Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 97
Текст из файла (страница 97)
Рог ехап|р|е, |и СЛе ксЛегпе ||еике|! Ьу Ваг(йо( е| а!. (С 99| ), оп|у 258 роо1к апг(282 Сек|к аге пеег(ег) Со ксгееи бсе 72,000 с|опек о1 а Лигпап цепогшс УАС ПЬгагу. ° ТЬе аггауе|! 1оггпас пасигайу (еас(к со ап ейт(иас(оп о1 гес(ипс(аксу ап|$ а бесесбоп о1 очег|арр|пц с|опек г(иг(пц ксгееп(пц.
5|псе а с|опе В а|ъчаук ас |Ье кап|е аг(с(гекк, |ск ||есессюп Ьу ичо г()бегепс ргоЬек В (тгпег()асе(у оЬчюия ° ТЬе огбеге|$ |ауоис о1 Фе ПЬгагу айпи к к(тр(е гоЬобс беч|сек со саггу оис гпапу о1 сЬе гоибпе к|ерк, |пчоЫе|$ |и йе герйсасюл агк! ксгеел|лц. 4.10 Отартет 4: )ьтот)Е!щ тч)Й Н!ф-сарае!ту Ъестоть ьет)иепсеь. ТЬе пеьч ьет оЕ с1опеь )ь йеп шарре6 апс1 йе ьет!иепсеь Еигйеьт атчау !тою тЬе ьтап!па рошт аге пьес! то ьсгееп тЬе!1Ьгагу Еог а тЬ!т6 типе. ТЬть ргосеьь !тча1ЫпВ) ть гереате6 ип61 тЬе еп6ге тех)оп оЕ тптегеьт Ьаь Ъееп тесочете6 ш а ьепеь оЕ очег!арр!пВ с1опеь.
Моьт честогь иье6 ш гесепт уеагь то сопьтгисс Вепошк 1тЪгапеь саггу ргоптотегь Еог ЬастепорЬаВе-епсобе6 КЯА ро1ушегаьеь ш геВ!опь 1шше6!ате!у йапЫпВ йе Еоге!ап ЕтЬ)А. ТЬВ адчапсе, ап6 йе с)ече1оршепт оЕ РСК шетЬобь тЬат иье о11аопис1еот!6е саььеттеь, "честогепе" ог "ьр1!п)сете!те," то ашрНу !пьет! ьет!иепсеь 1шше6!ате1у ад)асепт то еасЬ честог апп, Ьаь агеабу ятпр116ед тЬе таь)с оЕ лепета!)пВ епт)-ьрес!Етс ргоЪеь (Еог геч)етчь, р1еаье ьее Агпо16 апс) Нос)Вьоп 1991; Непаеп 1995; ОВ11ч)е апт) )аптеь 1996).
Нотчечег, сЬгопюьотпе тчаВс!па гешатпь а 1аЬог)оиь ргосеья Н)аЬ-сарае)ту честогь тЬат ассошшобате !атее ьеашепть оЕ РХА аге агеат!у ргеЕеггед Ьесаиье йеу т!есгеаье тЬе питпЬег оЕ ьтерь тЬат аге гет!и)ге6 то сотпр1ете а сЬготпоьотпа1 тчаВс. Кесоьтегу оЕ С!опег! Ьецпепсея СояпЫь, Ьастет)орЬаае Р!, РАС, ап6 ВАС с!опеь сап Ье ьерагасет! еаь)!у !гош Е. соВ сЬгошоьотпа1 РХА Ьу а!!са1!пе ехтгас6оп. Нотчечег, гесочегу оЕ риге ХАСь Етош Вассйатотусеь сетечтьтае ть а пта) ог ргоЫеш Ъесаиье тЬеге )ь по яшр1е шетЬо6 то ьерагате тАС ЕтХА Етош тЬе Ъас)сВгоип6 оЕ патига! уеаьт сЬготпоьотпа1 РХА.
Рит!Еу!пВ тпьегп оЕ тпапипа1тап аепош)с РЫА Егош УАСь иьиа!1у тет)шгеь ри1ье6-Ве16 Ве1 е1естгорЬогеяь (РРСЕ) апт)lог 6)тест ьиЬс1оп!пВ оЕ йе еп6ге уеая пепите Епто ЬастепорЬаце ). от сояпЫ честогь. ТЬе ьиЬс!опеь саггу)па шашша!Еап ьет)иепсеь аге тЬеп Ыеп66е6 Ьу йетт аЪ111ту то ЬуЬт)с)!хе то гере66че Рта ргоЪеь. ЯаЬ11!Еу оЕ С!опед $ет!пепсе0 Бег)оиь сопсегпь Ьаче Ьееп га!ье6 очег йе уеагь аЬош йе Вде1иу апс1 ьтаЬ)!1ту оЕ аепошк ьет!иепсеь с1опе6 )п сояпЫь апт! уАСь.
1п тЬе саье оЕ соьш16ь, геаггапаешепт оЕ с1опе6 ЕтХА оссигь Ьесаиье йе тесотпЬтпапп аге сагиес1 ас Ь!ВЬ сору пшпЬег !п Е, со)т', а яшабоп тЬат оЕтеп Еачоть йе ешегаепсе оЕ ьЬогсег, бе!етес) с1опеь йас сап гер1кате Еаьтет тЬап йетг рагепт. Сепопис ьет)иепсеь с1опе6 !п УАСь а1ьо ипбегВо геаггапцетпепть, Ьит Еог а 6Негепт геаьоп. Бп11)се сояшбь, 'тАСь 6о пот ехс1ис)е опе апойег с1ит!па тгапьЕоппабоп, ап6 Ь 1ь Еа!г1у сопипоп то Япс1 тччо ог пюге УАСь соех)ьт)па ш тЬе ьатпе се11.
ТЬ)ь ргочЫеь орроттип)т)еь Еог гесопйнпатюп Ьеттчееп геретгпче ОНА ьетртепсеь ш йе Вепопнс 1Э)ч)А оЕ 6Негепт 'тАСь. ТЬе рго6исть оЕ тЬ)ь туре оЕ геаггапаешепт аге сЬипепс шьегть йат сопяьт оЕ РХА Еготп ттчо с)Негепт сЬгопюьопта1 геа)опь. Моте тЬап 40% оЕ тЬе с1опеь !п УАС 11Ъгапеь тпау Ъе сЬипеПс, аь )идае6 Еготп Виогеьсепт тп яти ЬуЬгЫ)хат!оп оЕ 1п6!чЫиа1 тАС с1опеь то ьргеабь оЕ шапипа1тап сЬготпоьотпеь !Сгееп ет а1. 1991; Яе11е6 ет а!.
1992) ог Егопт сЬагастет)х)пу ьиЬс1опет1 УАС епбь (Марата)а ет а1. 1994). Ьптптпагу 1и ьшпшагу, по арпа)е аепош)с честог Еь Ыеа! Еог а11 ригроьеь ЕР1еаье ьее ТаЫе 4-1, р. 4.2) апд по япц!е Вепошк 1тЬгагу сопташь а регЕест тергеьепта6оп оЕтЬе Вепоше Егош тчЬ|сЬ тт В бепъей Рог ьоше 1пчеьт)аатогь, тЬе Ьеьт орбоп чч)!1 Ъе то ьсгееп а сору оЕ ап ех)ь6па аггауес1 ог роо1ет1 аепошк!!Ъгагу; Еог отЬегь, тЬе оп1у ч ау Еогтчагб шау Ье со Вепегате тЬе!г отчп 1тЬгапеь; Еог ап Епсгеаяпа пшпЪег, тЬе Ьеьт сошье В то иье йе ьегчкеь оЕ сопипегс)а1 огВапгхабопь якЬ аь бепогпе Яуьгешь !пс., ччЬо, Еог а Еее, ч611 иье о11Вопис!еотЫеь ргочЫе6 Ъу йе Епчеь6Ватот то ьсгееп ВАС апт1 тАС !тЬгапеь Еог с!опеь йас сопсаш йе с1еятет! ьет)иепсеь. С1опегь тчЬо та1се ргЫе ш т)о!па ечетутЫпВ Еог тЬешье1чеь ьЬои16 та)те ьо1асе Еготп йе Еаст тЬат тт 1ь сопяс1етаыу 1еьь ехрепяче ап6 Ьу Еат с)и)с)сег со иье а сопипегс)а1 ьетчке тЬап то ьет ир ьсгееп!пВ оЕ 1агае-!пьет! 11Ьгапеь ш тЬе 1аЪогагогу.
'чйтЬ тЬеье сопь!6егат!опь тп пипт1, тче деьспЪе ш йть сЬартег тпетЬобь Еог тЬе сопьттис6оп ап6 ьсгеепшВ оЕ сояпЫ !тЬгапеь сопса)п)пВ Вепош)с Е)ХА шьегть, апт) йе тпашри1атюп оЕ )п61чЫиа! ЬастегюрЬаае Р1, ВАС, ап6 'тАС с1опеь сои!а)п)па а репе ог геВ)оп оЕ !пгегеьт. Рго1осо! 1 СопМгис6оп о1 Сепот~с 0МА Ызгапеь ~п Совпав Чес1огь Е дят!Ашч гни 5лмь ркосеоихе5 лхе 05ео то сомткист цепопис РХА 1гЬгапеа ш Ъой ЪасгепорЬаце Х апг! сояшс1чесгогя 1п еасЬ ауагет, аецтепь ог еи)сагуог)с РХА аге Пцагег) !п ч!гго го чесгог РХА, уогт)пц сопсагетега гЬаг сап Ье рас)сацег! гпго ЬассегюрЬаце Х раг6с!ея Е!Ьгаг!еа сопаггиссег) ш х чесгоь аге агогег) апг( ргорацагег) аа гпуес6оиа гесогпЬшапг ЬасгепорЬацеа (р!еаае аее СЬаргег 2).
1п сояпЫ с1отпц, Ьоюечег, ЪассепорЬаце раг6с1еа цепегагег) Ъу гп чьго рас)сац!пц аегче гпеге1у аа Тго)ап Ьоьеа йаг де1гчег гесогпЪ|папг РЬ)А то1еси1еа е61- сгепг!у гпго Ьассепа, юЬеге гЬе РЬ(А с)гси1аг!хеа апг) Ь ргорацагег) аа 1агце р1аатнЬ (р1еаае аее Р(циге 4-6). Весагье соатиЬ аге аиЪ)есг Го гЬе аале рас)сац(пц сопаГгашЬ аа ЬасгегюрЬаце Х чесгога апг) Ьесагье соыпЫ чесгога аге гуркаПу -5 — 7 1сЬ гп яхе, гесопгЬшапг соат)сЬ сап сопгаш по!ея йап -28 1сЬ апг) по тоге йап -45 1сЬ ог !оге1цп цепопис РЬ)А.
Сепопгк Ггацтепга ог а яге арргорПаге гог с!отпц аге цепегаПу оЪгашес) Ъу раг6а! гПцеаг(оп оу Ь)цЬ-то!еси!агре(цЬг сЬготоаота! РХА ичгЬ а геаггк6оп епхуте гЬаг гесоцпгхеа а 4-Ьр аег!иепсе апг) цепегагеа а соЬеяче гегпипия ТЬе епхутеа тоаг ъ Ые!у иаег( 1ог гЬ!а ригроае аге МЬо! апг) 5аиЗА1, и ЫсЬ цепегаге РЬ)А (гацтепга йас сап Ъе с1опег( шсо а ВагиН! яге. ТЬе апп реп сопаггис6пц а цепопис РЬ(А ПЬгагу гп соатЫа аЬои16 Ье го цепегаге гесотЬгпапь ш питЪегз аигбс!епг го епсотрая 6че го аечеп ес)и)ча!епга ог йе гагцег цепогпе.
А цоог) сояпЫ ПЬгагу ог" а гпапипа!гап цепоте, ы)гЬ а Ьар1оЫ сотр1егпепг оу-3 х 10" Ьр о1 РХА, аЬои!д гЬегеуоге сопгагп >500,000 гпгПчЫиа1 ггапауогтапга (р!еаае аее йе !пггог)исг)оп го гЬь сЬаргег). Опсе сгеагег), йе ПЪ|.агу ь цепегацу атр66ег( апд гЬеп агогег( 6охеп еаЬег аз а япц)е роо1 ау ггапагогтег) Ьасгепа йаг Ь р1агег) аугеаЬ уог асгееп!пц (Ргогосо1 3), аа а рори1а6оп оу ггапагогтег( со1отеа оп пьгосеци1оае 61гега ог 1.В-81усего1 р1агеа (НапаЬап апд Меае!аоп 1980), ог аа ап аггау ог" япц1е ог роо!ег) ггапауогтапга ш неПа ог ткго6гег р!асеа (Ргогосо! 4) (Ечапа ег а1.
1992). А)гегпаг!че!у, апг( 1ея ггес(иепг1у, йе гесогпЪ|папг соатнЬ аге геасиег) (гот гЬе рори1агюп ог'рпгпагу ггапауогтапга Ъу сгапы!исг!оп апг( та!пга!пег) аа а а!ос)с ог" сгападисшц ЪасгепорЬаце раггк1ея СояиЫ чессога сап сопгаш еПЬег опе ог ичо сог ягея С1отпц шсо о!Пег, япц1е сог чесгога гег)и)ген тапу агеря шс!исцпц йе ьо1агюп ог !гацтепга оу цепопис РЬ)А оГ йе арргорпаге яхе (р1еаае аее Р!циге 4-7). Весаиае оГ гЬе гпейкгепсу оГ йь апс1 аечега! огЬег агеры цепега6пц гергеаепгаггче ПЬгапеа оу сотр!ех цепотеа ш япц1е сог чесгога Ьаа аЬчауа Ьееп а сЬаПепц!пц газ(с. А цгеаг ипргочетепг ш сояпЫ с1еыцп сагпе гч(гЬ йе шс1ияоп оу ггчо сог я!ей 1п йе чесгог (Васеа апд Ы16 1983). ТЬеае г1иа1 сог чесгога Ьаче а япци1аг аг)чапгаце: ТЬеу по 1опцег гег)и(ге Ьасгюпа6оп ог' раг6а! Жцеага оГ цепопис РХА Ьегоге Пцаг!оп апс1 рас)сац)пц.
Е)циге 4-8 аЬоюз Ьочг а сояпЫ чесгог гч(гЬ пчо соа ягеа (ш гЬ!а ехатр1е, цирегСоя 1; Ечапа ег а1. 1989) сап Ье иаег( го цепегаге цепогпк !гЬгапея 4.11 4.14 СЬаргег 41 ЪАЬг)стгт~ьчтт)т Нтч)т-сарас!ту 'честогт тз тт Есоп! Гчог ! — 4В- ВатН! ф — 7701 ! Есор! Хое! б~де51 аап ХЬа1 апб тгеа! пап рпоерпатаее Есорб ГЧСП ВетН! ~ — Атоа Есой1 ТЗ Т7 ХЬ51 д г С05 сое 8949 йеог оп' б!дее! четп ВетН! д г сое ВЧ40 йеог оо' С05 1141 Ьр 8798 Ьр Зда1е 1о 35-45-!гЬ ггадтеп15 от евеегуопс ОНА опаа!Себ Ьу ратас! б!деебоо чг1!Ь $50ЗА1 ог МЬо! аоб 1гееопе01 пап е!!ге!!Се рпоероа1аее Т7 ТЗ С05 ео!гагуоЬС ОНА сое ЗЧ49 йеог ол' Аго рг Е!451)!ТЕ 4-8 С1оп!и !пто 0опЫе соа Яте Честоге ($и егСоа-т) ЕоПоъипц б)аеат!оп тч)тЬ ХЬа! апб тгеа1гпеп1 ио!Ь а))га))пе рЬоерЬа!аае, Вое соегпЫ 0Ь)А )5 гогтЬег б)8е51- ег! чч)!Ь ВагпН! то Зерага1е 1Ье сот Зет)оепсеа 1Ьа1 аге поъч сагт)еб оп Зерагате 1га8гпеппп ТЬе геео!Вп8 соапт)б 0Ь)А )5 ))патей то дерЬоерЬогу!атеб 1гацгпепге о! еп)гагуот!с 074А ОЬта)пей Ьу рагда! б)аеет!оп иг)1Ь АТЬо! апг! тгеатптепт ъитЬ айа!!пе рЬоерЬатаее.
ТЬеее есйагуот)с 1гаагпелте саггу 1еггп)п! 1Ьа1 аге согпрат!Ые оп)у ъигЬ 1Ье ВагпН! соЬее)че 1егпт)п! о! !Ье честог. ТЬе сопсатепатед 0)ЧА )5 1Ьеп рас|га8ет) !пто Ьастег)орЬа8е ъ рагт)с!ее 1Ьа1 аге иЗЕС! 1о )и!ест а гесА 5!га)п О! Е. со!г.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
