Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 87
Текст из файла (страница 87)
ТЬе ргоЫегпа епсоиптегес1 ъетгЬ тЬыпетЬосГ аге япи1аг то тЬоае оит1тпетГ Гп Рготосо1а 3 апгГ 4. МАТЕК1АЕй САГГТГО!хГ: Р!еаае аее АррептГ!х 72 Гог арргорпа!е Ьапд!Гпк от пта!епа!а тагГтед ъи!Ь <Г>. Вобегк апд йо!66опВ Р!еаае еее Лррепйх ! Гог сотропепЬ о1 а!осГг ао!и6опя Ьи11ега„аптГ геаееп!я Рт1ите агосГт ао!ипопа !о ГЬе арргорпа!е сопсеп!га6опя Ейапо1 Л7аС1 Ьойгб РЬепо1 <Г> РЬепо1:сЫогоуогт 17:7, тгуи7 <Г> Ро!уетЬу1епе ВГусо1 (205ге иуи РЕС В0007 < ! > гл Н О 5осоигп асетате 13 М, рН 5.2) 5ТЕ ТЕ ГРН В.
01 ТгепС1 170 тм, рН В.07 Се!В гтВаготе Ве1а 10.ВЗге7 саиг т 0.5х ТВЕ, солга1п1лВ 0.5 рВ1т1 етЬгйит Ьгот1гте <! > Р!еате тее 5терт 6 аптГ 77. Мес11а ЕВ ог УТ тесоит соптат1пВ 5 тМ МВС1, Тгаптуег 250 тп! о1 тЬе птегГГшп тото а 2-Гттег ВатК аптГ театпт то 37'С Ьеуоге Втер 2. З.ЗО Рготосо!5: ЬагВе-яса!е Ргерагат!ол оГВастег!арЬаее М13 РАНГА 3.3! СепГг!Гоее5 апе! КоГог5 5огча11 С5А гогот ог едигааlелт 5огчаП 55-34 гогот ог едигиа1елт прес>а! Ее!и!ргпеп$ Согех селтпуиВе тиЬея ЕЗО т0 511)сол гиЬЬег ЬалсЕ 5!ел!е си0иге тиЬея 173 х 700 ттп ог 7 7 х 700 глт) АеМ!бопа! КеаеепГВ 57ер 5 оГ 7615 рготосоl гедииея йе геаВел15 11ятесЕ тл Рготосо)я 3, В, 9, алс) 70 оЕ СЬартег 7.
ЧесГог5 апе! Васют!а! Яга!пВ Е. со!! Г' р)аплВ Ьастела Р!еые яее ТаЫе 3-2 Еог а 1тят оЕ Е са11 ятгатпя яштаЫе Еог тЬе ргораВатюп оЕ ЬастегторЬаце М13. Ртс7ь а ап01е со1опу оЕ ап арргорпате Ьоят Егош а ГгеяЫу ятгеаЬетЕ М9 пншгпа1 айаг р1ате Еог Еготп ап Е.В р1ате соптатптпВ тетгасус1ше ог 7тапашус1п Еот ХЕ.Е-В1ие ятгатпя) шго 5 ш! оГ Е.В тп а 20-гп1 ятеп1е са!таге тиЬе.!псцЬате ЕЬе сц!шге Еог е-В Ьоигя ат 37'С ъч1ЕЬ шоъ7егаге аВттаттоп. ТЬе апп Ьеге!я то ачотЫ Вгоъчшц тЬе сы1тиге то патюпагу РЬаяе, ътЬтсЬ тпсгеаяея тЬе пя1с оЕ !оапек тЬе рт11 епсойет7 Ьу тЬе Р' р1аяпЫ, ВастегторЬаВе МЕ3 япц!е-ятгапъ1еъ1 7357А то Ье ияеъ1 ая а сетпр!ате Еог сегтатп турея оЕ одопис!еотЫеъЕтгестет7 птшаВепеяя яЬои1В Ье ргорааатет7 тп Е.
соВ Р' ятгатпя Ьеаг1пц пштатюпя тп ЕЬе т7ит апъЕ иие Вепея. Рог а тЕетат1етЕ рготосо! Еог шеъ71шп-яса!е цгоъттЬ оЕ ЬастегюрЬаее 1п тЬеяе гагашя, р1еаяе яее СЬартег 13, Рготосо1!. Вас1епорЬаВе М7 3 5тос)с РгерагеъЕ ая Веясг1ЬетЕ 1п Рготосо! 2 оЕ тЬЬ сЬартег. МЕТНОО Ргерага6оп оГ ВасГег!ор!тай М13 КЕ 0МА 1. ТгапяГег 2.5 ш! оГ р1абпц Ъастепа (р!еаяе яее Рготосо! 1) то а пеп!е тиЪе 713 х 100 пип ог 17 х 100 тпш).
АЕЫ 0.5 пт1 оГ ЬастегюрЬаце М13 ятос1с (-5 х 10" р6т) апс1 ппх Ъу тарр!па ЕЬе яс1е оГ ЕЬе тиЪе. 1псиЪасе тЬе шГестет) се!1я Гог 5 пипитея ат гоотп тешрегатиге. 2. Г3!!иге йе !пГестет! се11я !псо 250 ш1 оГ ГгеяЬ 1В ог т'Т шее)1шп солта)п)пц 5 тпМ тМВС1, ргеъчагшес! то 37 С !п а 2-!!тес йаяЬ. 1псиЪате Гог 5 Ьоигя ат 37'С ъч!й сопятапт, ч)аогоия яЬаЕВпц. 3. Нагчеят ЕЬе !пГестес1 се!1я Ьу септг)Гида!!оп ат 40000 (5000 гртп !п а 5огча!1 СВА гогот) Еог 15 пипитея ат 4"С. Кесочег йе яирегпатапт, ъчЬ)сЬ тпау Ье ияес1 Гог 1агае-яса!е ргерагапопя оГ я)па1е-я!галс!ее) ЪастепорЬаВе М13 ГЗ!ъ)А, ая т)еясг!Ьет1 ш 5теря 7 — 17 Ье!оъч.
4. Кеяиярепс) тЬе Ьастегта1 ре11ет тп 100 пт1 оГ Есе-со!В 5'! Е. Кесочег ЕЬе ъчаяЬсс) се11я Ьу ссптгтТиаат)оп ат 4000е !5000 грш ш а 5огча!1 СВА гогот) Гог 15 пшппея ат 4"С. 5. 1яо!ате ЕЬе Ьастег)орЬаае М13 с!ояеъ) стгси1аг КР 13)ъЕА Ьу йе а!)са!!пе 1уяя птейос1 ЕР1еаяе яее СЬартег 1, Рготосо! 3). 5са1е ир ЕЬе чо1шпея оГ 1уяя яо1шюпя арргорпасе!у. РипЕу йе ГЗЬЕА е)тЬег Ьу ргес!Рпапоп ъч)ЕЬ РЕС, Ьу со!шпп сЬготпатоцгарЬу, ог Ьу едш!тЪНшп септп6тцапоп тп СяС1-етЬ!с!!игп Ъгош!с!е агат)!ел!я.
6. Меаяиге йе сопсептгапоп оГ йе ГЗЫА ярестгорЬотошетпса!!у апс1 сопйпп Ья шсеВгпу Ъу ацагояе це! е!естгорЬогея!я. 5тоге йе с1ояет) с)гси!аг Гт)ъ)А ш яша!! ( 1 — 5 !та) а11диоп ат -20'С. ТЬе у1е!тЕ оГ КР ВЫА ехрестет1 Ьопт 250 ш! оЕ 1пЕестеъ7 се!1я В -200 рц. 3.32 СЬаргег 3: )Стог)аплЕ пай ВагтепорЬа8е М13 Стеетогт Ргерагабоп о1 Ьспц!е-81гапе!ег! Вас$егсорЬаце )ч113 тлМА То !хо!асе яп8!е-хсгапт)етс РЬЕА Егогп сЬе ЬассеНорЬа8е рагПс1ех !и сЬе !пЕессет1 сеП гпет)!шп, СгапхЕег СЬе 250-ш! хпрегпатапт Егош 5тер 3 Со а 500-ш! ЪеаЬег сопташш8 а тпа8пепс хпг- Нп8 Ьаг. Ат!П 10 8 оЕ РЕС апт! 7.5 8 оЕ ХаС! со сЬе апрегпасапс.
5с!г сЬе ьо!пПоп Еог 30 — 60 шспцсех ас гоогп сетпрегашге. Ело пос яа Еот!оп8ет репой оЕ сапе от ас !отчет сегаретасате Ьесапте ыптСетттетл Ьассепа! деЬта тпау ргестраасе. СоПесС СЬе ргеслрпате Ъу сепСН6л8апоп аС 10,000се (7800 грш ш а 5огчаП С5А гогот) Еог 20 ш!потех ас 4'С. !инесс йе сепспбл8е ЬогПе Еог 2-3 пиппсех со аПоч сЬе хпрегпасапс со т!га)п, апт! йеп пхе Кияч!Рех со гешоче сЬе 1ахс сгасех оЕ хпрегпасапс Сгош йе тчаПь апт) песЬ оЕ йе ЬогПе. АчоЫ соткЬЫ8 сЬе сЫп тнЬСсттЬ 81тп оЕ реестр!тагес! ЪассепорЬа8е раисе!ет оп йе аЫе аптс Ьоссопт оЕ сЬе сепспга8е Ъосс1е. Ат!д ! 0 тп! оЕ 1О тпМ ТНМС! (РН 8.0) со сЬе Ъосс!е.
5нн!г! йе тю!пПоп ш сЬе Ьосс1е апт! ихе а Раяепг ртрепе со Низе йе ят!ех оЕ сЬе Ъосс1е сЬогои8Ыу. ЪттЬеп йе ЪассепорЬа8е реПес 15 т!!ххо!чей СгапхЕег йе сю!ппоп Со а 30-тп! Согех септпбл8е СпЬе. 10. То йе ЬассегюрЬа8е хпхрепяоп, атЫ ап ет!иа1 чо!шпе оЕ ет!ш1лЪгасес1 РЬепо!, хеа! йе спЪе сч!СЬ а я!коп гиЬЬег Яоррег, апт! ппх СЬе сопСептх Ъу чогтехш8 ч18огопх1у Еот 2 ппппСея Септг!Е08е йе хо!ипоп ат 30008 (5000 грш ш а 5огчаП 58-34 гогот) Еог 5 ш!потех ат гоош сешрегашге. Тгапхуег йе пррег ат!пеоиь РЬаае со а ЕгехЬ сне апт! гереас сЬе ехсгаспоп сч!ЕЬ 10 тп1 оЕ РЬепоЬсЫогоЕопп. ЕЕ сЬете Ь а ЫяЫе СпсетЕасе Ьестчееп сЬе от8апк аптс ациеоот 1ауетя сЬеп ехстасс сЬе атспеоат т аретпатапт опсе плоте лнттЬ сЫотоЕопп.
Тгаихуег ет!па! агпоппсх оЕ сЬе ат!пеопх РЬахе со еасЬ оЕ снно 30-ш! Согех спЪея Ат!т! 0.5 тп1 оЕ 3 М хоеПшп асеСате (РН 5.2) апт! 11 тп1 оЕ ейапо1 Со еасЬ СпЬе. Млх йе хо!от!опт ъчеП апд йеп хсоге йети Еог 15 ти)потех ас гоотп сешрегашге. 13. Рееочег СЬе ргес!Рпате оЕ яп8!е-хтгапт!ет) РХА Ьу сепСН6л8апоп ат 12,0008 !10,000 гргп ш а 5огчаП 55-34 госог) Еог 20 ппписех ас 4'С. Саге6лПу гетпоче аП оЕ йе хирегпасапс. Мотс оЕ йе ртестраасе8 ЕтЬСА ах!11 со!1есс ш а йтп 81пт а!оп8 сЬе лна1!ь оЕ сЬе сепсп6л8е сыЬея То ачоЫ йкаггПп8 йе ГлЬЕА ассЫепса!1у, Ь Ь Ьетс со ататСт сЬе оистЫе оЕ сЬе сиЬел тнссЬ а реппапепс гаатЬет аптС то р1асе сЬе сиЬет Сп сЬе сепспЕеае госот тнтсЬ сЬе птагСтт Еассп8 оиттчаттС Стога сЬе ахь оЕ тосаОоп, 14.
АтЫ 30 ш1 оЕ 70% ейапо! ас 4'С со еасЬ спЬе, апт! сепсг!Е08е ас 12,000тт (10,000 грш ш а 8огчаП 55-34 госог) Еог 10 пппшех ас 4'С. СагеблПу гепюче ах шпсЬ оЕ йе хирегпасапс ах рохх!Ые, шчегс йе спЪез со аПосч тЬе !ахс сгасеь оЕ хпрегпасапс со т1га!п алчау 6ош сЬе ргес!Рпасе, апт1 лч!Ре йе пес)т оЕ йе спЪех хнссЬ К)шъч)рея Ма!ге тите йас йе ртеслртсасе тсоет пос т1Ые оас оЕ сЬе саЬея 16.
Меахиге сЬе сопсепсгасюп оЕ йе РХА зрессгорЬосошесгкаПу апд сопблгш Ьх шсе8гпу Ьу а8агохе 8е1 е1ессторЬогеяя 5соге сЬе с1охет! слгси1аг РХА ш яиаП (10-50 Сс8) а1щиосх ас — 20'С. ТЬе утеЫ оЕ ап8!е-тсгаптСетС ЕтЬЕА ехрессетс Еготп 250 тп1 оЕ ЫЕессетс си!сите ь 250 08 со 1 тп8. 17. А!!отч сЬе гехЫца! ейапо1 со ечарогасе ас гоопт сетпрегаспге. Р!яо1не сЬе реПеь !и 1 ш1 оЕ ТЕ (РН 8.0).
5соге йе РХА ас — 20'С. Рго1осо! 6 С!оп~пц ~про Вас1епорйаде М13 Чес1огь ° ЫПате т!оиЫе-зтгапс)ед зе8шепгз оЕ Р1чА ъч)тЬ Ыипт ог соЬеяче |егпиш !п|о сотпраПЫе я|ез !п |1оиЫе-зтгапт!ес) М13 КР РХАз. ° 1)зе йе ргос)истз оЕ |Ье П8ат!оп геас|юп |о СгапзЕогш соп|ре|еп| тпа1е Е. соП сеПз, тчЬ|сЬ аге р1атет) ш Сор а8аг соптатп)п8 1РТО ап|1 Х-8а1.
° Рте)с апс) ргора8а|е Ыие 1попгесотпЬ)пап|) апт! тчЬ!те (гесошЬ)пап|) р1ат)иез арреаг)пц аЕтег 6 — 8 Ьоигз аз т)езсг!Ъет) ш Рготосо1 2. ТЫз Ыие-тчЬ!те тез| )з ап ехсеПепт !пт!тсатог, Ьит К !з по| !пЕаП!Ые: Кате гесотпЬ!пап| ч!гизез ге|а!и йе аЪ|1Ку |о 8епегате Ыие р1ат)иез.
Оп апа!уз!з, йе зе8шепт оЕ Еоге)8п РХА !п йезе апоша!оиз гесоп|Ъ|пап|з )з 8епегаПу Еоипт! |о Ье чету япаП вЂ” регЬарз <100 Ъазез — апт) !пзег|- е|1 |и-Егатпе !пто |Ье 1ттсУ зет)иепсез оЕ |Ье чес|ог (е.8., р1еазе зее С1озе е| а!. 1983). ТЬе гея|16п8 Еияоп рер6|1е гета|пз зиЕПс)епт а-согпр1ешепПп8 асПчКу |о Пепегате а Ыие р1ат)ие !п шесПа сопташш8 1РТО апт! Х-Па!. А!йои8Ь |Ьеге |з по 1ипК !п |Ьеогу то йе з)хе оЕ |Ье Ега8шепт оЕ Еоге|8п РЫА йаг сап Ъе сагг)ет) !п ЬастегторЬа8е М13 гесошЪ|паптз, йеге аге гезтгтст!опз !п ргаст!се: Ьаг8ег зе8шептз оЕ Еоге|8п РЬ)А аге Еаг п|оге 1ЕКе!у |о зиЕЕег т!е!ет)опз апт! геаггап8ешептз |Ьап япаПег Ега8тпептя рог й|з геазоп, К тз Ьезт тчЬегечег розяЫе то с!опе што Ьастег!орЬа8е М13 р|есез оЕ Еоге)8п РЫА йат аге по итоге йап 1000 Ъазез ш !еп8|Ь.
1п атЫ!тюп, йе сеп|га1 ге8)опз оЕ 1аг8ег Ега8- тпеп|з п|ау Пе оитяде йе гап8е йат сап Ье геасЬет! !п РЬ)А зет)иепсш8 геасПопз рг)шее) Ъу йе иптчегза! "Еогтчаг|Г' апт! "гечегзе" зес)иепстп8 рг)гпегз. Ыш)т |Ье оррогтип!т!ез Еог |1е1етюп ап|1 ойег геаггап8егпеп|з оЕ с1опес) РХАз аз ЕоПоъчя ° Кеер |Ье Ега8тпептз оЕ Еоге|8п РЬ)А аз зп|аП аз |Ье ехрептпепс чпП аПоъч.
° Ро по| ргора8а|е гесошЬ|пап| ЬасгегторЬа8ез Еог пюге йап опе ог тъчо зег)а1 разза8ез |п си1- |иге. ° Кесочег т!оиЫе-зтгапт!ет! РЬ)А Ега8шеп|з Егош М13 гесошЪ|пап|з аз зооп аз розяЪ)е аЕтег з!те-Йгестет) шита8епеяз. 3.33 3.34 Отартет 3: Итог!стпц тч)т)т Вастет1ор)аце М!3 Ъестотз РезспЬед Ъе!очт аге йгее д1ттегепт шейодз сопипоп!у изед то сопзтгист ЪастепорЬаце М13 гесотпЪ|пап|я ° С1оптц Ьу 11ца6оп оу тзегт то 11ттеаг)аед честог.
А яте чт1|Ь)п |Ье пп|16р1е с!оп|пц гец)оп от' |Ье честог ь с!еачед чч1|Ь а ыпц1е гезтпс6оп епхуше, апс1 йе гези16пц 11пеаг РХА ь 11цасед тч1|Ь а йгее- то ттчето!д пю1аг ехсеы от тоге)цп РХА йа| Ьаз соп|ра6Ые сегпиш. Хо ейогт 1з тпаде то гедисе |Ье Ъас)сцгоипд от" попгесошЬ)пап| ч)гизез тотшед Ъу тес)гси1апкатюп от йе чес|от ог то зирргея йе тотшатюп от сЬипег|с с!опез. ТЬ)з |пе|Ьод 1з Ьез| зштед то с1оп|пц а япц!е зецшепт от' РХА — регЬарз рипйед ттош а це1 — ш ргерата6оп тот яте-д)гестед пштацепеыз, РХА зет!иепс)пц, ог зупйеяз от" гад)о1аЬе1ед ргоЪез.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
