Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 59
Текст из файла (страница 59)
Кереат йЫ атер нпт)1 йе сопсепь оЕ еасЬ оЕ )Ье тнЬеа Ьаче Ьееп тгапаЕеггет) опто аерагате р1атея 3. 1пснЬате йе р)атеа |чттЬоит тчегт)оп Еог -! 2 — 16 Ьонга ат 37'С. Р)атет аге пот )пчегтет) т)ит)п8 |псиЬатюп то епсоига8е ячеаВп8 о1 Ин)т) опто |Ье | нг(асе от |Ье йтЬ, тчйсЬ а))отчт йе Ьастег)орЬа8ет то тргеат) гонге еая1у. Лт |Ье типе о1 Ьагчетт)п8, йе р)ат)иет тЬои)т) тонсЬ опе апотЬег, апт) йе оп!у гИяЫе Ьастепа1 Иготчй тЬон)т) Ье а Ианту |чеЪЬ~п8 |Ьат птаг)тт йе )ипстюп Ъевчееп ат))асепт р1а|Р|ея ТЬе р1ате сон|а)п)пИ ип)птестет) се1Ь тЬои)|) т)ече)ор |пто а япоой )а|чп о( сопйиепт Ьастепа! Иготч|Ь. 4.
Кетоне )Ье р!атее Егогп йе |пснЬатот ап|1 а|Ы 5М (5 т1 то еасЬ 10-ст р)ате ог 10 п|1 то еасЬ ) 5-с|п р1ате). 5)оге )Ье р!атеа Еог тенета) Ьоига ат 4"С оп а аЬаЫп8 р)а)Еопп. 5. 1)а)п8 а аерагате Раатенг р)ретте Еог еасЬ р!ате, тгапаЕег аа пшсЬ оЕ (Ье 5М аа ро|ь)Ые што атеп)е асгетч- ог анар-сар ро!ургору1епе тнЬея 6.
А|Ы 1 тп1 оЕ ЕгеаЬ 5М со еасЬ р!асе, атн)г! йе йн)т) Вепт)у, ап|1 атосе )Ье р)атеа Еог 15 т)потек ш а т))тет) рот)т)оп то а!!о|ч а11 оЕ йе Е)шт) то т)гаш ш1о опе агеа. А8а)п гепюче тЬе 5М апт) сотЬше К тч))Ь (Ье йгат ЬагчегЬ )3)асагт) йе р!ате. 7. А|Ы 0.1 тп! оЕ сЫотоЕопп то еасЬ оЕ )Ье тнЬеа сон(а)пш8 5М, чогтех йе тнЪеа Ьпе))у, апт) )Ьеп теточе )Ье Ьастепа! т)еЬпа Ьу септт)Ен8атюп ат 4000ч (5800 гргп ш а 5огна11 55-34 гогот) Еог 10 т)потек ат 4"С. 8.
ТгапаЕег йе анрегпатапта со ЕгеаЬ ро1ургору!епе тнЬеа, апт1 а|Ы 1 |Ьор оЕсЫогоЕопп то еасЬ тнЬе. 5тоге )Ье геан)т)п8 ЪастегюрЬа8е р1ате атос)са ат 4"С. 9. Меаанге )Ье сопсептгатюп оЕ шЕест)она н)гоа рагт!с)еа |и еасЬ атос)т Ьу р)ат)не а|ьау аа т)еаспЬет) ш Рготосо1 1. ТЬе багет оЕР1ате ттос)тт аЬои)т) Ъе -) 0' то ) 0" РЕн) гп! агк1 тЬон)|) ген|ай ттаЫе ат!оп8 ат |Ье тюс)| Ь ттогет) ргорег!у (р)еате тее |Ье рапе! оп ЕОЫС-ТЕКМ 5ТОКАСЕ ОЕ ВАСТЕК!ОРНАСЕ х 5ТОСК5). ЕО)х)С-ТЕКМ 5ТОКАСЕ ОГ ВАСТЕК!ОРНАСЕ Е 5ТОСК5 5)ос)та о1 |почт атга)па о1 Ьастег)орЬа8е х аге атаЫе Еог тенета! уеага иЬеп а)огет) ас 4ОС )и 5М сон)а)п- . ЫИ а япаИ атоипт о( сЫого(опп (0.3% чМ.
Ноиечег гпапу )пнеат!Ватага Ьаче тонн|! йат югпе Ьасте( гюрЬаВе Л гесоп|Ь)папй !оке иаЬИИу и4|еп атогет) )и )Ь!а ънау 1ог а )еи гпоп)Ья ТЬь ргоЫеп| сап ия|- | аИу Ье ачойе|1 Ьу |ып8 )геФ!у тИа)И!ет) сЫого1опп ог сЫого1огп| )Ьат Ьаа Ьееп ехтгастет! и()Ь апЬут)гона аотИнт Ь)сагЬопате то геп|оче рго|1ись о1 рЬото!уяя Нотненег и е а!|ю гесогпгпеп|) )Ьат (Ье Итег о1 таатег атос)та Ье сЬесЕет! ечегу 2 — 3 |попйа апт! йат |почтет атос|я о1 аИ 'кпрогтапт Ьастег)орЬа8е х ягяпа и Ьоае Вепотуреа Ьаче Ьееп нег!Иет) Ье атогет) ат — 70'С.
Ве)оге атога8е, ат)т) т))|пе)Ьу)аи)1охк)е 03М5О) то )Ье ЬастегюрЬа8е атос)т то а Ипа! сопсептгатюп о) 7;6 (н)ч) Сепг!у |пчегт йе тиЬе аечегй )|тек то еп|юге йат )Ье Е)М5О апт) йе н)гна атос)т аге (ЬогоиИЫу |п)хет). Инп8е йе аеа)ет) тнЬе )пто 1к)- н)т) п)тго8еп. |М|еп )Ье Ит)н)т) Ьаа (готеп, (тапа)ег йе тиЬе то а — 70'С )тесте| 1ог!оп8-тегп| атога8е.
То гесонег йе ЬастегюрЬа8ея 1. Ат)т) 0.1 |и) о1 р!аИ п8 Ьастепа то 3 гп) о1 гпоКеп тор а8аг ат 4 TС. М|х )Ье соптепЬ о1 йе )иЬе Ьу тарр)п8 ог Вепт!е чогтех)п8 апт! йеп роиг И|е соптепь о1 йе тнЬе опто ап сВ а8аг р)ате йат Ьть Ьееп ет)нИ)Ьгатет) то гоогп теп|регатиге. 5)оге И|е р)ате Еог 10 |п)антек ат гоот тетрегатнге (о аИонч йе тор а8аг то Ьагт)еп. 2. 5сгаре йе анг(асе о1 йе Еготеп Ьастег!орЬа8е атосЕ тн)(Ь а атегИе 18-Ваи8е пает))е. Сепг!у аггее)т йе пее|Ие онег йе Ьап)епет! антЕасе о( йе тор а8аг. )пснЬате йе )п(естет! р!ате (ог 12 — 1 6 Ьоига ат йе арргорпате теп|регатиге то оЫай ЬастепорЬа8е р!а|)иея 3. Р)с)т а ънеИьо)атее) р)ат)не апт) Вепегате а Ь)ВЬ))тег атос)т Ьу опе о1 йе гпе(Ьо|Ь т)етспЬет) ) и Рготосо! 3 ог 4.
Ртогосо1 3: Ргераппц 5госЫ о7" Васгег(орГлаце Х Ьу Р|аге Еул|л апгГ Е)и(|оп 2.37 АЕТЕК)ъ(АТ!ТЕЕ РКОТОСОЕ: РКЕРАК!)ъЕС 5ТОСК5 ОГ ВАСТЕК!ОРГЕАСЕ Е ВУ РЕАТЕ ЕУ5!5 А)х)0 5СКАР| Ч 5 Ап а|(егпа(ве те(Ьог) 1ог ргераппд р|а(е !уна(ен Епчо!чен гесочеппц (Ье Ьасйег(орйацен 1гот йъе р|а(е Ьу асгар|пд ~ ЕЬе ной ацагоне Ы(о 5М. ТЫ5 арргоасЬ нийегн (голь ЕЬе г(гаччЬас)г о1 соп(ат(пайоп ъи(Ь ни((а(ег( ро)унассйаг(г|ен ' алс! ц!усапн (Ьа( гпау |пЫЫЕ Ейе асйч(|ен о1 еюпле епгутен инег| 1ог Еипйег тап(ри(айопн о1 гееочеге6 (ТГ(А Кесочегу о1 Ьас(ег(орйаде 1гопь р|а(е 5(ос(45 Ьу е|ийоп 'ь с(енсг(Ьен( |п Рго(осо! 3; ргерагайоп о1 Ьас(ег(орйаде 5(ос(ьн Егогп нтай Псйлк! сиИиген 'ь ргенеп(ег( |п Рго(осо! 4.
Ае(ЕЕ|1!опа! МаГег!а!5 ЕВ ог Х2СГМ еор ацагоне Ггераге ан а 0.5% (ъчМ но|ибоп (пн(еагЕ о1 ЕЬе 0.7% но)и((оп. ТЬе ине о( гйе |оъчег сопсепегайоп о1 еор адагоне Гасйеаеен гегпоъа| о( еЬе |ауег о1 еор адаюне. Адагоне В рге(еггегЕ ео айаг (и ЕЫн ргоеосо! (и огс|ег ео пнпнпые сопеапнпайоп чн(ЕЬ (пЬ(Ь(гогн ЕЬае сап (п(егЕеге ъчл(Ь нийнег(иеп( епхугнаг(с апа|угд о( Ьасеег(орйаде ОГЛА л(генг(иаее у|е|ед ое вол ига(пн о1 ьагеепорьаде х сап ье оьеа|пес! ьу ияпд !.В ог Г(2счм ьоиот адаг ан геенспьь( юиче ( Ноъчечег, П ргоЬ|егнн анне, (гнргочег( у|е|сЬ сап ойеп Ье оЬ(а(пег( 1гогп ГВ Ьоиогп адь ЕЬаг Ьан Ьееп нирр)егпепгес( ин(ЕЬ: 0.3% (ъчМ В)неоне 0.075 гпм СаС! 0.004 тм ГеС|, 2 гпм МП5О С)неоне гергеннен где /агпй депе апг( ЕЬин гег(исен Ейе агпоипг о( Ьас(егюрйаде ЕЬае В |онг Ьу аг)легре(оп Ео Ьагнепа! с|еЬгь (р|егье нее ЕЬе репе| оп АОО(Т(ОН ОГ МАЕТО5Е ГОВ СВОЧЧТН ОГ Х (и Рго(осо! 1). Са|сннп Ыпн аЬо гег)нее |огь Ьу геаг)ногргюп, ъчйегегь 1егпс Ыпн гпау гйпли|аге генр(гаг(оп агн! нирргеь ЕЬе |унодепк рагйъчау о1 Ьаглегюрйаде с|ече|оргпепг (АгЬег ес а!.
1983). Ме(Ьо В 1. Ргераге (пГес(ег( си!(иген 1ог р!абпд: Гог а 10 ст сйате(ег Ге(п с()ейг М|х 10' рЫ о1 Ьас(ег)орЬаце (иеиайу — 171 0 о1 а геяьрепс(ег( |псйп Ыиа| р(аг(ие ог 1!100 о1 а тасгор!аг(ие ь(ГЬ 0.1 т! о1 р|айпц Ьас(епа). Гог а 15-ст Ре(и' г((ьйг М|х 2 х 105 рЫ ъчн(Ь 0.2 гп| о1 р|айпц сецк А!ъчаун не! ир а( )еан( опе соп(го! (иЬе соп(а(п(пц ип(пГес(ег| сейн.
(псиЬа(е (Ье е1ес(ес| апг| сопио! си((иген Гог 20 т|пи(ен а( ЗTС Ео айоъч (Ье ч|плн (о аиаеЬ Ео ЕЬе се|Пи ъчьеп ргераппд неоснн ое (но)а(ег( ьагеепорьаде л. Тьае дгоъч роог|у, (псгьье нюси)ит ео ) 04 рйлго.е пъ! о1 р|айпд ьасеепа. 2.
АсЫ 3 пъ! о1 то|(еп (ор ацагоне (47"С) (10-ет р|а(е) ог 7.0 пъ! о1 гпо|(еп (ор ацагоне (47нО (15-ст р|а(е) (о Гйе йгн( (иЬе о( ! 01ес(ес( сей к М(х ЕЬе соп(епВ о1 йле ЕиЬе Ьу цепйе Еарр|пц ог чог(ех|пд 1ог йче несопс(5 апс|, ит(Ь- оиг г(е|ау, роиг ЕЬе епй ге соп(епгн о( (Ье ЕиЬе оп(о Гйе сеп(ег о1 а |аЬе|ег! ацаг р|а(е. Тгу (о ачок! сгеа(! пц а|г ЬиЬЫен. 5ъиг! (Ье р!а(е цеп(|у Со епеиге ап ечеп сйн(г)Ьийоп о1 Ьас(епа апс! Сор ацагоне. Кереа( йъ(5 5(ер ипй! Гйе соп(епгн о1 ай ЕЬе ГиЬен Ьаче Ьееп (гапн(аггел( оп(о нерага(е р!а(ен.
3. )псиЬа(е Гйе р!а(ен ин(Иои( Елчегн|оп Еог В Ьоигн а( 37"С. Иаген аге гю( (пчеиегЕ г(иппд (псиЬаооп Ео ргечепг ЕЬе Еор айаг!адагоне 1гогп нйрр~пд апд Ео епсоигаде нъчеаг(пд о( йиЫ олго ЕЬе ниг(асе о1 ЕЬе гйнЬ, ъчЬ(сЬ айоъчн ЕЬе Ьас(егюрйаден Ео нргеаг| гпоге ььйу. АЕ ЕЬе йгне о( Ьагченйпд, ЕЬе р(аг(иен нЬоиЫ Соней опе апогйег, апгЕ Ейе оп|у ЫяЫе Ьасгепа! дгоъчЕЬ нйоиЫ Ье а данну ъчеЬЫпд Пъаг гпаг|ь Пъе )ипсйоп Ьеичееп аг(|асепг р(аг)иен. ТЬе р|аге солил|и(пд ип(п(есгег) се|В нЬоиЫ г(гче)ор (пго а нгпоойь |аъчп оЕ сопйиепг Ьасгепа! дгоъчйь. 4. ъ'ъ(Ьеп сопйиеп( )ун!5 Ьан оссиггес(, асЫ 5 пъ! о( 5М Ео ЕЬе р|а(е апс! депйу нсгаре (Ье ной Еор ацагоне (п(о а КегПе сеп(пйлде (0Ье, ин(пц а 5(егйе Ьеп( д(аън гое(.
5. АсЫ ап асЫЖопа! 2 пъ! о1 5М (о (Ье р|а(е (о ппне ой апу гегпалп|пц Еор ацагоне, апг( согпЫпе |( ъчн(Ь ЕЬе Еор ацагоне Ы (Ье ееп(пйде ЕиЬе (Енот 5(ер 4). 6. АсЫ 0.1 гп| о1 сЫогоГоггп (о Гйе ацагоне яьрепн)оп апг( т(х ЕЬе нинрепн(оп Ьу 5!оъч го(айоп ог цепйе айаЫпд ( 1ог 15 т)пи(ен а( 3TС. 7. Сеп(пЫце ЕЬе нинрепнюп а( 40005 (5800 грпь )п а 5огчай 5534 го(ог) 1ог 10 гп|пи(ен а( 4'С.
Кесочег (Ье нирегпа(ап(, асЫ 1 с|гор о1 сЫого(огпз, апг| йоге(де Ыплн 5(ос)с аъ г|енсп|Ьес( (и (Ье рапе! оп ЕОЬЕС-ТЕКМ 5ТОКАСЕ ОГ ВАСТЕК|ОРНАСЕ Е 5ТОСК5). тье йгег о1 р|аее неосен н|юиы ье -10 ео 10'" реиегп! агн| ньоиы гепла|п ленце гь |опд гь гье неос)ъ В неогег! ргорег!. Ртотосо! 4: Ртерат)08 5!ос)гв оУВассет1орЬаце )с Ьу 5та11-ьса1е Елт)ий) Си!тите 2.39 !ч!ЕТНО0 1. 1поси!аге а яп8!е со!опу оЕ ап арргорпасе Е. сой яга)п спсо 5 пс1 оЕ !х)ХС'с'М ог ЕВ шейшп Еп а ьсеп1е ро1ургору1епе си1сиге сиЬе.!псиЬасе сЬе си1шге очегп18Ьс ийсЬ Ы8огоиь ьЬаЫ68 ас 30'С.
СгоъиЬ ат !оьчш сепсрегасиге шсгеавев сЬе сЬапсе сЬас йе се11в счс11 пот Ьаче геасЬей вашгасюи йиг!п8 сЬе очегп!ВЬс Вгосчй репой, Ьеисе ргечеп6и8 сЬе ассшпи1асюп оЕ !агаве апгоипо аЕ се11 йеЬпв сп сЬе гпейшп. ВассепорЬа8ев аййей со вашгасесс си1шгев сап асЬогЬ со сЬе 1.ашВ ргосеси ргевепс оп се11и! аг йеЬгеь сЬегеЬу гейисш8 сЬе 6сег ог' сЬе ЬассегюрЬа8е 1поси1шп. Л!сегиа6че!у, атосе а япа1! очегпсВЬс си1шге ас 37'С, й1ше сисо 5 ти! оЕ ЫХСУМ ог ЕВ гиейшп гп а яеп!е ро!ургору!еие сиЬе, аий гпсиЪасе йе си1сиге Еог 2-3 Ьоигв ас 37 С. 2. Тгапвуег 0.1 ш! оЕ сЬе ЕгевЬ очегпс8Ьс Ъассепа! си!сиге (ргерагей ш 5сер 1) со а ьсеп1е 17 х 100-пип ро1ургору1епе си1сиге сиЪе сч)сЬ а !ооье-Е!11168 сар.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
