Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 73
Текст из файла (страница 73)
ТЬе улеЫ оГ ЬассепорЬаВе рагос!еь (апс) Ьепсе Р)ч)А) ы Вгеас!у аГЕессеН Ъу сЬе аЬсю1ше атонпсг апд ге!асгче атоипгх оГ Ьассег!орЬаВег апд Ьассепа! сеаа лп сЬе лпосн)шп Гог )Ье 1гашН 1ухасе. ЪНЬеп на!пН ап нп(апноаг яга!п о( Е. соН, Ъассег!орЬаНе х чесгог, ог гесоплЪлпанс, лс )г Ъелс со хес ир а хепех оЕ сн! сигал сопса!и!пц лНГЕегепс гагюа оЕ Ъассепа апс) ЬассепорЬаНех. Ргераге ЬассепоРЬаце х РХА Егогп еасЬ оЕ )Ье геен!НпН Ннн!Н 1улагех. 3. АсЫ 4 ш1 оЕ )х)ХС'с'М гпейшп, апс1 лпсиЬасе йе си1(иге Еог -9 Ьоигх ас 37"С лч!(Ь чьцогоиъ аН!(ас!оп.
ТЬе си1сше хЬон!д с!еаг, Ънс чегу !ли)е с!еЬпа хЬон14 Ъе ечЫет. В!ух)а сЫех пос оссиг ог ь !псогпр!е(е, асЫ ап ес)иа) но!игпе оЕ ргеччаггпед МЛСТМ тесНит со йе ол!- илгех апс) соги)пие пзсиЬаНоп Еог а Еипаег 2 — 3 Ьоигь а( 37'С ччНЬ ч!Ногина аННаНоп. ТЫа а(ер сМН оссаяопаНу с)пче Нле сиаиге !о соплр!е!е!ух)ь (апс) ргос!исе а ЫНЬег у)еЫ о( ЬассегюрЬаНе 0)х(А). РгоЫегпх аотеотеа агЬе Ьесаиае т!п)ргерагаНопх о( ЬаесегюрЬаНе РЧА аге соп(агп)насел) Ьу Ьас(егаН РЬ)А ог К)ч)А.
)п !Ых саве, сННехг йе си!сиге!уха(е чи(Ь РЬ)аае 1 Ье(оге ЬассЬ сЬгогпасоНгарЬу оп ОЕ52. То )пс!ис)е (ЬЬ х(ер, асЫ сгис)е рапсгеаНс Равиче ! (р!еаче нее Ргососо) 6) со а Нпа1 сопсепсга(юп оЕ 10 пфп) Ье(о ге яагН пН 5(ер 4, апс) 1псиЬасе йе )ухасе Еог 30 гп(пи(еь а! 3 TС. ТЬегеайег сопН пне гай (Ье гегпа(пс)ег оЕ йе рго(осо1. Рйахе ггеасгпепс с(есгеахех йе Масон!Еу ОЕ (Ье 1ухасе апс) гпау епЬапсе гегпона( о( Е, соН цепогп(с РХА апс) КйА Ьу РЕАЕ-сеНи!оае сЬгогпасоНгарЬу.
2Л08 СЬарсег 2: ВассегсорЬаце )с аис1 Есз Ъессогз 10. 14. 15. АсЫ О.! сп1 оЕ сЫогоЕопп со СЬе семге апс1 сопПппе шспЪаПоп Еог а йгйег 15 пиписез ас 37"С чч)сЬ пцогопз ациаПоп. ТгапзЕег йе 1узасе со а 5-пл1 ро!ургору1епе сепспЕпце сне. Сепспйце ас 8008 (2600 грш 1и а 5огчаП 55-34 госог) Еог 1О ииписез ас 4"С. ТгапзЕег сЬе юрегпасапс со а ЕгезЬ шЪе, апс) гешоче йе Ьассепа! с!еЬпз Ъу сепспйцаПоп ас 40008 (5800 грш ли а 5огчаП 55-34 госог) Еог 10 иипшез ас 4'С. А яиаП а10!пос оЕ с1еагес1 !узасе сап Ье зес аяс1е ас сЬлз зсер аз а ЬассепорЬаце зсос1с зо106оп.
5соге йе зсос1с ас 4'С очег сЫогоЕопи. Рсзрепзе 1О ш1 оЕ а 2:! 51иггу оЕ РЕ52 гез)п !иго а ЕгезЬ сепспблце сне апс) зегцшепс йе геяп Ьу сепспблца6ои ас 5008 (2000 грш ш а цогчаП 55-34 госог) Еог 5 пиппсез ас гооги сешрегашге. алешине йе юрегпасапс Егогп йе геяп рецес апс1 р1асе йе сепспйце сне оп ке. Кезпзрепс) СЬе РЕ52 ш йе с1еагес! ЪасгепорЬаце Х юрегпаСапС апс1 ацосч йе ЪаслегйрЬаце рагПс!ез со аЬюгЬ со йе геяп Ьу гос)с!пц йе сепсп6лце спЬе Еог 3 ииписез ас гооси сешрегайге. Сепспйце сЬе ЬассепорЬаце ). зирегпасапс/РЕ52 51иггу ас 40008 (5800 грш )и а 5огчаП 55- 34 госог) Еог 5 гпшисез. СагейПу сгаизЕег йе юрегпасапс со а ЕгезЬ сепспйце шЬе апс1 гереас сЬе сепспйцассоп зсер, Р!зсагс) сЬе рецес айег еасЬ сепспйцаПоп. Тгапзуег йе юрегпасапс Егош йе зесопс) сепспйцаПоп со а 6.езЬ сепсп6лце сиЬе.
Ехсгасс йе юрегпасапс, лчЬкЬ сопсашз йе ЬассепорЬаце Х рагПс!ез, оисе сч)сЬ рЬепоЬсЫогоЕопи. ТгапзЕег сЬе ас!иеоиз рЬазе, лчЫсЬ сопсашз сЬе ЪассепорЬаце Х РХА, со а Егей ро1ургору1епе сиЬе аис) ас)с! ап ес)иа! но1шпе оЕ 1зоргорапо1. 5соге сЬе пихсиге Еог 1О пиписез ас — 70'С. СоПесС сЬе ргес)рПасес1 ЬассепорЬаце РЬ)А Ьу сепспйцаПоп ас 16,5008 (12,000 грш ш а 5огчаП 55-34 гогог) Еог 20 пиппгез аС 4 С. Рга!п йе сзоргорапо! Егогп сЬе сепсп6лце сиЪе апс) аПосч йе реПес оЕ РЬ!А со с1гу ш сЬе асг. Р)ззо1че йе РЬ)А рецес 1и 2 ш! оЕ 1осч-за!с Ьийег. РипЕу йе ЬассегюрЬаце РЬ)А Ьу сЬгопласоцгарЬу оп ап Е1ис!р-с) со!шпп аз с1езспЬес1 1и Ргососо! 23.
Мсх ! пл! оЕ ейапо1 сч!СЬ СЬе ю106оп оЕ е)илес) Р)х)А апс) шсиЬаге СЬе пихлиге оп ке Еог 20 иипшез. СоПесс йе ргес)рссасес) РХА Ьу сепсп6лцаслоп ш а ипсгоЕпце, сцзсагс1 йе юрегпасапс, апс) пизе йе рецес оЕ РХА сч!сЬ 0.5 ш1 оЕ 70% ейапо1. Рсзсагс! йе ялрегпасапс апс1 ацосч йе ейапо! со енарогасе. Рсаю1че сЬе с1аплр реПес оЕ Р)х)А !и 50 )с! оЕ ТЕ (рН 8.0).
лсезозреис) сЬе РНА Ъу сзрршц оп сЬе яс!е оГ сЬе соЬе. Тгу со ачосц чогсехспц. 11 сЬе СлЬСА ргочез с)сСВсисС Со цлззосня госоЬаСс СЬе СнЬо !ос Л5 иПонгез аС 50"С. 1Е пнисргерагассопз зге снос!глиц счец, ехресс ш ьо!зсе -5 рц оу риссВсес) ЬассеиорЬзце РВА Егоис 5 х со'з лиуеспоиз рагссе!е. 1с ь розяЪ|е со езснпасе сЬе с!изпсссу оу!>ассессорЬаце СлгсА ргезепс сп а р!аСе 1узаСе ог 1сс)шс) си!Шге !узаСе!лу сцгесС ацасозе це! е!есСгорЬогеяз (р!сазе зее РсоСосо! 7). Рог гезспспоп ава!узВ аос! зцасозе це! е1есссорЬогеяз, йцезс з 5-10-р! а!сслоос оЕ сЬе сезозрепс)- ес) СлЬСА.!Е геязсапс со с!езчаце, ссеас сЬе РХА заиср!ез ассогсцпц со сЬе исесЬос) с)езспЬесС га АОРСТЮНАЬ РРОТОСОР КЕМОЧСЫС РОссцАССНАК)РЕ5 Вс' РАДЕС!Р!ТАТ!ОН САС!ТН СТАВ сп Ргососо! 25.
ЕаЕогтаВоп Рапе1в 2.109 ВАСТЕК!ОРНАСЕВс Н!$ТОК!САЕ РЕКБРЕСТ!ыЕ 1п 1909, рге|1епс1| ъй11ьапь Тъчогс иьав та|1е Рсгессог оЕ тЬе Вгоъчи Апипа1 дав!сагу !пвсссисюп ш Ьопьтоп, ъчЬ|сЬ Ьаст Ьееп вес ир -40 уеагв ЬеЕоге ав а Ьоврьа! "Еог сЬе саге аист сгеастепс оЕ т2иастгиреъсв апс! Втгь!в |ье6|! со С|4апУ Тъчогс, ъчЬо Ьаьт Ьееп тгаше|1 ав а шссгоЬю!од!в|, Ьаь! опе всьепППс Ыеа сЬат Ье ригвие|1 аП оЕ Ьь Ие — тЬас расЬодепк Ьастепа пеес!ест ап Тдввепсса! 5иЬяапсе" Сот дгоъч|Ь аист чПа1Пу.
ЕасЬ огдапыиь геь!и!гесс а |11ЕЕегепс пшпепс ялЬыапсе сЬас |чав поппаду ргочЫеьт Ъу сЬе шЕессест Ьовс. ТЬы |чав ап иирогсапс Ыеа ат тЬе сапе, орешпд ир ап епсье Псе!0 оЕ сЬе пшпсюпа! гес!итгешепсв оЕ Ьассепа аист 1еадшд со сЬе ъ!ече! ортепс оЕ чассшев Еог расЬодепк огдапсвшв сЬас ргечогь!у Ьаь! Ьееп ипроя|Ые со си1сиге. 1п 1914, Тъчогс вес оис со Ыеп|ЕЕу сЬе е!ияче виЬвсапсе йас ъчои!П аПоъч чассьша ч|г|ь со дгоъч ш чиго. Ас йас Пгпе, япаПрох чассспев счете ргерагеьт ш йе в!сш оЕ са1чев аист ъчеге а1июя а1ъчаув сопсапипасе|1 и|1|Ь 5|ар!ту!осассив.
Тъчогс ъчопстегест ъчЬейег йе сопсаиипаПпц Ьассепа иидЬс Ье сЬе воигсе оЕ йе емепПа! виЬвсапсе Еог чассииа. Не р1асеь! йе втадрох чассше оп писпепс адат в1апь аист оЬ|ашеьт 1агде Ьассепа! со!опкв оЕ вечега1 со1огв. 1п а|!с!1|юп, ъч1|Ь йе аЫ оЕ а Ьаыд 1епв, Ье ваъч пиписе ц1аяу агеав сЬас Еадеьт со дгоъч ъчЬеп виЬси1сигей Не с!иссЫу геадхес! сЬат сЬеве ъчеге пос ь!едепегастче сЬапдев Ьис гасЬег ъчеге йе епс! яадев оЕ ап асисе шЕессюсь ьтсвеаве сЬас ьтевсгоуеьс сЬе Ьассепа! седл апьс сои!д Ье а|с|По|аду сгапяиП- сеь! Егои| опе всарЬу1ососса! со!опу со апосЬег. 1п а риЫкасюп ш йе 1аисес |п 1915, Ье саПе|1 сЬе сопсадтоп |Ье Вассегю1ус|с Адепт. АйсППопа1 ехрепп|епсв ргочес! |Ьас сЬе адепт сои!И рая йгоидЬ рогсе1аш 61- сегв апът геститгеът Ъассепа тог дгоъчсЬ. Тъчогс веепь со Ьаче П!гсеь! ъчПЬ сЬе Ыеа сЬас сЬе Вассепо1уск Адепс |чав часс|ша |Ьас шчаьсеь! йе Ьассепа ш веагсЬ оЕ |Ье Еяепба1 диЪвсапсе.
Тъчогс, П!се осЬегв, Ьеса|пе Епсешвсес! |п сЬе роя|Ь|! Пу оЕ ияпд Ьассепо1уПс ацепь со сиге Ъассепа1 ьттвеавев оЕ Ьшпапв аист апипа1в. тъьЬеп |Ьь арргоасЬ ргочест со Ье ипвиссевв6|1, Тъчогс гесгеасес! со Ьь опдтпа1 Ыеа — |Ьас Ьассепо1ус|с адепь геь!и!ге|! ап а|ЫПюпа! Еассог оЕ ап ехсерПопа! пасите со васьЕу сЬе|г 6лпс!атепса! рЬувто1одтса! пеес!в. Ноъчечег, Ьь веагсЬ Еог а виЬвсапсе тЬас ъчои10 адоъч Ыг|ьев со дгоъч арагс Егогп о|Ьег Еогиь оЕ Ие ъчав Егшс!евв аист Ыв!асег гевеагсЬ Ьеса|ие с!есгеаяпд!у гасюпа! ав Ье в|тодд!ест со ргоче |Ьас Ьассепа ечоЪеП !тот ч|гивев.
Ршапсса! виррогс Еог Тъчогс'в ъчог1| Ьас! стъчшсде|1 со а1пювс посЬ- шд ъчЬеп, 1п 1944, сЬе Вгоъчп 1пвйшюп ъчав с!евсгоуес! Ьу а ЬогпЬ. ТЬь даче |Ье 11итчегясу оЕ Ьопстоп а 1опдсюидЫ оррогсипьу со с!ерпче Тъчогс оЕ ЬЬ ровс ап|1 гевеагсЬ ЕасПЖев. Не гесс|ест со Пче ас СатЬег1еу, ш а Ьо|ье арргорпасе1у саПе|1 "ТЬе ъ%10егпеввУ 1п 1949, Тъчогс ъчгосе ап ешЫссегест ассоипс оЕ Ыв ехрепепсев.
Ву сЬеп, Ь|в ъчог!с |чав!агде1у Еогцоссеп аист ечеп сЬе пате Вассепо!ус!с Адепт Ьас! Ьееп с!1всагьтеьт ш Еачог оЕ ВассепорЬаде. Ву сЬеп, соо, |Ье рЬувка1 пасите оЕ ЬассегюрЬадев |чав ип|1егвсоо|Ь ТЬеи всгиссигев Ьасс Ъееп апасугес! Ьу е!ессгоп писговсору, апс! |рлап|ПаПче авваув оЕ шЕесПчПу Ьаь! Ьееп еяаЫыЬе|1. ТЬе аЬ|16у со шЕесс Ьассепа вупсЬгопоив1у ш а япд!е-втер дгоъчй ехрегипепс Ьа|1 ореие|1 сЬе ъчау со ЬюсЬеииса1 апа1уяв оЕ ЬассегюрЬаце гер1касюп. ТЬе Пгя ЬассепорЬаде ишсавсв Ьаът Ьееп ьо1асед, апд депеск гесогпЬ|пасюп Ьаст Ьееп стешопвсгасес1 Еъ.а!гпв ес а1. 1992!. рспаду, сЬе геа|1у етегдепсе оЕ Ьассепа1 пшсавь йас ъчеге гев|яапс со ЬассепорЬаде шЕесПоп ргочыЫест а гасюпа1 ехр!апасюп Еог йе Еадиге оЕ ЬассепорЬадев ав йегареиск адепь.
АП й|в веетв со Ьаче раввест Тъчогс Ьу. Не сдеП ш 1950, ипаъчаге оЕ йе ипрасс оЕ ЬЬ еаг1у сдкочегу апьт ъч1|Ь Ь!в ЬедеЕ |п ап ЕяепПа1 диЬвсапсе |псасс. 1и !917, Съчо уеагв айег Тъчьогт'в опдтпа! риЫкаСюв, а РгепсЬ-Сапа|!1ап, Редх Р'Нсчеде, ргевептеът а рарег со йе Асаьтетте с!ев 5степсев оп а иисгоогдашяп ЕЬе ВасссъпорЬаде! |Ьас сои!0 ЫП с!увепсегу ЬасдП. т|ъьЬесЬег Р'Негеде ъчав аъчаге оЕ Тъчогс'в ъчог1| Ьав Ьееп а тассег оЕ вреси1асюп. Р'Негеде Ыдогоы!у ьтеитеь! Еспоъч1естде оЕ Тъчогс'в еагдег гдвсочегу апс! тас!е регявсепс апетрь со с1аип рпопсу Еог Ьтшве!Е. Рог тапу уеагв, сЬегеЕоге, 1уыв оЕ Ьассепа Ьу рЬацев |чав гдр1оиьаПсаду 1|поъчп ав йе Тъчогс-Р'Негеде рЬепоиьепоп. Р'Негеде ъчав а гпоге шс|яче сЬ1п!сег сЬап Тъчогс апь! ь!иссЫу гесодисгес$ йас ЬассепорЬадев ЪеЬаче|1 ав ЕпЕесссоив рагПс1ев сЬас сои!П Ье сьгасес! Ьу р1а|!ие Еоппас!оп.
Не ъчепс оп со |1евспЬе а сЬгеевсер ргосея тог сЬе Ие Ывсогу о! тЬе ЬассегюрЬаде !аиасЬиьепс, пш16р1кас|оп, аист ге1еаве! тЬас 1в гетаг1|- аЫу ассигасе апь! регсерПче (Р'Негеде ! 92тьу Ноъчечег, П!се Тъчогс, Р'Негеде Ьесаиье Еавсшасеь! Ьу |Ье 1Пеа сЬас ЬассепорЬадев сои!0 Ье иветт то сиге Ьассепа! шЕесПопв аист очег |Ье уеагв содессеь! а 1агде апюипс оЕ апесьтоса! с!аса ш ялррогс оЕ сЬь Ыеа. Етпд!се Тъчогт, Р'Негеде сепстес! со сдвсоипс Еась сЬас |чете шсопчешепс апс1 со сЬе епьт теша!пест а ПатЪоуапс ргове!ус|хег оЕ ап Ыеа |Ьас ече|ь Тъчогс Ьаьт!опд япсе аЬап|1опей рог а гпоге с!есадест ассоипс оЕ Р'НегеПе'в сдвсочегу оЕ ЬассепорЬадев, ъчпссеп ъч1|Ь сЬе Ьепейс оЕ Ып|1яцЫ, р1еаве вее Р'Негеде !19496 2.110 СЬарсег 2| Васгег)орЬа~е Х аиг) 1я )гессогз МПЧ!М!УПЧС ОАМАСЕ ТО ЕАКСЕ ЕПЧА МОЕЕС!)ЕЕл Еники шо1еси!ез оЕ Ь10Ь-шо1еси1аг-ъче10Ьс Р)ъ)А Е>100 1|Ь) аге еая1у Ьго1|еп Ъу зЬеаг)пц Еогсез.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
