Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 54
Текст из файла (страница 54)
ТЬе ип!с)ие ге8!опя оГ ЬастеПа1 апд ч!Та! РМАя шчо1чед гп 1Ье гесогпЬ|пат!оп ечепт ате са11ед анВ апс1 апр я!Тея, геярест|че!у (Гог течтечтя, р!саяе яее ч)те!ЕЬег8 апд ) аиду 1983; Ьапду 1989; МаяЬ 1990; Рт|едшап 1992; СашрЬе11 1993). 1МТ АМО АТТ 1пт гесогпЫпаье (356 апипо ас!дя) Ь а (уре | 1ороЬогпегаье йа1 агп апс! ге|о|пь ОМА ьтгапсЬ опе а1 а Пепе (К!)сисЫ апс! МаьЬ 1979а,Ь; Ноеяя е1 а|. 1980; Сга(8 апд МаьЬ 1983).
|тя ргеГеггед ьиЬ91га1е, а1!еаь1 |п чПго, 'ь с|ояес! с|гси|аг ОМА сиота!п)пП педадче яирегЬеПса! 1игпя ПМ гиисЫ е| а|. 1978; П!сЬет е1 а1. 1986), 1п1 реп- | егатеь а Но|Пдау я1гис|иге Ьу сата1уедп8 а Пчо-ятгапд ехсЬап8е ат а ргесье пис|ео(Ые Ьу иау о| а 1гапь!епт ОМА-рготе|п Ьопс| оп а |утояпе геядие. ВгапсЬ тп)8гатюп йеп оссигь асгоья а 7-Ьр ье8шпепт оНЬе соте, апд |Ье Но1Пдау я(гостите 'ь геьо|чед Ьу ехсЬап8е Ьети ееп |Ье Ьчо о|Ьег ь|гагкЬ. Ргорег роя(1!оп!08 о( |пте8гаяе Ь Гасд!(атед Ьу |НЕ ччЬ|сЬ ЬепсЬ йе ОМА дир|ех !пто ятгис(отея согпрат!Ые 981Ь йе гес)и!гед ОМА рго1е!п (п1егасдопь (Гог геч(еччь, р!еаяе ьее МаяЬ 1990; Кип апд (аиду |992).
|НЕ 'ь а Ьетегод!гпег о( Ьчо ьгпаП ро!урербдеь, |НЕи апг! |НЕ!), епсодед Ьу ЬапА апд ЫтпО (Ы ) рес|' ! ((ЧППег ет а|. 1979). ат(Р ярапь -240 Ьр о( Ьас|епорЬа8е ОМА сеп1егес| оп а 15-Ьр соте йа1 В |с|епбса! рЬа8е апс1 Ьоьт сЬгопюяотпея апд |пс|идеь 1Ье сгоььочег ро1пт (члге!ьЬег8 апд |.аиду | 983 апс| Ь согпроьес| сЫеПу о( 1Ье соте ге8!оп. Оипп8 |п1е8гадоп, ат(Р гесогпЫпеь чдй а((8 1 Пап|сед Ьу гесотпЬшап1 апл апд ап(Т ь|теь, ТЬе (пяепед рюрЬа8е В йеге(оге Ьгас|сетед Ь д(гесТ опепта1юп. Оипп8 ехсь|оп, йеяе Пап)дп8 гереа( я яегче ая яиЬятга1еь Гог гесотпЫп йе а((В аид аПР ятея.
2.26 СЬартет2ГВастет|орЬаеелаид1О(естотя пюят пиг|апп спяр|ау де!ауед 1уягя, гчЪ|сЬ 1еасЬ то аи шгга- сеПи|аг ассшпи1адоп оГ аыешЫед ЪастепорЬа8е рагдс1ея; агЫишп оГ сЫого- Гопп то ап |пс1исес| 5 1уяо8еп геяи1п |и шяапгапеоия |уяя оГ |Ъе си|шге 1иггог!исггои 2.17 Тгамсг1р6ог) о1 РгорЬаре Сепеь А!шпаг а!1 ч!га! ггапасг!Рг!оп га гергеааес) !п гЬе !пгедгагег! агаге; гЬе гехА, гехВ, апг! с! денем Ьочечег, сонг!пие го Ье ехргеваей ТЬе с! депе ргог!исс пос оп1у ЫосЬх ггапхсПргюп о1 еаг1у депеа 1гогп )Ье рд апг! рг ргогпогегя Ъиг а!ео ров!г!че1у геди!а!ее !гв ои п вупгЬеяя ароне сопсепггаг!опа о1)Ье гергеяюг саиае гЬе асг!ч!гу оуйе гпа!пгепапсе ргопюгег, р го !псгеаае; Ь!дЬ сопсепггагюпа !пЬ)Ъгг !и!г!аг!оп о1 ггапвсПргюп аг р „!1ог геч!егч, р1еаае вее РгахЬпе 1992).
А11 о1 гЬеве е11есга аге гпег!!агент Ьу йе Ыпг!!пд о1 гергеяюг го гнчо орегагог гед!опв (ог апг! о ) (р)еаве аее Р!доге 2-б) ()оЬпаоп ег а1. 1979). Васгег!орЬадев ы!)Ь гпигадопь ш депе с1, с11, ог с111 аге ипаЫе го еьгаЫ!вЬ гергевв!оп еудс!епг1у; гЬеу йегеуоге 1огш с1еаг р1аг!иея И!1г)-гуре ргорЬадеа сап Ье !пг!исес) Ьу с1еачаде о1 гЬе С1 гергеваог 1о11онч!пд ехровиге го адепга гЬаг г!ашаде Т)ХА (1ог геч!еьн, р1еаае атее КоЪегга апс! Т)ечогег 1983). С1еачаде оссигв Ъегнчееп ап а1ашпе апг! а 81усше геыг1ие ш гЬе Ьшде гед!оп 1!пЫпд гЬе 1)МА-Ыпйпд апнпо-гегпмпа! г1ошагп апг! йе сагЪоху-гегпнпа1 йгпепхагюп г)оша!и. 1ли1е (1984) Ьаь аЬоъчп йаг с1еачаде о1 йе С1 ргогегп оссига аигосага!уг!са11у аг РН 10 !п ап шггашо1еси1аг геасг!оп йаг йзр1ауа Вггьг-огг!ег Ыпег!сх апг! !в !пг!ерепг!епг о1 ргоге!и сопсепггагюп. 1п чгчо, с1еачаде о1 гЬе А)а-С1у О =Е ~ЕВ =б ргоге)п) аса))о)бвб ргепеа ргеПваб ° = Иоа опса)впа) П)А ЬасГепорпаде Х .1 К нм гпагиге Пас)епорпаде Х рагас)е Г!СЕ)КЕ 2-8 5сЬегпаг!с Е)!адгагп о1 йе АвеегпЫу Ра)Ьгеау о1 Вас!ее!орЬа е л ТЬе депе ргодисга )пно)неб )и еасЬ яер аге )пб)сагед (!ог дега))я р)еаае вее гЬе ассогпрапу)пд гехг апс1 НоЬп !1979!).
ТЬе )еггегв а)дпНу йе ЬасгепорЬаде денев епсоб!пд напоив ягисгига! Ргоге)пв ивеб гп )Ье сопягисиоп о! ЬасгепорЬаде рагбс!ея 2.18 СВаргет 2: Втлсгет(ор)таце Х апт) 16 Ъесгоь Ьопт( апъ1 тЬе сопъеърлепт лпас6на6оп оЕ С! ргосе!и тел)и!тех йе Ьоат КесА рготе!и. Мшапт С! рготе!па (епсот(е6 Ьу с1 тъГ пплтапь) аге геяатапт то КесА-гпеецатед с1еанаце апс1 саппот ипт)егцо аито6!цеа6оп ш чиго. ТЬь апт) тпапу отЬег Пиеа оЕ ен!Вепсе шсцсате тЬас йе Еипсбоп оЕ КесА рготетп Ь то хт)ши!ате ае1Е-с1еанаце оЕ йе С1 ртосе!и (Еог геч(еъчя р1еаае ъее 1лп1е 1991, 1993).
ВастепорЬацеа саггушц а тегпрегатиге-лепят(не пшта6оп (п тЬе с1 цепе аге аЫе то езтаЬ- 1ЬЬ апс1 шатпта(п йе 1уаоцеп!с агате аа 1опц аа йе сеца аге ргорацатеъ) ат !оън сеплрегатиге (30"С). Ат тЬ(а тетпрегашге, йе гергеааог гела)па ть аЪт16у то тпЬтЪи тгапаспр6оп Етотп рт апъ) р . Ноъненег, 1уис цгоъчтЬ сап Ье (пйкет1 Ьу Ьеа6пц тЬе Ьастепа1 си)тите Еог 10 — 15 ш(питев то 45 С, ънЫсЬ рагбацу (пас6насеа йе с16857 гергеааог (5ихашап апд 1асоЬ 1962). А1йоицЬ йе гергея тюг сап гепаплге ъчЬеп тЬе си!тите )а соо1ет) со 37'С (Мапл)а1 апс) 1леЬ 1976), (ь сопсептта6оп Ь соо !оъч то ацоъч гееяаЫьЬгпепт оЕ !уаоцепу.
)патеад, тгапаспр6оп геяипеа Егогп р апд р ънЬеп -8098 оЕ тЬе С1 рготеш Ьаа Ьееп !пастгнатей Ат тЬ(а яаце, оп!у -40 пюпошега оЕ гергеахог тепла!и !п йе сеП, соо япаП а пшпЬег то яьталп соорега6че Ыпт)!пц то о„, апт1 о и 1п асЫ)т!оп, Ьесатье С1 рготеш ат(ши!атеа сгапаспр6оп оЕ (ь оънп цепе, ауптЬеяа оЕ пеъч гергеааог тпо1еси!еъ т(есгеааеа аа йе сопсептгабоп оЕ С! Еаця ТЬе Вьт рготетп ауптЬеа!ген ъчЬеп тгапхст!рт!оп геъишеа Егогп ра !а Сто, ънЫсЬ Ыпт!а то о, Ыос)бпц апу ЕигтЬег ауптЬеяа оЕ гергеааог, апс) йегеЬу сошпиитпц йе ч!га1 цепогпе то а сус!е оЕчецетаттче цгоъчй.
ТЬе !птецгаттоп апг) ехсьюп рготелпя 1пт апд Хь, аст тоцейег со саиае йе аь ятеа то гесотпЬ(пе, гели!т!пц ш ехсицоп оЕ тЬе ргорЬаце Р)ъ(А Егош йе Ьоат сЬгошоаоше. ТЬе 1утк сус1е йеп Еоцоъча ль иаиа! соигъе. СОМЦТКБСТ!ОМ ОГ ВАСТЕК!ОРНАСЕ лс ЧЕСТОКЦ Ат Пгхт ц1апсе, тЬе ат)арта!!оп оЕ ЬастепорЬаце )., ъч(тЬ ъь 1агце ап6 сошр1ех цепоше, Еог тье аз а честог ъчои16 аееш со Ье а Ыеа1с ргоаресс. ТЬе Р)ъ(А оЕ н61с1-туре атгаша сопла!па пш16р1е ягела Еог тпапу оЕ тЬе шоя тье6л1 геатпс6оп ептушея апг! тЬеъе ятеа аге ойеп 1осате6 (п гец!опт оЕ йе цепоше еааепт!а! !ог 1утк цгоъчй оЕ тЬе ч(гия Мотеонет, Ьесаихе ЬастепорЬаце Х рагт!с1ех нКП пот ассошшодате шо1еси1еа оЕ Р)ъ(А йат аге плисЬ 1опцет йап йе ч!га1 цепопле, и пицЫ хееш йас йе н(гиа ъчои!ъ1 Ье ъье6л! аа а нестог Еог оп1у япаП р)есех оЕ Еоге!цп Р)ъ(А.
ТЬеае ргоЫепь, Ьоъченег, аге пот аа Еотш!ъ)аЫе аа тЬеу ш!цЬт ат Пгя арреаг. р!тат, йе септга1 тЬ(гд оЕ тЬе н(га! цепотпе ь пот еяеп6а! Еог !у6с цгоънтЬ. Ву тЬе !асе 1960я пшсЬ ъног)ъ Ьаъ) Ъееп сагпед оит оп ареста!гхед тгападис(пц ЬастепорЬацея ъчЫсЬ аге Еотшеб ънЬеп ехсьюп оЕ Х ргорЬацеа Егош тЬе Ъастепа1 сЬготпогютпе оссига Ьу П1ец(т!тпате гесоплЬ(патюп, гайег тЬап тЬе поппа1 Ьошо1оцоиа ехсЬапце Ъетъчееп ая ятея Рагт оЕ тЬе септта! гец(оп оЕ тЬе чгга1 цепоше Ьесошеь гер1асес) Ьу тЬе аецшепт оЕ тЬе Ьастепа1 сЬгошоаоше Пап!Впц йе !птецгатес1 ргорЬаце. цреслаПгед тгапя(ис!пц ратт!с1еа Пепчеб Егош 1уаоцепа саггу(пц йе Х ргорЬаце ат гь поппа) тптецгатюп ысе !п тЬе Ьастепа1 сЬгопюаоше сап сапу йе Ьоът'а пе!ВЬЬот!пц ца( ог (лто цепея Руаоцепь сатгулпц ргорЬацеь ат есторк штецгатюп ятеь ргоь!исе тгапъъ(ис(пц рагт(с1еъ саггулпц ойег рать оЕ тЬе Е.
соц сЬгошоаоше. Сепебс атигцеа оЕ тЬеае арес(ацге6 ггапас1ис(пц ЪастепорЬацеа Ьай аЬоъчп йат тЬе гец(оп оЕ тЬе ЬастегюрЬаце ). цепоше 1утпц Ьетъчееп тЬе 1 апг! Ат цепеа сои!6 Ье гер1асед Ьу Е. соц Р(ъ(А (Еог ген(еъня р1еаае аее СашрЬеП 1962; Ргап)сПп 1971). ТЬе апа1уяз оЕ тЬе аттис!иге апд Еипсбоп оЕ тЬехе тгаплбис(пц рагт(с1еа Ъесаше а рте!ибе то йе ехр!огабоп оЕ ЬастепорЬаце Х аа а нес!от. Риппц йе еаг1у 1970я тпетЬот!а ънеге регЕестед Еог шашри!а6пц ытех оЕ с1еанаце Ьу геатпс6оп епхушеа ш йе ЪастепорЬаце Х цепогпе. ТЬе Пгат оЕ тЬеъе шейобя Ъаает( оп йе 1споъч1едце оЕ йе цепет!са оЕ геатпс6оп апс1 пюсцйсатюп оЕ Р(ъ)А Ьу Е.
со)т', ацоъчес1 зе1ест!оп ш н(но оЕ Пеггнатгнеа оЕ ЬассепорЬаце Х Егош ънЬлсЬ аП ятеь Еот ЕсоК1 Ьаъ1 Ъееп ецпппатет1 Егош тЬе еааеп6а! рогпоп оЕйе ч!га! цепоше. Ву цгонбпц тЬе и!тиа а1сетпа6че1у ш алга(пь оЕЕ, соП йас уитгодисйои 2.!9 е)йег рояяеяяе|1 ог 1ас)сед а р!аяпЫ сойп8 тот ЕсоКЬ пшсапь оГ ЬассепорЬа8е ). ъчеге Ьо1асед йас сои|а(пед оп1у опе ог ьчо саг8еся Сот ЕсоК1 1осасед (и сЬе попеяяепба1 ге8(оп ог" йе Вепотпе (Мпггау апд Мпггау 1974; КатЬасЬ апд Тю11аь 1974; ТЬотая ет а1. 1974).
Весатье йЬ Ми|1 оу яе!ессюп !и ч|чо ъчая рояяЫе оп!у ъчЬеп йе ЬассепорЬаВе сои!д Ъе Вгоъчи |и Ьояь йас яуи|Ьея)тед сЬе геяспс6оп епхуше оГ шсегея, и |чая песеяяагу со дече1ор а!сегпа6че тейодя со оЪ|аш чесСоь яштаЫе Сот |ье ъч(СЬ оСЬег геятгкСюп епгугпея. рог ехатпр1е: ° КесотЪ|папь Ъесъчееп ЬассепорЬа8е ), апд ойег 1атЬдоЫ ЪассепорЬа8ея (е.8., ф80) |чете сопясгпссед сЬас еЬЬег сопса(пед ог 1асКед рагбси1аг геяспссюп ясея. ° ТЬе дече1орп|епс ог ргоседпгея Сот рас(са8(п8 рипВед ЬассепорЬа8е Х Р)ъ)А тисо (пуесс(оия ратбс1ея регипьес( чессотя ъч(сЬ йе дея(гед сотпЬ|па6оп от" геяспссюп ясея со Ье Вепегасед Ьу ш чьго шап|ри1асюп. ВассегюрЬа8е Х Р)ъ)А ъчая й8еясед ъч(сЬ а геяспс6оп епхуше, апд йе яигч(ч(и8 ию!есп1ея |чете рас)ъа8ед |иго рагск1ея |и ч(сто апд ргора8асед !и Е.
соЕ (К1е!п апд Миггау 1979). Агтег яечега1 япссеяя(че сус!ея от" й8еяСюп, рас)са8(п8, апд 8гоъчСЬ, ЪастепорЬа8е Вепогпея ъчеге оЪсаше|1 йас Ьад 1ояс геяспс6оп ясея Ьу пшсасюп ъчЬ11е теса!шп8 (и|ест(ч!су. ° Моте гесепс1у, яупсЬеск о118опис1еосЫея Ьаче Ьееп ияед со сопягпсс ярес!Вса11у дея8пед РХА Сга8шепся сЬас аге йеп шяетсед шсо йе ЪассепорЬа8е Веиоте. ъ)я)п8 сЬ|я тейод, геяспс6оп ясея |неге р1асед ас деыгед 1оса6опя ъч(сЬ ргес|яоп аид Ь!ВЬ еГ6с(епсу (Ег|ясЬапу ес а1.
1983; Кати ес а1. 1984). То8е|Ьег, |Ьеяе и|есЬодя Ьаче 1ед со йе дече!ортепс оГ а!аг8е пшпЪег от" чессогя сЬас сап ассерс апд ргора8асе уга8гиепся оГ тоге(8п Р)ъ)А Вепегасед Ьу а чапе|у от" дНегепс геяспсбои ептутея (Гог геч)еъчя, р1еаяе яее Миггау 1983, 1991). lпяегутоп нес(ого 'ътессогя |Ьас Ьаче а я(п81е саг8ес ясе Сот !пяегсюп от' Соте(8п Р)ъ)А аге 1|почни ая (пяегбоп чессогя.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
