Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 101
Текст из файла (страница 101)
ТЬе р!атея аге нана!1у спенЬатег) Еог а соса! оЕ 12 — 15 Ьонгя Ьетоге ЕЬе со1оп!ея аге ясгеепег) Ьу ЬуЬпйгатюп Со а тат!!о!аЬе!ег) ргоЬе. Р!асе а ясегце, пишЬегег! 137-пип 6!сег оп а ЕгеяЬ ТВ ацаг р1асе сопсаштпц )гапашус!и (25 ттц)ш!). Рагегя гпау Ье пнтпЬегег) няне а яой-1еа6 репе!1. ТЬ!я 61гег чч6! Ъееогне а гер1геа оЕ опе оЕ тЬе гнаясег 61сегя. 8.
Р!асе а ясе61е ЪгтЬастпап )ч)о. 1 6Ьег оп а сЬ)с)г, ясеп!е ц)аяя р1асе. 9. 1)яе Ь!ипс-епдег) Еогсеря со гегпоче сЬе гер1ка 6!сег Егогп йе ЕгеяЬ ТВ ацаг р!асе (5сер 7) апт) р!асе К оп сЬе ггггЬасгпап Хо. ! 61сег. 1О. Ацатп ияе Еогсеря со гепюче а шаясег 61сег почч саггу!пц сгапяЕогшег! со!оптея Еготп Ья ТВ ацаг р!асе (цсер 6) апг1 р!асе !с, со!опу я!г)е г)отчп, ехасс!у оп сор оЕ йе пшпЪегег1 гер!ка 61сег оп йе чтгЬасшап Хо. 1 6!сег.
Сочег сЬе стчо 6Иегя тч!сЬ апойег ясеп!е ТаЕЬастпап Хо. 1 61сег. 11. Р!асе а яесопг! ясеп!е ц1аяя р!асе оп сор оЕ сЬе ясас)г оЕ Ясегя. Ргеяя сЬе р!атея соцесЬег. 12. Кепточе йе иррег ц1аяя р!аСе апт! йе иррег чттЬаттпап )ч!о. ! 61Сег. г)яе а 17-цаице Ьурот!егпис пеет!1е со )геу йе стчо ппгосе!1и!ояе ог пу!оп 6!сетя со еасЬ ойег Ьу ша!г!пц а яепея оЕ Ьо1ея (-5 илП г)о), р1асет1 аяупипетгка11у агоипг) СЬе ег)це оЕ йе 61Сегя.
СгоччЕЬ оЕ йе Кер!ка Н1егь 13. Рее! сЬе стчо пигосе11и!ояе ог пу!оп 6!сетя арагс, апг! тчогЫпц г)шсИу, гер1асе сЬепт оп сЬеи. ТВ ацаг р1асея сопса!и!пц )гапашуе!и (25 ттц)ш!). 14. 1псиЬасе сЬе тпаясег апг) гер!ка 6!сетя Еог а Еетч Ьоигя ас 37 С, ип61 сЬе Ъассепа1 со1ошея аге 05-!.0 пип тп йашесег. 4.26 Сйаргег 4: Игог)ггпе в|гй Н(5Ь-сарасЫу Ъесгопг 5еа! ! Ье гпаагег р!а(ея |п Рага6!гп апд я1оге (Ьегп а( 4'С |п ап !пчег(ед роябоп.
15. Ьуае (Ье со!оп!еа оп (Ье герйса 6!(ег (СЬар(ег 1, Ргогосо! 3!), апд ргосеаа ТЬе 6!сега Гог ЬуЬпсйхадоп (о гад!о!аЬе!ед ргоЬея (СЬар|ег 1, Рго(осо! 32). Кер|ка й!гехи сап Ье ихед со гер1|саге гйе |гЬгагу айагп ог гпау Ье ьгогед |гохеп ас -70'С. ° (аЬе!ед ргоЬея иаед 1ог ясгееп)пй пва( Ье (гее о1 р|аяпЫ чес|ог ьег) пепси апд Ьас(ег|орйайе Л соя ьег(пепси. Скйепч(ае, ечегу гесогпЬ~пап( сояп!д ччй! ЬуЬпдехе |о |Ье ргоЬе. ° Весаиие о1 |Ье|г !обжег сору пигпЬег, соапч|да Вепега(е иеа(гег ЬуЬпгйха|юп ь(Впа!ь (Ьап р)аагп)дв Саге гпиа( (Ьеге1оге Ье (а)геп (о гедисе (Ье 1ече! о1 попяргЫйс Ьас)гцгоипд ЬуЬг!д)ха()оп со а пипр ггвгп.
ТЬВ ь Ьеь( г|опе Ьу иа)пй СЬигсЬ Ьи(уег (р!еаве атее гес|ре Ье!оьч) аа а ао!чеп( 1ог ЬуЬпсйхайоп алд, й песеааагу, (пс!ид)пй а согпре|йог 0ХА !и |Ье ЬуЬпгйха|юп гпедиге (иаиайу 50 РВ)гп! о1 депа|игед Е, сой 0ЫА). СЬигсЬ Вибег В5А (170) ! 0ТА (1 гпМ) РЬоарйа(е ЬиВег (0.5 м)* 505 (7® *Рйоьрйа)е Ьийег (2 М) (рН 7 2) ь гпаде ир Ьу д)ххо)ч(пй 142 В о| На,НРОд 7Н О )и 999 т| о| Н О апд адд)пй 1 п~! 0| 85'А (в)ч) НхРО4. ° ТЬе Вепопйс 0)9А о| пюь( арсаев сопййпь апюип(а о1 гереййче ьег(иепсеь |Ьа| сап саиае епогпюиь ргоЫепха |п ЬТЬпд!хайоп ехреп|гпеп(а апг1 сйгогпоаогпе иа!Ыпц ехрепгпепйс Рог ехагпр!е, а гагйо|аЬе|ед ргоЬе соп(а(п)пй ап А(и ьег(иепсе ъчй! ЬуЬпгйхе |о (Ье гпа)оп|у о1 гесогпЫпапь Ы а соьпйг! ВЬгагу о1 Ьигпап Вепогп!с 0Р(А.
Кере|й|че е!егпеп(ь аге а|ею ргеьепг |п гпВЫАа, а|Ьей а( !оиег 1гег(иепсу (е.й., р!еаье атее уагпагпо|о е! а!. 1954). ччйеп иь!пй а с|опег! аейгпеп( о1 Вепогпк 0ХА ог с0ЫА |о асгееп а соагп!д ВЬга~у, йга( аасег|ав идее(Ьег (Ье ргоЬе соп(а)пь герей(ве е!епхеп(в ТЫа )ь Ьеь( г|опе Ьу ЬуЬпсйдпй (Ье гагйо|аЬе|ед ргоЬе (о а 5ои(Ьегп Ыо( о1 Вепогпк 0ЫА. К ЫВЫу гере|две вес(иепсех аге ргеьепй (Ье аи(огад)ойгарЬ ейй д(ьр)ау а согпр|ех иег)еа о1 ЬапсЬ ог а сопйпиоиа ьгпеаг о1 ЬуЬпгйха|юп а!опВ (Ье !епй(Ь о1 (Ье Ве! |гасЫ Рттасо! 2| 5сгсептпе ап Етпагпр!тГтег( СояпИ ЕтЬгагу Ьу НуЬг|т(|ааттопт Р1алпе ГЬе Ыиагу опто Р!Ггегз 4.27 А001Т1ОМАЕ РКОТОСО|а КЕООС1МС СКО55-Н г'ВК1017АТ!ОМ СгояеЬуЬпйха8оп Ьетччееп гере(!8че ОМАо сап Ье оиЬяапт!а!!у тес(исег) Ьу ргеЬуЬгИо5пВ йе тат()о1аЬе!ет( ргоЬе иой а согпрейог ОНА ТЬе то|1ои4пВ рготосо| 'ь г(ео!Влет! Гог иве и4й Ьигпап еепот!с ОМА апт) еау Ье геай| у гпот(!8ет) Гог иое ъий ОНА тгогп отЬег орестея Сопхпегаа| ргерагат!опо о( ОМА еппсЬет( Гог герет- !1!че вес(иепсеь (е.В., С,тт ОНА тгогп е|(е тесЬпо!оВ!еь) птау Ье пьет( И р|асе оГ то|а| р1асепта| ОНА 1п (Ыь рготосо!.
АгМ!1!опа! Матейа|ь Ейапо| Р(ате(гГ рВШВВ 5э(и(|оп А 0.9 м МаС| 50 тМ ятт)!ит рЬоьрЬате (рН 8.0) 5 тм ЕОТА 0.1А (иУч) 505 Ят(ит)оп В 50 тм ятт(!ит рЬоьрЬате (рН 8.0) 5 тм ЕОТА 0.1оА (иг/ч) 505 5оп|сатог, ргоЬе ог Ьай тиое ТЕ ГрН 7.6) Тога! Ьитап селит|с ОНА катет Ьат)тт ргеьет то 42оС алгГ Ьот)|пВ Ме1Ьот! 1. |и 10 т| о(ТЕ (рН 7.6), т(|ою!че 25 гп8 о( 1о1а| Ьигпал Вепотпк ОНА апг( 50 тВ о( йе р!аяпИ рВШР8 йат солта!по а птептЬег о( 1Ье А|и опт!!у от герей!че ОМА4 (Ое(п(пВег ет а|. 1981 ). 2.
5оп|сате 1Ье ОНА т!хтиге то ап ачегаВе !епВ(Ь о( 50-1 00 Ьр ия|пд а ргоЬе ог Ьай туре юпка1ог (р!еаое тее Аррепйх 8). 5того йе 6!оотг|па лихого |и топ| а|х|иои ат 4'С. 3. То ют ир а ЬуЬпт((хат!оп геас|1оп, агИ 1 00 р| о( ЫосИпц гп!хтиге (Ггое Мер 2) 1о йе гас(|о!аЬе!ет) ргоЬе. Оепа1иге 1Ье тп|хтиге оГ ргоЬе апт( Ыгкйпд ОМА4 Ьу Ьеа8пц 1о 100'С Гог 5 гп1питеА апг1 йеп р!ипее йе ИЬе |п1о 1се ччатег.
4. То |Ье ЬуЬг|т(!ъзт!оп геас6оп, агИ 20 тт! оГ 5о|итюп А. М!х и е|1, апт) атИ 600 тт! о( Ие-соИ ейапо|. 5. Со||ест йе ргес!р!татес) пис|ек ас|тЬ Ьу сеп1пйца0оп ат еах|тигп преет( Гог 10 е!питео !и а т!сготи8е, апт( а||ои йе ре||ет 1о т)гу тп 1Ье аг ипй по гпоге (тасей о( е1Ьапо| аге ч|я|Ые. Оью|че йе с1аптр ре||ет |и 5о|иВоп В. |псиЬа1е йе е!хтиге Гог 10 гп|пйеь ат 42'С 1о а||ои йе гереййе ОМА оет)иепсеь то геаппеа|. 6. (ттес(!ате!у агИ йе раг8аПу аппеа!ет( гйхтиге оГ гаг(!о!аЬе!ет( ргоЬе апт| ЫосИпВ юИВоп 1о ЬуЬпйхаВоп Ьи((ег апд соп6пие и|1Ь 1Ье Яапг(агг) рго1осо| Гог |п я1и ЬуЬг|г(|хат(оп оГ со!оп!ев 1о гаг(!о!аЬе!ес) ргоЬео (СЬар1ег т, Рго1осо! 32). Агпрй~са6оп апд Вогане о1 а Соытпд Богагу: АгпрИ~са6оп ~п 1лсрлЫ Сы!Ыге чекемтны)А5т)с лмРпг)слт)ом ог со5м|0 г)вкаие5 ь по! гесопипепдед, Ьесаиае Ь !печ!гаЫу геаи!Н ш а д!агоггед гергеаеп|адоп оу йе ог)В!па1 цепоше.
Раагег-Вгочч!пй с1опеа Ьесоше очеггергеаепсед) ипагаЫе с1опеа ипдегйо геаггапцешеп! (Р!еаае аее |Ье рапе! оп 0ЕАЕ!МС ЪЧ!ТН ОМ5ТАВЕЕ КЕСОМВ!МАМТ СО5М!О СЕОМЕ5); а1очч-Вго|ч!пй с!опеа шау д!аарреаг согпр!еге!у Тгош |Ье 1|Ьгагу. Т)пдеа!гаЫе йоицЬ |! гпау Ъе, агпр!кадоп !а Вепега1!у песе|Вагу апд аоше6|пеа ипачоЫ- аЫе. Рог ехагпр!е, 1Т йе 1|Ъгагу ы |о Ье асгеепед ид|Ь аечега) дНегеп! РгоЪеа апд ггапароггед |о ойег!аЬога|одея ог !Т йеге !а а сЬапсе |Ьас |Ье 11Ьгагу ч61! Ье иаед Рог сЬгопю|югпе |ча1Ыпц, |Ьеп йе 1|Ьгагу шиа! Ъе ехрапдед апд сор|ед аечега) Нгпея ТЬ)а рго|осо1 апд Ргососо! 4 деасПЬе аечега! ордопа Рог агпр!!6са|юп апд агогаае оу сояпЫ!|Ьгадея Агпр!|6садоп оу йе 1|Ьгагу диПпй Вго|чй |п ТВ шед!иш )а ргеаепсед Ьеге, |чЬегеаз Ргососо) 4 деа1а чч)гЬ ашр116са6оп диПпй Вгоъчй оп 6!сета ог оп р!атея (Ап а1|егпадче шеагь оу сояпЫ 1!Ъгагу ашр1!6са|юп апд агогайе Ы ои|1|пед |и |Ье рапе1 оп АМРПГ!САТ!ОМ ВУ КЕ5С!)!МС СО5М!О 0МА !М ТКАМ5- О!)С!МС РАКТ!СЕЕ5 ОЕ ВАСТЕК!ОРНАСЕ х а! йе епд от гЬ)а ргососо1.) 1п оиг Ьапдя |Ье п|ейод оу агпр1|6садоп ш 1и!шд си1|иге !пггодисеа 1е|ь д!а!от!!оп оу сояпЫ 6Ъгадеа йап апу ойег шейод, регЬара Ьесаиае йе аЬос)с со йе Ьоаг се1!а а|ьос|асед |ч!|Ь р!адпй ь ачоЫед.
ТЬ!з ехрепепсе !а досшпеп|ед Ъу 1опйпиге е| а1. (1993), |чЬо герог! йаг р!адпй сояпЫ!!ЪгаПеа оп 61- гега гейкеа |Ье со|пр1ехйу оТ йе!!Ьгагу. 0ЕАЕ!МС ЪЧ!ТН 0М5ТАВЕЕ КЕСОМВ!МАМТ СО5М!О СЕОМЕ5 Кереагед аег)иепсеа, ра!)п|1гоп ис аециепсея апд п|ейу!а|ед Ьааеа сап ай гг!ййег геаггапаегпеп! о! Вепопйс ) 0МАа с!опе|1 !и соапидя ТЬе йга! оиичагд а)йп о! геаггапйегпеп! 'ь ия|айу |Ье арреагапсе о! ех|га Ьап|Ь, ойеп )и |юЬпю!аг ап|оипгя 'в геяпс|юп д!цеага о! а сояпЫ. А!гйоийЫЬеге 'ь по аиагапгеед сиге !ог )пяа- Ы!)гу, ичо п|е|Ьо|Ь аге ача!аЫе |о агпе!юга|е й|е ргоЫегп: ° !1йе ргоЫетайс сояпк1 'ь Ьепчееп 38 Из апд 52 Ы| )и а)ге, й сап Ье !сапа!еггед |о а гййегеп| Ьоа! яга)п Ьу рас)гай)пй |и чйго иа)па согп|пегс!а! Рас)гай)пй ехггась )чоКоЬага е| а!.
'1 99| ) ог Ьу рас)гай)пд 1и чгчо иа!пд а Ье!Рег Ьасгег!орйаце Фо!!епччеЫег е! а!. 1980; ОП!е апд !ас)гаоп )987). |и Ьо|Ь сааея !гпргочеп|епь !п яаЫйгу Ьаче Ьееп герог|ед. ° СоагпЫ ОМА, !ао!а!ад !гогп а аепеа о1 !пд)ч!диа! Ьас|епа! со!оп!ея сап Ье апа!ухед Ьу д)йеа|)оп чч)ВЬ геагпсйоп епху|пеа. |и гпапу садбея югпе со!оа|ыч!И Ье Ыепййед йа| сои|а!и а Ыф ргорогйоп о! !ий- !епй|Ь соагпЫ ОМА|. ТЬеае |огас| |по!еси)еа сап Ье ггапа)еггед |о а пе|ч Ьас|епа1 яга!и Ьу е1ес|горогайоп ог гезсиед |ч)|Ь Ь)аЬ ейк)епсу Ьу )и ч)|го рас)гаа)пй апд й|еп !гала)еггед |о а д)йегепг аггап. 5|га)па о! Е, сой йа| Ьаче Ьееп герог|ед |о ! и| ргоче ЯаЫВ |у о! )пд)ч)дпа) сояп!да вс)иде 0Н5аМСК апд ММ554.
4.28 Рго1осо| 4 Агпрй|са6оп апд Яогаце ог а СоьтМ Богагу: Агпрй|са6оп оп Гйегь | н тнб метноо ое лмрпнслтюн, осьтоктюн ое тне овклкн !ь гаге!у а ргоЫетп: Ас по атаке аге пнхес! роро!апопь оЕЪассепа сои!а!и!ик с66егепс гесоп|Ь!паис сояпЫь Вгосчп ш сошре66оп сч!сЬ опе апойег. Ноччечег, ашр1|6са6оп !ь сесбоиь апс! 1ь ьошесииеь сотпргош!ьес! Ьу сЬе 1оьь оу со!оп!еь йас с!о пос кгосч айег ьсогаке оу сЬе шаьсег 6!сеть. Ап а!сегпа6не шесЬос! ть ргочсоео 1ог аптр1|6сапоп оп ТВ р1аСеь (р!еаье ьее йе рапе! оп АЕТЕК!ьСАТ!НЕ РКОТОСОЕ: АМРЕ7Е7САТ7ОСьС Он Рслтев ас сЬе епс! оусЬ!ь ргососо1).
ТЬ|ь а1сегпапче атпр!|6са6оп ргососо1 !ь чи1пегаЫе со сЬе 1оьь оу сояпЫ с1опеь йас кгосч роог!у. ТЬе Ьеьс оу а!1 орс!опь шау Ье со оЬсаш а сояпЫ 1|Ъгагу сЬас Ьаь Ьееп аггауес1 ш тпкго6сег р!асеь; ьпсЬ 1|Ьгапеь шау сЬеп Ье иье|1 со кепегасе Ь)кЬ-с)епясу аггауь !Еог гечтечт, р!еаье ьее Вчапь ес а1. !992).
Рог сЬе чаьс тпа!огпу о1 1аЬогасопеь, аггау!пк ть пос а геа!1ьс!с орсюп. Носченег, аггауес1 1|Ьгапеь аге Ъесоппик ача|!аЫе со ап !исгеаь!пк ехсепс Егош сопппегс!а1 ьопгсеь. 1и а|ЫЬюп, сорсеь о1 аггауес! ВЬгапеь аге ьсогес1 ш шоьс о1 сЬе ша)ог асас)еш!с шепоте Сепсегь сп сЬе Уи!сес! 5сасеь апс! Еигоре апс! 1п ьоше сопппегс)а1 остап!гас!опь. Ассеьь со сЬеье 1|Ьгапеь гь ьошесипеь роьыЫе Ьу ьесппВ пр арргорпасе соПаЪогапче аггапкетпепсь. МАТЕЮА15 Мес1!а ТВ акаг р1асеь 1750 тт) сопта1птпк 25 щ/т! )тапатустп ТВ тео5игп прес!а! Ецо!рптеп1 7с7ИгосеИи1оье ог 7с7у)оп Исеть 1737 |пт), с7етегкепс-тгее, ьсеп1е АсЫ!1!опа! йеадеп15 5|ер 7 от й|ь ртотосо1 гедшгеь геадепть 11ьтес7 |п Ртотосо) 2 и! СЬ|ь сЬартег. 5тер В оК Я|ь ргососо1 гедштеь Яе геакепть 11ьтес7 т СЬарсег 7, Рготосо)ь 37 апс7 32.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
