Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 106
Текст из файла (страница 106)
1п ЬпеГ, с1оаес( с|гси!аг чессог Т))ъ(А Ы 1!иеапгеИ Ьу ЙВеас!оп ъч!(Ь а геасг!сс!оп епгуше, сгеасе|1 ъч!(Ь аПса!!ие РЬоарЬасаае апд 1!аасес( со еепош!с ГТЫА сЬас Ьаа Ьееп рагйа1!у И!ВеасеИ ъч|й ап арргорпасе геасг!сс!оп епгуше, апс) сгасйопасе|1 Ьу РРСЕ. То ргенепс Гоппайоп оГ сЬипепс с!опея |Ье 1!касюп геасс(оп сои(а!па а сепГо1д пю!аг ехсеа| оГ чессог ГТЫА. ТЬе 1!аас!оп ргос!исса аге !исгодисес( шсо Е, соВ Ъу е1ессгорогасюп, ап|1 сгапаГогшапса аге хе!ессеи оп айаг р1асеа сои(а!и!па сЫогагпрЬепко!, 1РТС, апс( Х-аа!.
'чъгЬ!се со!оп!еа саггушд гесогпЬ|папс ВАСа аге сгапаГеггес( со а аесопс1 р1асе сои(а!и!пд йе ааше асЫЬЬ еа со сопйпп |Ье со1ог ае1есйоп. Ъйпсе со!оп!еа аге аца!п р!с)сед апс) аггауед |и |Ье ъче1!а оГ гп!сгос!сег р1асея ТЬеае асера аге с)еасг!Ьед ш пюге с)еса!! !и рарега с!еасг!Ъ!пд йе еасаЫЫЬп|епс оГ 1!Ьгаг!еа оГ аепоппс 13)ь(А оГ чапо|ь арес!еа (е.ц., Ьшпап, ВЬ|гиуа ес а!. )992; Кип ес а!. !996; аогкЬшп, ъЧоо ес а1. 1994; гке, (агапу ес а1. 1995; Ъолпе, Са| ес а1. 1995; сЬ!с1|еп, У!пппег апс) Тгегппс)ег С!ЬЬ(па 1997).
ТТп)!)се Ьассег!орЬаке )., сояпЫ, апс! ЬассепорЬаце Р! чессогя ВАСа Ьане по рас)сап!па 1ипиаИопя апд гесошЬ!паиса шау сопса!п аеешепса оГ депеш!с Т))ъ(А йас ехсее|1 300 1|Ь !и яге (Яихиуа ес а1. 1992). Ноъчечег, сЬе ачегаке яке оГ сЬе !паегь !и шапу ВАС 1!Ьгаг!еа Ь сопа(дегаЫу япа11ег, Ьесъчееп !00 1|Ъ апд !40 1|Ь (Кип ес а). 1996). Ыечегйе1еая 1!Ьгаг!еа ъч!(Ь ппкЬ 1агаег !паегса сап Ъе Вепегасес! Ъу сагеГи1 яа!пд оГ сЬе аепогп!с Г)ЫА ЪеГоге с!оп!иа апс) Ъу орВппх(пц сои|!!с!опа Гог е1ессгорогасюп |Ьас Гачог сгапаГоппас!оп оГ Е.
соВ ъч!(Ь чегу!агре р!аашнЬ (Улпппег апд Тгегг!иИег б!ЬЬ!па 1997). То ргечепс !шгасЬгопюаогпа! гесо|пЬ|пайоп Ьесъчееп серей|хе аег)иепсеа сопипоп1у Гоипд ш еи1|агуоск Г)ЫАя ВАСа аге ргорацасес( ш гесошЬ!пас(оп-с1еГесс!че Ьоаса аисЬ аа Е. соП Г)Н!ОВ (тсгА л(тгг-Ьгг(Р|М5-тсгВС) гесА!).
Еагае р1аяпЫ Г)ЫАа сап Ье !и(го|!исес! шсо сЬь асга!и ъччсЬ Ь!цЬ ейк!епсу Ьу е1ессгорогаВоп (5Ьепц ес а1. 1995), а ргорегсу йас Гас|!Васек ЬосЬ сопасгисс!оп оГ 1!Ьгапеа апд гесгоГ|сс!пк оГ |пйчЫиа1 ВАС гесошЬ!папь ъчиЬ ассеаюгу е1ешепса йас Гас|!Васе гпашри1айоп оГ 1агке с1опе|1 Г)Г4Аа (Ме)!а апИ Мопасо 1997). 4.50 С!таргет 4: У~ойтц ацй НЕц1т-сарастту Ъестотт Р!С1тЙЕ 4-11 Е!отнсЬатт: С!оп1п !и ВАС Уестота БСКЕЕММС ВАС Е!ВКАК1Е5 Сепопис 1!Ьгаг1ек сопатгиссет! ш ВАСЯ аге гоит!пе!у цг!сЫет! што огт!егет! аггауа Еог асгееп!пц Ьу ЬуЪг!Йкат!оп, ог йеу аге сошЫпет! гпто Ь!пя роо1я апс! аиЪроо!а Еог гарЫ асгееп!пц Ьу РСВ.
Мапу оЕ тЬеае аггаует! 11Ьгаг!еа аге пот геасц1у анацаЫе Егош асат!еш!с аоигсеа Ъш аге !пттеад тпашташет! Ьу сопипегста1 сошрап!еа юсЬ аа ВеаеагсЬ бепет!ся 1пс., ог Сепоше 5уатепь, 1пс. (р1еаае аее ТаЫе 4-2). Рог тпоя шнеат1цатогя и тв Ъу Еаг 1еы ехрепяне апт! Еаатег то оЬта!и гесоптЬтпапт ВАС с!опеа Егош тЬеае сопппегс1а! аирр1!ега тЬап то сопатгист тЬетг отчп 11Ъгаг1ея Еп шоат сааея а ЬуЬг!т!!хат!оп ргоЪе ог а ратг оЕ о11цопис1еот1т1еа арестйс Еог йе сЬгогпоюша1 гецюп оЕ шсегея !а аепт то а сопипегс!а1 вирр!!ег, ънЬо асгеепа цепопис ВАС 1!Ьгаг1еа оЕ йе арргорпате арес1ез апс1 гетигпа 1пт!!нЫиа! роя!иге с1опеа аа тгапаЕогшет! Ьастег1а ог ВАС ЭХА.
1п оиг ехрег1епсе, ат 1еая 50% оЕ тЬеае рояле с!опек астиа1!у сопта|п йе гец!оп оЕ !птегеат, ш а11 ог рагс. ТЬе геша!пт!ег аге Еа1ае роят1нек оЕ опе югт ог апойег. Рог тЬь геаюп, Ь ь егаепца1 то сопутгш Ьу шт1ерепт1епс шетЬотЬ тЬе Ыептиу апт1 сЬгошоюпта1 1осацоп оЕ петч1у ьо1атет! ВАС с1опея ТЬеае шетЬотЬ !пс!ит1е РСВ апа1уяа ичтЬ ши1т1р1е ргипег ра!гя Тт1!А ает1иепсшц, ЦоитЬегп 4.52 СЬартег 4: ИгогЕ/п5 гч/тЬ Н15Ь-сарае/ту Ъестога АЕЫ1Г1ооа! Кеаеео15 5тер 4 о/ тЬта рготосо1 гес/и/геь геацепта 1/атее/ т Рготосо! 8 о/ ГЬта сЬартег.
5/ер 5 оГ ГЫь рготосо/ геои!геа е/тЬег геадепти 1!атее/ т СЬаргег 8, Рготосо1 12 ог геадепга !!атее/ гп СЬаргег б, Рготосо! 10. Чес1ог5 аод ВасГег1а! Яга1115 ВАС Г7ХА ог Си!гиге о/ Е. соВ гггат ггапз/огтес/ гч/тЬ ВАС /ао/аге Е, со!1 ягат !е.д., РН108) аз Ггоаеп е/естгосотрегепт се!15 Кеци/гег1 оп! у 1Г Иге ВАС Во!аге 1ь аорр1гед аа рпггугегг ЕгЬ/А. Р!еаае аее СЬаргег 1, Ргогосо! 26.
МЕТНО0 1. Ргераге ЕгеаЬ ВАС тгапаЕоппапгя ! Г ТНЕ ВАС 15 5ОРРИЕО 1Ы ТНЕ ГОКМ ОГ ОЫА а. ТгапаГотш Е, со1г (атгаш Г)Н10В) чч11Ь ВАС Т/Ь)А Ьу е!естгорогатюп. Весапае гЬе еЬВкгепсу оу ггапауоггпаг1оп Ьу 1агВе ВАСа г)есгеааеа ВгагпагкаПу аа а Гопсбоп оГ гЬе чо!саВе аррВег! Впппа е1ессгорогагюп, гг ы Ьеаг со аег пр а аепеа оу е1ессгорогагюп геасиопа аг чо!гаВеа гап81п8 Егот 15 ЮЧ/сгп го 25 ЕЧ/спг 15Ьеп8 ег а1. 1995; 71пппег апа Чегг1пг)ег Сг1ЬЬ1па 1997). Ь. Р1ате 2.5, 25, апс! 250 р1 оЕ еасЬ ЪагсЬ оЕ е1есггорогагес) Ьассепа ото ЕВ а8аг р1атеа сопга)шп8 12.5 РВ/ш! сЫогатпрЬешсо1. !псиЬаге 1Ье р!атее Гог 16 — 24 Ьоига аг 37'С. ! Г ТНЕ ВАС 15 5Е/РРЕ1ЕО А5 А ТКАЫ5ГОКМЕО ВАСТЕК1АЕ 5ТОСК а.
51теа1с тЬе си1тиге члйош с!е1ау опто 1.В а8аг р1агеа сои!а)п)п8 12.5 рц/ш! сЫогашРЬешсо1. Ь. !псиЪаге 1Ье р1атеа Гог 12-16 Ьоига ат 37 С. 2. 5е!ест 12 шйч!с!иа1 тгапаЕоппапга апд )поси1аге 1Ьеае ппо 5-ш1 а1нрлога оГ ЕВ пгегВшп сопташ)п8 сЫогашрЬешсо! !12.5 и8/ш!). Сгогч йе си)тигеа очегшВЫ ас 37'С гч11Ь чг8отоиь аЬа!с1п8. 3. ГЛе а 1ооруи1 оГ еасЬ 5-гп! си11иге то ает ир сиЬигеа оЕ йе 12 тгапаЕотшапта ш ЕВ Гтеег!п8 тег)1ит. 1АгЬеп йеае си!тигеа Ьаче Вгогчп, тгапаГег тЬепг го а — 20'С Гтеегег Еог агогаВе. 4. РипЕу йе ВАС Г7ЬЕА Еготп 4.5 гп1 оГ еасЬ 5-тп! си!тите Егош 51ер 2, аь г)еасПЬес1 ш Ргогосо1 8.
5. Апа!уге ГЬе ВАС 17ХА. а. СопГгтш Ъу РСК 1Ьас тЬе ВАСа сопгаш 1Ье сЬгопюаоша1 ге8юп оЕ штегеат (р1еаае аее СЬартег 8, Рготосо1 12) ог 5оийегп ЬуЪгЫ)тат!оп ГР1еаае аее СЬарсег 6, Ргососо1 1О). Ь. Меааиге йе а!ге оГ йе !паегтв Ьу гВВеьгюп гч!ГЬ геатт!сг!оп епгутпеа апс) РРСЕ. 6. Оп 1Ье Ьаа!а оЕ1Ье геаи!ЬЬ ае1ест опе ог гпоге оЕ ГЬе ВАСа Еог Еигйег апа!уяа. !ю!акоп о1 ВАС 0МА 1гот 5гпа11-ьса1е Си!1игеь мАЕЕ АмОт/гтть ОГ ВАС 0ЫАь Аае РаеРАаео Еготп 5-т! сп1тпгеь оЕ ВАС тгапьЕогтпес/ се11ь. 0ЫА /ь тьо!атет1 Ьу ап ах!арта!/оп оЕ тЬе а/Ьа!!пе 1уьть тетЬос! т/еьсгтЪес! /п СЬартег 1, Рготосо! 1. ТЬе у/еЫ оЕ тЬе ргерагаВоп /ь 0.1-0.4 /те оЕ ВАС 0ХА, теЬ/сЬ /ь ьштаЫе Еог апа1уьь Ьу геьтг!стюп епгутпе йВеьт!оп, РСВ, ог 5оптЬегп Ыотт!пд.
МАТЕ К! А15 САЕ/Т!ОЫ: Р1еаье ьее АррепгВх 12 Еог арргориа!е Ьапт/1!пе оЕ ипа!ег!а/ь тагЬет! ъх!!Ь <! >. ВоЕЕеть апд $0106опь Р1еаье ьее Аррепгпх 1 Еог соптропепрь о/ ь/осЬ ьо1ипопь, Ьо//егь, апт! геаееп!ь. О!1и!е ь!ос/с ьо1и!!опь то тЬе арргорпа!е сопсеп!габопь.
Етаалоl !ьоргорало/ Бо/ийоль !ог РНА /ьо/ат!олт А//са//ле !уь/ь ьо/идол !, тсе со/г! Арка/тле /уь/ь ьо/и!тол П Яо!пт!оп !! аЬоо!о Ье 6еьЫу ргерагет! апт! пает! ат тоопт теюрегатше. А//са/!ле /уь/ь ьо/идол !!!, тсе соЫ Р1асе тЬе ао!отюп оп ке/оьт Ье/оге оье. 5ТЕ ьо/ит/ол, !се соЫ Р!асс тЬе ао1отюп оп ке !оят Ьеуоге чае. ТЕ !рН 8.0) Еыуптеь апд ВоЕЕеть Йеьтг!ст/ол еле/олис/еаьеь Се15 Ег/и/ртелг Еог ри/ьег/-Е!еЫ де/ е/естгорЬогеь/ь Р!еаае ке тЬе рапе! оп Рт/Е5Е0-Е!ЕЕ0 СЕЕ ЕЕЕСТКОРНОКЕ5!5 тп Рготосо! !. Мейа ЕВ тет//ит солта/л/лд 72.5 ре/т/ сЫогатрЬел/со/ <!> ОтааоЪе ьо1Ы сЫогаюрЬеп!со! ш етЬапо! то а Впа! сопсептгаооп о/ 34 тайп!.
Ргераге апт/ атЫ тЬе сЫогоатпрЬепко! !оьт Ье!оге оье. Мос1етс Ас!Т15 апд О1фопмс1ео6деь ОНА тат/сеть Еог ри/ьег/-Е/еЫ де! е/естгорЬогеьть ОЬта!и птеааЬаье тпаг1тега Егогп !аре ТесЬпо!оа!еа ог оье ВАСЬ тгЬоае а!хеь Ьаче Ьееп ргегюоь!у гпаЫЬЬеа 4.53 Рго1осо! 9 !ю!акоп о1 ВАС 0МА пот магде-ьса!е Си! аггея Е хтесев!ие лсеасув!5 Ое ВАС кесомв!Есльсть, !пс1ийпд с1еса!1ес1 геасг1сс1оп шарр!пВ, РЬЕА аес1пепс!пВ, ог зпЬс!ошпВ, гес!шгеа тоге РЬЕА сЬап ь ргоч1с1ес1 Ъу а япа!1-аса1е си!сиге Ергососо1 ВЬ?п сЬ1а ргососо!, сЬе сю!акоп ргосес1иге В аса!ес1 ир со ассошшос1асе 1агВе-кса1е си!сигея саггу!пВ а гесошЬспапС ВАС.
ТЬе ауегаВе у1е10 Егош а 500-ш1 си!гиге оЕ ВАС-Сгапьуогшес1 се1!а ь 20 — 25 1сВ оЕ ВАС РЬЕА. ТЬе РЬЕА шау Ъе ЬггСЬег ригЕВсес1 Ьу со!шпп сЬгошасоВгарЬу. МАТЕК(АЕЬ СА17т!ОЬС: Р1еаае аее Аррепгпх 72 Еог арргорпаСе Ьапс111пВ оЕ та!ее!а!а тагЬес1 илгЬ <! >. Вогтегв апд 5о!пбопь Р1еаае аее Аррепгпх 1 Еог сотропепса оЕ аСосЬ ао1иВопа, ЬиЕЕегь, апс1 геааепСа. 011и1е асосЬ ао1ийопь со СЬе арргорг!аСе сопсепСгасгопа. ЕГЬапо! !5оргорапо1 РЬепо1;сЫогоуогт 17:7, и1и! <1> 501ийопа Еог РХА !ю1аг!оп: АПсайпе Еуяь ьо1ийоп 1, !се соЫ рог 1агце-аеа!е ргерасассопа оЕ ВАС ЛЬЕА, асеп1е АПса1гое 1уяа ю1исгоп 1 аЬои!о Ье аирр1епсепсесс !иас Ъеуоге иае сессЬ!ЭЬСаае-Егее ВЬСаае ас а сопсепсгавоп оЕ 7 00 РВА!.
А11са1те !ух!а ьо1ийоп П во!шгоп 11 аЬои!о Ье ЕгеаЫу ргерагесс апсс иаес! ас гоогп сетрегасиге. А%а!!пе Еуа!а ьо!ийоп !!1, !се соЫ Р!асе сЬе ао1ивоп оп ссе 1апс ЬеЕоге иае. 5ТЕ ю!ипоп, ке соЫ Р!аее сЬе ю1и6оп оп гсе !ип Ьеуоге иге. ТЕ ЕрН 8.0! Епкугпев апг! Войегь Еуюгуте Кеасг!сг!оп епгуопис1еаьеь Нос!есс АСЫВ апд ОВеопсгс!ео6с!еь РХА тагЕгега Еог ри1аегЕ-!Ее!6 Ве1 е1ессгорЬогеа!ь ОЬсасп псецаЬаае псагЬега !гоги Еауе тесЬпо!оасеа ог иге ВАСа сеЬоае якеа Ьаче Ьееп ргеесоийу епаЬЪЬесс.
4.55 4.5б СБартет 4т Сс от)с)пе ччтй НЕСТЬ-гараттту )тетготт Се15 Ет)01ртелс Еот ри1ьегЕ-Ете)г) Веl е1еегторЬоте313 Р!еаье атее сЬе рапе! оп РСЗЕ5ЕО-Е!ЕЕО СЕЕ ЕЕЕСТКОРНОКЕ515 тп Ргососо! !. Мес1!а ЕВ теобит солса)л)ла 12.5 РВЕт1 ейотатрЬел1со1 (! > Р!шо!че яо!Ы сЫоташрЬеп!со! ш есЬапо! со а Ппа! сопсепсгас!оп оЕ 34 тпфш!.
Ргераге апт! атстС ЕЬе сЫотоашрЬептео! )итс ЬеЕоге иге. Сеп$гЫще5 апд Ко$ог5 5отчаП С5А гогот от ет)ива)елт, ччЕСЬ Оа)тт1тЕВе СиЬея !уча!Пеле) ореста1 Ецо1ргпеп$ СЬтотатоВтарйу теебл СЬготпасоцтарЬу гевал шау Ье геоо!тет! со Еаса!тасе геьспсбоп опт)опас!еаяе йаегсюп оЕ ВАС ЕтсчА Ер!еате атее 5сер с3).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
