Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 65
Текст из файла (страница 65)
Опиг АТР П ияп8 а сопсгпегсса1 08аяе ЪиПег сЬаС сопСашя АТР. 3. Ехсгасс сЬе !|Вас(оп геаспоп сч|сЬ рЬепоЬсЫого(опп. Рипп8 ППасюп, сЬе К РС4А чАП Еопп с1ояес( с|гс!ея апс( 1оп8 сопсасегпегя апс| Ьесопге яспяиче со яЬеаг(п8 (р!саяе яее |Ье ш(оппа6оп рапе! оп М!ММ!ХПЧС ОАМАСЕ ТО !АКОЕ ОгчА МОЕЕСС>СЕ5>. Напс(!е сЬе ППасес( Р>7А сагериау| Ро пос чогсех. Сапу ош сЬе РЬепоЬс|Пого(опп ехсгассюп Ьу цепс!> шчегПп8 сЬе сиЪе со еПса епш1яюп Еоппаиоп. 4. 5ерагасе сЬе остап(с апс1 ас!иеоия рЬаяея Ьу сепспЕиПас|оп Еог 1 пиписе ас гоош сегпрегасиге ш а гп|сгоЕиПе. Кегпоче сЬе ас(иеоия рЬаяе сопсашшП сЬе чпга1 РЬ(А со а песч сиЬе ия(пц ап аисогпайс р(рессор с(еч(се есриррес! сч|сЬ а сПярояаЫе Пр сЬас Ьая Ьееп яп(ррес! >ч(сЬ с(оП сое-па>1 с1|ррегя со шсгеаяе сЬе сЬашесег оЕ сЬе Ьо1е.
Рго1осо! 16 Рипйсабоп о1 Вас1епорйаце Х Агля: Сеп1г~1ицабоп ЙгоццЬ 5исгоье Оепы1у СгасйепЬ мике!Й5екпОЙ чесгОк5, тне ОейОме5 Ое РеРЕАсемейт честОК5 сопгагп а сепгга1 5гийег аецтепл ГЬал пшаГ Ъе геточед Го ассоттодасе аецтепЬ ог" гоге)цп )лЛ)А. ТЬЬ ргосе55 ь цепега11у гегеггед го аа "ргерагагюп ог" Х агта" апд шчо1чеа геяпсдоп епдопис!еаае йцезгюп ог ) 131)А го аерагаге гЬе глчо агта !гоги 1Ье яийег )гацтепг, Ео!!охед Ъу рипйсаг)оп оу йе аппя Ткачи тегЬода аге соиипоп!у иаед го рипгу аггпя аисгоае депягу цгайепг сепгпуицагюп (деаспЬед Ьеге) апд сепсп6лцаг)оп гЬгоицЬ Л)аС! депягу цгайепь. А)гЬоицЬ гЬе 1аьег ргоседиге Ь г)и)с)сег, ЕЬе аппа аге аотегипеа сопгат)пагед Ьу япа11 апюипь ог яийег ггацтепс, регЬара Ъесагье ЕЬе геао!ч)пц ролчег ог аойшп сЫогЫе цгайепга ь 1ипьед.
ЕгЫйит Ьгоплгде, аг а сопсепггалюп ог" 2 )лцйп1, сап Ье 1пс!идед ш ысгоае ог Л)аС! депялу цгайепЬ. ТЬе роясюпа ог" ЕЬе й1Тегепг арес)еа ог Ел))А лч)гЫп гЬе цгайепс сап гЬеп Ье десегт)пед ч)аиа11у. Ъ)г)гЬ ргасИсе, Ь Ь роыгЫе Го роо1 ГЬоае )гаслюпа ГЬал сои!а)п йе аппеа!ед аппа лч)ГЬоис рпог апа1уяа Ьу ацагоае це1 е1есггорЬогеыя 1п аоте сааея 1ог ехагпр!е, 1г' йе геяпсгюп епдопис1еаае йцеяед епда ог" гЬе чесгог аге го Ье ггеагед ъчЬЬ РЬозрЬагаае, 1г и деягаЫе го 1)цаге ЕЬе соЛеяче сегт)ш ог" чесгог )л)чА Ьелоге йце56пц лч)гЬ геагпсгюп епдопис1еааея ТЬе ассогпрапу)пц рапе1 оп Е1ОАТ!Ом Е!Ют (аее МегЬод) деаспЬеа гЬе лег)еа ог яера ге9и)гед ло реггопп йе рге!)пипагу 1)цадоп, ВасгепорЬаце ) агта сап а1ю сап Ье рипВед Ъу ргерагаг)че е1есггорЬогеяа йгоицЬ 0.5% ацагоае це!я 1п цепега1, Ьолчечег, йе у)е1д ог" Ел))А оЬга)пед Ьу це! е!есггорЬогеяз и 1олчег гЬап гЬаг оЬгашед Ьу депягу цгайепг сепгпгицаг)оп.
Рипйед аппа ог" йе гпоаГ роро!аг чеслога (е.ц., ЕМВЕЗ апд ЕМВЕ4, Хцл10, ).цл11, ).Бх11, ХллАВН, апд ).КАР) аге ача11аЫе 1гот сопипегс)а! 5оигсея ТЬеке аге |пча1иаЫе )г' аотеГЬ)пц цоеа хгопц ог лчЬеп с!ошпц )п ЬасгепорЬаце Х гог гЬе Вгаг багие. 1г гпау а1ю Ъе )еаа ехрепяче со иле сопипегс)а1 аппа гагЬег гЬап догпея)сну ргодисед геацепга бог йе оссаяопа1 япа11-аса!е с!ошпц рго)есс, гог ехагпр1е, юЪс!опшц вагит шйчЫиа! Ьасгепа! ог уеааг агг)6с)а! сЬготоютея Ноиечег, )г'гЬе агпь аге со Ье гьед геци!аг!у ог гог ЕЬе сопаггисдоп ог" 11Ъгапеа, Ь и пюге есопописа! го ргераге гЬепл Ьу депягу цгайепг сепгпгицаг)оп.
ТЫ5 тейод гог рипйсагюп оу ЬасгепорЬаце ). аппк йгоицЬ аисгоае депягу цгайепь Ь депчед Ггот Машаьа ег а!. (1978), апд и сап Ъе ихед со ргераге гЬе аппа ог" апу ЪасгепорЬаце Х чесгог. 2. 71 2.74 СЬаргсг 2: Вассег)орЬа8е ). агсгГ Гь Сгесгогг 4. 1оас) оп!о еасЬ Вгайепс по тоге йап 75 р8 оГ аппеа1ей с)18сасес) Ьассег)орЬа8е ). РЫА ш а со1шпе оГ 500 01 ог!егя Миге Р)4А сап саше сЬе ВгагРепс со Ье очаг!оаг)ес) апг) !еаа со роог ьерага6оп оГ йе ешРег Ра8- игепь Роил сЬе апик 5.
Сеисп6л8е сЬе угас))сиса ас !20,0008 126,000 григ сп а Вес)спсап 5Х28 госог) Гог 24 Ьоига ас !5оС 6. Со!1есс 0.5-гп1 Ьас6опь сЬгои8Ь а 21-Ваи8е пеесПе 1паегсес) сЬгои8Ь йе Ъоиоил оГ сЬе сеп- сп6л8е тЬе. 7. Та!се ьчо 15-р1 а!н)носа Ггоси ечегу сЬ)гс) Ггассюп апс1 й1ше еасЬ се)сЬ 35 р! оГН,О. АсЫ 8 р1 оГ аисгоае 8е!-1оас)1п8 ЬиГГег, Ьеас опе а1н)иос Ггосп еасЬ Ггассюп со 68'С Гог 5 пипшея апг) 1еауе сЬе аесоисс а1н)иос ипсгеасед. Апа1ухе а1! оГ йе аатр1еь Ьу е1ессгорЬогеа)а сЬгоицЬ а сЬсс1с 0.59е а8агоае 8е1. Г)ае аа таг)сега !и!асс Ьассег)орЬа8е Х РХА апс1 сЬе а1н)иос оГ с)18еасес1 РХА аес аа)г)е Ги 5сер 2.
Ае))сгас йе аисгоее апг) га!с соисепсгаиопг оГ сЬе гиаг)гегг со исассЬ с!логе оГ йе еапср1ея осЬегег!ее, йе!г е!ессгорЬогеск гиоЫ!!Веа лч!!1 пос Ъе согпрагаЫе. ТЬе аписа!ее) агп е ш!Вгасе сЬгоиВЬ йе 059е адагоге Ве! ас а гасе сЬас ь авиа!)у !пг)!ес!п8и!е!саЫе Ропс сЬас оГ гпсасс ЬассеиорЬаде ), РССА. Ро пос псп сЬе апа1уиса! Ве!е ас ЬгВЬ ео!саде ог ш е1ессгорЬогее!г 1юйеп оГ Ь!8Ь е!ессгка! геяасапсе: ОнегЬеади8 гпе1ь йе сопение сепп!иг оГ ЬассеиорЬа8е Х РХА е)иг!пц е!есегорЬогеяа. 8.
Айег рЬосодгарЬш8 йе Ве!,!осасе апг) роо! йе Ггасс)опь йас сопсаш йе аппеа!ес! агта ГР18иге 2-13). Ве саге6з! пос со !пс!иг)е Ггассюы сЬас аге екдЫу соисапдпасее! ъчсй ипеддеесее! ЬассегюрЬаде ). РХА ог угас!!опе сЬас соиса!и ядп!Ггсапс циапсп5ее оГ ииаппеа!ее) !ей ог иВЬс ассам ог гшКег Гга8гпеис)е). ).сои!го! ! 4 7 10 13 16 19 22 25 28 3! иис)!деагес) ). РЬСА !есс апи идй агги 'а!иПег' Е!СС)РЕ 2-13 Ргерага11оп оГ СЬе Аппа оГ Вас!ее!орЬаде ).
РЬСА Ьу 5исгоае Сгагс!епС Сепгг!Гида!!оп !и йе ехрег!спепс г)ер!ссег) Ьеге, йе РС4А оГ ЬассеиорЬа8е Е еессог СЬагои 28 сеаь й8еесе8 иАй ВагиН), аиг) сеисиГидед сЬгои8Ь а 10 — 407е !!пеаг аисгоае Вгайеис, сеЫсЬ сеаа йеи Ггасдоиасед аа с)еасг!Ьег) !и йе ргоСосо!. А)!с)нога Гтпс еуегу й!гсс Ггасдоп сееге ЬеаСег! Со 68 С Гог 5 ги!иигеа аиг) йеи ргерагег! Гог е!ессгорЬогеа!а аиг) апа!угег) оп а 0.5еА адагоее Ве!. 7Ье роа!с!опе ос йе !еР аип 123.5 ЬЬ), г!8Ьс аип 19 )сЬ), Гагиссег" Гга8теига 16.5 )сЬ 8 аиг) ииг)!Веагег) Х Р)4А аге !ис)!сагес).
Егасдоие 1 — 16 сои!а)гди8 йе агта сееге роо!есс. Ргогого! !6: Ригфсагсоп оЕВаггепорЬаее ХАгтя Сепии~а!!оп гЬгоиеЬ 5исгоге гуепг!гу Сгагс!епгг 2.75 9. Ес!а!ухе сЬе роо1ес1 Егас0опа ааа!пас а 1000-Ео)й ехсеаа оЕТЕ (рН 8.0) Еог 12-16 Ьопгь ас 4"С, ъч!сЬ ас !еаас опе сЬапре оЕ Ьпйег. Ве епге со а1!осч Еог а пчо- со сЬгеесо16 госгеаее т чо1шпе 6пг!пв йа!уяя А!сегпапче!у, !Е сЬе чо1шпе о! сЬе роо1ееС еатр!е Ь япа11, сЬе 11146 сап Ье ргее!р!сасес$ сч!сЬ есЬапо! чг!сЬопс ргюг йа1уеы Ьу 6!!пс!пе сЬе загор1е и !сЬ ТЕ (рН 7.6) ю сЬас сЬе сопсеппасюп оЕ ьпегоее Ь геопеео со -10ео.
1п й|з саге, !! есспйшп Ьгот!гСе маг !пе1пеСегС !о сЬе «Сепясу ага6!епся ехсгаес сЬе рпп6ес! агюь сю!се члсЬ !гоагпу1 а1соЬо! со гегпоче гейЯпа! еСуе Ьозп йе СусчЛ. 1О. Ехсгасс сЬе йа1ухес! кагпр1е аечега! с!псов ъч!сЬ п-Ъпсапо1 со гег)псе !са чо1шпе со )еаа сЬап 3 пс!. 11. рееочег йе 6!а)убег! РХА Ьу агапе)агс! есЬапо! ргес)р!сас!оп. 12. Еу!аао!че йе ЕуЫА сп ТЕ (рН 7.6) ас а сопсепсгасюп оЕ 300 — 500 )сц/гп!. 13. Меаапге йе сопсепсгайоп оЕ йе Е11)А арессгорЬосопсесйса11у (! ОЕ1, = -50 Ссвугп!), апс! апа!ухе ап а!!с!по! Ьу е!ессгорЬогеа!а сЬгопаЬ а 0.596 ааагоье ае! со аааеаа !са рппсу.
5соге йе Е!Ь)А ас — 20"С сп а!и!поса оЕ 1 — 5 !се. Рго1осо~ 1 7 Раг6а! Вфеь6оп о1 Еи1сагуобс 0МА аког Нее ~и Сепоппс БЬгапеь: Р~1о1 Кеас6опя н !сн-могвснглк-тчнснт ОЙ!А слн вв гклсментю ш а опая-гапдош гааЬюи, !ггеаресг!че оГ па Ьаае сошроа!г!оп апд иег)пепсе, Ьу Ьудгодупаш!с ацеадпц (р1еаае аее ТаЫе 12-1 ш СЬаргег 12, Ргогосо1 1). Нотчечег, РЬ)А ргерагес1 (и ГЫв тчау тес)шгеа ехгепяче епкушаг!с шашри!аг!опа (герагг оГ гегппш, шегЬу1агюп, 1(цагюп го 1ш1сегя д!цея!оп оГ 1!и)сета) го ргогесг шгегпа1 геагг(сг!оп ягеа апд го цепегаге соЬеяче гепиш1 сошраг!Ые х!гЬ гЬоае ог" йе чесгога гьед го цепегаге цепоппс 01!А! !Ъгадев (Машагь ег а1.
1978). Оп йе огЬег Ьапс1, раг6а! д(цеагюп тч(гЬ геагПсгюп епкушеа гЬаг гесоцп)хе !тес)пепг1у оссигПпц геггаппс1еог(де аецпепсеь гч)гЬ(п еп1сагуоггс 1тХА у)е!да а роро!аг!оп ог (гацшепта йаг ь с1оае епопцЬ го гапдогп (ог гиапу рпгроаеа апд уег сап Ье гьед тч(гЬопг 6лгйег шаи!Рп1агюп го цепегаге цепоппс 11Ьгапея ТЬе го!1отч!иц аге Гопг шегЬосЬ соппиоп!у гьед 1ог рагс!а! д(цезгюп ог Ь(цЬ-шо!есп1агтче!8Ьг РХА ги зо!пг!оп: ° чагугпц йе сопсепггаг!оп о(гЬе епхуше ° чагу)пц йе!епцй ог йе шспЪаГ!оп ° !пп!Г(пц ГЬе сопсепсгаЬоп о( Мцг' (А1ЬегЬеп еГ а1. 1990) ° ргогесг(пц а апЬаег о( геагг(сг)оп ягев гч!гЬ йе соцпаге шегЬу1аае (НоЬе)ае1 ег а1.
1989) ТЬе ()гя ог" гЬеке шейодв (а гЬе яшр1еаг го кег пр апд, !и опт Ьапдя гЬе гпоя гергодпс(Ые. ТЬе спид(!юпхт гог рагг!а! д(цеаг!оп аге еагаЫ)аЬед ешр(Псацу ш рг1ос ехрегппепь ргеаепгед ш йь ргогосо!, тчЬоае 1пгепг ь го шахйпгхе йе у(еЫ ог угацшепга о! а иге арргордаге Ког пьеггюп шсо а чесгог. ТЬе апп ог гЬеве япа11-аса!е геасгюпа ь го дегегпппе йе агиопш ог епхуше тес)п!гед го гедпсе йе шода! яхе о( гЬе его го 20-25 )сЬ (тчЬеп ЪасгедорЬаце л !а гьед аа а чесгог) ог -45 )сЬ (гог сопягпсг!оп ог 1гЬгадев гп сояшда). ТЬе ордпшш ашоппг о(епкуше песеяагу гч1!1 чагу гог еасЬ ЬагсЬ ог епхуше апд ргерагагюп ог" ВЬ)А. Оп гЬе Ьаяа ог гЬе геап!га оЬгашед (гош йе рг!ог ехрегппепь,!агце-ьса1е ргерагаг)че геасг!опя аге аес пр, еасЬ сопса(пшц а118Ьг1у д(йегепг сопсепггаг!опа ог геагг)сг(оп епкуше (Ргогосо1 18).
2. 76 Ргососо! 17г Рагс/а! Е/1ееьс(оп оТ Еи(гагуос!с Ег(ь/А (ог Е/ье т беиоипс /лЬгапеьг Ргlос Рсеасс/оиь 2.77 То сопьсгисС а еепогп(с !!Ьгагу, йе ачегаее (епесЬ о1 йе пап(пе пепит(с 0Ь/А ьаоиЫ Ье а1 (еаь1 е(аЬ1 йпеь йе сарасссу о! йе чессог. ТЬЬ ь/ге гапее епьигеь сЬаС йе та!опсу оl 0ЫА гпо(еси(еь сгеасес( Ьу рагВа! с((аеь6оп сч(й геьспаВоп епауизеЬО аге Вегвес1 1гогп (псегпа! ьеетепсь о1 йе Ь(еЬ-гпо(еси(аг-сче(еЬс 0г(А апс1 йегеlоге сапу Сепо(п! йа1 аге сотраВЫе ъч!СЬ йоье о1 йе чес1ог апиь. МеСЬосЬ Со 'ьо!аСе пепит/с 0Ь/А о1 сЬе гессе(гесс ь(хе аге ргеьепсесс (и СЬарсег 6, Ргососоа с апс3 2. ТЬе ыге о1 сЬе пепит(с 0/4А Ьеlоге с(!ееьсюп ьЬои!с( Ье сЬесссес( Ьу рисьес(-Ве(с( есесггорЬогеь(ь ог Ьу сопчепсюпа! е(ессгорЬогеяь 1ЬгоиеЬ а 0.7% а5ггоье ее(, иь(пе аь гиагссегь ос!еогпегь о1 Ьассег(орЬаде / 0г(А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
