Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 102
Текст из файла (страница 102)
Чес1огв апд Вас1ег!а! Яга1пв Вастег1орЬаке Х рас)так!од геаспоп р!еаье ьее ртососо! с, 5сер 79 от |ЬЬ сварсет. Е. со!! р1аппд Ьастепа от йе арргорпате ьтгат 1е.к., Хс7-В1ие, Е73В767, 17М554, 77Н5аМСК) Рот а сотар!есе 166пк ос" аРРтоРпасе а|та|па, р!еаье ьее Лрреосс|х Ь. Реп(ого|4: Атр(3(тсаг(оп апс( Ьсогаце о3 а Соьт(с( Т(йгагу: Атр|фсаг(оп оп Р|31егь 4.33 СОМЬТК0СТЗМС КЕЬТК|СТ|ОМ МАРЬ ОЕ КЕСОМВ|МАМТ СОЬМ305 Ьечега| ь1га1еюеь аге ача(!аЬ(е 1о сопьтитс( |оиггеьо|и1юп геьтпсйоп гпарь о( ьецтепть о(цепогп|с 0МА с(опес( |и соьт|сЬ; ° ТЬе с(оп)пц ытеь о( птапу соьпз(с( чес(огь аге Яапйес( Ьу геьтг|ст|оп ь(теь тот епкугпеь (Ьат с|еаче гпатгпайап 0МА |г Яес|иепйу (е.ц., Ьтс(3, Ьт($, (Ьс(, апс! Хо($).
0(цеьт(оп ил(Ь 1Ьеье епкугпеь, ыпц|у ог (п соптЫпатюп, ил|3 цепега||у у(е(с3 а ыиай пигпЬег о( 0МА (тацтеить (йат сап Ье огс|егес( |иго а тар. ° И а геыпсйоп епауте В |Яепййес! (Ьа( ге(еаьеь (Ье (пьет( (гоги тйе честог Ьит с(оеь пот с|еаче ил|(6- |и $1, 1Ьеп а ьесопс( ьтгатецу Ьесоптеь ачайаЫе |и соьгп(с3 чес(огь ьосЬ аь 5орегСоь-1. |и честогь о( (Ыь туре, (Ье ргопто(егь Тог(це ЬастегюрЬаце ТЗ аис3 Т7 КМА ро|угпегаьеь аге (осатес3 Ьеичееп Яте ВагпН$ с|оп|пц ы1е апс| тйе ЯапК(пц МоП геьтпс6оп ы1еь. Кеьтг(сйоп ы1еь сап Ье гпаррес$ Ьу ге|еаь|пц(Ье |пьет( ил|(Ь Хо($, ьетйпц ор раг6а| с((цев(оп илТЬ геь(пс6оп епаутеь, апс3 апа(уа(пц(Ье ргос3- исть Ьу Ьоо(Ьегп ЬуЬг(с((тат(оп иь(пц ап ойцогвс(еойс(е ргоЬе согпр|егпептагу 1о е(йтег 1Ье ЬастепорЬаце ТЗ ог (Ье Ьас(епогрЬаце Т7 ргогпо1ег ьес|иепсе.
А (ас(с(ег о( ЬуЬг(с$(а(пц Ьапс(ь (ь с|етестес3 оп тце аотогас((оцгат, ил(Ь (Ье ьгпайеь1 Ьапс| цепегатес$ Ьу беачаце ат(Ье ыте пеагеьт опе о((Ье теггп(п( о( |Ье с|опес! цепопйс Яацгпепт апс3 ргореьыче(у |агцег Ьапс(ь цепега1ес3 Ьу с|еачаце а1 ы1еь (псгеаь(пц(у сйыап( (гоги (Ье епс(. ТЬе сйцегепсе |п ь(ке Ьеиэееп ас3)асепт ЬапсЫь а гпеаытге о( тЬе с3(ьтапсе Ьеичееп геьтг(сйоп ы1еь.
ТЫь гар(с( гпарр|пц арргоасЫь а чапатюп оп |Ье ьтга1ецу опц(- пайу с(ече(орет( Ьу 5т((Ь апс$ В|гпьйе| (1976). ° А ыгп|3аг пте( Ьод та|сеь ас(чаптаце о( тйе аЬю(|(у о( |Ье тепп|паье епауте оТ ЬастегюрЬаце к 1о гесоцп(ае апс$ с|еаче а1 соь ытеь (Кас)оч|та е1 а!. 1985). С|еачаце о( соыпйс$0МА |и чцго ил|(Ь (ептьпаье у|е|сЬ а йпеаг пто|еси|е саггу(пц ргосптс((пц ь(пц(е-Ыгапс(ес( тепп|п|, 12 гвс|ео1Ыеь (п |епц(Ь (ТАго апс( Тау|ог 1971 ). Рагйа| сйцеьйоп геастюпь сап тцеп Ье сагпес$ оо1 аь с(еьсг(Ьес3 аЬоче 1о тиар 1Ье ытеь о( с|еачаце о( о(Ьег геьтг(сйоп епхугпеь. |п ыпц|е соь честогыйе теггп(пале-с3(цеьтес3 0МА сап Ье епс|-|аЬе|ес3 ил(Ь (а-'тр|с$МТРь апс| 1Ье К|епотч (гацтеп( о( Е.
сой 0МА ро|утегаье | (р|еаье ьее СЬар1ег 9, Рготосо| 10) Ье(оге рагйа! с((цеьт(оп ил|1Ь тце геьтпс6оп епауте. |п с$ооЫе соь чье|ось, (Ье Ьчо соь ытеь сап Ье с((ьт(пцо)ьЬес( Ьу епс| (аЬе((пц ил(Ь сйцегеп1 [ир'Р)с$МТРь (чтго апс3 Тау|ог 1971). А|тегпатве|у, ойцопис(еот(с(е ргоЬеь ьрес(йс (ог (Ье (ей соь ыте ог пцЫ соь ы(е сап Ье пьес( аь ргоЬеь (п Ьоо|цегп ЬуЬг(с((аайопь (Кас(оч((т ет а!. 1984).
4.34 СЬаргег 4: Игог)с|пд чч|гЬ Н|ЗЬ-сарас|(у несыт ь сЬаргег апс(|п СЬаргег Ь Рго|осоВ 37 Ме(Ьод 1. Го! 1очч 5(ерш 1 (ЬгоиВЬ 3 о( Рго|осо| 4, 2. Аг)г( 0.5 гп| о( ТВ (о еасЬ (иЬе. СопВпие |псиЬабоп (ог а (ипЬег 45 гп!пи(еь ()ве а я(еп!е ьргеадег |о ьгпеаг (Ье соп(еп(ь о| еасЬ Ы эе очег (Ье еиг|асе о( а ТВ аВаг р1а(е соп(а)п)пВ ! (гапагпус)п (25 )гоп(), апг) (гапа(ег (Ье р(а(ев |о а ЗTС !псиЬа(ог (ог ьечега| Ьоигыо нчего)ф1 (|2 — 1 5 ! Ьоига). ИЪеп |Ье (гана(оггпес( Ьас|епа| со!оп)еь геасЬ 0.1-0.2 пип |п йагпе(ег, ьсгаре (Ьегп (гоги еасЬ р1а(е |п (игп !п|о аерага(е 10-гп( а!|г)ио(ь о( ТВ соп(а|п)пц )напагпус)п (25 РВггп(). В)пье еасЬ р|асе чч!(Ь ап агЫ)()опа) 5 гп| о| ТВ соп|а|п1пВ )сапагпус(п (25 нфп!), |о епеиге согпр|е|е гесочегу о( |Ье Ьас|епа.
Роо| (Ье Ьас|епа| аиьрепвюпь оЬ(а)пег) (гого й((егеп( р|а(ек Ног(ех |Ье роо(ег( аиьрепь)оп (о г)!арегье с(игпрь о( Ьас|епа. Меаьиге |Ье егас( чо|игпе о( (Ье аиьрепя!оп. То (Ье аиьрепь!оп, агЫ ь(еп(е В!усего) (о а Япа| сопсеп(гапон о| 15% ( |ч). М|х (Ье аиьрепьюп чче11 Ьу ! |пчегВпд (Ье с!овес( |иЬе ьечега| |ипею 0|арепае а1)оио(а (0.5-00 гп|) о( (Ье Ьас|епа| аиьрепя!оп !п(о ! ь(еп|(е Ма|к 5(оге |Ье ()ф1!у с!пав чгаВ очегп)ВЬ( а( — 70'С. ТЬе пех| г(ау, гепюче ап а!|циог о( | Ье Ьас(епа! аиьрепь!оп (гого |Ье (геехег апг) (Ьачч В гаргйу а( 3TС.
Маке а иег!еь о( (еп|оЫ Й)и(|опь о( (Ье аиьрепьюп (п ТВ. Зргеас! сЫр1ка(е 0.|-гп| а!)с(ио(а о( еасЬ й|и|юп оп(о ТВ р!а(еь соп(а!п)пВ !галагпус|п (25 РВ)гп!). 1псиЬа(е |Ье р(а(еь очеггиВЬ( а( ЗTС. Соип| |Ье пигпЬег о( со!оп)еь апг) са!си!а(е (Ье пигпЬег о(ч)аЬ|е се1!а(гп) о| опВ!па! ядрена!оп ТЬе Раег о| (Ье !)Ьга~у аЬонЫ гегпа)п сопкап| (ог а|!еаьг 1 уеаг г)нг)пВ агогаде аг -70'С. ) О. То ясгееп (Ье 1!Ьга~у, (Ьачч ап а|к|но( о(|Ье аиьрепа)оп гарЫ|у а| 37"С апс( р1а|е 30000-50000 Ьас|епа оп(о еасЬ о( а вепеь о( пигпЬегег( В||егь аа г)еьспЬег( |и Рго|осо| 2 ЬеВ!пп)пВ ъч((Ь 5(ер 5.
Ргосеег( ич(Ь !уь(пВ |Ье со(оп1еь оп |Ье гер||са 6|сегал (СЬар(ег 1, Рго|осо| 31) апг) ргосеаа!пВ (Ье 01(его (ог ЬуЬпйха- (юп |о )аЬе)ег) ргоЬея (СЬар|ег 1, Рго(осо) 32) РГО1ОСО! 5 ЮогЫпц ний Вас1епорЬаце Р1 апд Ыь С!оп~пц 5уМеть лстеяогнлсе Р1 ччль вьсочеаегь ь тне долме чела аа ЬасгеПорЬа8е !ъ (Веяаш 19518 А1йощЬ ЬогЬ Ъасгег!орЬа8еь аге гешрегаге !п гЬегг пашга1 Ьояя гЬе!г Ь!агог!ез ш гЬе 1аЬогагогу сои!К Ьагг(!у Ъе гпоге ъ!!Кегепг. АЬпоя ишпесПаге!у айег Ьь г(!ьсочегу, Ъассег!орЬа8е л ъчаа г(и!сну аъ!орсег( Ьу гЬе !пйиепКа1 1аЪогагог!еь ог" гЬе гипе аь гЬе гуре-арес!еа !ог шо1еси1аг яиъ(- (еь ог' 1уао8еп!с ЬасгепорЬа8ея ТЬе 30-уеаг еКогг го ипъ!егагапд !га !шПсаге сопгго1 с!гси!га Ьесагпе а 1ог(еяопе !ог Вепегагюпь оГ цгаг(иаге яиъ!епга апд роьЫосгога1 уеПоъчя Ву йе еаг1у 1970я а Ьще ашоипъ оГ 1споън1ефе Ьаъ! Ъееп ЬагчеЯеь! апй ав а сопьег(иепсе, ЪасгегюрЬа8е Х ъчаь гЬе па!ига! Кгя сЬоке аь а чесгог го с1опе (га8шепга о! Вепош!с 13)ъ(А.
!Г ъчаь Го Ье апоГЬег 20 уеагь Ъегоге йе КгЯ ЪасгепорЬа8е Р! чесъог ъчаа ъ!ече1ореъ! аа рагС оъ'а с1еПЪегаге ейогг го сгеаге а с!оп!п8 ъеЫс!е гЬаг сои!0 еКъс!епг1у ргорацаге 1аг8ег (90 — 100 1сЬ) !га8шепгь ог" цепош!с !3(ъ!А (8гегпЬегц 1990). Ву гЬеп, К Ьаъ! Ьесоше с1еаг йаг гЬе аааегпЬ)у ог" кегле о! 1аг8е сопг!Виоиа ьеъ!иепсев (сопг!Ва) апг! гЬе сопьггисг!оп ог" РЬуяса1 гоара ог" пгапипа1(ап 8епошеь соиЫ по! геасП1у Ье аспъечед ън!гЬ ПЬгапеь сопаггисгег( !п е!йег ЬасгегюрЬа8е Х ог соя шЫ чесгогя ЕКогга го ргойке сопг!Ва 1оп8ег йап аечега! Ьипь!геъ! Ы1оЪазеа ВепегаПу гаПеь! Ьесаиае о! гЬе ь1оьн гаге оГ сЬгошоаоше ъча1Ып8 ипровеК Ъу гЬе япаП яхе о( !паегга !и ЬасгепоРЬа8е л с1опея Ъу геаггап8ешепг о! с1опеъ! Вепопис веъ!иепсеь ъ!иг!п8 ргора8агюп оу сояпЫя ог Ьесаиае ог'Вара иг сочега8е гп Ъой (с!псЬ о6 ПЬгапея 'гАС нес!ига (Виг1се ег а1.
1987) Ьас1 йе!г оъчп аега о! РгоЫепь, сЫейу, гЬе 1щЬ ангес(иепсу ог сЬипегк с!опт апс1 гЬе йКъси1гу ъп гпап!ри!аип8 апд !ао1аг!п8'гАСз ш а Ьас1с8гоипь! ог" уеаьг Вепош!с 13)ь!А. ТНЕ 0ЕЬ!С(ъ( ОГ Р1 ЧЕСТОКЬ Ву сопггая го Ьасгег!орЬа8е л, ъчЬеге нес!ига ено1чеК !гош гЬе ъчог1с ог" пъапу Ьипг(гегЬ оГ шнея г!Вагога !и ггасПгюпа1 асас(епис !паКгшопя ЬасгепорЬа8е Р! чесгогь ъчеге гЬе ргоь!исс ог" а яп81е 1аЬогаГогу, гЬаг ог" (ъ!аг 8гегпЪег8 аг гЬе !7иропг Мегс1с РЬагшасеиг!са1 Сошрапу,!осагег! ш гЬе йеп ънПйегпеаа оГ ХПш!пцгоп, 13е1аънаге.
ВгегпЬег8'а Воа! ъчаз го чКече1ор а ауяегп гЬас ънои1П Вепегаге ПЬгаг!еа гЬаг ехЫЬ|г гЬе г(еягаЫе Геагигеь оГ сояпЫ апс( УАС ПЪгаПеа Ъиг пипипгае гЬег с(егъс!епс!еь." ТЬе геаи1г!п8 Р! с1ошщ ауяеш, ъчЬгсЬ !а йП ог'!щеп!оиа Ыеая ъ!гаъна с1еер1у оп йе Ъю1о8у ог" Ъасгег!орЬа8е Р1 (р1еаае аее гЬе рапе1 оп ТНЕ Е! ГЕ СЧСЕЕ ОГ ВЛСТЕКЮРНЛСЕ Ръ) Ьиг !а япи1аг !п рппс!Р1е го с!оп!п8 !п сояпЫя 4.35 4.36 Сйаргег 4: Игог)г(иц в|гй Н(цй-сарае|ту Ъесгогв ° Сепоппс Р)ъ)А ь рагг|а11у г((цев(ес( ъчпЬ а гевгг(сг!оп епхуте я»сЬ ав 5аиЗА1, апг( пю!еси1ев 70 — 100 1гЬ (п 1епц( Ь аге 1Ьеп риг!йег( Ъу я»сгове г1епяту сеп1ПЬ»цагюп ог ри1вег(-Вте1г( це1 е1естгорЬогеяв.
° ТЬе Егацшеп(в оЕ цепопис 0)ъ)А аге 1(ца(ег( го а чесгог (Ьаг солта|па чаПоив цепетк е!ешептв г(ег(че|$ Егош Р! апг( а р1аяп|г( гер1коп/рагцйюп вувгеш. ° 1,!пеаг гесошЬ|папт шо!еси1ев аге рас(сацес( ш чпго шсо ЪастеПорЬаце Р1 рагт(с1ев. ° ТЬе рас1сацег1 О)ъ)А Ы 1гапвуесгег$ ппо Ъастег!а ъчйеге й с(гси1аПхев апг$ гер1ка[ев аигопопюив1у ипг(ег (Ье сопгго1 оЕ | Ье япц1е-сору Р1 р1аяп(г( гер1коп. ° ТЬе р1аяп(г$ сап Ье ашр!1йес( Го Ь|цЬ сору пшпЬег Ьу аг(|1(пц (воргору1-)3-О-5-ГЬ|оу1ас1ояг(е (1РТС), ъчЬ|сЬ шйкев гер!катюп Егош (Ье Р1!у(|с гер1коп (р1еаве вее 5(ер 1 оЕ(Ьь ргогосо1). А1(ЬоицЬ вппр1е !п рг(пс(р1е, 1Ь!в всЬеше гег)и(гев Р1 чесгогв ег(и(ррег( вйЬ тпапу ассеяогу е1ешепгв (Ьаг аяиге а Ь|цЬ еЕВ»с|епсу оГ с1оп|пц апс( гесочегу оЕ ипгеаггапцес( цепопис Р)ъ(А ТНЕ Е(ГЕ СУСЕЕ ОЕ ВАСТЕК(ОРНАСЕ Р1 ° ТЬе ОНА гпо|есо|ев еигааег( (го|и а рори|а6оп о( |п(есПоив Р1 рагцс|ев аге -1 10 Ы» |п (епц(Ь, г(ооЫе-вггапг(е|$, Ппеаг, гептчпаИу гег(опт(апг, апг| с|гсо|аг|у реггпогег(.
ТЬе попгег(опт(ап(0(ъ)А вег|иепсев аге — 90 Ы» |и |епцй. ° Айег (п)есМоп |иго а реггпьяче, гесоп»ЫпаИоп-ргойаепс Ьовт, Ьогпо(оцоов гесогпЬ|па6оп Ьепчееп йе 10-Ы» гег(опт(апг (еггп|па| вег(оепсев цепегагев попгег(опт(апг агси|аг 0$$А цепогпев, -100 $|Ь |п |епцй. |п а тес Ьоя, с(гсо(апта((оп сап еИИ оссог И йе чга|ОМАв солта|п |охР я(е|яп йе 1ептчпа|- ! |у гег(опт(апт гЕЦ ОПВ.
|охР в(гев аге 34-Ьр вег(оепсев йат аге |юЬвггагев (ог 1Ье чгацу епсог(ег( Сге, гесогпЫпаве (р(еаве вее йе |п(оггпа(юп рапе| оп СКЕ4охР). ° Оереп|$(пц оп йе рйув(о(оц|са( втаге о( (Ье Ьовг сеИ, е|йег (Ле с)гсо)апхег( чга|ОМА сал еп(ег а |увоцеп|с в(аге апг( Ьесогпе а ргорЬаце |и ъчЬ|сЬ |ут(с й|псПогь аге гергеввег( Ьу (Ье чга| с| герге|ьог ог й сап оп(ог! йе |посЬ |агцег вет о( ч|та| |опсПопв гег(о|гас((ог (ут(с )и1есйоп. ° |п Р1 !увоцепв, (Ье чга|ОЬ)А 'ыпа|пгяпег| ав а япц1е-сору р|аяпЫ йат гер(|сагев ча йе К гер|коп, ъчЬкЬ сопв(вЬ о( ап опц(п о( гер|ка(юп апг(ОНА епсог(|пц ап е|ьепг|а| гер|каИоп рготе|п (КерА) ъчйЬ йв аввос|агег( сои(го| гец(оп.
Аг()асепс то йе гер1коп В а 22оЫ» рагйюп|пц е|егпепт (раг) йа1 епя|гев (аййи| вецгеца(юп о( (Ье г(аоцЬ(ег ргорЬаце |по|еси|ев аг сеИ г$вьюп. ° (.РИс (и(еа)оп ргосеег(в ъчЬеп (Ье сопсептгаИоп о( с| гергевюг ь !п|ю(йс|еп( го ев(аЬ()вЬ ог и»а(ига|и (Ье (увоцеп(с агате. ОНА герцсаПоп, ъчЬ|с|яв г|гвеп Ьу (Ье (уМс ог $. гер|коп, оссогв Пгя |и Са|гпв ог в яшс(огев Ьи1 вооп ячтсЬев го а гоП|пц с|гс|е птесЬапьгп, ъчЬ|сЬ ргог(осев Ьеаг(-то-та|! (апг|епт|у гереаге|$ сор|ев о( йе ч|га! ОНА. ТЬеве сопса1егпепс п|о|есо|ев аге ГЬе 1еп|р|атев (ог рас(гац(пц |и(о ЬастегюрЬаце рагПс|ея ° Ргеси гвог Ьеаг$ вгп»с|отеч (ргоЬеаг(в) Ь»п|$ го (Ье сопсагегпегк чта! 0(ъ(А аг а врес|Пс 162-Ьр яге (рас) йат |в с(еачег( Ьу (Ье Р1-епсог|ег$ расаве апг( пчо Е.
соП ОНА-Ь|пг()пц рго(е|пц (НЕ апг| НО. 5ягПпц ' (го| и (Ье пеъч(у сгеаге|$ епг|, (Ье чга! ОЬ(А 'ь рас||ацег$ опийгесгюпаПу оп($$ йе ргоЬеаг| 'ь й»И. ТЬе расПацег(ОЫА ь йеп с(еачег( (гоп| йе гепта|пг$ег о(йе сопсатептег Ьу а вег(иепсе |пг(ерепг(еп1 а|6 г|пц геасгюп апг( а весопг| гоопг( от' рас(гац(пц ь (п)г(а(ег( йоги йе епг| сгеагег$ Ьу (Ье "Ьеаг((о(" со(- Ппц геасИоп. | ° Весаове Ьас|епорйаце Р1 Ьеаг(в сап ассоптптог$ате 110 |гЬ о( ОЬ(Я ъчЬегеав йе Р1 цепо|пе 'ь оп|у 100 $|Ь ~и |епц(Ь, йе 0$4А рас(гацег( |иго еасЬ ргоЬеаг| ь (ептчпаИу гег(опт(апт.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
