Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 69
Текст из файла (страница 69)
Кешоче сЬе р1асеь Егош сЬе со)с) гоош ог геЕПуегасог. Ма1се ппрппсь оЕ сЬе р1аъ)иеь оп еасЬ р1асе нь!пц сЬе 6гь! яе! оЕ 1аЬе!ес! 6!сегь. Р1асе а с)гу,!аЬе!ес) с!гсн1аг шсгосе11и1ояе ог пу!оп 61сег пеас!у опсо йе ьпгЕасе оЕ йе сор абрагове ьо йас Ь согпеь !псо ебгесс сопсас! ъч)сЬ йе р1ас!иеь. Напс!1е сЬе 61сег ъчПЬ а!оче6 Ьапбы Еспаег ос!я ргечепс ъчесс!па оЕ йе 61сег апсС аКесс сгапясег оЕ Е!!чА.
Огаяр сЬе 6!сег Ьу Пя есСаея апсС аПоъч сЬе сепсег оЕ йе ьППЬПу Ьепс 61сег со гпа1се сопсасс ъч!й сЬе сепсег оЕ йе сор аааг. Опсе сопсасс Ьаь Ьееп шас1е, ь1оъч1у ге1еаье йе 6!сег ап6 аПоъч П со Пассеп опсо сЬе яигсасе оЕ сЬе сор аПагояе. Тъо пос ассепърс со ас!)ияс сЬе роысюп оЕ сЬе 61сег ыпсе сЫя чПП !печ!саЫу 1еасС со сеаг!пП оЕ йе сор аПагоье. Ве саге66 пос со сгар асг ЪиЬЫея, ъчЬссЬ нпП йьр!асе йе 61сег апъс пъау аепегасе Ьас!сагоипсС ПиНпП ЬуЬпсПхасюп. 7. Маг)с сЬе 61сег сп сЬгее ог !ноге аяупппеспс, репрЬега1!осасюпя Ъу всаЬЪ!пн сЬгоидЬ сс апс1 шсо йе ацаг ЬепеасЬ ъвпй а 21-ранце пеес!1е ассасЬес! со а ьуппце сон!а!и!пц ъчасегргооЕ Ыас1с с1гаъч!па сп1с.
Ма!се ьше с!ис с1ъе !сеу!съа шагСъв аге аьушшеиъсаПу р1аъеъС аъъъс с1ис Ьой с!ъе 61сег агсъС с1се р1асе аге спагЬеъ). ТЬеге гпшс Ье епонаЬ !и!с оп сЬе р1асе со Ье еаы!у ч!ь!Ые ъчЬеп а яесопс! 61сег Ь ш р1асе. Ьагае ЫоссЬея оЕ ш1с, Ьоъчечес, аге ипс1еыгаЫе. !п1с ойеп Ъесошеь сопсапбпасе6 ъчПЬ Ьассег!орЬааеь апъс Ьассепа сЕ и Ьая Ъееп наес! шапу Пспея. ТЫь ргоЫесп сап Ъе пнпнпЬеП Ьу Ьеас!па сЬе !пСс !и а пнсгоъчаче очеп со спасочасе сопсапнпабпр чсгиьея апсС пнсгоогПапЬшь, 8. Айег 1-2 пнпнсеь, иье Ынпс-епс)ес! Еогсерь (е.д., М!11!роге Еогсерь) со рее1 сЬе 61сегь Егош еасЬ р1асе ш спг.
ТЬ!я ясер Ь Ьеьс ясоне Ьу риЕПпа ь! оъч1у иръчагс1 оп опе евсее оЕ сЬе 61сег апс1 рееПиа сЬе епПге 61- сег Егош йе ипсСег!у!пП ааагоье !и а ь!пасе ыпоосЬ спосюп. Ас сЬся асане, юспе !пчеяс!насоса ргесег со ъсгу сЬе 61сегв Еог 15 пнписеь оп рарег соъче1ь ог ьЬееы оЕ ЪъЬасшап ЗММ рарег. Ноъчечег, !и оиг Ьапъ)в, сЬсв ясер Ь иппесеыагу. Ас й1ь рошс, сЬе сгапясеггеП Ьассег!орЬаПе псау Ье аспр!сбей р!еаье ьее сЬе ране! оп Пъ! 5!ТО АМРс!р!САТ!О!ъ! ас йе епс! оЕ сЬЬ ргососо!. Рготосо1 21: Тгаптуег ау' Вастег|орЬаце ОКА |сопл Р1аг(иет та Рт!тегт 2.95 То фх Ьу сготт-1тЕ(п5 тч(тЬ ЕЛ'!|661: Саггу ош 1Ье ргоседиге ияп5 а сопипегс!а1 дечтсе !ог 1Ь!я ригрояе апд Го!!оън 1Ье гпапиЕастигег'я !патгисдопй А!МРОКТАМТ 0о по1 аПоъч 1Ье 6)теть 1о т|гу ош рпог то сгиб-Пп(ъ(пц. 14.
Айег Ьа)дп6 ог сгоаа-!!п)с|пВ, !ооее!у ънгар 1Ье дгу 6!1ега тп а1ипипши Еод апс1 ьтоге 16етп ат гоогп тетирегатше. А|тегпадче!у, !Е ЬуЬг|д!хат!оп Ы то Ье сагпед оит ън|1Ь!и а дау ог яо, чная 1Ье 6т!(его Еог 30 гп!питеь ат 65'С |и О.
(х 55С ог 55РЕ, 059о 505 апс! йоге )Ьегп ънет гп яеа!ед р1аьдс ЪаВй ТЬе Вт)тетя тпау поъч Ье иьед Еог ЬуЬгЯЬадоп аъ деьсг(Ьед тп Рготосо! 22. |М 5|Т0 АМРЫНСАТ|ОМ )тупо е1 а|. (1978) апд Ччоо (1979) Ьаче дезспЬед а тпойбса1юп о( 1Ье Веп1оп апд 0ачь (1977) асгееп)пц гпетЬод тЬа1 (пчоЬез агпр|Ясабоп о( 1Ье Ьас1ег(орЬабеъ оп тЬе пПгосеПи|оье Я1ег ргюг 1о ЬуЬпд|аадоп. Весаиье плоте Ьастег)орЬабе 0МА Ьесогпея аиасЬед 1о 1Ье пПгосеПи|ове Я1ег, 1Ье аитогад)обгарЬ|с яВпа|ь 6 опт ройдче с(опт аге епЬапсед арргох(гпате|у Пче(о|й Агпр86садоп )Веге(оге |еатЬ то ап |гпргочегпепт (и 1Ье га1ю от' яцпа| то поЬе апт| аЬо аПоиь 1Ье )епВ(Ь о1 1Ье аитогад(оВгарЫс ехроаиге то Ье гейлсед.
АгпрПВсатюп В рагдси|аг|у ча|иаЫе ъчЬеп оПВопис)еоддеь о( ЫВЬ дебепегасу аге иъед аъ ргоЬеь (р(еаье атее СЬар1ег 10), ънЬеп оп|у а ьгпаП апюипт о( а на|иаЫе ргоЬе ь анаПаЫе, ог ъчЬеп ъсгеепп6 ипдег сопсИопь о( гедисед ьтг(пбепсу. А детаПед рготосо! (ог |п йил агпрПВсатюп 'ь оибпед оп радев 2.112 — 2.113 о1 1Ье 5есопд ЕсИоп о( Мо(еси)аг С(оп)пе. АЕТЕКМАТ!ЧЕ РКОТОСОЫ КАР|0 ТКАМ5ГЕК ОЕ РЕАООЕ5 ТО НЕТЕК5 ТЬе тоПондп8 ргоседиге, Ьаъед оп а рготосо| дече|оред Ьу Сату 5(гиЫ !и 1983 ънЫ(е Ье ъчаь а ройдостога| (еПоъч )и Тогп Мап(ась' |аЬогатогу, еПпт(па(ее тгеатгпеп1 от'6!теть ъч4|Ь айаП, сап каче Вгпе ъчЬеп с|еаПп6 нддт !агбе пиптЬегь о( 6|1ег8 апд гпау Ье иьед аь ап а|1егпадне 1о Иере 9 1ЬгоиВЬ 13. М)тгосеПи(оье 6!теть гпиьт Ье ь1епПаед то ргенепт аЬпп(саде (р(еаве атее 5(ер 1 аЬоче); Ьоъчечег, пу|оп Вт!теть аге, |п оиг ЬапгЬ, ьирегюг апд аге 1Ьеге|оге гесоптгпепдесЕ Ме1Ь од 1.
Айег гегпоч(п6 1Ье 6)теть (гогп 1Ье тор абагоее (5(ер 8), р|асе 1Ьегп, 0МА йс|е ир, оп рарег тонне(ъ 1ог 5 — 1 0 пт(пъаеа. 2. ънЬеп 1Ьег едбеь Ьеб)п то сит|, р|асе 1Ье 6(теть (и йас(га от'теп (птег(еачед ъй(Ь с|гсл|аг ъЧЬатптап ЗММ рарега Р|асе а (еън ЗММ рарегь оп 1Ье тор апт! Ьоттопт о( 1Ье атас(ъ.
3. Р|асе 1Ье ьтасЬ оп а ьгпаП р)адогпт (е.6., ап |пчегтег! Ругех даат) |п ап аи1ос|аче. Ехроье 1Ье 6!теть то 'Втгеапт(п8 зтеагп" (ог 3 гйпитеь (Ее., 100'С вЂ” ачо)д ылрег-Ьеатед етеапт). 4. Тгапйег тЬе йас(ъ от 6|тег рарегь апд п)тгосеПи)оке 6)теть то а часиипт очеп. 5. Ва)ге Птг 2 Ьоигь ат 80'С ъчЬ|!е дгачдп6 а насиипт сопдпиоиь!у. Кепюче апу ЗММ рарег 1Ьа1 ьдс)съ 1о 1Ье пПгосеПи|оке 6!теть Ьу ъоаЯп6 |п 2х 55РЕ Ье|оге ргеЬуЬг(д(а(п8.
6. Ргосеег! |о 51ер 14 о( 1Ье рго1осо|. Рго$осо! 22 НуЬпйкабоп о1 Вас1епорйаце 0МА оп Н1егь $ ггек5 саккч|глс |ммов|г|хгО вы!А ! ком к$АО|лк5 Аке 5скке|чеО Ьу ЬуЪг1йхабоп ш яш чч11Ь лхр-!аЪе!ег$ ршЪев. ТЬе гесЬпн1пе 1в ехггегпе1у гоЪ|ля, Ь15Ыу врес|6с, апг$ чегу вепя6че апг$ а11оччв 1Ье Ыеп6глса6оп оЕ а япц1е гесоп|Ь1папг ашот вечега1 1Ьопвапг$ р1ас$пев. ТЬе р1а|1пе Ыеп6ггес$ ав ЬуЬг1йха6оп-роя6че |в 1Ьеп рппйед Ьу впЬве|рлепг гошпЬ оувсгеепшд. ТЬе очег- аП вес1пепсе ог'ечепгв 1в ргевепгед ш Р15пге 2-15.
Рог 6лггЬег $$ега1!в оп 1Ье ЬуЪг1йгабоп ог П$ч$А ипшоЬ111хег$ оп 611егв, р!еаве вее СЬаргег 6, Ргогосо! 10. Зрак лпе $$$1ег/|пе|пЬгапе |п ргепуЬпсдхабоп во$и1$оп согйа$п$пд Ь|осК$пд адепгв 1о гег$исе попврес$1$с аЬвогргюп о116е гаг$$о$апе$ег$ ргоЬе. $псиЬа1е гпе $$$1егв апКЬ |$епа1огес$ гас!|о!апе$ег$ ргоЬе ипг$ег сопс$$1$опв гпа1 ргогпо1е врес$1$с ЬуЬпс$аа1юп. Чуавп гпе д|гегв оп|лег сопс$$1$опв гпа1 ргевегче пис|е|с ас|с$ ЬуЬг|пв апб ргогпо1е гпе с$$ввос|а1$оп о1 ргоЬе попврес$$$са$$у а11аспес$1о гпе д|$1ег ог гпегпЬгапе. ОЫа|п ап |гпаде оггпе К|1ег ог гпегпЬгапе оп Х-гау «|гп. А|$дп гпе $гпаде ч|$1Ь гпе р|а1ев апг! гесочег 1пе р|ациев гпа1 ЬуЬг||$|хе арво|пса!!у 1о гпе ргоЬе.
НС11КЕ 2-15 г!оъчсЬаг1| 5е иепсе оу НуЬгЫ$ха1$оп 51ерв 2.96 Ргогосо! 22: Нуйг(д(айаг(ол оЕ Васгег(орйайе Е)ХА ол р((гегь 2.97 МАТЕК!А!.л САОТ1ОЬЬ Р!еаье аее Аррепйх 72 (ог арргорла(е Ьапд(!пй о( гпа1еда1а гпагйед гч!(Ь <! >. Впйегй апд $0106опй Р1еаае аее Аррепд!х 1 Еог согпропеп1а о( а1осй ао1ипопа, Ьи((ега, апд геайеп1а. 01101е а(осй ао1ипопа 1о ЕЬе арргорпа1е сопсеп1га(!опа. СЫого(олл <1> Ргейуйг(йгайол ао(ийол < ! > Р!еаье аее гйе рапе! оп РЙЕНУВК1012АТ1ОЫ А)ч0 НЧВК101ХАТ(ОЙ 5ОИ)Т(ОЫ5 ш Сйаргег 1, Ргогосо! 32. 5М 2х 55РЕ Ререпд(пй оп дге пшпЬег о( 6!сега со Ье ргосеяед, 1 11гег ог гпоге шау Ъе гег)шгед.
ууахЬ ю(и(сол 7 2х 55С 0.1% (х(ч) 505 Иаай ю(и6ол 2 1х 55С 0.1% (гч(ч) Ю5 Игаей ю(ибол 3 0.1х 55С од% (гч(ч) 5(75 Ь(ос!е(с АспЬ апд О11еоп()с!еоТЫе5 Е(7(ега (ттоЬ(((хед ед(Ь Ьас(ег(орйаде 0)ЧА Ргерагед аа деасг(Ьед гп Ргососо! 21 о( гЫа сйаргег. лайо(аЬе!едргоЬе <!> Ргерагед аа деаслЬед ш Сйаргег 9 ог 10. лресЫ Е(101 ргпеп$ Войглй ччагег Ьа(Ь (Еог дела(иг(лй доиЫе-х(галдед ргойеь) Сlааа (Ругех) Ьа(г(лй 6(аЬ ог о(йег Ьуйпйгабол сйатЬег АЕТЕКЫАТ1ЧЕ НУВЕ(10!ХАТ!О)х) СНАМВЕК5 5огпе (пчеаййа(ога рге(ег (о !псиЬа(е й!(ега !п ЬеайаеаlаЫе р!аайс Ьайа (5еага 5еа(-А-Меа! ог ег)и(ча- ! !еп1) (е.й., р!еаае атее СЬар1ег й, Рго(осо! 10) диг!пй Ейе ргейуЬг)д(хасаи апд ЬуЬг!д(хайоп а!ери га!Ьег !Ьап !и сгуа(а!Паайоп д(айеа. ТЬе Еолпег гпе(Ьод ачо!сЬ ргоЫеша нч((Ь ечарогайоп апд, Ьесаиае (Ье аеа(ег! Ьайа сап Ье юЬгпегцег! (п а ша(ег Ьа(Ь, епюгеа !Ьа! Ейе !ешрегагигеа диг(пй ЬуЬпд!хайоп апд ! иааЫпд аге соггес!.
ТЬе Ьайа гпиа( Ье орепед апд геаеа!ед ччйеп сйапй!пц Ьийега. То ачо!д гад!оасйче соп!агЫпа!юп о( (Ье нча(ег Ьа!Ь, (Ье геаеа(ед Ьай соп1а!п(пй гасйоас(М(у айои!д Ье аеа!ед !па(де а аесопд, попсоп1аш(па(ед Ьац. й оп1у а аглай пигпЬег о( й!(его аге юЬ!ес!ед 1о ЬуЬпд!хайоп, (Ьеп и ее а ц! ааа асгенч-(ор Ьой(е Ейа( Ела (Ье гойега оЕ а ЬуЬпд(хайло онеп !и р!асе от'а сгуа(айсаа(юп д(аЬ ог 5еа!-А-Меа! Ьай. ТЬеае Ьой!еа ' апс! пчела Ьаче Ейе адчап(айе Ейа! аглай чо!игпеа о( ЬуЬг(д(хайло ао!ийоп сап Ье иаед апд (Ье ЬуЬг(д(гайоп 1егп рега(иге сап Ье ассига(е!у сап(гойегй Сlие айс(с, гча(ег-ю(иЫе (е.й., ()Н(7 56с 6(ь(ггйи(ед Ьу ЕаЬегСаь(ей) (лсиЬабол сйатЬег ргеае( а((йе арргорла(е ЬуЬг(йаайол (етрега(иге Р1еаае аее 5гер 2. гхад(оасбче (л(с <! > Касйоасгп е !п)г Ь шаде Ьу гпгх(пй а япа!1 агпоипг о( иР чг(гЬ юагегргоо( Ыас)г дгачппй (п)г. Ие йпд гг сопчеп(епг го ша(ге гЬе !п)г ш гЬгее йгадек чегу Ьог (>2000 сра оп а Ьапг(-Ье!д ппшгпопйог), Ьос (>500 сра оп а Ьапд-Ье!д пипппошгог), апд соо! (>50 сра оп а Ьапд-Ье!д пшипюшгог).
1)ае а 6Ьег- 2.98 СЬартег 2: ВапепорЬаде Л аис) 1(я Ъестогя 6р реп со арр1у зп1с оЕ сЬе ъ(ея(геъ( Ьоспея со сЬе аъ)Ьея(че 1аЬе!я. АссасЬ гайоасс(че-ъчагп(пд саре со сЬе реп, апс) ясоге зс зп ап арргорпасе Р!асе. КеняаЫе а!сегпа6чея со гайоас6че ш1с аге сЬепи!нпнпегкепс пзаг!сетя ача(!аЫе Егопз 5сгасадепе (О!одоя). ТЬе зпаг)сетя сап Ъе ыес1 пш16р!е Ьгпея апс) яЬонЫ Ье ехрояес1 со Лиогеясепс 1(ВЬс )ыс рпог со а пеъч гонит( оЕ ашогайодгарЬу. С(гйаттап ЗММ рарег МЕТНО0 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
