Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 60
Текст из файла (страница 60)
1пуесс сЬе си1сиге сч)сЬ -10 рЕи оЕ ЬассегюрЬа8е Х сп 50 — 100 )с! оЕ 5М. А!сЬоиВЬ споя всгаспв оЕ Ьассег!орЬа8е Вговч ьче1! сп 11г)и)й си!сше апй гои6ие!у усе!й 1увасев сопса!пгп8 5 х 10в руи/ш1, сЬеге аге ьогпе в!гасив сЬас гер11сасе роог!у. ТЬсв ртоЫегп сап пусси Ье ю1чей Ьу 1псгеаяпц сЬе тасю оЕ ЬассегсорЬаВе со Ьассепа си йе шуессюи ог Ьу Вгоюша йе шуессей си!шге ас 39'С, сЬе ор6пгшп сепсрегасиге Сот ВгочгсЬ оЕ сегсаси вставив оЕ Ьассег)орЬа8е. 1п аййсюп, вогпе спчев68асогв ргеЕег со саггу оис сЬе айвогр6оп всер ас 0'С Еи йе ргевепсе оЕ 5 шм СаС! Ерассегюи аий Есеаи !987). ТЫв ргосейиге а11осчв а пюге иштогш шуес6ои апй вуисЬгопоы ВготчсЬ оЕ йе Ьассег!орЬа8е.
3. !псиЪасе сЬе шЕессей си!сиге Еог 20 ш)посев ас 37"С со а!!осч сЬе ЬассепорЬа8е рагск1ев со айьогЬ со сЬе Ъассепа. 4. АсЫ 4 ш1 оЕ ХХСУМ ог 1.В шейшп, ргесчагшей Со 37'С, апй шсиЪаге СЬе си!Сиге чч)СЬ ч18- огооь а81сасюп ипп! !уяь оссшь (иьиа1!у 8 — 12 Ьоигь ас 37"С).
АЬйсайои Ь Ьевс ассогир1ЬЬей Ъу роя6ои)и8 сЬе си1шге шЪе 1и а вЬа1сег шсиЪасог 1300 сус1евгшсписе). То епвиге айес!пасе аега6оп, йе сар оЕ сЬе си1сиге шЪе вЬои!й лот Ье 68Ьс1у с!овес1. ТЬе оивес оЕ 1уяв Ь спаг1сей Ьу а йв6псс йесгеаве си сигЬгйсу оЕ сЬе си1шге самее! Ьу сЬе йеягиссюп оЕ сЬе Ъассепа1 се1Ь. 1Е йе си!шге Ь Ье1й ир со сЬе!18Ьс, сЬе 5сЫ1егеп раиегпв апсс яВсу арреагапсе оЕ а йепве, ип1увей Ьассепа! си1сиге вЬои!й иос Ье чсвЕЫе. Се!1и!аг йеЬгЬ, арреапп8 ав счЫс)вЬ ьсг!и8в ш сЬе гпейшп, гиау Ье чсвЕЫе ирои 1уяв. 1Е 1уяв йоев пос оссиг ог ы гисошр1есе аусет 12 Ьоигв оЕ гпсиЪасюп, айй аи ессиа! чо1игпе оЕ ргегчаппес1 АСТМ ог 1.8 гпейшп со сЬе си1шге апс1 соисшие шсиЪасюи Еог а ЕигсЬег 2 — 3 Ьоигв ас 37'С чйсЬ ч18огоив а81сассоп.
5. АЕсег !уяь Ьав оссиггей, асЫ 2 йгорв (-100)с!) оусЫогоЕопп апй соп6пие 1псиЪасюп Еог 15 ппписеь ас 37 "С. 6. СепспЕ08е сЬе си1гиге ас 4000е (5800 грш сп а 5огча11 55-34 гогот) Еог 10 ппписеь ас 4"С. 7. Кесосег сЬе ьирегпасапс, асЫ 1 йгор (-50 )с!) оЕ сЫого)опп, апй ьсоге сЬе ч)гиь ьсос1с аь йевспЪей сп сЬе рапе1 оп ЕОЫС-ТЕКМ 5ТОКАСЕ ОГ ВАСТЕК1ОРНАСЕ х 5ТОСК5 сп Ргососо1 3. Рго1осо! 5 ~агре-ьса1е Сгоюй о1 Вас1епорйаце Х: ! п1есбоп а1 Еоч~ Ми! Мр! ~Ойу | Авсе Ос!Агет1т1е5 ое влстек1орнлсе л мАч ве Ркерлкео Ьу спЕесбоп оЕ а Ьассепа1 сп1шге ас )осч пш16р1кЬу 1гсеаспЪес1 сп сЬ)а ргососо)) ог Ьу 1пЕессюп ас Ь!дЬ пш16р1кЬу 1ргеаепсед ш сЬе рапе1 оп АЕТЕКЫАТ1НЕ РКОТОСОО !АКОЕ-5САЕЕ СКОЪЧТН ОГ ВАСТЕК!ОРНАСЕ Л: !ЫЕЕСТ1ОЫ Ат Н1СН МЫТ!РЕ1Ссту аг СЬе епгс оЕ сЬ15 ргоСосо1).
АЕсег шЕессюп ас 1ои пш16р1ссЬу, СЬе сп1спге !а сгапаЕеггесс ппшейасе1у со а 1агВе чо1шпе оЕ шейшп. Весапае оп1у а япа11 Егассюп оЕ сЬе шсба1 Ьассепа1 роро)ассоп 15 гпЕессей сЬе пп!пЕессед се115 ш сЬе сп1спге соп6ппе со йчЫе Еог аечега1 Ьопгя Нои ечег, апссеаяче гоппсЬ оЕ ВгосчсЬ ап6 гешЕес6оп 1еаг! со сЬе ргодпсс!оп оЕ)псгеаяпВ г!пап!)ссеа оЕ ЬассепорЬаВе. Ечепспа)1у, а11 оЕ сЬе Ьассепа Ъесоше шЕессе6 апс1 сошр1есе )уяа оЕ сЬе сп1шге осспгя Саге 15 гег)п!ге6 ипсЬ ЕЬса шесЬог! Ъесапае япа)1 сЬапвеа ш сЬе гасю оЕ се!15 со ЪассегюрЬаве рагск)еа )п сЬе шрба1 1пЕессюп Вгеас1у а1уесс сЬе Впа1 у)е16 оЕ ЪассепорЬаВе рагпс1ея рпгсЬегшоге, сЬе орсппшп га60 чапеа Сог 61ЕЕегепс а!саша оЕ ЬассепорЬаце Л ап6 Ьассепа. Х11Ь а 1Кс)е еЕЕогс, Ьосчечег, сЬе шесЬо6 сап Ъе адарсес1 Еог пае ипсЬ шоас сошЪ)па6опа оЕ ч)гпа апс1 Ьоас се11я ТЬ)а арргоасЬ )а рагбсп1аг)у ъче!1-ашсе6 со 4!осе-ВгоичпВ асса!па оЕ ЬассепорЬаае Л (е.В., сЬоье ЬагЬоппа !агВе Вепошсс Е!ХА 1паегса).
ТЬ)а ргососо1 !а а пюй6са6оп оЕ а шесЬод Вгас деаспЬес1 Ьу В1аппег ес а1. (1977) ап6 15 Ьш опе оЕ гпапу чапапса ш сопппоп пае. МАТЕ!с!А15 САССТ1О!х1: Рсеаае аее Аррепйх сг Еог арргорпаге Ьапг)110К от тагепа15 гпаг1сед иасЬ <! >. ВссЕЕегв апс! Бо!и6опв Рсеаае аее Аррепйх С Еог согпропепга оЕ а!ос)с ао1011опа, Ьиттега, апгС геаКепеп 01!иге а!ос!с ао106опа Со СЬе арргорпаге сопсепгга6опа. СИогоЕоггп (1> 5М Мейа ХсСУА4 Рог а ьгаггег си!гиге, ргераге 100 гос от СесСУМ 1п а 500-ги1 сопгсас ЙааСс.
Рог г аЬаевиепс 1агВе-аса!е сп1- сиге, ргераге 4 х 500-гп! а119иоса от ГссСУМ !и 2-11сег ВааСся рггу аггпегС со 37'С. Еопг агСосс!опас 500- ги1 а11гСиоса гпау Ье пеегСегС Сог евер 9. Ртогосо! 5: Е.аг8е-гса!е 6гогч/И о~Васгег/орИице Х:!папесс/оп аг Е.огч Ми!г/р!/сну 2А1 Сеп!г!Ессее5 апс! Ко4ог5 5огча// 55-34 ог ег/и/ча/епс Ас!с!Жопа! Кеаееп15 5гер у у о/ ЕИь ргогосо/ гег/и/геь ЕИе геадепгх Их/ее/ /и Ргогосо/ б о/ ЕИ/х сИаргег. Чеспаг5 апс! Вас!ег!а! Яга!п5 Н/цИ-Г/Гег хсос/г о/ ЬасгепорИа8е / Ргерагей ах йехспЬей !и Ргососо! 3 ог 4 оЕ гЬ/х сЬаргег. ТЬе 6гег хЬоиЫ Ье 10г го Еоя РЕи/ш1.
МЕТНО0 1. 1поси1асе 100 т1 оЕ !х)ХС"г'М !п а 500-т1 сопка1 Е)ах|с чч!ГЬ а яп81е со1опу оЕ ап арргорпаге Ьасгепа! ЬоЯ. 1псиЬаге гЬе си1гиге очегп!8Ьг аг 37'С хч!ЕЬ ч!8огоих а8!гаг!оп. 2. Меахиге ГЬе О)3 оЕ йе си1Гиге. Са1си!асе ГЬе се11 сопсепсга6оп аххит!п8 ГЬас 1 О!3 1 х 10ч се1!х/т1. 3. уч!ЕЬйгахч Еоиг а!!г)иогя еасЬ сопга!и!п8 10'а се1!я Сепгпйл8е еасЬ а1!г)иог аг 40008 (5800 грт ш а 5огча11 55-34 гогог) Еог 10 т!пигех аг гоот гетрегагше. Р!хсагй ЕЬе хирегпагапгя 4. Рхеяырепй еасЬ Ьасгепа1 ре11ег !п 3 т1 оЕ 5М. 5. АсЫ йе арргорпаге питЬег оЕ !пЕесг!оих ЬасгепорЬа8е рагпс1ех апй ххч!г! ЕЬе си1гиге го епягге йаг йе шоси!шп !х й!хрегхед гарЫ!у гЬгои8Ьоиг гЬе си1гиге. ТЬе пшпЬег оЕ ЬасгепорЬа8е рагс/с! ех ыей ь сгисса!. Рог ягашх оЕ ЬасгепорЬа8е Л гЬаг 8гоы 1че1! Ее.8., ЕМВ13 апй 4 апй Х8г10), айй 5 х 1О' РЕи го еасЬ хмрепхюп оЕ 10'~ се1!х; Еог ЬасгегюрЬа8ех йас 8гохч ге1абче1у роог1у Ее.8., гЬе СЬагоп хепех), и Ь Ьепег го шсгеаье йе хгап!п8 !посо!игп го 5 х !Ох РЕи.
Ноюечег, ЕЬеге аге по Ьагй апй Еахг ги!ех, апй гЬе соус!еп6оы шчехпаагог чй1! ипйоиЬсей1у хчапс со ехрепгпепг со 6пй гЬе гпи16р!Ыиу йаг 81чех гЬе Ьехг гехи!гх. 6. 1псиЪасе йе шЕессей си1Гигех Еог 20 пипи!ею ас 37"С хч!ГЬ гпсеппгссепс хгч!г1!68. 7. АгЫ еасЬ гпЕесгей а1н)иос го 500 т! оЕ ХХС г'М, ргеччагтей го 37'С ш 2-!пег Е)ах)сх. 1псиЬасе йе си!сигех ас 37'С ъч!ГЬ ч!цогоих хЬаЫп8 (300 сус1ев/т!писе гп а го!агу ьЬа)гег). 8. Ве8!и со топпог гЬе си1гигех Еог 1ух!х аЕгег 8 Ьоигя Сопсот!гапг 8гоччгЬ оЕ Ьассепа апй Ъасгег!орЬа8ех ьЬои!д оссиг, гехи!г!п8 ш !уях оЕ гЬе си!гиге аЕгег 8 — 12 Ьоигя 1Е 1уях Ы оЬзегчес1, ргосеей го 5гер 1О.
А Еи11у 1ухей си1гиге сопга/пх а сопяйегаЫе апюипг оЕ Ьасгепа! йеЬгсп хчЬ1сЬ сап чаху /п арреагапсе Егоп1 а 6пе, хр1!пгегу ргес!р!гаге го пшсЬ 1аг8ег, хгпп8у с1шпрх. ЕЕ гЬе си!шгех аге ЬеЫ ир го йе 1!8Ы, гЬе 5сЫ!егеп раиегпх апй яПсу арреагапсе оЕ а йепхе, ип1ухей Ьассепа! си1гше хЬои16 пог Ье ч1х!Ые. 9. ! Е 1ух!х )х пос аррагепг аЕгег 12 Ьоигв, сЬес)с а япа11 хатр!е оЕ гЬе си!гигех Еог ечЫепсе оЕ ЬасгегюрЬа8е 8гохчгЬ. а. Тгапхуег гхчо а1!с)иогх ( ! т! еасЬ) оЕ гЬе гпЕесгей си1гиге гпго 81ахх гиЪея Ь. АсЫ 1 ог 2 йгорх оЕ сЫогоЕогт (-50-100 р1) го опе оЕ ЕЬе гиЬея апй !псиЬаге ЬогЬ шЬех Еог 5-10 т!писех ас 37'С хч!ГЬ гпсегпииепс хЬаЫп8. 2.44 СБаргег 2г Вас!ее!орЬаче ). апгй!ь \~есгогз МЕТНО0 Ргесйрй1а6оп о1 Вас1егйорйеаде Раг6сйе5 ччй1Ь РЕС Соо! ЕЬе 1уаесй си1гигеа сои!а)п)п8 ЬасгегюрЬа8е ) го гоопг гетрегагиге.
АсЫ рапсгеапс )3Ь)аае 1 апсй КЬ)аде, еасЬ го а 6па1 сопсепгга6оп оЕ 1 )г8йп1. 1псиЬаге !Ье 1уаесй си1гигеа Еог 30 шйпигеь а! гоопг гетрегагиге. Сгис)е согпгоегсга1 ргерагабопа оЕ Ъой РЪГаае 1 апс) КХаае аге гпоге ЕЬап ас)ес)иаге го с88ея ЕЬе пис!е)с асЫа 1гЬегагес! Ьогп 1уаес) Ъасгепа ш !!Па егер оЕ ЕЬе ргогосо!. ЧЧ)ЕЬоиг с88еаиоп, а ы8шЕ- кап! пшпЪег оЕ ЬасгегюрЬа8е рагис!еа Ъесогпе оп!гаррос) )п гЬе а1ипе оЕ Ьоя пис1егс асЫа. То еасЬ 500-ги1 си!гиге, асЫ 29.2 8 оЕ ю!Ы Ь)аС! 16па! сопсеп)гапоп, 1 Ь!). 5чч!г1 ЕЬе си1!игеа ип61 йе аа11 Ьаа йаао1чесй. 5гоге ЕЬе си1шгеа Еог 1 Ьоиг оп ке.
ТЬе ас)йг)оп оЕ Хас) ргогпогеа гПяосгаПоп оЕ ЬассепорЬа8е рагис)еа Егогп Ьасгепа! с)еЪг)а апс) !а геишгеа Еог еЕПсгепг ргес!Р1гагюп оЕ ЪассепорЬа8е рагс)с!еа Ьу РЕС. 5оше гпчеа08асога ргеЕег со асЫ гЬе РЕС 15гер 4) аг йе аапге г!гпе аз ЕЬе ХаС! Е5гер 2). ТЬе сепгпЕи8апоп яер ЕЗ) гпау ЕЬеп Ъе опиггес1. Ногчечег, Ъе игагпес) йаг гЬе яши!гапеоиа асЫеПоп оЕ РЕС апс) Ъгас! гчог)са еЕйс)епс!у оп1у гЕ гЬе ЪасгегюрЬа8е 8гояа гче1! агн1 ЕЬе Пгег оЕ ЪаяепорЬа8е гп ЕЬе оп8!па1 1уаес1 си1шге Ь )2 х 1О'а РЕиЕш! Кеточе сйеЬг!а Ьу сепгп628апоп аг 11,0008 (8300 гргп ш а 8огчаП СВА гогог) Еог 10 пипи!ее ас 4'С. СотЬ)пе ЕЬе аирегпагап!а !гот ЕЬе Еоиг си1гигеа !иго а с1еап 2-1пег Пгасйиагегй су!йпсйег. Меаыге йе чо1шпе оЕ ЕЬе роо1есй гшрегпагапга апсй гЬеп ггапьуег йе ргерагагюп го а с1еап 2-16ег Пав)с.
АсЫ ю!Ы РЕС 8000 го а 6па! сопсепггагюп оЕ !0% чч)ч (!.е., 50 8 рег 500 гп1 оЕ яарегпагапг). !)1аао1че ЕЬе РЕС Ьу 51очч яггпп8 оп а та8пепс апггег аг гоот гетрегатге. Тгапауег ЕЬе ао!и!юп го ро!ургору!епе сеп!г!Ьг8е Ьогбея соо1 ЕЬе ЪасгепорЬа8е)РЕС ао1игюп йи ке ъчагег, апс1 йоге ЕЬе сепгпуи8е Ьогг1еа Еог аг 1еаа! 1 Ьош оп ке го аПосч ЕЬе ЬасгегюрЬа8е рагг!с1еа го ргесгрйаге.
Кесочег йе ргес!РЬасес1 ЬасгегюрЬа8е рагпс1еа Ьу сепггйуи8агйоп а! 11,0008 (8300 грп! Еп а 5огчаП СВА гогог) Еог 10 т!пи!ее а! 4'С. 131асагсй йе вирегпагапгя апс1 агапсй ЕЬе гпчеггес1 сепгпуи8е Ьоп1еа !п а ЕПгесй рояпоп Еог 5 пипи!ее го аПоъч гЬе гегпашш8 Пшд го сйгайп аъчау Его!и йе реПе!. Кепюче апу геясЬла! 6ОЫ ъч!ЕЬ а р!Регге. ЕхФгас6оп о1 Вас1егйа! ОеЬгй5 ъчй1йе Сй)його1огеп !чае а ччЫе-Ьоге ргрепе ес)шрресй счйгЬ а гиЬЬег Ъи1Ь го геаиьрепсй ЕЬе ЬасгегюрЬа8е реПе! 8епг1у гп 5М (8 гп! !ог еасЬ 500 т1 оЕ гшрегпагапг Егот 8гер 3).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
