Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 112
Текст из файла (страница 112)
Но иечег, яп51еяге РСК 1в 1Ье випр1ег апд 1евв ехрепяче орг)оп, ге!!и!г)пц Ееччег егере апд вупгЬег)с о1!Вопис1еогЫев. Ве!ою, чче 11евсПЬе а ргогосо1 Еог в!пц1е-в!ге РСК йаг ччог)гв 1че11 !п оиг Ьапдя ТЬе гпегЬод пгау Ье еая!у адаргед 1о чесгогегге РСК Ьу сЬапрпа 1Ье о11цопис1еог!де саввегге. Рог дега!!в оЕ чесгогеггев йаг гпау Ъе ивед го гесочег 1Ье гегпппа1 вес!иепсев оЕ р гАС4, р1еаве вес Ыеу ег а1. (1990), МсА1еег е1 а1. (1996), апд ОВ!1ч!е апд !агпев (1996). Чес1огепев аге ача)1аЪ)е сотгпегс!а11у Егот Сеповув В!огесЬпо!оиру (ЪЧоод!апдв, Техав). 4.7В СЬаргег 4: Мог)!!пВ и'!гЬ НгцЬ-саров!Гу Ъесгогь Г)А ввцгпвп! гвв!псссп вав чвс!сг ввсивпсв гвв!г1сйсп вйв сйдввг п!йй ап впгугпе !Пв! сгвв1вв в ргсггисйпц 3' впг1 чвс!сг рг!пгвг А с1спви 0ГЧА йцагв п!Тп в в!пд1в в1гвсбвб сйдспис!всемв с!спвб 0Г)А чвс!сг рг!гсвг А в!пд!в-в1гвпбвг) сйцспис!есйдв ппц!в-в1гапбвб сйцспис~всг~бв | агпрЫу Ьу РСП (йгвг вх1впесп и!оп рпгпвг А) рг!с!вг А | вгпрИу Ьу РСП ив!пц япц1в-в!галеви сйдспис1вс1к1в апб рг!гсвг А рпп!вг А сйдспис!всйав ав рпгсвг Е1С1)КЕ 4-16 51пе1е-в1!е йсЬегпе ТЬе в!га!еау Гог ив!па в!па1е-в!!е РСК !о 1г)еп!!Гу !Ье епг)в о! с!опед Ггаатеп!в 1в !)евспЬес1 1п 1Ье !ех!.
МАТЕЫА1.$ СА1)Т!ОГх: Р1еаве вее Аррепйх 72 Гог арргорпаге Ьапг111пе о! и!агепа1в гпагЬег! ччпСЬ <1>. Войегц апд Ьо!66опь Р1еаве вее Аррепйх 7 Гог соп!ропеп1в о7 в1осЬ во!и6опв, Ьиггегв, апд геааеп7в. 011и1е в!ос)г во!и6опв !о !Ье арргориа1е сопсеп1га6опв. 70х Атр)17!'са7)ол Ьиууег с)НТР ьо)ипол Г7 тМ) сол!ат!лВ аИ !лиг г)АГТРв ГРН В,О) РСК Вгаг)е) ЕГЬало! РЬело)гсЫогоГогт Г7:7, чЬВ <1> 5осдит асегаге ГЗ АГ, РН 5.2) 70х Т4 ОАГА 7)Ваве Ьийег Епкугпец апд Войегц Вас7елорЬаВе Т4 О74А ))Вава Яевглспоп елг)олис)еавев Рвп ог !ч!в1! ТЬегтоьгаЫе РА)А ро)утегаве Ртососо! )4т Гьо!астпе сЬе Епт(ь оГ Сепотн РХА ртадтепсь С!апет( т НцЬ-сарае!су Мессотьт уессотессе РСК 4.79 Се15 Адагоье де)ь Р!еаье ьее Мери 1 апс( 8.
Ь)ос!е1с Ас1415 апд О!фопос!ео$141е5 О)!Вопис(еос(с)е саььессе Г5.0 ОО о)т! à — В.5 р)а!) тп ТЕ (рН 7.6) 5 'САТССТСССТССССАТАСССАСТССТСТАСАСССТТАССТТССТССТАСАТСТССАСССТТССАЗ ТЬть 64-ппс(еосЫе ь!па(е-а!таис(ет( саяеие Ь т(еь!апет( Еот 1(аасюп со сагЕес Р(х(Аз саггуспа сегиипт аепегасес( Ьу рьс! ог №11. ТЬе Еош 3'-сетпппас пис!еосЫез (ппт)ег1!пет() аге сотпр1ептепсагу со тЬе ргосгит(спЕ сепшш оЕ ЕгаЕшепсь оГ РХА цепегасет( Ьу с1еачаЕе ъчтй йеье ептуптез.!Е апойет гезспссюп епхупте Ь ыей сЬе пис!еосЫез ас сЬе 3' епт( оЕ тЬе 1!п(тет тпыс Ье сЬапЕет( ю аь со соти р!еитепс йе рго- сгпйпЕ сепп!пиь аепегасет( Ьу сЬе ептутие.
Ее(оге ые, сЬе о!!Еоппс!еос!т(е ьЬои10 Ье рит(Етет( Ьу Сть сЬгоптасоЕгарЬу ог е!ессторЬогеьо сЬгоицЬ а 1296 ро1уасгу!аитЫе ае1, аь опс!шес( тп СЬарсет 10, Ргососо1 !. ТЬе 5' сеппшы оЕ йе о1!Еопис!еос!т(е ьЬоп16 пос Ье РЬоьрЬогу1асетс. ОВВопис(еос)с(е ГГ)п)сег) ргттег Г5.0 ОО,ьо)т! à — ! 7 Стас!) тп ТЕ ГрН 7.6) 5 'САТССТСССТССССАТАСССАСТССТСТАСАСЗ ' ТЬЬ оЕаоппс1еос!т(е (ь Ыепссса1 ш ьет(иепсе со сЬе 32 ппс!еосЫеь ас сЬе 5' епт( оЕ сЬе о1!аоппс!еоск(е саяессе апт( Ь ыес1 аз ап ашр!ппег си сЬе РСК. '1'Ьеге Ь по стает( со рппЕу ог РЬозрЬогу!асс сЬе т(ергосессет) о1!аоппс1еосЫе ЬеЕоге иье. РЬю(че сЬе одопис!еосЫе ш ТЕ (РН 7.6) ас а сопсепсга6оп оЕ 5.0 ОР )ш! зо1исюп (-17 рм).
5ет)иепсе-ьрестутс и!Гдолис!еос(с)е (чессог) рптег Г5.0 ООтьи)т! 1-77 нм!) т ТЕ ГрН 7.6) ТЬсь рпшег Ь соптр!еитепсшу со сЬе чессог тчЬеп сегиппа! зет(пепсез оЕ а с!опет( зеашепс оЕ РХА аге со Ье ашр!!Етет( ог со с!апет) РХА зет(пепсез тчЬеп а пе!аЬЬот!пЕ зеашепс оЕ аепопис РМА Ь со Ье гесочегей ТЬе рпшег зЬоп10 Ье 26 — 32 ппс!еосЫез !и!епасЬ апс1 !и ргегоссе0 тпе16пц сегпрегасиге зЬои14 Ье арргохппасе!у ет(па! со сЬас оЕ сЬе 32-ппс!еосЫе о!(аоппс1еос(0е рпшег. Рог зе0иепсез оЕ рпшегь зрес16с Гог сЬе 1есс апт) г(ЕЫ аггы оГ РУАС4, р1еазе зее МсА!еег ес а1. (1996).
ТЬеге ть по пест( со рш!Еу ог РЬозрЬогу1асе сЬе т(арго!естес( о110оппс!еосЫе Ье(оге изе. РЬю!че сЬе о1!аоппс!еосЫе тп ТЕ (РН 7.6) ас а сопсепсга6оп оГ5.0 ОР !пт! ю1пЕоп (-17 рм). Тетпр!асе ОГ4Аси гесотпЬтпапс ВАС, УАС, ог соьт(гГ ОГ4А УАСь сап етсЬег Ье ешЬесЫет) си ап аЕагоье р1иь (2 РЕ тп 100-01 р!пЕ) ог !и ю!пИоп, (!п1ея сЬе уеаьс зсгаш Ь саггуспа тпоге сЬап опе ХАС, сЬеге Ь по пеет( со рипЕу уАС РЫА Ьу РРСЕ Ье(оге ые тп чессогеие ог з!па1е-з!се РСЕ.
РЬСАз зЬои1сс Ье рипйет1 Ьу со!шпп сЬгошасоцгарЬу пьтпа, е.ц, С й!ааеп геяп от СепеС1еап 1! (Р1еаье зее СЬарсег 1, Ргососо( 91, апт( геюзрепдет( ас а сопсепсгасюп оГ 1 РЕГР! тп ТЕ (РН 7.6). Ьресса1 Е41о1рсу3еоГ Вагггег прь Гог аисогпасто р!рессеь АГ!сгоГиде сиЬеь Г0.5 гп0, ГЬ(п-чча))ег) Гог атр)ту(сас(оп Роь(с(че 05ьр!асетепс р!россе ТЬегта! сус!ег ртоагаттег) чЫй г)еьаег! атрВВсаВоп ргососо! 1Г с!те йеппас сус1ет и пос етсшрреа тч!с!т а Гтеапм Ет), ые етйет шшета1 ои от рата(6п тчах со ртечепс ечарогасюп оЕ!!с(шт( Гготп сЬе геасПоп иихспте т(пт!па РСК. (4та(ег ЬасЬ ог сои!(пд Ь)ос)с ргеьес Со 75 С МЕ'П1О0 1. Р!иеьс -5 ссц оГ сегир!асе РЬ(А ит(сЬ Рьй ог №т1.
СЬес1с а яиаП а1и)иос оГ йе геассюп Ьу аиагоье ие! е1ессгорЬогеяь со епьше сЬас аП оГ сЬе Р!х(А Ьаь Ъееп с1еачей 2. Ехсгасс йе геасооп пихсиге чт!й рЬепо1:сЬ!огоГогт, апт1 гесочег йе Р(х(А Ьу ьсапс1агс1 ргес!рПаНоп тч!(Ь ейапо! апс( ьиЬьес!иепс тчаьЬ!пд Ги 709о ейапо1. В!осе йе ореп сиЬе !и ап сичегсет) роясюп оп а Ьет! оГ рарег соъче1ь со аПотч сЬе !аьс сгасеь оГ ейапо1 со ечарогасе, апт! йеп с!!ььо1че сЬе с!атир реПес оГ 1)(х(А !и 50 р! оГ Н,О. Ргогосо! 74л Тло7аг|пд гйе Епг(л о1' бепотлс В)х)А Ргадтепгл С(опег7 т Нл57л-сараслгу уесгога )лесгогегге РСК 4.81 Е|ЧНА|ЧСЕМЕ|ЧТ5 ОЕ ЧЕСТО31ЕТТЕ 31ЕАСТЗО)Ч5 лй/НЕ)Ч 053)ЧС СЕ|ЧОМ|С 0|ЧА ТЕМРЕАТЕ5 й агпрййсайоп 'ь )пей)с(еп1 ап67ог й гпоге |йап опе аплрййсайоп рголйлс( 'ь бе(ес(е6, гереа| гйе иа)пц опе ог гпоге о((йе епйапсегпеп(а оий)пе6 Ье)оли ТЬеье аге раг6си|аг|у идее(и! и4леп (Ье с 1юп о( (агйе1 вес(иепсеа 3ь |ои, е.й., и Ьеп иа(пц (о(а! еийагуойс ОНА аа а |егор|а(е га1Ьег |Ьап а иа| с|опе о| йепопйс ОЬ(А.
° |п а ргейпипагу ехрепплеп|, с3е1епп|пе (йе а(ке о( гйе сЗеа(год 0)ЧА (гай пеп1 Ьу 5оигйегп ЬуЬ ие(п5 а ргоЬе с|епчес3 (гогп 1Ье пе)5ЬЬог(пу, йполчп ОЬ)А еес|иепсе. ТЬеп (гасйопа|е |Ье сййе Ьу айагоье йе! е)ес(горйогее|ь |и геа6)пеаа (ог 5(ер 2 (р)еа~е атее СЬар|ег 5, Рго1осо| 1). ° Айег 5(ер 1, Ьеа| 1Ье сйцеь(ед (епзр|а1е ОНА (ог 10 гп)пи(еь а1 65'С 1о гпе|1 апу аппеа(е6 с 1Ьа( тау Ьаче (оппед. ° Айег 5(ер 5, гегпоче ехсем оййопис|ео66е савойе Ьу ьрип со|игпп сйгопла1оегарйу.
° (псгеаяе 1Ье (опе о(|йе бепа(игайоп лйер (п |Ее йглй сус|е о! РСлс 1о 10 гп|пи|еа. ТЬ|к сйапй согпр|е(е |пасйчайоп о(|Ье Т4 ОНА 3(цаяе апс| 5иагап1еез 1Ьа| ай |еплр|а1е ОЬ(Ач аге |ийу д ТЬогоийЬ с3епайлга|юп ргечеп(а еаза гера|г о( гесеаее6 3 ' 1еггп(п! апд (йеге(оге юрргееаеылплчап(е6 РСй ргойисЬ (р!еаье атее рго1осо| |п(гог|ис6оп), ° Ове Ьо(-ь1ап РСй, |и илЬ|сЬ 1Ье 1Ьеппох(аЫе 0)ЧА ро)угпегаае 'ь с|еп|ел| ассею 1о (йе |егпр3а|е Ье(оге согпр|е|е г3епайлгайоп ((ог де(аЬ, р)еаяе атее СЬар|ег 6 |п(гол3исйоп). ° Оае а пеа(е6 чес|ог рпгпег(а) 1о епйапсе прес)йсйу апс| у(е(д.
ТЫь епйапсегпеп( гес|сйгеь (Ье ьуп1Ьеы о! ап агЫ|йопа| чес|ог рпгпег, илЫсЬ сап Ье ива еййег |и ап асЫй)опа! агпрййса6оп геас6оп ог Ье агЫей (о 1Ье (пй(а) агпрййса(юп айег 5 — 1 0 сус)еь. А|(егпайне|у, (йе ргойис(ь о! 1Ье (пй)а! РСй сап Ье (гас(юпа1ес| Ьу е|ес|горйогеа|ь 1ЬгоийЬ ап айагоье 5е( апс| апа(ухес$ Ьу 5ои(Ьегп ЬуЬпсйайоп, ие(пй |Ье поз(ест рплпег ак а ргоЬе. А ьесоп6 РСй сап |Ьеп Ье рег|оггпес| иь(пц аь |егпр|а|еа 0(ЧАь о( (Ье арргорпа|е а(ке.
° ТЬе асЫй(оп о! Рег|ес| Ма(сй (51га(айепе) 1о а сопсеп|гайоп ог 0.1 ип((а(лл! о( геас(юп гп)хгиге гпау ьогпейгпеи Ье|р |о гелосе (йе пиплЬег о( попьрес|йс РСй ргодис(а (МсА|еег е| а!. 1996). ° ТЬе иве о! СС-Мей (С).034ТЕСН) плау (тргоче |йе ей)с)епсу о( 1Ье РСР. 4.В2 Е Ьаргет 4: Итог)тгиВ пай Н~дЬ-тарас|ту Месгогв СТАЕ-!охР ! се|ассе Ьеичееп ! аа|асви1 |схр ! ! ! ! ! ЫЬ ! ЫЬ ! ! ЫЬ ! ! а|поип1 о| 01|А расавдеб |п1с Ьасгег|српаде Р| рвгсбев |в -100 КО РЕСНИЦЕ 4-17 ратаса 1и о( Вас(епо Ьа е Р1 0Ь)А Егош 1п(гасеПи1аг Сопса1еп|егв ТЬе я|Ьв(гаге Еог рас)таВ!иВ 'ь а Пиеаг соиса|егиег о( О!нА (вЬо|чи !и Ьо!6), |и |чЫсЬ |Ье !и6!чк1иа! Р1 Веиошев аге аггаиВед !и а Ьеад-|о-|аП гаибеш.
Рас)таВ!иВ ь !и|Па|ей а| а я1е (рас, вЬо|чи ав !агВе всея вогв) йа1 Пев — 5 )тЫгогп 1Ье пеагев| lохр я1е. Ойег рас я|ев (вгиаП всьвогв) !и йе соиса1егиег аге ио| овей Рас)таВ!иВ оссигв Ьу а ии!6!гесбоиа! ргосеяПне "Ьеаб(иГ гиесЬаиьи| !и ъчЫсЬ виссевв!че 100-)|Ь веВшеи(в о( О!чА аге гее!ед !и1о йе Ьастег!орЬаВе ргоЬеай Весаиве 1Ье яге о( 1Ье Ьас)епорЬаВе Р1 Веиоше 'ь -90 )|Ь, ъчЬегеав |Ье сарае!|у о1|Ье ргоЬеа6 'ь -100 )сЬ, йе ОНА рас)гаВед |иго еасЬ Ьас|ег!орЬаВе раг6с!е !в |египиаПу гебиидаи1. Весаиве о( |Ь!в гебиидаису, йе Ягв| Ьастег!орЬаВе раг(тс!е |о Ье (отша Егош еасЬ соиса1еи|ег сои|а|ив Ьно lохр я1ев. ТЬе О!чА о( 1Ь!в Ьастег!орЬаВе саи |Ьеге(оге Ье сусПге6 Ьу Сге гесогиЫиаве а(тег !и)есбои !и|о а иеъч Ьас|епа! сеП. Арргохппа|е!у Еоиг Ьас|еиорЬаВев аге рас)таВед Егош еасЬ соиса1егиег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
