Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 91
Текст из файла (страница 91)
ТЬе (4) апд ( — ) опепсас|опа оу сЬе |исегдепк гед(огс аПои 1Ье геасие Ъу Ье1рег ЬассепоРЬадеь оГ аепае апд апдаепье яид!е-асгапдед 33)ъ)Ая Рог а 1(ас оу РЬадетЫ честить апс1 Ье1рег ЬассепорЬадея р1еаае аее Тадде 3-4. Рог Вгя-сцие цаега оу РЬадеи|Ыя 1Ье ааГеас сЬо|сеа (ог Ье!Рег н|гия РЬадет!днес(от, апд Ьоас аге а ъче!1-сеьсед апд ге1(аЫе Ье1рег ч(гиа аисЬ аа М13К07 апд а дерепдаЫе РЬадетпЫ (е.д., опе ог тоге оу йе дсгасадепе 5К ог Рготеда рбетпР аепеа) |п ап Е.
сой ягаш ьцсЬ аа Т)Н!15 (сап ес а1. 1992). НЕЕРЕК ВАСТЕК1ОРНАСЕ5 5ечега| Ье|рег чгиаеа Ьаче Ьееп еид(пеегед 1о шах(т(те (Ье у|еЫ о( а(пд!е-аиапдед рЬадетЫ ОЬСА рас1|- адед |пса й(агпепсоиа рагйс!еа айег аирег)п(ест(оп о( а РЬадегпЫ-сгапдоппед сийиге. СНЬеп вогЫпд ией, йе габо о( РЬадегпЫ со Ье|рег депогпеа |и йе ЬассегюрЬаде раг6с!еа ге!еаъед |пса сЬе п|едюп| аЬои16 Ье — 20:1. А атай-ьса(е (1.5 и|1) сийиге ь|юи(д ргочде епоидЬ ь(пд(е-асгапдед РЬадегпЫ ОНА (ог (оиг 1о е)дЫ всх(цепс)пд геасбопя ° МТЗК07 'ь а депчабне (Н|ейа апд Меха(пд 1987) о( ЬассепорЬаде М13 йа1 сагг(еа а р!аагп)д опд(п о( герйсасюп (|3епнес3 (гоги р1 5А), сЬе йапатус)п-геа|яапсе депе сгот йе сгапароаап Тп903, апд а п|и1асед негяоп о( депе П (депчед (тот М1 Згпр1 ), |и и ЫсЬ 1Ье С геядие а1 6125 Ьаь Ьееп гер|асед Ьу а Т (Н|е|та апд Меаа)пд 1987).
СА|Ьеп М13К07 )и(асса сейа сапу|ад РЬадепн|Ь, 1Ье |пса| Ыпд а(пд(е-асгапдед ОНА о( сЬе Ье|рег ЬассепорЬаде 'ь сопчегсед Ьу сейи|аг ептугпеа со а доиЫе-асгапдед (оггп йас (Ьеп иаеа 1Ье р!аап|Ы р1 5А опд(п 1о герйсасе. Весаиае 1Ье ассигпи|абоп о( доиЫеасгапдед М13К07 ОНА доеа по1 гегсаге чПа| депе рготйлсся |Ьеге 'ь йи!е оррогсипйу (ог сйе геядепс РЬадегп|гЬ 1о |псегтеге ъчсЬ 1Ье еаг|у яадеь о( герйсабоп о( йе |псопбпд Ье|рег ЬассегюрЬаде депоп|е. ЪН|1Ь 6|пе, йе рао| о( доиЫе-асгапдед М13К07 депогпеа ехргеааеа ай о( 1Ье рго1ееь гег|и|гед 1о депегасе ргодепу а(пд)е-асгапдед ОЫА Нои ечег ТЬе июсасет1 депе П ргодисс епсос|ед Ьу М13К07 (псегаста !еаа ей)с(епбу чий йе ЬассегюрЬаде ог(д)п от' гер|3сасюп саи|ед оп Па ои|п депогпе (с|ие со 6|е (паеи)оп о1 )асЛ аегсиепсеа) 1Ьап ъчсЬ йе оа'- д)п с|опед |п1о 1Ье РЬаде|пЫ чессог (Че|га ал|| Меха(пд 1987). ТЫа рте(егепсе гехи!Са |и 6|е ргас|исбоп о( пюге (и) асгапда (гоги сЬе РЬадегпЫ сбап йоги сйе Ье|рег чгиа апс1 епаигеа йа1 йе ч|гиа раг6с(еа ргодисед Ьу |Ье сей соп1а|п а ргеропс|егапсе о( а(пд(е-асгаидед ОНА дегЫес| (го|и (Ье рЬадегпЫ.
ИЪеп М13К07 'ь дгоъчп |и 1Ье аЬаепсе о( а РЬадегп)д нессог (5(ерш 1 — 3 |и (Ыа рго1асо3), 1Ье гписапс депе П рго1е|п (псегассь и|ей епоидЬ ъчй тйе сйагир1ед ог(д(п о( герйсасюп 1о ргадисе аи(йс(епс ЬассепорЬаде сот 5ирег(п(ест|оп. ° 8408 'ь а депна1Ые (Киаае! е1 а|. 1986) о( Ьассег|орЬаде (1 (тот и ЫсЬ ап |п1егпа| 24-Ьр ьедгпеис о( 1Ье ядпа| гесса(гед (ог расхад(пд о( ЬассегюрЬаде раг6с(еь Ьаа Ьееп де|есес|. ТЬе геаи(бпд Ье|рег ЬассегюРЬаде расйадеа а(пд!е-асгапдед ОНАЯ соптяп(пд а согир|есе расйад(пд ядпа1 Ьеиег йап П расйадеа (сь ои и а(пд!е-асгалдед ОНА |и адд(бап со а гпосййед расйад)пд а|дпа1, К408 сагг)еь (1) а ив(абаи йпоип аъ (К1 1Ьас гепдега К408 |паепайне 1о |п1ег(егепсе Ьу де(есбне н(гиаеа (Епеа апд гйпс1ег 1982) алд (2) 1Ье дбхА июсасюп йас (тргонеь йе ей)с|епсу о( ЬассепорЬаде аъаетЫу Ьу айепид ап агп|гю асЫ |и а гиогРЬодепебс рго1е|п.
С) пййе М13К07, К408 доеа пос сапу ап апбЫобс геа(асапсе гпагйег. ° Отйег Нетрег Игиаея А(1ЬаидЬ М13К07 агх| К408 аге (Ье пюас ън(де!у иаед Ье|рег ч|гиаея сатрап(еа | сЬас аей РЬадегп)да |пау гесотгпеас| осЬег Ье|рег н|пгаед (ог ехагпр|е, ЕхАаа|ас (5(гасадепе) апд НС5М13, ~ и Ь|сЬ )а а дегва1Ые о( М13К07 (Н|е|га апс! Меаа(пд 1987). Ноъненег Ьой |и оиг ехрепепсе апс| 1Ьа1 о( | осЬегя йе у|еЫ апд ргорогбоп о( й(а|пепсоиа рап(с!еь сопса|п|пд япд|еягапдед РЬадегп|г! депогпеа аге || и|юайу ЫПЬег ъчй М13К07 (е.д., р!еаъе аее Оп е1 а!. 1992) 1Ьап и ПЬ ойег Ье1рег ч|плвеа. Ртгосо!8| РгодистК 5)лфе-ьггаидсд РЖА и |Я РЬаКет(д \Фсгогь 3.4' МАТЕВ!Ас5 СА()Т1ОЫ: Р!еаье ьее Аррепс((х 12 Еог арргорпасе Ьапс(1(пе оЕ та1епа1ь тагЬес! ю11Ь <! >.
Войег5 апс! Ьо!о6оп5 Р)еаье ьее Аррепопх 7 Еог со|пропел!а оЕ ьсос)с ьо!иоопь, ЬиЕЕегь, апд геаеепсь. ЕЗ!!и1е ьсос!с ьо!опопь Ео ЕЬе арргорпасе сопсепсгаоопь. Калатувл (70 л|В)л|0 Капа|пус!п ы ыес1 |п йЬ ргососо( со ел|иге йас а)! Ьассепа1 се1!ь сопса!п)п5 а рЬацеш!6 Калоше аге ш(ессес) Ьу йе Ье1рег М)ЗК07 ЬассегюрЬа5е. 0иппц ргорацас!оп оЕ М13К07 (е.5., Еперь 1 — 3), сЬеге ы ье(ес6оп Еог ЪассегюрЬа5е Кепогпеь сЬас Ьаче !оьс йе р! ЗА ог!5!п апсс йе Тп903 сгапьроюп. рог Ниь геаьо, 1с Ь еяепс|а) со !пс(ис(е 1|апашус|п ш сЬе гпейигп ыеа со ргераге йе ьсос1| оЕ Ье!рег ч|гы (5сер 3). 505 ьо)идол (2;4 и)ч) 5исгоье де(-1оайлц ЬиЕЕег Се!5 Аеагоье ее) (О. 7;4) саьс |л 0.5х ТВЕ, солса(л(лВ 0.5 рВ/т! еЯсд(ит Ьгот(де <1> Р!еаье ьее 5сер 12.
МеЕЕ!а 5ирр1етелгес1 М9 тт|та( аВаг р1аСеь СС|Ьеп ияп5 Е. соЬ ьсга|пь сЬас саггу а с(е!есюп оЕ йе рго!ше Ь|оьуп|Ье6с орегоп (и (1ас ргоАВ) ) !п |Ье Ьассепа) сЬго|поьоп|е апд йе сошр!ешепс!п5 ргоАВ Вепеь оп йе р' р!аяппе иье ьирр!е|пепсе|1 М9 полипа! п|ейшп. УТ аВаг р(агеь сол(а(лте 60 рВ)т( атр(с(1!(л 2х УТ гпед)игл 2х УТ тесеит солСат(лВ 60 рВ)т) атр(с(!!т 2х УТ глееоит солСат(лВ 25 рВ)т) Есалатус(л ТЬе а|Ыиюп оЕ МВс| (5 шм) со |пейа (Ке|ыу апс( МсКеппеу 1996) Ь герогсе|1 со ипргоче йе у!е!6 оЕ Ьассег!орЬа5е М13 си1шгеь (п(ессе6 ас 1о|ч иш16р!!с(су.
прес!а! ЕЕЕосргпеп1 Игасег ЬаЯ ргеьег Со 65 С АЕМЖопа! ВеаеепЬ 5серь 2 алд 5 оЕ 1Ь(ь ргососо1 гес)и(ге гИе геаеелсь 1(ьсед т Ргогосо! 7 оЕ сЬ)ь сЬаргег. 51ер 74 оЕ Я(ь ргососо1 гег(и(геь Яе гегеле Ььсед |л Ргососо1 4 оЕ Ягь сЬарсег. суес$ог5 апс! Вас!егьа! Ягасп5 ВассеггорЬаде М73К07 Фе1рег) М!ЗК07 спау Ье оЬ|а!пес( соиипегс|а11у (е.5., Егош РЬаппас|а ог Ь)ею Вп5!апс) Вю!аЬ|) апс) ргора5асе6 аь с(еьсг!Ьес( |п 5серь 1 — 3 Ье)очс 5соге ьсос)сь оЕ Ье!рег чиж ас 4'С |п роюсЬ спейшп ог ас — 20'С |п Кгою|Ь гпейшп солса(п!п5 50аа (ч)ч) 5)усего1. М1ЗК07 йои!6 пос Ье ые6 со ьиреппЕесс си1|игеь о! Е. соП 1М109 сгапьуоппес) чай рЬа5егпга чессогь.
рог геаьопь йас аге пос ипаегыоой й|ь ьсгаш ипс(егКоеь я5шесапс )уяь ъчЬеп (п(ессес) ю|й М13К07. ТЬе гесопипепде6 ьсга|п Еог М1ЗК07 (ь Е|Н ! 15 (Ып ес а1. 1992). Е, со1! Е ьсга)л рог а 166п5 оЕ ьсга|пь ьшсаЫе Еог сЬе ргора5асюп оЕ ЬассегюрЬаде М!3, р)еаье ьее ТаЫе 3-2 ш йе !псгобисс!оп со йЬ сЬарсег. ЗА6 СЬартег 3: 14Ьг)гтпц тчттЬ ВастеПорЬаце М!3 Ъестогт !п рппс)р!е, !1 5ЬоиЫ Ье ро55(Ые то ргосЫсе ЬастепорЬаце раи)с!е5 1Ьат сопта!и 5(пц!е-51гапс(ес) сор(е5 о( рЬацетЫ 0)5)А )п апу пта!е 51га(п о( Е.
со!). Бп(от(ипате!у, 1Ье у(еЫ о( 5!пц!е-5(гапт)ет) 0ЫА сап Ье цгеацу а((естес) Ьу йе Ьастепа! 5!гати пает) то ргорацате 1Ье р!аашкЕ Еог ехагпр!е, Е. соц 51пцп5 МН1 784 (Вег!чет( (гопт !МВЗ) апс( МН1 790 (Пег(чес( тгопт )М7 07) ргот)исе 5а85(астогу у!е!сЬ, тчЬегеа5 МН7 304 (депчес) тгогп )М105) т!ое5 пот. ТЬе Ью!оцка! геааоп5 тог чагу!пц у!е!85 аге роог!у ипс(егатоот). 5ечега! 51га(п5 (МН7784, ОН)15, ХИ-ВЬте, ХЫ-В!ие МкГ'; (ог гпоге согпр!ете с)ета)!5, р!еаае 5ее ТаЫе 32) Ьаче Ьееп пает) Ьу тапу !аЬогатопе5 апт) цепегацу у!еЫ тчог(таЫе с)иапт!т!е5 о( 5!пц!е-51гапс)ет) рЬацетпк! 0)5)А5 (Н(е)га апс! Ме55!пц 7987; Вп ет а!.
1992), тМ(Ь ац 51га(п5, гпах(пюпт у(е1сЬ о( рЬацептЫ 074А аге оЬ(а(пег) счЬеп )п(естет) си(- 1иге5 аге тчец-аегатет(. Е. соц 51гатп РН7 75 0Н115 (Е(п ет а1. 1992) Ь ачат1айе Егогп ЫЕе ТесЬпо!оц!ет. МН1184, а !е55-рте(еггет) ортюп, сап Ье оЪта(пег) Ьогп !. Ме55(пц. ВотЬ Пгашт 5Ьои!8 Ье р!атетт оп аирр1етпептед шшппа! ацаг р!атет. Е. соц 5(гата РН7 75, 1гап5(огтес( тч(1Ь Ьас1епорЬаце М73 рЬацет(г( честог Тгаптсопп Е. соц тч(тЬ тЬе РЬацеш!8 частот а5 т(етсг(Ьег( тп Рготосо! 6.
ТЬе тгапттогшетт ттгаш птау Ье ргорацатетт а5 а си1(иге ат Петсг!Ьетт (и Рготосо1 2. Е, соц 5(тат РН7 75, 1гапауогтеВ тч(1Ь Ьастег(орЬаце М73 гесотЬтпап1 рЬацет(с( честог с)оле саггутц Еогетцп Р)НА Тгапт(опп Е. соц тч(тЬ тЬе гесотпЬтпапт РЬацепит( честог ат т)етсг(Ьет( тп Рготосо! 6. ТЬе тгапттоппет( 5тгатп шау Ъе ргорацатет( а5 а си1шге ат т(етсг!Ьет) (и Рготосо1 2. МЕТНО0 Ргерага6оо оЕ а НтдЬ41(ег Яостс оЕ Не!рег Вас(егторЬаде ТЬе )сеу то аиссе55 ш и5!пц РЬацешЫ5 !5 то ргераге а 5(ос)с оЕ Ье1рег ч!гиа тчЬоае тттег Ы ассига1е1у )спотчп. 1. 1п 20 ш1 оЕ 2х УТ шес)!иш, еатаЫ!5Ь а си!тите оЕЕ.
соц 5(га!и РН115 Егопт а 5!пц1е со1опу Еге5Ыу р!с)сес( Егош аирр1егпептес( пипипа1 ацаг р1ате5. 1псиЬате 1Ье си!тите ат 37'С чг!1Ь шос(егате ац!тат(оп ипН! 1Ье ОР геасЬе5 0.8. 2. Ргераге а аеПе5 оЕтепЕо!г( Й1ит!оп5 оЕ Ьас1еПорЬаце М!ЗК07 ш 2х УТ гпет(!иш, апт( р1ате а1пцио15 оЕ йе ЬастеПорЬаце а5 т(еасг!Ъет( тп Рготосо1 1 1о оЪташ тче11-!5о(атес( р!ат)ие5 оп а 1атчп оЕ РН115 се115. 3. Рк1с чче11-5ерагатес(, 5!пц!е р1ат)ие5 апт1 р!асе еасЬ р1ат)ие ш 2 — 3 ш1 оЕ 2х УТ шет)!иш сопташшц 1сапатпус(п (25 )тц)ш1) ш а 15-гп1 си11иге тиЪе. 1псиЬате йе !пЕестес1 си11иге5 Еог 12 — 16 Ьоига ат 37'С тч!й шот(егате ац!тат!оп (250 сус!е5/ш!поте).
А !МРОВТА1ЧТ 05е 51ос(т5 о( М13К07 т(ег)чет) (гота 5(пц!е Еге5Ыу р)с)сет) р!ат!ие5 !и 1Ье (оцоилпц 51е!75. 4. Тгап5Еег 1Ье (п(естес) си11иге5 то 1.5-ш1 5(егт1е шкго(ице тиЬе5 апс) септПЕице 1Ьепт ат шахипиш 5реес) Еог 2 пипше5 ат 4'С !п а пнсго(ице. Тгап5Еег йе 5ирегпатап15 то Еге5Ь тиЬе5 апс1 йоге йегп а1 4'С.
5. Меааиге йе Втег оЕ еасЬ оЕ(Ье ЪастеПорЬаце 5!ос(с5 Ьу р1ат)ие 1оппацоп (Рготосо1 1) оп а 51гатп оЕ Е. соБ Р' (ТС1, РН!15, ЫМ522, ог ХМ-В!ие) йа1 5иррогта 1Ье цготчй оЕ Ьас1епорЬаце М13. ТЬе тпег оЕ ш(естюит ЬастегюрЬаце рагПс1е5 ш йе 5(ос)г5 5Ьои!8 Ье 70'" р(и/ш!. Расагй апу 5(ос!с тч(тЬ а !отчет итег. Ршгосо! 8: Ргодис(ич 5(иИ!е-лггапдед О/ъ/А иий РЬа5ет/д Уесгоп ЗА7 Сг|Оч)(ЕЕ) оЕ КесопЗЬ|папЕ РЬарепшЬ чч$1$$ Не!рег Чтге$5 6. 5(геа)т Е)Н)15 себа тгапаЕотшед Ьу (3) 1Ье гесотпЬ~папт рЬа8еш(д апд (6) (Ье ешрту (рагеп1) рЬа8ешЫ честот опто 1|чо яерагате т'Т а8аг р1а1еь сои(а(и(иц 60 $|8/ш! ашрк|11(п. !псиЬате йе р1атеа Еог 16 Ьоига ат 37"С. 7. Р(с)с (3) аечета! со1оп(еь ттапяЕоппед Ьу йе гесошЬ(папт РЬа8епд|1 апд (6) опе ог пчо со!оп(еа тгапаЕоппед Ьу йе ратепт честог (пто атег(1е $5-ш! си1(иге тиЬеа |Ьат сопса)п 2 — 3 ш! оЕ 2х т'Т тпед3шп сопта)п!08 60 )|8/тп! ашрк(11(п.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
