Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 107
Текст из файла (страница 107)
Кот!пь сап Ъе ршсЬавет! 6ош Е)!ау.п !пп от Етотп Сепотпе 5утсепы, !по !КВ-100 со!шппь). сеес$ог5 апс1 Васют!а! Ягатпь Е. соП гтта)л Сталауоттег) итй ВАС Его)ате Р!еаяе атее Ртососо! 7 оЕ сЬ!ь сЬарсег, Ргераге а ЕтеьЬ очеса!аЬс со!сиге; р!еаье ьее 5сер !. МЕТНОО 1. !посо!асе 500 тп1 оЕ ЬВ тпегПшп солса)пша 12.5 ттцйп! оЕ сЫогашрЬешсо1 чч)сЬ 50 р1 оЕ а ьасигасет! очегшдЫ си1шге оЕ ВАС-сгапаЕогшет) сеПа.
1псиЬасе сЬе 500-ш1 си1сиге Еог 12 — 16 Ьоига ас 37чС чч)сЬ чткотоиь аВ)сас)оп (300 сус1еа1ш)лисе) ипП1 йе се!Ь геасЬ ьасигаПоп. 2. Нагчеас йе сеПя Егош йе си!сиге Ьу сепсп6лВапоп ас 2500е (3900 грш тп а 5огчаП СВА госог) Еог 15 пиписеь ас 4 С. Роиг оЕЕ сЬе ырегпасапс, апт) )пчегс сЬе орел сепсг)Еиае Ьогае со аПош сЬе !аас т!горя оЕ сЬе ьирегпасапс со т)гаш асчау. 3. Кеаизрепт) йе Ьассепа1 реПес )п 100 тп1 оЕ )се-со!т) 5ТЕ.
СоПесс сЬе Ъассепа1 сеПв Ъу сепсг)Еиаас)оп ая т)еасг)Ъет) 1п 5сер 2. ЕЕ песеяату, сЬе чтаъЬетс се!! Ре!!ес птау Ье ясотесс Еог ьечега! тСауь тп сЬе яеа!етс еепсг!Еиае Ьоп!е ас — 20'С. 4, Кеаиарепт1 йе Ьассепа! реПес гп 24 ш1 оЕ А!ЬаПпе 1уа!я яо!ипоп 1 солса)п)пд Е)Ыаке-Егее КХаье !100 ттВйп1). АтЫ 1уюкутпе со а Ппа1 сопсепсгапоп оЕ ! шПЕш!. Масте зцге сЬас сЬе се!!я ате сошр!есе!у тетотрепт)ет! аптС сЬас сЬе зозрепт!оп ь Оее оЕ с!шла. 5. АтЫ 24 ш! оЕ ЕгеяЫу ргерагет! АПтаПпе 1уяь ю!исаоп 1!. С!оае сЬе сор оЕ сЬе сепсг)Еице Ьосс1е апт! пих сЬе сопсепсь сЬогоиВЫу Ъу Кепс!у шчегс)пП сЬе Ъоп1е ьечега! Потех, 1псиЬасе сЬе ЪосПе Еог 5 ппписек оп ке. 6. АтЫ 24 тп1 оЕ )ее-со!д А!ЬаПпе !уа)в ю1ис)оп П!.
С!иве сЬе сор оЕ йе сепсг)ЕиВе Ьосс1е апт! пих йе сопсепса цепс!у Ъис сЬогоиВЫу Ьу ачч)г1шП сЬе Ьосс1е ип61 сЬеге аге по !пикет сио т!)ьс!пки)ьЬаЫе 1нрсЫ РЬааеь. Р1асе йе Ъогпе оп 1се Еог 5 ш)посев. Ргогоео! 9: Бо!ас!оп оЕ'ВАС РХА)гот Еагее-лги!е Си!пкел 4.57 7.
Сепсг!Еи8е йе ЪассеПа! !увале ас 15,0000 (9600 гргп !и а 5огчаП С5А госог) Еог 10 пипи!ел ас 4'С. Ас сЬе епг) оЕ йе сепсг!Еи8ас)оп асер, г1есапс йе с1еаг аирегпасапс !псо а ро1ургору1епе сепСН6л8е Ьои!е. л)!асагг) йе реПеС гешашш8 ш йе сепгг16лВе Ъогг)е. ТЬе ЕаПиге со Еогги а согпрасс реПес ассег сеисг!Еи8ас!ои ы иаиаПу а сопьег)сгеисе оЕ сиаг)еииасе оПхю8 оЕ сЬе Ьассег!а! !увале иг!ЕЬ АПга1!пе !уял ю1шюп !!! сяер 6). !Е сЬе Ьассег!а! г)еЬг!ь г)оеь пос Еопп а ПВЬс!у рае)лег) рсПес, сеисг!Еи8е а8а!и ас с5,000е Еог а ЕигсЬег 15 пиписея аиг) ЕЬеи сгаизсег аь плисЬ оЕ сЬе ырегиасаис ал роя!Ые со а ЕгелЬ ю!ъе.
8. АгЫ ап ег)иа! чо1шпе оЕ рЬепо1:сЫогоуогш. М!х йе аг)пепит апс) остап!е рЬааеа Ъу Вепс1у шчегПпВ сЬе сиЬе аечега! сипея 5ерагасе йе рЬааеа Ьу сепсг!ЕиВас!оп ас 30000 !4300 грш !п а 5огчаП С5А госог) Еог ! 5 ппписеа ас гоош сепсрегасиге. 9. ~Уве а лчЫе-Ьоге рлреие со сгапауег сЬе ас)иеоиа 1ауег со а ЕгеаЬ сепсг!Еи8е ЪосПе апс1 асЫ ап есрла1 чо!шпе оЕ !аоргорапо1. 1пчегс сЬе Ьосс!е аечега! сипел со пих лчеП. 10. Магас сЬе шЬе оп опе ан1е апг1 р!асе П ш а сепсг)Еи8е госог чч!ЕЬ йе гпаг1сес1 аЫе Еаслп8 аъчау !гош йе сепсег оЕ йе госог. МагЫп8 ш сЬ!а ъчау ипП аЫ !п сЬе ялЬье9иепс ЫепППсасюп оЕ йе пис!ек асЫ реПес.
Кесочег сЬе ргес)р)сасег) пис1е)с асЫа Ъу сепсгл6л8асюп ас 15,0000 (9600 грш ш а 5огчаП С5А госог) !ог 15 ш!писеа ас гоот сетрегагиге. А!МРОКТАЬ)Т 5а!С гпау ргес!р!Сале П сепгг!Еи8ал!оп !а сагг!ег) оиг аг 4"С. 11. Елесапс йе аирегпасапс сагеблПу, апд шчегс сЬе Ъосс!е оп а рарег солче1 со аПоиг сЬе !аас с!гора оЕ аирегпасапс со г!га!и аъчау. К!псе сЬе реПес апд сЬе ъчаПа оЕ сЬе Ьосс!е чч!ЕЬ 20 ш1 оЕ 709и ейапо1 ас гоош сегпрегасиге. 1)га!и оЕЕ йе есЬапо1, апг) р)асе йе !пчегсег! сиЪе оп а раг! оЕ рарег соъче!а Еог а Ееиг ш!пи!ее ас гоогп сешрегасиге со аПочч сЬе есЬапо! со ечарогасе.
~ЧС/АКММС ТЬе ОЬСА реПей !а еаьПу Йа!ос)8ег) апс) !оя аг СЬ!а вгер. 12. Сепс1у г)!аао!че йе реПес оЕ ВАС 1ЭЬ)А !п 0.2 ш1 оЕ ТЕ (рН 8.0). Аеа!ас лп сЬе г!!аао1ис!оп оЕ йе 13ХА Ьу сарр!п8 сЬе аЫеа оЕ сЬе Ьоя!е гайег сЬап чогсех!п8. Меааиге сЬе сопсепсгас!оп оЕ 1)Ь)А Ьу аЪсюгрсюп арессгоскору (р!еаае аее АррепгПх 8). ТЬе ачега8е у!е!П оЕ ВАС СЛ! СА Ь 20 — 25 и8 рег 500-ил! си!Сиге. 13. 13!Вез! йе ВАС 13ХА сч!ЕЬ геасгксюп епс1опис!елея Огеаыоиа! ргерагасюиь иге геяяаис со с!еача8е апг) июя Ье риг!Егег) ЕигсЬег Ьу со!иилп сЬгоюасо8гарЬу ои О!а8еи геяп ог КВ- ! 00 со!шипя !и еасЬ сале, ЕоПолч сЬе гиапиЕассигегЪ гПгессюиь ргесые!у.
14. Апа1ухе сЬе г!!Веасед ВАС 131)А Ьу РЕСЕ, ияп8 Е)ХА шаг)сега оЕ ап арргорпасе яхе. Рго1осо! 10 Ч~огЫщ ъий УеаМ Аг6йс~а! СЬгогпоютея |Чти. тНВ М|О 198О5, НО тВСНН|С)Г|В5 ЧЧВВВ ЛЧА|ГАВГВ |о )ао1а|е, ргораца|е, ап|1 апа1ухе соЬегепс !агце аецтепга оЕ цепопис 13Ь)А. ВеЕоге йеп, г)ега1!егЕ РЬуяса1 апд Еипс6опа! а|игцеа игеге оЕ песея||у сагпе6 ои| оп аецтепга оЕ Е|ХА оЕ а яхе |Ьа| сои!6 В| |п|о йе аЬе11а оЕ Ъас|егюРЬаце Х ог сояпЫ чес|огя Т|чо аерагаге аг!чапсеа ъчеге гег)и)ге|1 |о Ъгеа1| Егее Егогп ЕЬ)а сопаггашг: |Ье ъчЫеаргеаг! ассер|апсе оЕ РРСЕ аа а тегЬог1 |о аерагаге 1агце ЕЗУСА то!еси1еа (р!еаае аее йе шсгог!ис6оп |о СЬар|ег 5) апг) |Ье г!ече1ортепс оЕуеааг аг6Вс|а! сЬготоаотеа ( |АСа) аз чеЫс1еа го с!опе ап6 ргораца|е пшсЬ 1агцег аецтепь оЕ цепопис Е)Ь)А.
ТЬе Ьаяс |Ьеогу оЕ УАСа ччаа Вга| риЫьЬе|1 1п 1983 (Миггау ап6 цхоа|а1с 1983), Ьи| |Ье ипрог|апсе оЕ |Ье |есЬ- ппцие ччаа по| Еи1!у геа11хег! ип61 Е)ачЫ Виг)се, ччог)с(пц ш Маупагд 01аопЪ цгоир, г!ече!прес) '|АС чесгога |Ьаг |чете сараЫе оЕ ргораца6пц аечега! Ьипс)гег! Ы1оЪааеа оЕ !31чА апд аЬо|чед |Ьа| |Ьеу сои!6 Ъе иаег! со цепега|е епг)ге 11Ьгапеа оЕ та|п|пацап цепопнс Ет)ч(А (р)еахе аее Виг1|е ег а1. 1987). Сопаггисгюп оЕ цепопис 11Ъгапеа ш |АСа ь г)те-сопаит(пц, ехрепяче, апд г(етап61пц, ге|!шппц по| оп!у ехрег6ае 1п Ьап|11)пц !агце ЕИч)А пю1еси1ея Ьи| а!ао Еапи11ап|у чбй |Ье цепе|- 1са ап6 пю1еси!аг Ъ|о!оцу оЕ а гВЕЕегеп| суре оЕписгоЬ)а1 Ьоаг, 5. сегечь(ае.
Риг|Ьеппоге, ейк(епг агогаце оЕ цепопис ХАС 1|Ъгапеа Епчо)чеа аггаушц с1опеа 1п|о |Ье |чеПа оЕ писго|пег р1а|ея |чЬегеаа!1Ъгагу асгеепшц оЕ|еп песеаягагеа цепега6пц а ЫегагсЬу оЕ роо1а оЕ |АС с!опеа Егоп| |ч1|Ь)п |Ье 11Ьгагу. ТЬЬ сотЬ|пабоп оЕ ар6!1а ап6 геаоигсеа — татри!а|юп оЕ Егац)1е то1еси1ез оЕ Е)ХА, Виепсу 1п уеааг цепегкя ап|1 ассеаа со гоЬобс бечкеа — ь гаге1у Еоип|1 ш а япц!е 1аЬога|огу.
ТЬе сопаггис6оп оЕ пе|ч '|АС 11Ьгапеа 1а |ЬегеЕоге Ъеаг !еЕг |о арес)а!|яя ччЬегеаа асгееп1пц оЕ ехЬ6пц '|АС 11Ьгапеа 1а цепега!1у сагпе6 ои| |п со!1аЬога6оп |ч1|Ь бепоте Сепгега ог, |ч(гЬ ~псгеаяпц Егег!иепсу, оп а сопипегс|а! Ъаяя '|АС 11Ъгапез оЕ йе цепотеа оЕ тапу арес)еа аге по|ч ача|1аЫе Егот ГЬеае аоигсеа (е.ц., р1еаае аее Виг!се 1991; чап Опипеп 1992; аее а1ао ТаЫе 4-2 1п |Ье 1пггог!исг)оп |о |Ь)а сЬарсег). ЧАС С!оп1пе ЧесЕогв Мог!егп '|АС чесгога аге тоаака оЕ со-ас6пц со|пропепь апс) Еипсгюпа! ить с!гаччп Его|п аеч— ега! |11ЕЕегепг огцатяпя ТЬеу аге ргорацагег) аа сопчеп6опа1 р1аяпЫа 1п Е. со11 апг) аге соп- 4.58 Рготосо! 10: Итог)стим пай УеоттАгттРста! СЬготоготет 4.59 есст Нтсет Нтпап, Хттс~ ВвотН! Е!СЕУКЕ 4-12 тАС4 ТЬе Вепега! Ееатигев )гпропапс тот сопвтгисВоп от' ЧАС ВЬгапев аге г(ер1ссесЕ йе аггап8ептепт о( Вепев тп тЬе сисЫаг честог, ав тчеП ав 1гпрогтапт вет(иепсе е!егпептя апт) !теу гевтпстгоп выев (Еог ЕипЬет т(етаВВ р1еаве вее Виг)те ет а1.
1987; Виг1се апт) О1воп 1991). чегсет) шсо ттчо агшв Ьу геатг!ст!оп епгутпе с!еача8е т!иг!пВ йе с!оп!п8 ргосеая Сепопис тАС 1!ЬгаПеа аге сгеатет! !п чЬго Ъу 1пвегт!пВ чету Ь!ВЬ-шо!еси!аг-тче!ВЬт аеВшепта оЕ Вепош!с ТтЪ(А Ъеттчееп тЬеве ттчо агшя ВепегаВп8 !шеаг шо!еси)еь тчЬоае аттис!иге апт( торо1оВу гевегпЪ!е тЬат оЕ ап аитЬепт!с уеая сЬгошовотпе. Весаиае тАС честогз сопташ е1етпепта гет)и!гет( Еог аитопошоиа гер1!сат!оп, Еог веВге8ат!оп оЕ сЬгошоаошеь Ъеттчееп т)аиВЬтег се!1ь, апт) Еог сЬгошоаотпе втаЬт1Ьу, гесошЬ!пап! 'тАСз !птгос(исет( што 5, сегет4яае Ъесоше рагс оЕ тЬе огВап)яп'ь сотпр1етпепт оЕ сЬготпоаотпея Ап ехашр1е оЕ а честог (р тАС4) Ъе)оп8!пВ то йе сопипоп!у ивет! р тАС аеПеа !а вЬотчп !п р!Вите 4-12. Рог т!евсг!рт!опт оЕ отЬег честить оЕ тЬ!ь аеПея р!еаае вее Кеечеа ет а1.
(1992). Честогв оЕ йе р тАС ьеПеа сопта!и тЬе Ео!!отч!п8: ° Ттчо вета оЕ те1ошеПс гереат (ТРУ,) ает)иепсея верагатег( Ьу а атийег Ега8шепт, аге тес)и!гед Еог тЬе Еоппатюп оЕ ааЫе сЬготпоьоше епт!я 1п шоя тАС честогя йе те1ошеПс ает)иепсеа аге т!ег!чет) Етош ТетгаЬутепа. ВеЕоге с!ойпВ, йе честог ТУЛА !а т(!Веатег) чч!тЬ БатН! то ге!еаве йе втиЕЕег ЕгаВшепт саггу!пц тЬе Н!53 депе, тчЬ!сЬ епсог(еь ипЫако1еВ!усего1рЬоарЬате (1СР) г)еЬут!гатаве, ап епхуше тЬас сага!утек а атер !п тЬе Ь!вт!т)!пе ЬювуптЬетк ратЬтчау. ° А с!оп!пВ яте !осасес1 тч!тЬ!и тЬе ЯУР4 Вепе йас ироп с!еача8е аерагатеь тЬе честог ЕУЫА што тччо аппя ТЬе Б!УР4 депе ргот!ист (а тКХА) аирргеааеь а шитат!оп ат йе ат(е !оспа оЕ арргорпате втга!пв оЕ уеаат, геки!!!пВ ш а с!тапВе тп тЬе со!ог оЕ со!оп!еа Етош гег1 то ъчЬЬе ш йе ргевепсе оЕ 1ипЫпВ сопсептгат!опт оЕ ат)еп!пе.
ТгапаЕогшапта саггу!п8 гесоптЬтпапс уАСВ ш тчЬ!сЬ йе ЯЗР4 Вепе !а !птеггиртет) Ьу !поест!оп, Вготч ав гет) со!оп!ев (Нтесег ет а!. 1985) (р!еахе аее йе рапе! оп 5СЙЕЕ!9тптС ЧАС ЙЕСОМВтт9АЬтТ5 оп йе Ео!1очтппВ раВе). 4.60 СЬаргег 4: $4 огас(пд гч(гЬ Н(дЬ-сарае(гу Уесгогг ! 5СКЕЕЫ! ЧС УАС яЕСОМВ!ЫАЫТ5 1 | ТЬе ас)е2 а1|е|е соп1а)пх а попаепхе гпигаг)оп 1Ьаг сап Ье аирргегьес$ Ьу 5$2Р4 сагпес$ |п уАС непога якЬ аа ,' руАС4. С|опгод а)геа Гог )Ье чесгог де ъч41Ып )Ье 5$2Р4 депе.
д по )паеи ь ргеаепг $п 1Ье уАС нес|ог, гЬе 5И'4 депе )а )огас! (асдне) апс$1Ье ас)е2 гпигаг)оп 'ь аирргегьег$. Тгапа(оггпапь сапу|пд гЬь рагепг нес|ог дгочч ач ънЫ)е со|оп|еа оп ас|с$-Ьуг|го|угес| саха)п (АНС) гпес3$ипз. Сопнегае|у, д ап )паеи ь ргеаепг )п )Ье руАС4 нес- ! )ог, )Ьеп йе 5$2Р4 депе ь |пас|ва)ег| апг$ йе попхепче спи)а)гоп |п )Ье ас|е2 а||е3е ргенепь ауп)Ьеяа о(йе ' рЬоарЬог)Ьсьу|агп|по)гп)г|ахо|е сагЬоху|ахе епхугпе )п Фе Ьоаг. |п где аЬаепсе о(1Ьь епхуте, рЬоарЬопЬо- ~ ху|д|ус|пагпк$|пе ассигпи|агех )п 1Ье уеах1, чнЫсЬ дгоъч аа гег| ог р|п$с со3оп|ея г|ерепс$)пд оп )Ье агпоипг о( ,' епхугпе )Ьаг Ьи)|г|х ир. ТЬе иве о(йь я|гпр|е со|ог асгееп ччаа |пЫаду героиег$ |п |Ье |аге 1950а Ьу НегьсЬе! Рогпап (1957), а |еас$гад $)дЫ |п согп апс3 уеаа1 депедся 5)псе йа1 1)гпе, йе зсЬегпе Ьач Ьееп иях$ чн)1Ь дгеаг ~ е|едапсе 1о гпопдог депе гесогпЬ|паиоп ечепЬ (Годе! ег а1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
