Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 70
Текст из файла (страница 70)
!Е сЬе 61сегя аге с1гу, 6оас йе Ъа)сес1 ог сгояя-)ш)сес) 61сегя оп сЬе яигуасе оЕ2х 55РВ ип61 сЬеу Ьаче Ьесоше сЬогондЫу ъчессес) Егош Ьепеай. 5иЬшегде йе 6)сетя )ог 5 ш)писея. Ма!се сиге йас по а(г ЬнЬЫея аге сгарреь) нпъ)ег сЬе 61сегя. ТЬе 6!сетя яЬон1с! сЬапде Егопз ъчЫсе со а Ышяд со1ог ая йе ас)неона яо!чепс репесгасея сЬе рогея оЕ сЬе 61сег. Ма)се яые йас сЬеге аге по ъчЬзсе ароса ог рассЬея гепзашшд оп Йе 61сегя Ье(оге ргосеейпд со 5сер 2. 2. Тгапяуег йе 61сегя со а Ругех йяЬ ог осЬег ЬуЪпйхасзоп сЬашЪег сопташшд ргеЬуЪпйха6оп яо)исюп.
Е)яе 3 ш1 оЕ ргеЬуЬпйха6оп яо1и6оп рег 82-ппп 6!сег ог 5 ш1 рег 132-ппп 61- сег. 1псиЬасе сЬе 6!сетя ъч)сЬ депс1е ад)сасюп оп а госуйпд р)асуогш Еог 1 — 2 Ьоигя ог гпоге ас сЬе арргорпасе сешрегашге ().е., 68'С ъчЬеп ЬуЬпйхасюп )я со Ъе сагпес) оис ш ас)неона яо)ис)оп; 42'С ъчЬеп ЬуЬпсбхасюп ь со Ъе сагпес) ош )п 50% Еогшагп)с)е). НчЬакчег суре оЕ сопса1пег Ь няей йе нирогсапс розпс Ь йас йе 6!сетя аге сошр!есе1у сочегеь) Ьу йе ргеЬуЬгЫпабоп ю!исюп.
Рнппд ргеЬуЬпйхасюп, ясея оп сЬе пзсгосе!!н1ояе 6)сег сЬас попяресйса1- 1у Ьспс1 япд1е- ог с)онЫе-я!гааз)ес) Р)ъ)А Ьесоше Ьонпс( Ьу ргосе(ппп йе ЫосЫпд ю1шюп. Ад(сасюп епгнгея Йас йе 6!сетя аге соп6пноня1у Ьайеь) !п апъ) ечеп1у озасеь) Ьу сЬе ргеЬуЪпйхасюп 6нЫ. СНЬесЬег ог пос со ые а рсеЬуЬпйга6оп ю1нИоп сопсаинпд ЕоппагпЫе Ь 1агде!у а гпапег оЕ регяопа! РгеЕегепсе. Вой чеьюпя оЕ Йе гесопипепс(еъ) яо!пдопя д(че ехсе!1епс геян!ь апс( пеЬЬег Ьая с!еаг-снс аъ(чапсадея очег сЬе осЬег. Ноъчечег, ЬуЬпйхас1оп зп 50% ЕоппашЫе ас 42'С зя 1еь ЬагяЬ оп пбгоседи1ояе 6!сетя сЬап В ЬуЬпйхасюп ас 68'С ш аъ)неона яо1нИоп.
Ойяес6пд ЙЬ ас(чан!аде Ь сЬе съчо- со сЬгеесо!8 я1он ег гасе оЕ ЬуЬпйхаиоп 1п яо1шюпя сопташспд Еоппаш(с(е. Ыу!оп ВЬ сеь аге згпрегчюня со сЬе с(е)есег(оня ейесь ос ах(неона ЬуЬпйхасюп ас ЬздЬ сезпрегашсея. 3. Репа!иге ятр-)аЬе)ес) с)оиЫе-я!ганс)ес) ргоЪея Ъу Ьеа6пд Еог 5 пшшсея ас 100"С. СЬз1! сЬе ргоЬе гар)с))у )п ке ъчасег. 5)пд!е-я!гипс)ес) ргоЬея пеес) пос Ъе с)епасигес). А!сегпадче!у, сЬе ргоЬе пзау Ье ъ(епаснгес) Ьу ас)6!пд О. ! чо1шпе оЕ 5 сс ЫаОН. Айаг 5 пнпнсея ас гоогп сезпрегаснге, сгапя(ег Йе ргоЬе со ке ъчасег апъ) асЫ 0.1 чо1шпе оЕ ! М Тпя-С! (РН 7,2) апс1 0.1 чо) н те оЕ 2 5 п НС!.
Айег с1епаснгасюп, стоге йе ргоЬея !п ке ъчасег нп61 пестрей Ас !оъч сепзрегасиге, йе гасе оЕ геаяпос(асзоп оЕ РХА Ь ехсгепзе!у я1оъч апз) еяеп6а1!у йе ргоЪе гепзазпя (п а ыпд)е-ясгапъ(ес( Еопп. Весъчееп 2 х 10' апс) 1 х 10 српз оЕ з'Р-!аЬе!еь) ргоЪе (яресзбс ас6чзсу 5 х 10 срш/Ссд) яЬон!6 Ье наес( рег пи1НЬег оЕ ЬуЬ|Ысяадоп яо!шюп.
1)япд споге ргоЬе саняея сЬе Ьас)сдгонпс( оЕ попярестдс ЬуЬпйгасюп со (псгеаяе; няпд 1ея гес(нсея йе гасе оЕ ЬуЪгЫ(сас(оп. И гайо!аЬе!ес( о)!Воине!еосЫея аге наес) ая ргоЬея зп ЙЬ ясер, р1еаяе яее СЬарсег 6, Ргососо1 1О, ог СЬарсег 10, Ргососо! 8 Еог ЬуЬгЫ!хасюп апъ( ъчаяЬ(пд сопйсюпя. РЕ)К!Тз' ОГ РКОВЕ5 !с ь еяяепс!а( йас ргоЬея ияес( со ясгееп ЬассегюрЬаде Л ! )Ьгапея сон!а(л ло яес(иеп сея йас ъч46 ЬуЬг!с) !хе Со РХА яес)иепсея !п Йе чессог. 5ечега! ЬассегюрЬаде Л нес!ига, яисЬ ая Лд(11, ЛОКГ8, !атЬс)а УАР апс) юспе оЕ сЬе ) СЬагоп Ьассег!орЬадея, сон!а(п йе Е.
сод (ас2 депе, е!Йег Еог зпзпюпосЬепнса( ясгеепзпд ог ая рагс о( а р1аяпЫ !пседгасес) !псо 1Ье ЬассегюрЬаде депогпе со аяя!яс чисЬ геясне о( с!опес(, яес!иепсея, ог ая рагс о( сЬе сел!та! яййег Егадгпепт. Весаняе Рг(А ргоЬея аге ойеп ргерагес( Ьопз Ьпд- гпепь оЕ р!аяш!с)я сЬас сон!а(п а) ! ог рагс оНЬе !ас2 депе, ечеп а ягпа)! агпоипс о( сопсагп(пабоп ъи(! саые сЬе ргоЬе со ЬуЬпс()хе !пддсппипасе!у со ЬассепорЬаде р!ас)иея. То епянге сЬас а РЫА Егадпзепс с(оея лос сон!а!и яес)непсея сЬас аге согпр!егпепсагу со сЬе честог, ъче гесогпгпепс) О) рнп(у!пд йе РС(А язссея- яне!у сЬгоидЬ Ьчо де!я (адагояе ог ро!уасзу!агпЫе) ая с(еясг!Ьес( зп СЬарсег 5, Ье(оге сапу!пд оис (Ье гай- о!аЬе!зпд геассюп, ог (6) ргераппд йе ргоЬе Ьу РСК апзр!!Всатюп апс) рнпдса6оп (р!еаяе яее СЬарсег 8, ,' Рготосо! 1), Ркокосо! 22| НуЬкк)!хабоп о! Васкег)орЬаде ОХА ои Р|1ссгв 2.99 4.
А|Ы сЬе с)епасигес) ргоЪе со йе ргеЬуЪг!с)!хас!Оп во!исюп сочеппд йе 61сегя 1псиЬасе йе 6!|егв Еог 12 — 16 Ьоигв ас сЬе арргорпасе сешрегашге (р!еаве вее СЬарсег 6, ргососо! 10). Рапид ЬуЬпсдхасюи, )ссср йе сопка)иегв Ьо!сдид йе 61сегв 68Ьс1у с!овес) со ргечеис йе 1оп оЕ Вшд Ьу ечарога0ои, То и|ахии|ае йе гасе оГ аииеаВид оЕ йе ргоЬе сч)сЬ |ыагдес, ЬуЬпсдкас!оив аге |ьиа1!у сагк)ес) оис |и во1идоив оЕ ЬгдЬ юик вскеидй !6х 55С ог бх 55РЕ) а| а |еи|регасиге йас Ь 20 — 25'С Ье1о|ч йе и|е10ид се|ирегасиге !Р!саве вее СЬар|ег 1, Ргососо!в 28-30 ог СЬарсег 6, Рго|осо! 10). Вой 55РЕ аис) 55С |чог1| еоиа11у |че11 |чЬеи ЬуЪпйкасюи Ь сакс!ег) ош Ги ациео|ь во1чеисв, Но|чечег, |чЬеи ГоппашЫе ь )ис)иг)ес) Ы |Ье ЬуЬпйхасюи ЬиГГек, бх 55РЕ Ь ргеуеггес) Ьеса|ье оЕ Ьв дгеасег Ьиссек)ид сарасЬу. Рог а деиега! |Квсивяои оГ йе Еассоь йас аЕЕес| йе гасе аиг) |рек|деку оЕ ЬуЬпйкасюи оЕ кайоасдче ргоЬев |о иис1ек асЫв |иииоЬ|1|аеО ои во1Ы виррогсв, р!саве все СЬар|ск 6, Рго|осо1 10.
5. |А|Ьеп сЬе ЬуЬпс!!гас!оп !в сошр!егер, г)и)с)с)у гешоче 6!сегв Ггокп йе ЬуЬпйлас!Оп 801и6оп ап|1 кттег)|пкс)у !шшегве |Ьегп ш а 1агде чо1шие !ЗОΠ— 500 |п1) оЕ'чскавЬ во1шюп 1 ас гоокп сешрегасиге. Ад!саге йе 6!сека депс!у, сш пшд йе|п очек ас 1еавс опсе с)иппд ъчавЬшд. Айег 5 ппписев, сгапвуег сЬе 6!сегв со а ГгевЬ ЬассЬ оЕ ччавЬ во1исюп апс! сопс|пие со ад!гасе йе|п депс1у.
Кереас йе счавЬ!пд ргосес!ике с|ч!се пюге. Ас ио паде с)ик)ид йе |чавЬкид ргосег)иге вЬои!О сЬе В!сеь Ье а1!очке|) со г)ку ок со вс!с)с |одейек. Ои!у а яиаП Егассюи оЕ |Ье ргоЬе Еопив врес!Вс ЬуЬгЫ| к)сЬ сЬе сагдес вег)иеисев !шшоЬ!!Гкег) ои йе 61|егв. ТЬекеЕоге, ЬуЬпйхасюи во1исюив гиау Ье гесочеге|1, яоке|1, аиг) кеше|1 Еог а |скоп|1 копи|) оЕ ЬуЬпсдкасюи. Ногчечег, йе |исеиясу оЕ сЬе ядиа1 оЬ|а!иег) скоки кесус1ег) ЬуЬп|6аасюи во1иВои шау Ье гес)исег) Еог а чакксу оГ геаюив: сЬе гес)осе|с врес)Вс асВч|су оЕ йе ргоЬе с)ие со гасдоассье гСесау, г)едгаг)асюи оЕ сЬе ргоЬе г)ик)ид шсиЪа6ои, аи|1 геиасшасюи оЕ доиЫе-всгаий е|1 ргоЬе диппд йе Вгвс ЬуЬпйка0ои веер.
6. ЪЧавЬ сЬе 6!сека ссч!се Гог 1 — 1.5 Ьоигв ш 300 — 500 и|! ОЕ'|АкавЬ во1и6оп 2 ас 68 С. ЪЧ)сЬ ехрепеисе, и ь роя|Ые |о |ье а ЬаийЬе16 пюи!гок со се|с |чЬе|Ьег |чавЫид ь сои|р!есе. 1Г йе Ьас)сдгоиис) Ь |611 соо ЬздЬ ок |Т йе ехрепгиеис |Геигаис)в |чавЬгид ас Ь)дЬ япидеис|ев, иигиегве |Ье 6!сегв Еог 60 иииисев )и 300 — 500 и|1 оЕ ЪЧавЬ во1шюи 3 а| 68'С.
7. Г)гу сЬе 61сегв !и йе а|г ас гоогп сегпрегасиге оп вЬеесв оГЪй~асгпап ЗММ рарег ог всас)св оЕ рарег спике!в. 5сгеаЬ сЬе ипс)егв!с!е оГ сЬе 61сегв сч!ЕЬ а ъчасег-во!иЫе д!ие 86сЬ апс! аггапде сЬе 6!сека (пшпЬегес) я|1е ир) оп а с!сап, |1гу, 6ас вЬеес оЕ ЗММ рарег. Кбпп!у рге|ь сЬе 61- сегв ада!пвс сЬе ЗММ рарег со епвиге сЬас сЬеу ссо пос гпоче. Арр1у ас!Ьев!че 1аЪе1в киаг)сес! иг!ЕЬ гас!!пасс)че |п1с ог сЬепп1шп|певсепс гиаг1|егв со вечега! авупипеспс 1оса6опв оп сЬе ЗММ рарег. ТЬеве гпаг)сека векче со а1!дп сЬе аисогаебодгарЬ мг!ЕЬ йе 61сегв. Сочег йе 61- сегв апс)!аЬе!в сч!ЕЬ Вагап ||кар)С1!ид Иш. !)ве саре со весиге йе |стар со |Ье Ъас)с оЕ сЬе ЗММ рарег ап|1 всгессЬ йе |стар очег йе рарег со гешоче ът!ОИев.
8. Ехрове сЬе 6!сегв со Х-гау 61ш (Кос)а)с ХАК-2, ХАК-5, ог сЬе)г ес)и!ча)епс) Еог 12 — 16 Ьоигв ас -70"С счтй ап !псепв!Еу!пд всгееп. 9. Рече!ор сЬе 61кп апс! абдо К чч!ЕЬ сЬе 61сегв ияпд йе кпаг1св !ей Ьу йе гасбоас6че |п)с ок 6и- огевсепс шаг)сег. ТЛе а попгасбоасссче гес) 6Ьег-6р реп со шаг)с сЬе 6)ш г й сЬе роя6опв оЕ сЬе авупипесгка11у !оса!ее) с)осв оп сЬе пишЪегес) 61сегв. 1О. Ыепс!Гу йе роя6че р1ас)иев Ъу а1!дп!пд йе опепса6оп кпаг1св сч!1Ь |Ьове оп |Ье адаг р1асе. ЗЧЬеи с)ир1)касс веь оГ ЯЬекв аге ЬуЪпсдхе6 со сЬе ваи|е ргоЬе, йеге ы !ея сЬаисе оЕ соиЕияид а Ьас)сдгоиисс ашик!де сч)сЬ а ров|с|хе р!ас)ие.
Р!с)с ои1у сЬове р!сопев йас у!е18 соич|ис|ид ЬуЬий|асюи ядиа!в ои Ьой всь оЕ В!сегв Еок Еигйег аиа!уяв, ЧЧЬеи всгеешид а деиошк 1|Ъкагу Еог а яид1е-сору депе, ехресс |о Е|иг) ио киоге йаи оие роясье с!оис рег 10| р!аг)иев всгееией '|ЧЬеи всгеешид сРЫА 1!Ьгапев, йе ишиЬег оЕ рояс|чев с)арсис)в ои сЬе аЬииг)аисе оЕ сЬе шКНА оГ )и|счев|. Рдсегв 8!пес) со ЗММ рарег агс геа|61у гсшоче|Г ш ргерага6ои Еог вспрр!ид !Р1саве вес СЬарсег 6, Ргососо1 10) Ьу р!ас!ид йе ЗММ рарег сч!сЬ ассасЬес) гиегиЬгаиев |и а сиЬ оЕ 2х 55С. ТЬе па|агап!иЫе 81ие йыоЬ с| Ги |ЬЬ во!шюи, ге!еаяпд йе 61сегв Еог сгаивуег |о а пирр|од во1исюи аиг) а копи|) оЕ ЬуЬгЫпасюи со аиосЬег ргоЪе, |Ее)ев!гес). 2.100 СЬарсег 2: ВассегюрБаее г.
апг(1гг Ъессогг 11. РЫ14 еасЬ роябче р1ас!ие аа с)еасг!Ьес( ш Ргососо1 2 апс! асоге !п 1 ш1 оЕ 5М сопсашша а с)гор (50 р1) оЕ сЬ!ого(огш. !Е сЬе а11апшепс оЕ йе 01сега ю11Ь сЬе р1асе 6оеа пос реппп Ыеп60сасюп оЕ ап спйчЫиа! ЬуЬг161гспа р!аг!ие, ап аааг р!иа сои!а!и!па аечега! р!аг!иеа !п сЬе агеа оЕ гпсегеас аЬои16 Ъе согег1 иа!па йе !агае еаза оЕ а асеп1е Раасеиг ргреие. Уае а ЕгеаЬ рсрепе со соге еасЬ ЬуЬпйгапоп-роя6че агеа. 12. То рипуу а ЬуЬг!с(!гас!оп-рог!11че р!ас!ие, р1асе ап а1п!иос (иаиаПу 50 ф оЕ а 10 с Й1ис(оп) оЕ сЬе Ьассег!орЬааеа сЬас аге гесочегес! Егош сЬе согес( аааг р!иа апс( ргосеес! ъчпЬ аиЬаес!иепс гоипсЬ оЕ асгееп(па Ъу ЬуЬг(с(!гас!оп. 16еа11у, сп а аесоп6 гоип6 р!ас!па, йеге аЬои16 Ье -300 р1аг!иеа оп а 100-пнп р!асе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
