Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 52
Текст из файла (страница 52)
ТЬоь, С! еяаЫ(ьЬеь !уьо8епу Ьу йгосс!ю8 ехргеььюп о( Вепеь сгапьспЬед (го|и р апд, опсе йе !уьо8еп(с ьсасе (ь асЬ~енед, сопсгоВ (сь оип сопсепсгадоп Ьу |пЬ|Ыс|п8 сгапьспрсюп ас р„. Весавье Ь|пйп8 ос С! со ад)асепс ьпеыь соорегадне, йе рго|д!|п(су о( о епьогеь а ьЬагр сопсепсгадоп дерепс!епсе ос Ьга|йщ со о,. В(пд(п8 о( С! со о„, а!ьо ассвасеь сгапьспрсюп Его|о р . Оп )пдисдоп, С! ргосе|п В (пассвасед Ьу с!еана8е апд сгапьспрдоп (гога рь геьо|пеь. ТЬе Вгьс ргос!осс о( сгапьспрдоп (ь йе гпР)йА Еог Сго.
В|пйп8 о! Сго Со о, ргенепсь Еог|Ьег ьупйеяь о( С! ргосе(п. Рергеььюп о( сгапьспрсюп В ге((енес! ас р апд еяаЫпЬед ас р . ТЬе ын(ссЬ со (ус(с |п(есСюп В |Ьеп реггпапепс (Р|аьЬпе 1986). (МодИед, сн((Ь реппВяоп, Его|о Нагг(ьоп 1992.) 66оп десегпппеь ънЬесЬег йе се11 ич!1 Ъесоше 1уьо8ешс ог ич11 аднапсе со сЬе 1асе ьса8еь оЕ!уск шЕессюп. ТЬе йгее Ь|пйп8 ясеь оЕ О„аге аггап8ед идсЬш апд Ьепнееп пно йнег8епс ргопюсегь Еог йе Вепеь епсойп8 йе сио гергеььогь.
Сго апд йе С1 ргосе|п Ь|пд со сЬеье ясеь гдй йсуегепс ргеЕегепсеь (огдег оЕ Ь(пйп8, соорега6нду, ап|1 аЕЕ|п(гу) ()оЬпьоп е| а1. 1979). ТЬпь, йе С1 ргосеш Ъ(пдь со ясеь о, апд о„ ьсгоп8!у апд соорега6не1у, и|Ьегеаь Сго Ь(пдь со о „ьсгоп81у апд со о|п вечеа)ду (Сго доеь пос Ъ|пд соорега6не1у). ЕасЬ ргосеш спгпь оЕЕ йе депе епсойп8 |сь соп|- ресдог аь сне!1 аь йе арргорпасе доснпьсгеатп Вепеь йас аге гес)шгед Еог 1ус|с Вгоснй ог 1уьо8епу. ТЬе си о гергеььогь йегеЕоге пос оп1у соп|ресе сог йе ьаше ясеь, Ъпс а1ьо Ьане пшспа1!у апса8оп(ьск рЬуь!о!о8(са! еЕЕессь (Еог ген(еннь, р1еаье ьее Спьяп ес а1.
1983; РсаьЬпе 1992). 1п адд(6оп со !сь гергеьяне еЕЕессь оп г(8Ь|и агд сгапьспрс|оп, |Ье С1 ргосеш ьбпш1асеь 1еЕсснагд сгапьспрсюп оЕ |сь о|нп депе Ьу а Еассог оЕ -10. ТЫь ейесс ыпейасед Ьу Ъ|пйп8 оЕ а гергеььог йгпег ас о„; а гергеььог йшег Ъоппд ас о, шсегассь соорега6не!у ипсЬ гергеььог Ьоипд ас о, со ьсаЬ|!Ые Ь|пйп8 со |Ье Е))н)А (р1еаье ьее Р(8пге 2-6) (Меуег ес а1.
1980). ТЬе Ьоипд гергеььог |ь аЫе со ша)се дпесс сопсасс ндй КХА ро!ушегаье ас |Ье 1еЕсснагд ргопюсег, 1пттог!истЕоп 2.11 р„(бпагепте ет а!. 1982: НосЬасЬПс] ет а1. 1983) апс[ тЬегеЬу го атппп1асе тЬе тгапятюп Етош тЬе с1оаес[ то тЬе ореп тгапаспр6оп сотпр1ех [Натч!еу апг$ МсС!пге ! 983; Вопд ет а1. 1993). Тгапьспрт!оп Етош р, шау а!ао Ье абпш1ате6 Ъу С1-тпесдатес1 ехс!иа!оп оЕ К)4А ро!ушегаье Егош Ыпт!!пд то р (НегаЬЬетдег ет а1. 1993). 1п хшпшагу, дцппд еагаЫ)аЬшепт оЕ 1уаодепу, гергеяог ьуптЬеа]а ]а сдгестед Ьу тЬе ргопютег р ппс1ег роя6че гедп!абоп Ьу тЬе С11 апг! С111 рготе!пя Нотчечег, Ьесапае гергеяюг ргечепта тгапхспрбоп Егош р„ап6 р,, П Ыос)са Епгйег ехргеьа!оп оЕ с11 ап6 сИ!, геарест[че1у.
ТЬы, тЬеье депеа ате шас6че ш 1уаодепь [Вобе апс1 Ка!аег !965). ршгЬегшоте, япсе С!! апс1 С111 аге ппатаЫе, С1 ргоге!и пшя ечепгыаПу ьпрргеая а!ЪеП !псПгест1у, сгапьспртюп Етош р Тгапаспр6оп оЕ с1 !того а аесопт! ргоптосег р га тЬегеЕоге гег!и!гед !ог тЬе шаштепапсе оЕ !уаодепу [р!еаье аее Ьуаодепу [р. 2.15] ап6 Р!дите 2-6). ЕАТЕ [УТ!С !]ЧГЕСТ!ОМ 0МА Кер!]са1[оп Ттчо депея О апт[ Р, аге хеаИу ггапьспЬед Егош ра нпшесдате1у аЕтег гпЕестюп апс] пюге атгопд1у 1атег аь а сопьеопепсе оЕ рХ-ше6!атег) апйегпппа6оп. ТЬе ргобпсп оЕ тЬеае депея тодетЬег чбтЬ аоше оЕ тЬе Ьоьт гер1катюп ргосешь ап6 а!тета рготе!пя аге геоп!гед Еог гер1ка6оп оЕ ЬастегюрЬаде РИА [Еог геч|еч ь, р!еаье аее РпгтЬ апд Ъйс)спет 1983; КогпЪегд апд Ва)сег 1992). Рпппд йе еаг!у рЬаье оЕ шЕестюп, ЪастепорЬаде Х, РХА герПсатеа Ьгсдгес6опаПу аь а Са!гпь ог 8 (с!гс1е го с!гс!е) Еопп, пыпд а япд1е от!д!и [оН) гЬаг !х аст!чатем Ьу ргоге!па рО апс1 рр. 1п а ъчдйгуре Е.
соВ ]пЕестес] члй ч61д-туре ЬассепорЬаде Х, -50 пюпошепс, с!гсп!аг ЬастепорЬаде депошев аге ьуптЬеягес) ЬеЕоге гер!кабоп ьЬ!Еть то а гоП!пд с!гс!е пюс[е. 1!пеаг РЫА гпо1еси1еа аге йеп депегатед йат сопыат оЕ тапс)еш ро1ушегь оЕ тЬе ЬассепорЬаде депоше аггапдес! Ьеад то саг!. ТЬеье!опд сопсагешепс шо!есп1ех аге сит апг! рас1садес1 што ргоЬеасЬ оЕ ргодепу раг6- с!еа [р!еаье атее Р!доге 2-7 ап6 Р!чА Рас)сад!пд [р. 2.14] ).
1с !а пот [спотчп иЬаг тпддега йе ш!с]-ьтгеаш ЦЫП Егош 0 го гоП!пд сггс!е герПсагюп. Нотченег, йе сопчегяоп Егош опе пюг)е то апойег [а шЫЬгтед Ьу йе Ьетеготгппепс ехоппс1еаае Ъ', тчЫсЬ !а епсооео Ьу тЬе Ъастепа! тесВ, гесС, апг! гесР депеа [Те1апбег-Мпх)сач!тсЬ апс] 1лпп 1981). ХечегтЬе1ея, йе ргос)псгюп оЕ сопсатепагес) РХА !а пот аЕЕесгес) ш тесВСР сеПа аь 1опд аа йе шЕестшд ЪасгепорЬаде сатпеа а Еппс6опа! дат депе.
ТЬе ргос!пег оЕ йга депе Ъ1пт)а го ехопис1еаье ч' ап6 тпастгчагеа !ть ехоппс!ео!угк ас6чПу [!7пдег апд С1аг1с 1972; Кигпппоч ес а1. !994). !п йе аЪьепсе оЕ Саш рготе]п, йе росепт, гпп16Еппсгюпа! КесВСР пис1еаае с]едгас[еь йе сопсатепатед 1шеаг ЬастепорЬаде РХА ргобпсес! Ъу годшд сггс1е тер!ка6оп. Оагп ргосеш !а пот пееоео Еог ргобпсг!оп оЕ Ппеаг сопсагепатеа оЕ ч!га1 РЬ)А !Е йе КесВСР ппс1еаае га ПеЕестгче ог адепт [Сгеепяе!и апс! Ясадса !975). Мозг ЪасгепорЬаде ) чесгогь!ас1с йе дат депе Ьш сап печеггЬе!еаа шп!пр1у го а раьааЫе ехтепт ]п тесВСР седа 1Е йеу аге аЫе то депегате сопсагешегк Еотша оЕ йе депоше тЬат аге ашгаЪ|е апЬатгагеь Еог рас)сад!пд оЕ ргодепу рагтк!ея дпсЬ сопсасешегь сап Ье Еогшес! Ьу гесошЬгпатюп Ьепчееп пюпопгепс сггсп1аг Р1!А тпо!есп!еа йаг аге ртос1псес1 Ьу 8-туре гер!катюп.
КесотпЬ!па1!оп Ьу81етпь !и Се!!8!пЕес$ед ил% Вас1ет[орЬаце )с Вой ЬасгепорЬаде ) ап6 Е. соП епсос1е гесошЬгпа6оп ауяепь [гетЕ апд тесА, геарестдче!у) йат сап ргодпсе с]!шет!с апт) шп!тппепс скс1еа Егош гЬе гер1ка6пд 9 Еопп. Моьт ЬасгепорЬаде ) чессогь йат аге датп аге а1ьо тетЕ апт) пшя йегеЕоте Ъе ргорадасе6 оп тесА а!та!пх оЕЬастепа ш огс]ег со ргопгосе йе еЕЕгс[епт ргос)пег!оп оЕ с1гсп!ат пш!тппегя Риппд рас)сад!пд, тЬеае с1г- Гиггодисдоп 2.13 ° А пшпЬег оупшсап1 асгашл оЕЕ, сай аге ача!1аЫе 1Ьас аге гесошЫпадоп-рго(|с!епс Ьш 11е6- с|епс ш ехопис1еале ъг. ТЬеле |пс!иде яга|пл йас аге деуесдче |и гесВ ог гесС, ал ъче11 ал лсга!па саггу|пк йе шисадопл г|)сА ог гйсВ, Ьо(Ь оу ъчЬкЬ сшррге|ь пшсасюпл |и гесВС.
Весагье аупсЬеяа оГ сасепасед ЬассепорЬайе 0)ъ)А Ы ппредед Ьу ехопис1еале ъг, гед чагп ЬассепорЬайеа ргодисе япа11 р1ас)иел ъчЬеп р!асед оп ъч(1д-суре Е. со!|. Нои ечег, гесошЪ|па6опс1е6с|епс Ъассег(орЬаке гписапсл саггу(пй ап оссашепс;( Р)ъ)А лес)иепсе 1споъчп ал у (сЬЦ ргодисе р1ас)иел йас аге с1ояе со поппа1 |и яхе (1.аш ес а!.
1974: Непдеглоп апс1 Чге|! 1975; р1еале зеесЬе рапе1 оп СН| 7 5)ТЕ). ТЬе ргеаепсе оу(1) йе у лес)иепсе |и сЬе Ьас1еборЬайе цепоше апс1 (2) ап ас6че гесогпЬшабоп КесВСР лулсеш ргоч| дед Ьу 1Ье Ьоя 1еада со ап (псгеале |и 1Ье е(Б- с|епсу оугесошЬ~па6оп ечепЫ йас Вепегасе с!оаед с|гси!аг д|шега апд пш!сипега 1гош В Еогпы. гед Кап| Ъассег|орЬацеа рас)саде йеле пш!сппега ейк)епс1у, апд гед дат )( ЬассепорЬайел Вгоъч со а геааопаЫе у|е!д ш ъч(1д-суре Е. со!|. лйгпи(асогу е((есг о(х лес~иепсел оп гесопъЬ~пасюп ь дие со сЬе (оггпасюп о( а п|с|с аЬоис йче пис|еойдел 3 о( 1Ье 7 я1е Ьу йе Е. сой КесВСО рго1е|п, а Ьесегоспгпегк епгугпе епсодед Ьу (Ье гесВ, гесС, гес0 Пепел ' (Тау|ог ес а!. 1985; (ог геч|еьч, р|егье лее Тау|ог 1988).
ТЬе п)сй оп|у оссигл и4ъеп (Ье епгу|пе раълел 1ЬгоиВЬ 1Ье х лес(иепсе |и опе сйгессюп Игопь г)ВЬ1 со )е(с, ал ъчг(пеп асхве), ипъч(пд(пц Фе ОНА ал |1 доел (Еаи(дл ес | а!. 1 979; Уайй ес а!. 1980; 5пъйЬ е1 а|. 1981). П|е со|пЫпасюп о( ипъч)пд(пц апс| п(сй(па цепегасел а л(пц(е- ! лсгапдед "сай" ъч(1Ь а х лес)иепсе пеаг (са 3 епд. ТЫл сай В Ьейечед со Ье а росеп1 лиЬлсгасе (ог КесА ргосе|п, и Ь|сЬ саса!угел (Ье (оггпайоп о( гесопъЫпап1 гпо|еси|ел Ьесъчееп сЬе л(пй)е-лсгапдед сай апд Ьогпо|о- | , цо|ь доиЫе-лсгапдед 0НА дог гечьет, р(еале лее 5пай 1 998). О(йе лечега! п|а)ог райиаул о( гесопъЬ|пасюп |и Е, сой', оп|у КесВСО В ейгпи|а1ед Ьу х л|1ея х л((ел ,,' аге йегесоге |пассюе |и гесВ, гесС, апс! гесВС с|оиЫе гписапь. С4оггпаПу, сйе КесВС0 рго1е|п ехрге|ьел а ' рои епи! ехопис|еаье Ч аас(ч(су (Те|апдегМиайач1сЬ апс! Нпп 1981) 1Ьас )л плед, ец., 1о делсгоу (оге(йп 0)ъ)А йас Ьал Ьееп Йеачед Ьу гелсг|сйоп епгу|пеа (5)гп|поп апс! ЕедегЬегц 1972; О|вег апд Со|ВЬегй 1977).
Ноъчечег, х л)сел ргосесс йпеаг ОНА (гоп| дейгадайоп Ьой |и чво апс! |и и(го, регЬарл Ьу (пас|(чаг(пй йе ехогвс(еаье Н асйи1у о( (Ье КесВС0 пис(еале (Киггп(поч ес а|. С 994). ИЧЬ 1Ье Ье|р о( сйе КесА рго1е|п, (Ье ,' (гауед епд о( 0НА (пчадел а Ьогпо)ойоил лес(иепсе 1о (оггп а ЬгапсЬед ягиссиге йа1 сап Ье сопчегсед |пса | а герйсайоп (ог|с апд геяъ(чед Ьу гесогпЬ|пасюп. Х лес(иепсел ъчеге йглс дьсочегес! |и ЬасгепорЬаце Х ах гписайопл сгеайпй гесогпЫпасюпа! Ьос лроь (ог КесВС0-ргоп|о1ед гесогпЬ!па1юп (Саго е1 а|. 1974; Непдеглоп апс! Ч/ей 1 975; 5(аЫ е1 а!.
1 975); 1Ьеге аге по х л(сел |и ъи|с|-суре х ОНА. Ноъчечег, Х лес(иепсел Ьаче Ьееп сгеасед Ьу л(па(е-Ьале сЬапдел ас лечега! ъиде|у лрасед лйел |и 1Ье Ьасгег(орЬайе Х Вепо|пе. ТЬе Е. сой цепогпе спаса(пл а 1о1а| о( — 1|р х л(сев — 1 рег 4 — 5 КЬ (Гаи(дл е1 а|. С 979; В|аьдей е1 а!. С 993; Виг|апд е1 а!. С 993; (ог гелеъчв р|е|ье лее 5гп|Ф С 983; Миггау 1991 ). О| йеле л(сея |и сйе Е. сой сЬгопъологпе, 9ггуь аге опеп1ес| гвсЬ 1Ьа1 йеу ъий ргосесс айа(пас с|ейгада1юп о( ОНА ргосеед)пй соъчагд йе ог(В)п о( гер|касюп (Виг|апд ес а!.
С 993; Мед|цие е1 а|. 1993). Х л(сел, йеге(оге, легче аъ Ьи(йчагйл, и ЫсЬ аге лсгасей(сайу дер|оуес! со рго1есс со|с|а! л(сел |и 0НА айа(пас сйе гачадел о( 1Ье РесВС0 рго1е|п. Весаиле гесогпЫпаиоп ь еллепйа! (ог е(йс|епс герйсасюп апд расйай(пй о( ЬассепорЬаде х йепогпел, йе ргелепсе ог аЬлепсе о(Х л(сел апс! сЬе яасе о(сЬе Ьолс гесоп|Ь|пасюп п|асЫпе|у аге (гпрогсапс (ассогл 1о сопл(дег и Ьеп ле)есс(пц а Ьолс сей (ог а рагйси|аг Ьассег(орЬайе х чессог.
ТЬе ге|йстегпепс (ог а Х л)се |и гед Ваго Ьассег(орЬацел сап Ье ейпйпа1ес! Ьу ил(пц гь Ьоль Ьассепа! асса(па 1Ьас сапу гес0 пвсасюпя ТЬеле лсга(пл, ъчЫсЬ аге лирегргойс(епс |и гесогпЫпасюп Ьис де|ессве |и ехопис(еале ч' ргос|иссюп (Агпипдлеп е1 а!. 1986), Вепегасе сопса1егпегл о( ЬасхегюрЬаце л 0НА Ьу Ьо(Ь гесогпЫпасюп апс! гой(пц с|гс|е герйсайоп. ! ТЬе гесопъЫпасюп лулсе|п |и гес0 го|пап(а |л |ю ассве йа1 а Х лес(иепсе 'ь по )опйег ге||егсд |и гед Вага | Ьассегюрйацек Весаиле яыпе Ьассег(орйайе л чессогл аге гесГ Ваго апд до пос сапу а х ясе, гесогпЫпапь | |ъчои)д поггпайу Ье ехрессед со д(лр!ау а япай-р(ас)ие рЬепосуре оп ил|д-суре Е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
