Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 110
Текст из файла (страница 110)
Чеасг сап Ье гесочегесС !гоги ьгога8е Ьу Сгаигсегг!и8 а ьгиаа сгогеп ясир!е Со а ЧРСГ а8аг р!аге. аг ЪЧАКГССХСС Чеая со!Согех !осе чсаСг1!!Су 'г ьгогегС аг Сепзрегагогеа Сс!8!гег Фаи -55 С. Рго1осо! 11 Сгоюй ог 5. сегеляае апд Ргерага6оп 01 О!ЧА НЕ ЕОСсОГЕ!НС РКОТОСОЕ ОВВСа!ВВВ МЕТНООВ ЕОК !ЮГАТЮН оЕ Соса! РЬ)А Егош а ягаш оЕ 5. сегелг)ае саггу!пВ а гесошЬгпапг УАС. ТЬ)ь шейос1 )а арргорпасе 1ог ргераппц РЬ)А йаГ и611 Ье аиЪ)ее!ей со геуи1аг адагоае де! е1ессгорЬогек!я 5оийегп Ыогг!пд, аиЬс1ошпц, Вепопис 1!Ьгагу сопягисбоп, РСК, ог ойег шегЬосЬ йаг с1о пог гес)и!ге шгасг Ь!ВЬ-шо1еси1аг-гхе!ВЬг РЬ)А.
1Е йе РЬ)А 1а иаес) ш РЕбЕ, Ео!!ото йе ргерагабоп шегЬос1 В)реп ш СЬаргег 5, Ргогосо1 14. ТЬе япа11-аса1е ргерага6оп оЕ УАС РЬ)А )а ргеаепгес! !п Ргогосо1 12 оЕ й)а сЬаргег. Весаиае гЬе 1шеаг УАС РЬ7Аа аге аепа!г!уе го аЬеаппд Еогсея ргрепеа ге!гЬ ггЫе-Ьоге ггра кЬои16 Ъе иае6 со ггапаЕег РЬ)Ая Ргор с11а1уа!к ьЬои16 Ье иаес! го ехсЬапае ЬиЕЕегя ТЬе ехресгес1 у!е16 Егош а 10- ш1 си1гиге !а 2 — 4 щ оЕ уеаьг РЬ)А. МАТЕИАЕЬ СА1)т!ОГх': Р!еаье атее Аррепг1!х 72 Еог арргорнаге Ьапг!!!пе оЕ гпагепа1а гпаг!сег1 епй <1>.
ВпЕЕегв апд йо16Е1опв Р1еаае атее Аррепспх 7 Еог сотропепга оЕ а!ос!с ао!ипопа, ЬиЕЕегь, апг! геаеепгя Р!1и1е а!ос!с ао!иг!опа 1о йе арргорпаге сопсепгга6опя Аттоп)игп асегаге 170 м) Ейапо! РЬепо1ссЬ!оготогт 17:7, г1г) <!> ТЕ ЕРЕ) 8.0) ТЕ ЕрН 8.0) сап!а)пгпе 20 ае)т) ИА)аде Тг11оп)505 ао1ипоп Мес1!а УРР тес!!от р!саас аее гвс рапе! оо УЕА5т МЕР!А !и ргогасо! 7О, СепЕг1ЕоВеь апд КоЕогв 5огга1! 55-34 гогог ог ег7и!Уа1епг 4.67 Ргососо! 11: бгосчй ос 5. сегеч!асае аглс! Ргерагас!огс оЕОХА 4.69 11. СоПесс сЬе ргеслрПасед Ел! !А Ьу сепсг!Еп8ас!оп ас тахппшп ьреесс Еог 2 — 5 т!посев аС 4"С ш а ппсгобл8е.
Кепюче сЬе апрегпасапс лчссЬ а ссгаччп опс Раасепг рсрессе. СепсН6л8е сЬе спЬе ЬНейу (2 аесопсЬ) апс1 геточе сЬе!аас сгасеа оЕ есЬапо1 Егот йе Ьоссот оЕ сЬе спЪе. 12. Кеяырепс! сЬе ппс1ек асЫ реПес ш 0.4 т! оЕ ТЕ (РН 8.0! счссЬ КЬ!аае апс1 шспЬасе сЬе яо1иПоп Еог 5 пл!ппсеа ас 37'С. 13. АсЫ со сЬе ю!псюп ап ес!па! чо1шпе оЕ РЬепоЬсЫогосот апс! ехсгасс сЬе КЬ!аае-сС!8еьсес! ю!псюп, т!х!п8 Ьу спчегяоп гасЬег йап чогсехсп8.
5ерагасе йе ас!пеопа апсс ог8атс РЬаяея Ъу сепгг!Еп8агсоп аг псахппшп ьреес! Еог 5 т!ппгеа аС гоот СетрегаСпге сп а ппсгобл8е апс! сгапаЕег йе ассиеопа 1ауег со а ЕгеаЬ лпкгобл8е спЬе. 14. АсЫ 80 р1 оЕ 10 м апппопшт асесасе апс1 1 т1 оЕ есЬапо1 со сЬе асСпеопа 1ауег. Мсх сЬе ао1псюп Ъу 8епс1у шчеггПоп апсс ьсоге сЬе спЬе Еог 5 т!ппсеа ас гоогп сетрегаспге. 15. СоПесс йе ргеслрКасеП Е1Ь!А Ьу сепсг!6л8ас!оп Сог 5 т!ппсеа ш а ппсго6л8е. Елесапл йе ялрегпасапс апс! Нпае йе ппс1ек асЫ реПес лчссЬ 0.5 пс1 оЕ 709 о ейапо1. СепсН6л8е ас тахппшп яреесс Еог 2 т!посек апс! геточе йе ейапо! Нпае ъч!сЬ а с!гасчп опс Раасепг рсрессе. СепСН6л8е йе СпЪе Ъпейу (2 аесопсЬ) апс! геточе СЬе !ааг Сгасеа оЕ еСЬапо1 Егот СЬе Ъокот оЕ сЬе спЬе.
АПоъч йе реПес оЕ 131 !А со ссгу т сЬе алг Еог 5 т!ппсеа апс! сЬеп с!!аао!че йе ре1- !ес ш 50 р1 оЕ ТЕ (РН 8.0Ь ТЬе ргерагасюп еЬоо18 сопла!о 2 — 4 88 осуеаяс СлЬСА. Ас йы яса8е, йе СсЬСА сао Ье апа!уге8 Ьу РСК аосС 5оойегп ЬуЬпйгаПоп апсС гоау Ье оеесС со 8епегасе!1Ьгапеь оЕ гоЬс1ооеь Еог !ЛЬСА аеооеос!о8 ог осЬег ршроеея. Рго1осо~ 12 Эта! 1-ьса!е Ргерага6опь о1 Уеай ВМА у еавт Е)НА !в Раевааео вч о!севт!ог! ог тне сесс ччлсс апс) 1уяа о! гЬе геап!йпа арЬегор1ааи чбгЬ 5Р5.
ТЬ!я гпейод гергос)пс!Ь)у у!е16а аечега1 ппсгоагата оЕ уеап 1)ХА йаг сап Ъе еЕ6с!епбу ВеачеВ Ъу геагпсбоп епкугпеь апс! пае6 аь а гегпр1аге Еп РСРс. Ноге ЕЬаг йе Ео11оьчпа рго!осе! !Ргогосо1 13) деяспЪеь а гпейод Еог апа1уа!па уеаяг со!оп!еь с)!тес!!у Ъу РСК, ичгЬопг рпг!Еу!па уеап Е))ч)А. Ап а1гегпа6че тегЬое) Еог ргераг)па уеаьг Е)ХА га а)неп Еп СЬаргег б, Ргогосо! 7. ЧдтЕВ1МЬ ВиЕЕегв апг! $01611опв Р!еаае аее Аррепг!!х ! Еог согпропепгь оЕ атос!с ао!опопа, ЬоЕЕегь, апд геааепЕа. са!!иГе атос!с ао1пиопа Ео ЕЬе арргорг!аге сопсепггаЕ!опа. иоргорало) РоГаааЕит асегаге 15 М) 505 1)ОУа ьн)ч) 5осВигл асегаге 13 М, рН 7.0) 5огЬНо) Ьиттег ТЕ !рН 7.4) ТЕ 1рН В.О) слога)л)па 20 ое)т) КЫаье Уеаьг геьиьрепьгоп ЬиЕЕег Епгуптев апд ВиЕЕегв Луто)уаье 1ООТ Мег1!а УРТ) тесВит Р!саяе аее йе рапе! оп УЕА5т МЕО!А гп Ргогосо! 10.
Сеп1г1йдев апгЕ Ко1огв 5огча11 55-34 го)ог ог еди!на!ел! прес!а! Еци1ргпеп1 УУасег ЬаГЬ ргеиеГ Го 65 С 'чЕес1огв апд теав1 Яга1пв Уеааг се!!ь 4.70 Ргогосо112: 5та!1-гса1е Ргерагаг1опг оГ Уеагг Р1ЧА 4.71 МЕТНОО СгоччГЬ оЕ Се!!5 апд ЕхГгас6оп оЕ 0Ь)А 1. 5еГ ир 10-гп1 си1Гигеа оЕуеааГ гп гРЕ1 шег)!иш. 1псиЬаГе йе сц!Гигеа очегп!8ЬГ аГ 30'С гч!ГЬ пюг!егаге а8!гагюп. 2. ТгапаЕег 5 гп! оЕ йе сеПь го а сепспЕи8е гиЪе. СоПесг гЬе сеПа Ьу сепсНЬг8аПоп ас 2000д (4100 григ гп а 5огчаП 55-34 гогог) Еог 5 пшпиея 5гоге гЬе цпиаес) рогпоп оЕ гЬе сц1гцге аг 4'С.
3. Кеаиарепс) гЬе сеПь гп 0.5 ш! оГ аогЬПо! ЬиЕЕег. ТгапьГег йе аиарепяоп го а шкгоГи8е гцЬе. 4. АсЫ 20 и1 оГ а ао!цг!оп оЕ Хугпо1уаае 100Т Г2.5 ш81ш! !п аогЪ|го! Ьийег), апс1 !псцЬасе гЬе сеП ацарепяоп Еог 1 Ьоиг аг 37'С. 5. СоПесг йе сеПа Ъу сепгНГц8апоп !п а пгкгоЕц8е Еог 1 пипцге. Кешоче гЬе ацрегпагапс Ъу аар!гаг!оп. 6. Кеаиарепд гЬе сеПа ш 0.5 ш! оЕуеааг геьиарепяоп ЬиЕЕег.
7. АсЫ 50 И! оЕ 10~ Я)5. С1озе йе гор оГйе гиЪе апг! пшс гЬе сопгепга Ъу гарЫ1у !пчегг!п8 гЬе гцЬе аечега! гипея 1псиЬаге йе гиЬе Еог 30 ш!пигеа аг 65'С. 8. АсЫ 0.2 ш1 оГ 5 м рогааа!иш асегаге апд а!иге йе шЬе Еог 1 Ьоцг оп ке. 1ьо!аГ1оп оЕ 0МА 9. РеПеГ ГЬе сеП г!еЪг!а Ьу сепГНЕц8аПоп аг шахгпиип ареес) Гог 5 ш!писеа аГ 4"С ш а ш!сгоЕи8е. 10. ГЛе а и Ые-Ьоге р!Репе Пр го ггапаЕег йе аирегпагапс го а ЕгеаЬ ш!сгоЕи8е гиЬе аг гоогп гешрегагше. 11.
Ргесгрпаге гЬе пис!е!с ас!сЬ Ьу асЫ!п8 ап ег!ца! чо1шпе оЕ гоогп-гешрегашге !аоргорапо1. Мгх йе сопгепга оГ ГЬе гиЬе апг! а!иге Ь Гог 5 ш!пцгеь ас гоош гегпрегагше. а,1МРОКТАМТ Оо поГ а|1ои йе ргес)р1Гапоп геаспоп Го ргосеег) Гог > 5 гп1пцГея 12. Кесочег ГЬе ргесгрпасес1 пцс1ек асЫь Ьу сепГНГи8аГюп аГ шахипшп зреег$ Гог 10 зесотиЬ ш а пнсгоГи8е. Кепюче йе аирегпасапг Ьу аьрггапоп апг! аПогч ГЬе реПег го г)гу ш йе агг Еог 10 пипигея 13. Г31аао!че йе реПег 1п 300 И! оЕТЕ !РН 8.0) сои!а)п)пи 20 И81ш! рапсгеапс КХаае.!псиЬаге йе Й8еаПоп пихГиге Еог 30 ш!пиГеа аГ 37'С. 14.
АсЫ 30 )г1 оГ 3 м ьосПшп асегаге (РН 7.0). Мгх йе ао1цПоп апс1 йеп асЫ 0.2 гп1 оГ )аоргорапо1. Мгх опсе а8а!п апг! гесочег йе ргес!р!гагес) ЕЗУСА Ъу сепгНЕц8агюп аг гпахигшш ареес) Еог 20 аесопс!ь ш а ппсгоЕи8е. 15. Кепюче гЬе аирегпагапг Ьу акр)гаг!оп апг! аПои йе реПес го г)гу ш йе агг Гог !О пипигея 13!аао1че йе 13ХА ш 150 )г! оГ ТП !РН 7.4). Рго1осо! 13 Апа1ул1пу Уеаь| Со!оп~еь оу РСК т НЕКЕ !5 Г4О Г4ЕЕО ТО РЕ)К)ЕЧ 0Е4А ГКОМ ЧЕА5т ЕОК АГ)АЕч5)5 гп РСй. ТЬе го))оМпд ргогосо1, 5чЬ!сЬ ивеь сгие)е!уяагеь оГ !пйчЫиа1 уеаП со)оп)еь аа гетр)агеа Тог ашр!г6сагюп, га иаес) го аасег)а!и ччЬеГЬег )))х)А аес)иепсеа оГ !пгегеь) аге ргеаепГ !п УАСК ТЬе ше)Ьос) сап аЬо Ъе иаег) го сЬес)с гчЬе)Ьег депепс шап!Ри!аг!опа )п уеааг, е.д., депе йагир6опь, Ьаче Ьееп аиссе85641.
Рог аг)йг!опа! е)ега)!ь оп регГогш!пд РСК, р)еаае аее СЬаргег 8, Ргогосо1 1. ° Аа ш аБ РСй ашр1гдса6опа, Ь !5 еааепба) го !пс)ие)е арргорпасе педабче сопсго!ь, е.д., геасгюпа го ччЬкЬ по уеаа! гпагепа! !8 асЫед апе) геас6опа сопгагшпд чч!)Й-гуре уеаьг йаг с)оеа по! саггу а УАС. ° Ро66че сои!го)8 !пс)иг)е уеап пгашь а1геас1у саггушд йе )))х)А аег)иепсе гагдегег1 )ог атр)1- 6са)юп апйог гесопягпк))оп геасг!опт соп)ашшд чч!!с1-гуре уеааГ со)оп)еа апг) 10 — 100 рд о) р)аяпЫ 1))х)А сопгашшд йе гагдег ))Ь)А аее)иепсе. МАТЕК1А1 й САЕ)Т!ОМ: Р)еаае аее Аррепйх 12 Тог арргорпа!е Ьапд1!пд о) та!епа!а таг)еед илй < 1>. ВЫЕег5 апе) йо166оп5 Р)еаае аее Аррепйх 1 !ог согпропеп)а о1 5!ос)г ао!ипопа, Ьи))ега, апд геадеппп ЕГ!)и!е а!ос)г ьо!и!!опа !о йе арргорг!а!е сопсеп!га!!опт.
70х Со)опу РСК ЬиТТег О. )25 М Тг)е-С! )рН 8.5) 0.56 М КС! дНТР ао)иГ)оп 110 тм) соп)аттД ад Тоиг дг4ТРь (РН 8.0; РСК Раде) МдС!г 125 гпМ) Епгугпед апс) Во)тег5 Таг) РНЯ ро)утегаве р!еаье атее йе гп)оппагпоп репе! оп ТАГ2 О!хА РО)уМЕКА5Е ш С)гаргег 8. Се)5 Адагоае ог Ро)уасгу1атрде де) <1> Р!еаее атее 5гер 4. 4.72 Рго|осо1 13: Апа1уг(п3 Уеаяг Со1опгез Ьу РСК 4.73 Ь)4(с!е!с АсиЬ ап(! О!акоп(яс!еоТЫе6 ОЕ(допис)ео((с)е рптегя ТЬе одопис!еог!Пея яЬои1|1 Ье 20 — 24 пис!ео|Ыея ш !епц|Ь, ярос|бе Еог |Ье гагаег Т|14А яе|рлепсея, Ггее оЕ ро|еппа! яесопбагу я|гисшгея, апг) сон|а!п по 1езя йап 10 ап6 по гпоге |Ьап 15 6 апг) С ге|Мне|.
Рог адчке оп |Ье депп оЕ о!фопис(еогЫе рп|пегя |ье6 |п РСК, р!еаяе яее |Ье (псгодисгюп |о СЬар|ег 8. Маг)сег 0А)А прес!а! Ег!ц!р|33езтЕ М(сгоуиде 1иЬея (0.5 п|!) ()яе |Ь!п-ччаПес( агпр66саиоп шЬея с)ея)апе6 Еог |ье |п а йеппа! сус1ег. ТЬегта) сус1ег ргодгаттес) ччг(Ь гуез(гегГ атр)гу(са((оп рго1осо) 1Е |Ье |Ьеппа! сус1ег Ь по| ецшрред и|1|6 а Ьеаге6 1Ы, ияе еКЬег пипега! оП ог рагаЕ6п |чах |о ргечеп| ечарога|юп оЕ 1щшд Ггоп| |Ье геасиоп них|иге диг(пц РСК. ЧесЕог5 апг! Чеа5Е Яга!п5 Уеая( з(га(п саггу(пд гесогпЬ|палг УАС оГ Еп(егея( МЕТНО0 2. 13зе а гПзрозаЫе уеПозч р|ре((е Пр (о !гапзуег а япаП агпоипС оуа уеая! со1опу (0.10 — 0.25 р!) !о ! Ье геасПоп пих1иге.
1| ь ппрог|ап| по| |о Ье |оо агнессу |чЬеп яашрПп0 |Ье уеая со1опу Ьесаияе сеП |чаП сошропеп|я !пЬ!Ь!| |Ье РСК. 3. Тгапзуег !Ье РСК !иЬе (о (Ье !Ьеппосус1ег, ргокга|игпег! аз ЕОПоччз, апс1 яаг! |Ье ргоцгат. ТЬеяе Пгпея аге яш|аЫе Гог 50 и! геасиопя агаегпЫе|1 |и Оап чгаПед 0.5 и|! |нЬея апг) |псиЬа|е|! ш йеппа! сус1егя яисЬ ая |!ге РегЫп-Е!гпег 9000 ог 9200, Мая|ег сус1ег (Еррепбог(), апг( РТС 100 (М) КеяеагсЬ). Топе| ап|1 |еп|рега|игея |пау пее6 |о Ье абаргес( |о яш| ойег |урез оЕ е|)шр|пеп| апг( геас|юп чо!шпея. 4. Апа!ухе (Ье ргос(ис(з оЕ (Ье РСК Ъу е1ес!горЬогеяз (ЬгоикЬ ап ацагояе ог ро1уасгу1атЫе це1, ия!пц |пас)сегя оГ ягП!аЫе я(ге. 1Г ашр66саиоп оЕ |Ье гагКег яениепсе (я |чеа)с ог еггаис, гереа| |Ье геас|юпя ия)пц а ро!угпепга|юп |е|прегашге 2 — 5"С Ье!о|ч |Ье са!си!агед п|еуипц |егпрегашге оЕ йе оПаопис!ео|Ые рпгпег |Ьа| Ь псЬег ш АЕТ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
