Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 105
Текст из файла (страница 105)
5рог $Ье гегпа$пс$ег оХ$Ье Ьасгег$орЬаее Р1 0$4А 1гогп 51ер 14 йюче $п $Ье сепгег о!а М$й$роге 5епеь Ч тетЬгапе, Яоа!$пе ьЬ$пу ь$г$е ир оп 10 гп! о! ь!еп!е Н О $п а 90-тгп-с$$агпегег Регп' г$$ьЬ. 2. 0$а$уке ьйе 0МА 4ог 10 пппигеь. 3. Кегпоче 1Ье с$гор 1о а с$еап пи!со!иее гиЬе апс$ иье а$$с$иогь о!1Ье г$$а!угег$0йА 1ог геьгпсгюп епкутпе г$$аеь1$оп апг$гог 0ХА ьег$иепс$пе. Ргогосо! 57 Игогй|пе и 7ГЬ Васгег|орйаде Р) апг( Егл С!оп!пе Вуягетя 4.45 АЕТЕКЫАТ13(Е РКОТОСОЫ РЕ)К1Е!САТ)ОЫ ОЕ Н1СН-МОЕЕСЕ)ЕАК-)А)Е1СНТ С)КСЕ)ЕАК ЕЗЫА ВУ СНКОМАТОСКАРНУ ОХ О!АСЕ1Ч КЕ51Ч О!реп гел)пь Ьаче Ьееп олег) лисселл(и))у 1о рип(у с|гси|аг ЫВЬ-пю)еси)аг-ъче!аЫ Е)ЫА (е.ц., Ьас(ег!орЬаце Р1 ОНА; е.д., р)еале вес Р|егсе апг( 5(егпЬегд 7992; Мас1агеп апг) С)аг)ге 7996).
Ноъчечег, 1Ыл рго1осо| ил|! по( ~чог)г (ог 1)пеаг ЫеЬ-гпо)еси1аг-ъче!ВЬ1 ОНА, ъчЫсЬ Ыпг)л '(ггечегл(Ыу 1о 1Ье со!ипъп. СА()Т)ОЫ; Р|еале лее Аррепг)|х 12 (ог арргорпа|е Ьапг)1!пд о! тагег!а)л таг)ъег) вйЬ <7>. Адг|!1!опа1 Ма1ела1ь СЬеелес)о(Ь Е. со!1 Ьолг ь1га(п сагп7(гд Р7 гесотЬгпага Е|игюп Ьиууег 50 тм ТггмО (РН 8. 7-8.2) 7Ммиаа 75% (чуч) еГЬапо! 1улоауте Омкоме ло))а 1улохуте аг а сопсепггаиоп о( 7 0 оп) |п 7 0 гпМ Тг)ло) (РН 60) ) им Ье!оге и япВ О|аееп-1|р 500 ог 2500 со|итп ъиуй арргорпа1е Ьиууегл (е.е., РЗ апг( ОВТ лирр!юг) гп О|акоп )г)0.
5огча(! С54 гогог ог ес(илга(епг ТВ гпег()ит соп(а)а|па 25 ифт! )ъапатус|п ууалЬ 606ег 50 тМ МОР5-КОН < ! > (рН 7.5-7.6) 0.75 м ХаО 75% (ч(ч) есйапо| ЪЧЬеп тагл)пВ уйти Ьийег, аа|илг гйе РН о( а МОР57)хаС) ло|ийоп Ье(оге аг)ъ))пе 7Ье есЬапо|. Ме1Ьос! 7. Сгоъч ап очегп)ф1 сирюге о(1Ье арргорпа1е Ьоь1 ь1га)п саггу)пе лйе Р7 гесотЬ|пап( с!опе гп 500 гп! о( ТВ соп(а)п!пе 25 иВ)т) )ъапатус!и. 2. Ресочег |йе се1)я Ьу сеп1г)Ела(!оп а1 50000 (5500 гргп )и а 5огча)! С5А го1ог) апс) Йеел( Ейепъ иа)пВ 1улоаугпе а( а йпа| сопсеп(га(юп о( 7 гпмнп) апг) )йе тосИег( а!)ъа)!пе ргосег)иге г)елсг)Ьсл) )п (Ье О)адеп !!(ега1иге. Айег 1Ье ас)г))1)оп о( сЫ))ег) РЗ Ьийег апд госиЬа(юп оп !се 1ог 20 гп|пи1ем сеп1г!67ее (Ье )ула(е а1 7 5,000а (9600 грпъ |и а 5огча|! СЗА го(ог) Еог 30 гЫпи1ел а1 4'С.
3. Ргогпр11у 1гапл(ег гйе яирегпа(ап1 (о а (гелЬ (иЬе, апг1 й!(ег 7Ье ьирегпа(ап( (ЬгоиеЬ ьечега) )ауегл о( с Ьеелес |о( Ь. 4. Ег)и!!!Ьга(е а ( М)ааеп-1)р со|игпп ийЬ 10 пъ| о( ОВТ Ьийег (лирр 5. Арр|у 1Ье й!1егег) !ула1е (гого 5(ер 3 1о гйе со|гнпп. 6. )гиалЬ 1Ье сойпъп ъи(Ь 30 гп| о(ъчалЬ Ьийег. Оо гюг ъчаъЬ гЬе го)итп илуй пъоге 7Ьап 30 т| о( 7Ых Ьийег. 7. Е|и1е 1Ье Р1 О)ъ)А (гогп (Ье сойгпп ъи(Ь 7 5 пъ! 0( е!и(юп Ьийег.
В. Ргес|рйа1е 1Ье е!и(ес( ОНА ъи)Ь 0.7 чо|игпе о( )лоргорапо). Со йоп а( 70,000а (72,000 грпъ (и а 5огча|! 55-34 го1ог) 1ог 30 т!и 9. К!псе 1Ье ре|1е( ил(Ь 70;4 е(Ьапо|. Кепюче ал гписЬ егйапо! аь и) о1 ТЕ (рН 8.0). 10. Апа)уге латр!ел оНЬе (ЗЫА (2.0 а! ог — 1 иа) Ьу геь1г|с(!оп епгу а сопчеп(юпа! ааагоье Ве| ог а ри!легИе!г) айаголе ее). Рго1осо! 6 Тгапйегп'пц Вас1епорЬаце Р1 С!опея оеЬюееп Е сой Нойс т нв игто лмо с)илитч ог влсткиорнлсв Р! 0МА овтмнео Егош сП!Тегепт а!та!па оЕ Е. соП чагу черепе!!пц оп тЬе аепотуре оЕ йе Ьоат Ъастегшш апт( йе рагПсп!аг ает)пепсе оЕ Еоге!ап 1314А сагт!ее! !п тЬе гесотпЪтпапт.
РгоЫетпа ъчПЬ !оиг у!е16 ог роог е)паПту сап аошетппеа Ъе очетсотпе Ьу тгапа(егНпВ йе Р1 ог РАС гесошЬтпапг тпсо а атга!и оЕЕ. соП йат т(оеа пот ехргеаа Сге гесотп- Ъ!пахе (е.д., Ы535 1 6; 5тегпЬегВ ет а1. 1994). Тъчо шетЬот!а аге сошпюп1у пает! то СгапаЕег гесотпЬтпапт Р1 с!опеа Егош опе Ьоат атгатп со апойег: ° ТтатгЕист(оп оЕ тЬе Р! гесогпЬтпапт р1аяпЫ !пчо1чеа ятреНпЕесПоп оЕ йе я!та!и ог!В!паПу сатгу!пд йе Р! с!опе ъчй ичЫ-Гуре Р! Ьастег!орЬаае. 13пг!пВ йе епап!пц сус!е оЕ 1ТПс шЕесПоп, тЬе Р1 р)аяпЫ !а рас(гарет( што Р1 рагПс1ея тчЫсЬ сап Ье пает! со !пЕесг апойет ягатп оЕ Е. со!1 ТгапаЕотшет( сеПа сопташ!пВ йе Р! с!опе ш р1аяпЫ Еопп аге йеп ее!естес) оп р1атеь сопса!и!пВ )тапатпус!и.
5!ос)са оЕ тчИ-гуре Р! ЬассеНорЬаце, тодетЬег ъчй рготосо1ь Еог сгапат!пст!оп, аге оЕгеп апррПет! Ьу сопппегста1 сошрап!еа аа рагс оЕ йетг ьегч!се то асгееп Р! ПЬгапея ° Е!естгорогаг!оп оЕ рпНПет1 Р1 1)ХА )пто а т)(йегепт а!та!и оЕ Ьоьт сеПь та а яшр1е тпейот(, Ъп! аоше оЕ йе гесотпЬшапт аепошеа тпау апЕЕег т)е1ет!опа с)пт!пВ е1естгорогаПоп. ТЬе геяткПоп раттегпа оЕ йе от!а!па! гесошЪтпапт апт( 131!Аз Егош а ьеНеь оЕ шдерепт(епт тгапаЕогшапта аЬоц!П Ье сотпрагес1 то Ыепт!Еу с1опеа йат Ьаче пот апЕЕегет( теаггапветпепта т(пг!пц е1естторогатюп. ТЬе ЕоПоичпц рготосо1 Еог тгапаЕег оЕ Р1 с1опеа Ьу е1естгорогаПоп тчаь аиррПед Ьу Кау Мас(3опа16 (()и!чета!ту оЕ Техаа ВоптЬтчеяетп МесПса1 Септег, 13аПаа) апс1 деасг!Ьеа йе е1естгорогаПоп оЕ а сопппегс!аПу ачаПаЫе а!та!и оЕ Е.
соП (15-5, В!о-Кат)). 1п йе Мас)3опа1д 1аЪогасогу, йе у!е1сЬ оЕ ЪастеНорЬаде Р1 13ЫА тчеге !псгеаает! аа пшсЬ аа теп(о1д аЕтег !тапа(ег !псо а!ганы 15-5 ог 13Н10В Егош МЯ3529. 5!ш1!ат геап1та Ьаче Ъееп герогтет1 аЕтег сгапаЕег !пто Е. соП а!та!и И535 1 6 (Мас1агеп апт( С1аг(се 1996). МАТЕК!А1 о Епкуптев апс! ВттЕЕегв йеатггстюп епгтопис!еаьеа СЕ!5 Ядагозе ае) Р!еаее еее втер 10. 4.46 Рго1осо! 7 Ч/огЫпц млй Вас1епа! Аг6йс~а! Спготоюгпеь В лсттк|лт лкт|нс!л| снкомоюмь, ок ВАСЬ, лксм ычтнтт!с чтстокь Ьааег! оп |Ье Гег61Ьу (Е) гас|от о$ Е.
со!|. Апюик йе ргоретВеа йа| ша)ге йе Е Гас|от |ю а||гасВче аа а Ь|ВЬ-сараску честог уог кепош!с ВХА аге йе Ео!1отч!иВ: ° А 1оъч сору пшпЪег (1 — 2 шо1есп)еа/се!1; Егаше апс) В)аЬор !971) апг! йе ргеаепсе оГ т ю Вепеа (рагА апг! рагВ) епапге |Ье ассига|е рагт!т!ои!пк оГ Е-уастог 1)1)А пю1еси1ез |о г1аикЬ- сег се!!а |!пт!пВ се!1 йч)а!ои. рагВ 1а а!|ю геаропа!Ые гог ехс1ийиВ ехтгаиеопа Е р1аяпЫа |тоги се11я ТЫа сошЪ|паВоп ог' 1о|м сору пшпЬег апг) ап !иап1атег! еиигопшепг 1ип!ыЬе оррогтишнеа Гог !птетшо1есп1аг гесошЬ|па|юп Ъегммееп р!аяпЫ гпо1еси!ея гч!|Ьш се!1я 1п ртасВ- са1 |егшя тЬ!а 1пштатюп шеар |Ьат гесошЬшапс ВАСЯ йар1ау а 1отмег!ече1 ог" теаггапкетпепт ап|! сЬппет!аш ог" Уоге!Вп Р1)А вес)пепсеа |Ьап УАСя ° 1| Ьаа йе аЬ!1!ту |о ргораВасе мету 1агке аекшепта ог РХА. Ь)атига11у осспгт!пВ Е уассогз сап саггу пр |о опе |)паттег оГ йе Е.
сой сЬгогповоше тм)|Ьоиг а|та!и ог !иатаЬ)1!ту. ° 1| ь еаау |о шашрп1ате. Весаиае оу !та с!овес) с|гси!аг па|иге, Е-гас|от у|ХА сап Ье !ао1асег) ггош Е. соВ Ьу а|та!ВЬтуог|магс1, Гаш!1)аг тесЬп)г)иеа апсЬ аа аПса1!ие 1уяя ьоруспк септт!гиВаиоп !и СаС1-ейЫЫш ЬгошЫе цга|Веп|я апг) арии со1шпп сЬгошатокгарЬу йгопВЬ геяпв (Х!шшег ап|! Ъегт!пг)ег б!ЬЬ!па 1997). ЯпВ)с!епс ВАС !7Ь)А сап папа!!у Ье оЪга)пег! антош а 5- гп1 Ьастет!а1 сп1|пге уог геагт!ст!оп апа1уяя РСК, апг) Япогеасепг !и я|п ЬуЬ|Ы!тат!оп.
рог гиоге !иуотшатюп оп Е гастотя р1еаве аее йе рапе! оп г тЛСТОК5. ВАС СЕОММС ЧЕСТОКБ ТЬе теагпгеь г!екает!Ьег) Ьеге |чете ехр!о!те|! Ьу Ме1 Ягпоп апг) со11еакпеа ш йе еаг1у 1990а со с) ече!ор ВАС чес|оыЬа| соп|аш, !и а|ЫВюп |о рагА апг! рагВ, Вепез (ог)К аист герЕ) )пчо1чег! !и |Ье !п!ВаВоп ап|1 от!ептат!оп оу г-гас|от Т|Ь)А гер1канои. ТЬе честога (-7.4 )гЪ |п 1епВ|Ь) аге а!го ет)шрре|! мч!|Ь а ро1ус!ои!пВ ае|)пепсе ап|! а ае!естаЫе шаг1|ег (сЫогашрЬеп!со) геяитаисе). Ь)етчег ВАС честога сои|а|и а|1гВ|юпа1 е!ешепь йат (1) а11отм со!от-Ьаае|! Ыеп66са|юи (!ась, исошр1ешепсат!оп) от' гесошЬ!пап|а саггу!ик !иветта ап|1 (2) соп|аш е!ешептз со гас!1!тасе тесомегу апг! шашри1а|юп оГ с1опе|! ОХАМ (Кпп ет а1.
1996; Ага)та|ма е| а1. 1997) (р1еазе аее Е)Вите 4- 2 |и |Ье !и!тот!пст!оп |о |Ыа сЬартег). 4.48 Рго|осо! 7: )Сог)с(пе пч(Ь Вас|ейа! Агг!)чс!а! СЬготоготег 4.49 Г ГАСТОС|5 Гегсй(у ог Е Гассоь ъчеге йхсочегед СЛгоикЬ СЬе ! пИе реп«епс ъчог!с ог' Сача)! )-5(огга (1 950) апс! Науеа (С 952) оп сЬе ипкйгес6опа! (сапа!ег о( сЬгогпоюп|а! гпаг)сега Ииппк соп)иеа! спас(па ос Г, со)Ь ТЬе аЬ)!(Су со аегче аъ а с!опог о( сЬгоп|оюгпа! гпа«ъегь «Ье Е сЬагассег) ъчаа (сапа(еггеИ со гес|р(епс се)!ъ (Г) ъч)(Ь негу Ь(аЬ ейс)епсу (Сача!!)-51огга е| а!.
1953; Науеа 1953), аиккеа((па йа| соп)иаа((че (сапа(ег ге|!Ыгес! а Сгапагп(айЫе Гег6!)(у Гассог, ъчйсЬ ъчаь Иеа)апасе« Г ЧЧе поъч )споъч И|ас (Ь(ъ ог(е(па! Г4ассог р!аяпк! ъчаь а па|игаПу осси гппа чапапс йас соий )псеегасе (псо йе Ьоас сЬгопююп|е апИ (сапа(ег аепес(с гпаг(сегъ ас ап аЬпоггпа(!у Ь)аЬ Ггес!иепсу. ТЬе Вече!орп|епс о( соп)ика()че (сапа(ег о! гпаг(сега ъчаа Феге(оге а«чапсес! аечега) уеага Ьу йй Ьарру сЬапсе. ТЬе Е (ассог о( Е. сой й ап — | 00-)|Ь р(аагпЫ епсоИ)па гпоге сЬап 60 ргосе)пв |пно1че|! )п гер!)са6оп, рагйюп, апс! соп)икас(оп «ог геч(еьч, р!еаъе аее ЧЧИ!есь апИ 5)сиггау С 987). С)ъиа)!у сагпеИ |п И|е (оггп о( а ИоиЫе-а(саиде«, с!оаеИ с)гси(аг 0НА (| — 2 сор)еа!се!!), йе Е Гассог сап печегсЬе!еаа (псеагасе ас гап|!оп| )псо аС !еаас 30 а)(еа оп СЬе Е.
со5 сЬгогпоъогпе «ог геч(еьч, р)еаае аее Гоъч | 987). Се()а саггу(па Г е|йег ерйогпаПу ог (п ап (псеагасеИ а(асе, ехргеаа ир со |Ьгее Ьа|г-!йе Е рй, ъчйсЬ аге Лех)Ые ЬоПоъч су()п«еь — 8 пгп )п И)агпесег ъч)(Ь а 2-пп| ах)а! !игпеп. ТЬе рИ! аге сопъроаеИ !агке(у о( а а)па!е ргосе|п, рйп, ъчЫсЬ (а йе ргосеъаеИ рго«исс о( |Ье р)аяпк! |гаА аепе «ог геч|еччя р)еаье аее (рреп-)Ыег апИ М(пйеу | 986; РагапсЬусЬ апИ Ггоас | 988).
Г-р|)| пос оп(у аге гес)и(геИ Гог ргос!ис6не рЬуяса! сои|асс Ьепчееп Иопог апИ гес)р|епс се!!я Ьис а)ю ргойс!е а)сеа Гог йе ассасЬгпепс о( гпа(е-арес(Г)с, йап|епсоиъ Ьассег(орЬааеа юсЬ аъ М| 3 апИ ГИ «ог пюге |п(оппабоп, р!еаае аее |Ье )псго«ис6оп со СЬарсег 3), СОЮТК1)СТ1ОЬ! ОЕ СЕЬ!ОМ!С Е1ВКАК1ЕЬ 1Ч ВАС ЧЕСТОКй бепош!с 1!Ьгапеа аге сопасгиссес) |п ВАС чессога еааепс!а1!у сЬе ваше ъчау аа |п РАС чессога (р1еаае аее Р!аиге 4-11).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
