Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 103
Текст из файла (страница 103)
5|псе йе Ьеаг(й»$ согВпц геастюп гпгвев ргг»цге|ь(че(у а|опц йе чга$ цепогпе, ГЬе роро|а(юп о( рас(тацег( и»о(есо(ев |в с|гсо|аг|у реппо(ег|. ° $ уИс (и(еаюп о( |аЬога1о|у втгапв о( Е. соП ъч(Ь Ьас(епорЬаце Р1 цепега(ев 100-200 ргоцепу рагП- с(ев рег сеП. Еув)в о( (Ье (п(еаег( сеИ гег(о)гев ехргевв)оп о( чгаИу епсог(ег( (ув(в цепев алг| оссигв | айег -60 и||потев. Рог ге(егепсев апг| й»гйег де|ацв, р|еаве вее йе соти ргейепвве гечеъч о( ЬасгепорЬаце Р1 Ыо|о Ьу Уаги»о((пйу ап|$5(егпЬегц (1988). ТЬе дегацес$ п|есЬапьп| о( Йеачаце ат (Ье рас вйе ь г((всоввег( В(ас(г (1989) апг(5(гои»рв(г( ет а!. (1992, 1994). Ргатосо! 5: Ног)с!п8 тч!т)т Вастегтор)та8е Р! апд 1тт С1отп8 Буттетт 4.37 1гоп| |гана!огшед Ьастепа.
Рог |Ье 1аат аечега! уеагя |Ье честить ог сЬоке (ог сопыгистюп оу Вепопнс 1!Ъгапеа Ьаче Ьееп РАс110тасВ!! (Р!еаае хее Р18иге 4-3, р. 4.4) апд Ьа дег!чат(чек (Р!егсе ет а!. 1992а; Гог геч!етчы р1еаае атее Р(егсе апд 5тегпЪег8 1992; ВтегпЪег8 1992, 1994; 5ЬерЬетд апд 8|по11ег 1994). ТЬехе чес|огя тчЫсЬ сопташ а шаг)сег |Ьат а!!отче роыдче ае!естюп оГ гесошЬ1- папта (тасВ'; р1еаае аее Ье1отч), Ьаче а11отчед йе сопыгистюп о(8епопнс 11Ьгапез оК аи61с!епт сошр1ехпу то сочег шатптпа1|ап Вепошеа сч!|Ь гедипдапсу тес)и(гед Гог сЬгошовогпе шаррш8 апд Ьо1а6оп оГ 8епея ТЬе 1о!!о|чш8 аге |Ье сЫеГ Геаюгеа оГ йе с|гси1аг РАс110тасВ!! пю1еси1е (р1еаве аее Р18иге 4-3); ° ТЬе чессог Ь йчЫед што т|чо с1оша!па Ьу 1охр гесошЪ|па6оп ятеа (Ноеаа апд АЬгепьЫ 1984).
ТЬе 1охР тес)иепсез аге аиЬатгатез 1ог |Ье Р1-епсодес1 Сге гесошЪ(паае, счЫсЬ сап Ъе |ьес1 !п чбго ог |и чтчо то йчЫе йе честог |п|о ичо с|гси1аг р1аяпнЬ (АЬгепьЫ ет а1. 1983). ° ТЬе дотпаш оп |Ье!ей-Ьапд яде оу йе честог сон|а(пы т, А со1Е1 гер!коп депчес1 6отп РВК322. 2, ТЬе пнпипа1 Р1 рас(са81п8 яте (162 Ьр) (рас) (ВасЫ апс1 АгЬег 1977), |чЬЫп йе сойп8 тес)иепсе оГ |Ье расА 8епе (Ясотира(с! ет а1.
1992). 3. Ап 11-1сЬ атибег Гга8тпепт оГ адет|очьит !3МА тчЬоае шзегтюп |п|о а Еса1 яте Ьаа шаст|чатес1 ап атр' Вепе |чЬ|1е!еачш8 штаст йе 5са! яте нпп|ейа|е1у с!ос)сМае со рас. ТЬе атиКег тга8шепт Ьаа а риге1у равиче Гипсдоп: то 611 йе РЬа8е Ьеас1 |чЬеп йе шаегт !)ХА ь оу пьитбс(епт яге (5|егпЬег8 ет а1. 1990). ° ТЬе "!сап" доша!и оп |Ье пВЫ-Ьапд яде оГ йе честит соп|ашы |, ТЬе 1сапап|усш 8епе угош Тп903. 2. ТЬе ипп сору Р1 р1аяпЫ гер1коп апд а раг||6оп ауатеш раг. ТЬе Ъаяс Р1 гер1|соп ша!пта!па Р1 р!аяпиЬ ш Е.
соВ а| аЬош опе сору рег Ьоат сЬготпоаотпе. 3, А ауптЬетк гер!коп, сопяат(п8 оГ |Ье 1ут|с Р1 гер1коп тчЬоае асдчбу Ь дпчеп Ьу йе !ас рготпотег. ТЬе гер11соп Ь !пасдче 1п Ьас|епа ехргеаяп8 |Ье 1ас гергеахог Ьит сап Ъе ЬгоиВЬ| то Не Ьу асЫш8 |Ье шдисег !РТС то йе п|ейшп. ТЬе р!аыпЫ !3)с)А ь |Ьеп гарЫ!у ашр1|6ед (счЬЬ|п 30 пнпитеа) бои а сору пшпЬег оу -1 то -20 сор!еа рег се11 (5тегпЬег8 апд СоЬеп 1989).
4, А тет' Вепе |Ьат Ьаа Ьееп с1е1!Ьега|е!у (паства|ес1 Ьу шаегт!оп о1 |Ье тасВ Вене 6оп| Вас|Пи| ату!о!тс!ие)астеш. тасВ епсодеа ап ехоепхуше,!ечап аисгаае, тчЬ|сЬ сага!ухеа |Ье Ьус1го1уяа оу аисгоае. |стЬеп ехргеааес1 !п Е. со!1, йе 5асВ епхуше 8епегатеа 1ечап, |чЫсЬ асси1ишатез ш |Ье репр1аяшс арасе, чд|Ь 1е|Ьа1 ейесь (Сау е| а1. 1983, 1985; Тап8 ет а1. 1990). Ехргеяяоп оу тасВ ш РАс110тасВ!! Ь соптгоБед Ьу а ауптЬет!с пеаг-сопзепыь Е.
саВ ргогпотег |Ьат очег1ара тч(тЬ а сопаепыь Р1 с1 гергеахог!орегасог яте (Е!1ааоп апс1 5тегпЬег8 1987). ТЬе тасВ 8епе ь |Ьеге|оге гергеааед (п се!1а йат ехргеаа йе с1 гергеахог, аПочдп8 |Ье е(6|с!епт ргодис6оп о(чес|ог !)ХА. СЬОММС ПЧТО Р1 ЧЕСТОКБ Р1 ВЬгапеа аге сурка1!у Вепегасед Ъу с1ошп8 |шо йе Р1 честог РАд10|асВ!1 (р1еаае атее Е18иге 4-10).
С1опш8 !3МА што йе ВатН! яте оГ |Ье тасВ Вепе |п|еггирЬ ехргеаа!оп оГ 1ечап аисгаае апс1 регш!тв Вготч|Ь оу р1аяпЫ-сопта|шп8 се!!а ш йе ргевепсе оу 59(т аисгоае. ТЬЬ д!агиртюп ргоч!деа а 50 — 75-Го!д йаспш(патюп оГ Р1 с!опеа тЬас сопта!и !паегЬ Ггош ГЬоае йат до пот сопсаш шаегь (Р|егсе ет а1. 1992а; 1оаппои ет а1. 1994). ТЬе ВатН1 с1ошп8 я|е ь Йап1сед Ьу Ргососо! 5| Кот)с!п5 ягсс)г Вас!ее!орЬаце Р1 апг( 1ь С!оп!пч 5уксетя 4.39 ТАВЬЕ 4-4 5сгееп)п5 Гас)!!С!ея (ог 1АС, РАС, апг! Р! Ь!Ьгаг!ея 5скеем1мс Семгек 5скеемсмс 5екч1сея Сомгксг Е-сна|К ка!екФдепогнеяуксегнк.гого Ь|КЬ: Ьир:Псосочскепоснекуясенся.сосо Сено|не 5уксегок, 1пс. 51. Ьошк, М!ккошс РСК КекеагсЬ Сепеиск, 1пс. РСК, Ь|КЬ-с!епк!су гнегоЬгапе ЬуЬпйсаВоп Е-ша|Ь !и!оФгеяЕеп.сото Ь|КЬ: Ьсср:Ониосчаекееп.сосо 1.еЫен ХАС Сенте| ТЬе МесЬег!ангЬ РСК, Ь15Ь-г!епыгу снегнЬгапе ЬуЬпйсаиоп РСК, Ь15Ь-с(соя!Су ЕгЫ ксгеепшд Раиса ТАС Сен1ег 1са!у Е-ша|Ь уас гнапацегФсерЬЬ.Гг Ь|Иа ЬссратнионссерЬЬ.сгткегч!сек РСК СЕРН Рапк РСК, Ь15Ь-гсепк!су кгЫ ксгеен!пк Е-ша!Ь 64оЬе1РИЬЕшрипгс.ас.н1с ЬСКЬ: Ьсср:Псоъяо.Ькгорапгс.ас.н)с ЫК НСМР Кеяонгсе Сепсег Ьоп|Соп, Енц1апг! Б!сег ЬуЬгЫгхес!он 1СКР Ьонг(он, Епк!апет ! Рерппсеа го!1Ь реонивюп, Кого Си|теис Ргогогоя си Ниигои беиеио (еа М С.
Есаооро1! ес ац 1994 1©ЧЧ!!еу Мев уогц 1 рточЫегй а ргососо1 сот сопясгиссюп ос а Р1 1|Ъгагу; йе ргосекк !к яи6!с!еп6у согир!ех СЬас сечс шчеяс!касогк ассиа11у сгеасе сЬе|г о|чп 1|Ъгапея. Рог а 1!яс!ик ос |Ье Гас!1!с!ек |Ьас ргочЫе ача!!аЫе 11Ьгапея, р!еаяе кее ТаЫе 4-2 (р. 4.3), аис! тот соп|асСк тот гас!1!С!ея йаС ргочЫе ясгееи!пВ орС|о|ь тот йе 1|Ьгагу, р1еаяе яее ТаЫе 4-4. ТЬе Огдап!еабоп апе! 6сгееп!пд о1 Сепогп!с ЙЬгагсе5 СопйгосФес! 1п Р1 Чес1ог5 Ь(Ъгапея |и Р1 честогя Ьаче Ьееи сопя!снесет! ик(ик Веиош!с 13Ъ)А !ко!асес( (гош 6кяоп уеакс (НоЬе!яе! е1 а1. 1993), 13гокорЬ!!а (5шо11ег ес а1. 1991, 1994; Нагс1 е| а1.
1994), рше (Сопиап ес а!. 1992), пюияе (Р(егсе ес а1. 1992а,Ъ; ЯетпЬегВ 1994; Ргапсь ес а1. 1994), апс! Ьшиап (5сегпЪегк ес а1. 1990; Ргапс(к ес а1. 1994; 5ЬерЬегс1 е| а1. 1994; ТаиаЬаяЬ1 1994). 1п а|ЫВюп, а Ьшиаи кепош!с 1|Ьгагу Ьак Ьееп сопя|тиссе|! |и а яиа!1ег с!епча6че оГ РАс(10яасВ11, РС'с'РАС1, |ЧЬ|сЬ |чая 6ече1оре6 Кот е1ессгорога6ои от" с!гси1аг 115абоп ргог!исса, гасЬег йап рас!сак(пк апг! Сгешейа|ес1 гесо|пЪ|иаСюи (1оаипои еС а1. 1994). Мокс Р1 1|Ьгапея аге аггауей еВЬег ая |пйчЫиа1 с1опея ог, пюге сопииоп1у, ая роо1к ос с!опек 1и сЬе сче1!я от" писгойег йяЬея.
!п |Ье 1апег саяе, |Ье роо!я аге ксгеепес! Ъу РСК ш а сорт(осчп арргоасЬ (Сгееи аи|1 01яоп 1990; Р|егсе ес а1. 1992Ь). 1пйчЫиа1 с1опея, р(с)сес! а| таис(отп тгош |Ье 11Ъгагу, аге роо1ег! 1и чапоия сошЬ!па|1опя от !псгеак!ик сотпр1ехпу апс! ястеепес) сот йе ргеяеисе ог" йе с!ек!гег! СагВет кег!иеисе.
Рог ехашр1е, йе пшппе Веиош!с Р1 ВЬгапек с(еяспЪес! Ьу Р|егсе е| а1. (1992а) аиг! 5|егпЪегк (1994) аге |игпа11у ясгеепес( !и ях роо1я от 25,000 с1оиея еасЬ. ч!|Ьеи а роыС1че роо1 ь Ыеипбей а кесопс( гонит) от ясгееи!пВ Ь сагпес! оШ оп 10 яиЬроо!я, еасЬ сои|а!и!пк 2500 с1опея. ТЬе сЬ!гг! апс! 6па1 топит( от ясгеешпд 1к сагпес( оис оп 10 яиЬяиЬ роо1я сопса!и!ик 350-500 с1опея еасЬ. Оисе а рояпче сЬ!гс(-1ече1 роо1 Ь Ыеипбей сЬе с(ек!гег! с1оие Ь Ыеп66ес1 Ьу со1оиу ЬуЪ|Ы!Еас!оп.
ТЬе р1аяиЫ 13Ъ)А сап сЬеп Ъе ашр!!6ег! аис1 !ко1атес! Ьу ктаиг!агс! шеСЬос!к, е.к., а!(са!ше )3ХА ехтгасСюп (5ЬерЬегг! аи|1 5|ио11ег 1994). А)СЬоикЬ аггауег! Р1!|Ьгапея соиСа!и!ик пш16Р1е с!опек рег |че11 саи Ъе ясгееиет1 ет6с!епт1у, роо1шВ ос с1опея а!яо сагпея г!к)ся. Весаияе шйчЫиа! с1оиея Вгочч ас ЖКегепс га1ея, сЬеге !к а с(аицег йа| я!осе-кгочс!ик гесоп|Ь|папь тиау Ье !оп !тоти |Ье роо1к (5ЬерЬегс( ес а1.
1994; 5Ьоч1ш 199б). ТЬь рояяЬ~16у Ьая 1ег! 1о 1Ье киккеясюи сЬас 1|Ьгапея яЬои16 Ье р1асе|1 ог гпай|аше|1 !и а 4.40 Сдартег 4: )тот)стд ьч1т)т ВВд)т-тарас!ту Ъестотт опе-с!опе-рег-тче11 бттшат. Ноччечет, асгееп!пд апсЬ а 1!Ъгагу ы Ъеуопт! тЬе сарасбу от' пюя 1аЬ- огатопея Рог а ти!1 йасыяоп от тЬе ат)наптадеа апт! т!!хат!чаптадеа от роо1ет), аггаует! Р1 ВЬгаПея р1еаае аее 5ЬерЬегт! апт! дпто11ег (1994).
ТНЕ РАС СЕОММС 6Ч6ТЕМ ТЬе РАС зувтеш сошЪ!пев йе театпгеь от Р! нес!ига апс1 Ьастепа1 аг66ста1 сЬгоиюаошев (ВАС). ТЬе РАС нес!от !а т!ег!нет! !гош РАт!1ОтасВ!1 Ъу т!е1ет!оп от тЬе ат!епон!гпа атиКег апт! !пьет!!оп от" а р1)С-Ъаает! Р1аяиЫ. ТЬеае сЬапдеа !псгеаае йе у!еЫ от" нес!от апт! гет!псе тЬе тоысВу оу тЬе дасВ11 ргосе!п ш йе аЪаепсе от" апсгоае.
ТЬе РАС честог тета!па а11 оу йе отЬег театпгеа от РАт!10тасВ!1, шс!псдпц тЬе роядче ве1естюп ьуатеш апт! тЬе ттчо Р1-епсот!ет! гер1копя Ноччечег, !патеат! от рас)сад!пд апт! а!те-прес!6с гесошЬтпа6оп, гесогпЬтпапс РАСа аге !и!тот!псет! !пто Е. сод Ьу е1естгорога6оп. ТЬе !паете ти а РАС-Ъаает! ВЪгагу от" Ьшиап депоппс !3Ъ)А гапде ш яте тгогп ! 30 1сЬ то 150 1сЬ (!оаппоп ет а!. 1994). АОЧАМТАСЕй АМО О1$АОЧА1ЧТАСЕБ ОГ ТНЕ Р1 А!ЧО РАС СЕОММС 6УБТЕМЬ Ву сои!тахт то соаш!т!а апт! ЪастегюрЬаде Х, а япд1е Р1 ог РАС с!опе от" депоипс ЭЫА гх 1опд епопдЬ то арап тЬе ачегаде шаиииа1тап цепе, шс!псбпц штгоиа апт! соптго11тпц е1ептепгя 1п йеогу ат 1еая, Ь аЬои!д Ье роя!Ые со тгапатест апсЬ 1оид ТтЫА пю1еси1еь !пто арргорПате 1!пеа от" шапипа1тап седа апт! оЬтатп ехргея!оп от" тЬе тагдет цепе !и !тв патига1 ьетт!пд от" 5' апт! 3' аедиепсея Нотченег, тЬе ехиишц Р1 апс! РАС ВЪгаПеь аге сопзтгпстет! ш честить йат 1ас)с герояег депеа апт! ае1естаЫе шаг!тета тот шаиипабап се!1я Ат ргезепт, тЬеге!оге, тт !а песеааагу го гетто6т !псдчЫиа1 РАС апс1 Р! с1опеа сои!а!гдпд тЬе цепе оГ !итегеат чч!тЬ саяеттеа саггу1пд тЬе ге1ечапт тпаг1сегз апт! герогтега (СЬаттег)ее апт! дтегпЪегд 1996; Мера апс1 Мопасо 1997).
1п а<ЫВюп то тппст!опа) апа1уа!а от' раг6си1аг депея Р! апс1 РАС с1опеа аге паем !псгеаа!пц1у то депегате спит)да апт! то сопягист РЬуяса1 опара от депопис гед!опя 1п депега1, депотпк вет!иепсеа с1опес! ш Р1 апт! РАС нес!ига ехЫЬВ 1оччег гатеа от геаггапдегпепт апс! сЬппепяи !! — 29а) (дтегпЪегц 1994) тЬап УАСя 1п асЫ)т)оп, тЬеу аге сопа!т!егаЫу пюге то!егапс от гереиттче апс) ра1!пт!гоппс депопис ает!иепсеа тЬат аге ппс)еггергезептет! ог аЪьепт тгош 'тАС апт! соя тпЫ ВЪгапея ТЬе ЬассеПорЬаде ргопютега ВапЫпд йе с!опет! депопис !3ЫА ш РАс110тасВ!! Гас!!!гаге йе ргот!пст!оп от" ргоЪеа тЬат сап Ье пает! то ЬирЫ сои!!да Ъу сЬгопюаоше чтадс!пд апт! то ЬтЫде дара ш сояпЫ апс1 тАС соп6дя ТЬе сЬ!ет" т!!хат!чаи!аде от" йе ЪастепорЬаде Р1 ауатеш Веа !и тЬе т!!6)си!ту от' сопатгпст!пд 1агде ВЪгапеа тЬат сочег йе цепоше то а т1ерй ятйктепс тот сЬгопюаоше тча!!т!пд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
