Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 74
Текст из файла (страница 74)
Сопчепсюпа1 шесЬодз оЕ ехсгасс)па апй сопсепсгас)пц Р)ъ)Л, ъчйсЬ шс1ийе ехсгассюп ъч)сЬ огцапсс зо1- чепсз апй ргес|р|сасюп ъч|сЬ есЬапо1 ог Ьнсапо!, сур|са!!у у|е!д п|о1еси1ез япа!1ег сЬап 100 ЕЬ |и з)хе. Ечеп 1шеаг РЫА п|о1еси1ез аз зЬогс аз 50 1|Ь вЂ” сЬе яхе оЕ сЬе ЬассегюрЬаае ) цепоше — сап Ье Ьго1|еп Ьу ехсезяче1у гарЫ апд рго!опрей р)ресс)п0 апд ч)погона зЬаЫпц. Ейпеаг с!оиЫе-зсгапйе|1 РХЛ ЬеЬачез ш зо!нйоп аз а гапйош со|1 сЬас Ез зс)ЕЕепей Ьу !1) зсас)с)пц шсегас6опз Ьесъчееп Ьазез апй !2) е1ессгозсайс гери1яоп Ьесъчееи ЕЬе геал1аг!у зрасед пецассче1у сЬагцей РЬозрЬасез |п сЬе Ьас)|Ьопе.
ТЬе г)рй)су оЕ !опа Р!ъ)А пю!еси1ез 1еачез сЬеш чи!пегаЫе со зЬеаг)пц Еогсез сЬас саше йонЫе-зсгап|1ес! Ьгеа!сз, ъчЬкЬ оссиг п|озс ойеп ш сЬе сепсег оЕ сЬе ехсепйей пю1еси!ез. "ъге1ос)су асад!енса а!гопы епоинЬ со зЬеаг Р)ъ)А аге цепегасей ъчЬеи зо1идопз аге афсасед Ьу чогсе|йиа ог зЬаЫпа, ъчЬеп зо1ндопз аге йгаъчп шсо ог ехре11ед Егози р|рессез, ог ъчЬеп !опц шо1еси!ез оЕ Р)ъ)А аге д)ззо1чей айег ргес)РЬадоп Ьу а1соЬо!з.
Опе ччау со пнпшнхе дашке со Р)ъ)А днгспд сгапзЕег 1з знпр1у со ронг сЬе зо!ибоп 6огп опе сопсашег со апосЬег. Нои ечег, сЬ)з )з пос а1|чауз ЕеаяЫе апй Ь а Нз!су Ъияпеи ас сЬе Ьея оЕ снпез. 5о1исюпз оЕ Ь10Ь-шо!еси)аг-ъчефЬс РХА аге чьсоы апд сепг! со йоъч |и оие дгеас 1шпр гасЬег сЬаи 1п а япоосЬ сопсго11аЫе ягеаш. 'ъ'ъгсде-Ьоге р|рессез оЕЕег а заЕег шесЬод. ТЬезе р)релез сап Ье рнгсЬазей соинпегс)а11у ог ЕазЬюией аз пеейей ш ЕЬе 1аЬогасогу Ъу сиссша сЬе Нрз 6огп д)зрозаЫе р!азс)с р|рессез, Ыие р)репе йрз, ог Разсеиг р|реяез.
Ноъчечег, сЬе япа!1 апюипс оЕ пера!)че ргеяиге ргочЫей Ьу гиЬЬег Ьи1Ьз ог а шапиа1 р)расс!па йеч)се спау пос Ъе зирбс|епс со геса|п ехсгеше!у часом зо1исюпз оЕ РХА ш сЬе р|рессе. Е1ессгка11у йпчеп аисошас|с р|реяез !зисЬ аз Р|рессеАЫз) аге, сЬегеЕоге, ргеЕеггед. ТЬе Ео11оюш5 аге а|ЫЖопа! хауз со пнплпгее зЬеаг)пц. ° 56г га|Ьег |Ьап зЬа1|е Р)ъ)А зо1шюпз. ° Ма!пса)и а Ь15Ь РХА сопсеисгасюп. ° С)зе а ЪнЕЕег оЕ Ь15Ь юшс зсгеицсЬ со |ЬегеЬу гейисе |Ье е1ессгозсас|с Еогсез сЬас сопЕег зс)ЕЕпезз ороп !аде РНА гпо1есн1ез. ° Айд сопйеияпц ацепсз зисЬ аз зрегинпе ог ро!у1уяие. ° 1зо!асс апй шаи|ри1а|е РНА 1изЫе адагозе Ъ!осЫ !Р!еазе зее СЬарсег 5, Ргососо! 15).
ТЬ~з шесЬой ь пос геъ)и)гей ъчЬеи ргерагси5 цеиошсс РХА Еог с!ои)иц 1п сояпЫз ог ЬассегюрЬаце ). чессогз, Ноъчечег, |с !з |Ье |песЬод оЕ сЬо|се ъчЬеп ргерагси5 Ь15Ь-шо!еси!аг-ъчесцЬ| РСъ)А Еог с!оиспд си Ьассег!орЬаде Рс чесюгз ог ъчЬеи соизсгисдпд Ъассепа1 апд уеая аг66сса! сЬгои|озои|ез. ПЧ ЧПКО РАСКАС!)ЧС Рас)сан)пд оЕЬасгег)орЬаце ). РХА ш чЬго ъчаз )шйа11у дече1орей Ьу Вес)сег апд бо1й (!975) иана пнхсигез оЕ ехсгассз ргерагей Егош Ьассепа |пЕессей чдсЬ ягашз оЕ Ьассег)орЬаае ) саггуша пшсайопсдп цепез гес)и!сей Еог сЬе аяегпЫу оЕ Ьассег)орЬаае рагс|с!ез. ТЬе ргосейиге Ьаз Ьееп пюд16|ед апд нпргочед со сЬе рошс ъчЬеге 2 х 10з р6| сап Ье цепегасей гошше1у |п рас)саупц геассюпз солса)псин 1.0 )|0 оЕ |псасс Ьассег)орЬаце ).
РЫА. ТЬЕз Ь15Ь ейк)енсу оЕ рас)сан!па, соир1е|1 ъч)сЬ ЕЬе йече!оргпепс оЕ а! аде зсаЫе оЕ ЬассегсорЬаде ). чессогз апй сЬе аЬй)су со зсгееп 11Ьгапез Ьу ЬуЬг)д)гас!оп ог нппшпосЬепнса! шесЬойя !ей со сЬе с!опнпапсе оЕ сЬезе чессогз |п сРХА 11Ьгагу сопзсгиссюп ш ЕЬе 1980з. ТЬе шсгеазей изе оЕ Ъассег)орЬаае ). аз а с!оп)пц чессог а)зо !ей со сЬе йече1орспепс оЕ сои||неге)а1 рас)са51пц геассюпз. Тодау, сЬе ргерагасюп оЕ рас)зарод геассюиз аз с!езсНЬе|1 ш сЬе 5есопд Ед)сюп оЕ сЬ)з гпапна1 Ез а1гпозс а !озс ая, ечеп ш сЬе 1аЬогасойез оЕ ехрепепсей ЪассегюрЬаде ъчог)сегз. Со|и|неге)а! Рас)сауну геассюпз ъчог1| ехсеедсиц1у ъче!! ап|1 аге ю геаюпаЫу рпсед сЬас сЬеу Ьаче гер1асей Ьо|пегпаде ехсгассз |п |ноя гоисше с!оп)пц саз)сз, Ноъчечег, Еог зрес|а1|хей арр! кайопз зисЬ аз сЬе сопяпкИоп оЕ 1!и)с)па алй )ншрша аепошк РХА 1|Ьгайез ЕъчЬ)сЬ изе Ьлс)е пшпЬегз оЕ рас)сан)пц геасйопз), Ь Ез ъчогсЬ са)с)пц сЬе Нше со ргераге Гп)огта6оп Рапе1з 2.111 Ьопъе-Ьгеъчей рас)са8!п8 ехггась (роизг)са 1993).
Рас)са8(п8 ехггась аге ргерагей Ьу опе оЕ гъчо Вепега1 зггаге8!ез: !. Ехргезз!оп оЕ ЬасгепорЬа8е ). 8епез !з ъвдисед ъп гъчо зерагаге !ую8епз гЬас ргочЫе сопър1епъепг!п8 сопъропепь оГ гЬе расКаЕдп8 геасгюп (е8., р1еазе зее 5са!епВЬе ес а!. 198 1). Аз а сопзеъ)иевсе оЕ пъшаиопз !п гЬе ргорЬа8е 8епопъез, пе!ГЬег !узо8еп а!опе Ь сараЫе оГ рас)са8!в8 ехо8епоиз1у адйей ЬасгепорЬа8е РХА. Ехсгасгз оГ еасЬ си1гше аге ргерагес! зерагаге1у апй Ыепс!ес! аг гЬе ЬепсЬ !пго а ппхгиге гЬас сопга!пз а11 оЕ Гве сошропепь песеяагу Еог рас)са8!п8.
ТЬе гезиЫп8 рас)са8!п8 пихгигез аге е(6съепг, !урка!1у у!е!д!п8 гп ехсем оЕ !О' руи!88 оГ ЪассеворЬа8е ). РХА, апй еяепг!а!!у Егее Егогп Ьас88гоипй (ъчЬеп аззауей оп арргорпаге Ьозь згга!пз). Ехашр1ез оЕ сопъпъегс!а11у ачаь!аЫе, пчо-сошропепг зузгепь аге С(8арас)с !1 Со!й (5ггага8епе) апй гЬе ). рас)са8!п8 зузгеш ачаъ!аЫе Ггопь ЫЕе ТесЬпо!о8!ез. 2. А яп81е Е. со!г' С ЬасгегюрЬа8е ), 1узо8еп Ь гьеь! го ргераге ап ехсгасг гЬаг сопгашз а!! оГ гЬе сошропепь песеьагу го рас1са8е ехо8епоиз!у асЫед ч!га! РХА (ВозепЪег8 1987). Опе 1узо8еп сап Ье сьес1 го ргераге рас)са8!п8 ехггась Еог ьчо геазопз. р!гя, ЕЬе ргорЬа8е сагпед ш ЕЬе 1узо8епк зггаш содез Гог а11 оЕ ЕЬе ргогешз пеейей Гог рас)са8!п8.
5есопй, гЬе соз з(ге оГ гЬе ргорЬа8е Ьаз Ьееп де)егед. ТЬезе Ееаыгез ъчог1с го8егЬег ъп гЬе ЕоПоъчш8 шаппег, !пйисиоп оЕ гЬе 1узо8еп гези1ь (п гЬе шггасе11и!аг ассипш1агюп оГ а!1 ргоге!и сошропепгз пеедей Гог рас)са8)п8, апд сошр1еге ргеЬеадз аге Еогшей. Ноъчечег, гЬе пехг яерз ш ЕЬе рас)са8(п8 ргосегь аге гЬе гесо8шг1оп оЕ гЬе соз ягез оп сопсагепагед ЪассегюрЬа8е ).
РХА Ьу гЬе ЬасгедорЬа8е А ргогегп апс! ЕЬе шзегдов оЕ гЬе ЪасгедорЬа8е ). 8епогпе шго ЕЬе ргеЬеад. ТЬе 1ас(с оЕ Еве соз яге ъп Еве ргорЬа8е РХА ргечепь гЬгз згер 6огп оссигьп8, апд рас)са8!п8 Ь гЬиз еЕГесьче!у Ьа!гед аг ЕЬе ргеЬеай зга8е, ечеп гЬои86 а11 оЕ ЕЬе песегьагу сошропепгз изес1 1агег гп гье ргосезз аге ргезепг. Ноъчечег, ехо8епоиз РХА ъчЬЬ ап асдче соз яге сап Ье шзеггей шго ЕЬе ргеЬеаъ1, авй гЬе рас)са8!п8 ргосея гЬеп 1еайз го ЕЬе ргос1исдоп оГ ап ш(есгюиз ЬасгепорЬа8е рагьс!е. Ехггасгз гпайе !и ЕЬгз ъчау гьиа!! у Ьаче а 1оъчег Ьас)с8гоипд оГ р!ас)иез гЬап гЬе с!аыгса1 Ьшагу ппхгпгез, Ьесаизе гЬе йе!егюп оГ ЕЬе соз яге Ыос!ь рас)са8!п8 оГ епдо8епогь ЬасгепорЬа8е ) РХА вюге сошр1еге1у гЬап гЬе гпшагюпз ргезепг гп ЕЬе Ъгпагу ягашз.
Е, со6 С ъчаз сЬозеп аз ЕЬе 1узо8епк Ьозг го 1еьеп гЬе ргоЬ- аЪ|16у оГ гесопъЬгпагюп Ьегъчееп сгургк ЬасгедорЬа8е ) ргорЬа8ез, ъчЫсЬ аге 1споъчп го Ье ргезепс ъп гЬе 8епопъе оГ Е. со6 К, апс! ГЬе соз-с1е1егед ргорЬа8е. РшгЬеппоге, Е, со!ь С 1ас1сз гЬе ЕсоК гезггкгюп зузгевь (КозепЬег8 1985). ТЫз зузгевь, 1!)се огЬег геягкдоп зузгешз, сиь ипвюс66ед РХА гп а зе9иепсе-зрес!Егс шаппег апс1 Ь а!зо Еипсдопа1 !п рас)са8!п8 геасгюпз !п а!го. Т1шз, ехггась ргерагес! !говь се!1з оЕ Е.
со6 К Ьаче гЬе рогепьа1 го зе!есг а8ашзг РХА ГЬаг сопга!пз ап шипог66ей ЕсоК гесо8- шгюп яге. Весагье еи1сагуодс РХА гьед го сопягисг ВЬгапез ъч6! пос Ье ргогессей 6опь Ыеача8е, с1опез ГЬа! Ьу сЬапсе сов!а!и ап ЕсоК гесо8шдоп з!Ее гпау Ье !оя 6огп ГЬе рори1адоп йипп8 рас1са8- ш8. Кесопзггисдоп ехредшепь зЬоъч ЕЬаг ЬасгеьорЬа8е ). РХА саггуш8 ап ЕсоК гесо8шгюв зпе ь рас1са8ед Гъчо- Го зечепЕо1д 1езз еубсгепъ1у ш ехггасъз ъ!епчей Еговь Е.
со6 К ГЬап !п ехггасЬ ргерагед Егош Е. со6 С (КозепЬег8 1985). ТЬе Е. сой С гезггкгюп-шос66садоп зузгепъз ехргея сошропепгз (тстА /тсгВ апс! тгг) гЬаг с68езг РХА саггуш8 гпегЬу! 8гоирз оп сугояпе апй адепше геяйиез. (е.8., р1еазе зее Кгегх ег а1. !989; КоЫег ег а1. 1990).
Весаизе пюзг еи)сагуог!с РХАз аге гпегЬу1агед оп гЬезе гезЫиез, рас!са8!п8 ехггасгз Егопь яга!пз оЕ Е. со6 саггуш8 ъпгасг тсг апд тгг зуяегпз зе1есс а8ашя въеЕЬу!асей еи)сагуог!с РХА зес)иепсез. Ноъчечег, ЕЬе ъье оЕ рас)са8!п8 ехггась ргерагей Егош Ьасгеьа1 се11з дебс!епг !и ЕЬе ЕсоК, тсг, апд тгг 8епез (8епогуре А(гпгг-)ъзйВМ5-тсгВ]) ейесъ(че!у е!впшагез гЫз ргоЫеш (Кгеь ег а1.
!989). рог 8оос1 пъеазше, гЬе тсгр- апй тгг-епсойей геяпсгюп зузгепь Ьаче а1зо Ьеев е1шппагей Егош ЕЬе Е. соБ зггашз чьей го ргераге зоше соввпегс)а!1у ача!1аЫе ъп чьго рас1са8!п8 ехггась. Ехашр!ез оЕ сошшегс!а1!у ачаг1- аЫе яп8!е-сошропепг ЬасгепорЬа8е ). рас)са8!п8 ехггасгз аге гЬе С!8арас)с !11 СоЫ Егогп 5ггага8епе, ЕЬе Махр1ах рас)са8!ъъ8 ехзгасъ Егопь Ер(сев!ге ТесЬпо1о8!ез, апд ГЬе Рас)са8епе ехъгасъ Егогп Ргоше8а. КЕГЕКЕ!хС!СЕЯ 2./!2 Е Ьарсег 2; ВасгегсорЬаде Л аиг//В 'час!ось А1Ъегяеп Н.М, АЬг1еггаЬип Н., Сапп Н.М., Ранье! !., Ле Ра|1|ег Р., апсс СоЬеп Р.
1990. Сомсгисбоп апс1 сЬагассепхабов оГ а уеаьс агс|Ес|а! сЬгоп|оьоп|е 1|Ьгагу сопса|п|пВ ьечеп Ьар1оЫ Ьшпап Вепоте ес!шча1епя. Ргас. №И. Аса|1 5с|. 87: 4256-4260. Ашипссьеп 5.К., Тау1ог А.Р., СЬаисСЬигу А.М., апс/ 5пи|Ь С.К. 1986. гес0: ТЬе Вепе Гог ап еяепВа! СЫС|Е ьпЬишС оГ еховис1еаье Ч. Ргос. /час!. Ага|с. 5с|. 83: 5558 — 5562. Арр!еуаг|Е К.К.
1954. ВеВгеВассоп оЕ пе|ч 1уьоВепсс суре| г!игсп8 Вго|ч|Ь оЕ а ссоиЫу !уьоВепк ьсгасп с!ее!чесс Егот ЕьсЬеПс)иа сой К12. Сеиегнь 39: 440 — 452. АгЬег Ссг., Епссшьс 1, НоЬп В., Миггау ЬС.Е., ап|1 Миггау К. 1983. Ехрептепса! спесЬоссь Гог ые юпЬ !атЬВа. !п ЕатЫа П Еей К.ссг. Не|йпх ес а1.), рр. 433 — 466. СоЫ ВрпвВ НагЬог ЕаЬогасогу, Со!6 ВргшВ НагЬог, Ьсесч Уогсс.
Васогай /., НсппсЬь Ссг., апгс ВаепВег Ж 1988, ТЬе евхутапс ашп|су оЕ ргосеспаье К ы сов!го!1егс Ьу са!ссшп. Еиг. /. В|осЬет. 176: 441 — 447. Васога|Ь !., КаВЬипа|Ьап 5., НшпсЬь Сьг., апгс ВаепВег Ссг. 1989. ЕопВ-гапВе ьсгисшга1 сЬап8еь ш ргосешаье К сг188егегс Ьу са1с|шп Ып гепюча1.
№Сиге 337: 481 — 484. Вапиеп Е, Ноус М.А., Масраг!апе 1... ЕсЬоЬ Н., ав|Е Негь1|о|ч! са 1. 1986. Ь/!В, а пе|ч Е|гЬеПСЫа саВ!оси| геВи1асспВ 1уьоВепу апсС йе Сече! оЕ ЬассепорЬаВе 1апсЬда с!1 ргоСеш. /. Мо1. Вю1. 187: 213-224. Вагпеь ССС.М. 1994. РСК ап|РЬЕсабоп оЕ ир со 35-1|Ь РГ4А гйсЬ ЬсВЬ Есбе11су апгс ЫВЬ усе!6 Егоп| 1атЬсса ЬассегюрЬаВе сетр!асеь. Ргас. №К Асаг/. 5сс. 91: 2216 — 2220. Веатег К/. а|Ы РаЬо С.О. 1992. Кеуспесс 1.8 А сгуяа! ягиссиге оЕ йе Л гергеььог-орегасог сотр1ех, /.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
