргососо! 10) ог РСсс (р!еаае атее СЬарсег 8, Ргососо! 12) йас йе саг8ес вес)иепсе !а ргеаепс !и сЬе гАС ЭХА.
б. 1Г йе геаи1са аге вас(кГассогу, !.е., И' йе си1сигеа сопсаш УАСа оГ йе хаше яхе, !Е сЬеге Ра по яами ос !иасаЬ!!!су ог геаггаи8ешепс, апг) !с йе саг8ес аес)оепсеа аге ргекепс, сЬеп сЬооае опе ог Съчо оу йе сц1гигеа Еог!оп8-Сепи а!осаде (р1еаае атее СЬе рапе1 оп 5ТОйАСЕ ОЕ УЕА5Т СС)!.- ТС) ССЕ5) . 5ТО!САСЕ ОЕ УЕА5Т СШТЕ)ССЕ5 уеаас сибогеь саи Ье всогес) (ис)еби)се!у ас — 70"С !и 8гочсаЬ гпес)!оси соигаи!и8 С 5г ( уч) 8!уеего! (чче!! аис) 5сеччап 1973). Рог ьгога8е: С. Ргераге 2-ги! ч)а!а сои!а)и)и8 0.5 ги! о( яеи)е 306 ! уч) ц!усего! !и УР(3 исес)!оис. 2. АгЫ 0.5 ги! о( сбе уеая си!псге аиг) гвх сбе соисеиса о( сбе сабе Ьу 8еи8е чогсех!и8. 3. Тгаиа(ег йе г4а)ь Со -70"С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
