Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 56
Текст из файла (страница 56)
1980). То ачо!д тЫа ргоЫеш, аечега1 честогаЬаче Ьееп дея8пед тЬат саггу йе чат Пепе оп опе оЕ йе агпь оЕ йе ЬастепорЬа8е Х РХА. Ехашр1еа оЕ аисЬ честога аге СЬагоп 32 — 35 апт1 40 ().оепеп апт1 В1аттпег 1983; Ропп апт1 В1аттпег 1987). Едпсе еасЬ оЕ тЬеае честога )а гед, )пЕестет1 тесА сеПа аге рЬепотуркаПу КесА, КесВС, апд Кед . ТЬе гье оЕ аисЬ честога Ьаа 1п аоше 1патапсеа очегсотпе йе ргоЫепь оЕ с!ошп8 ае8шепта оЕ Еоге)8п Р)4А сопташтп8 гесошЬтпо8епк аес)иепсея ТЬе 6па! Пепедс Еастог то сопядег ш сЬоояп8 а честог ь йе ргеаепсе оЕ а ч яте. Аа д)я сияет! еагПег, тЬе 8готчтЬ оЕ гед чагтт ЬастедорЬа8еа оп кд1д-туре Е.
со!т )а 1ипПед Ьу тЬе ачаП- аЪт16у оЕ сопсатепатед РЬ)А пю1еси1еа тЬат сап Ье еЕ6с)епс1у рас)са8ед тпто рЬа8е рагдс1ея Нотчечег, тЬе ргеаепсе оЕ а )! яте шсгеааеа йе ейк)епсу оЕ тЬе гесошЬтпадоп ргосея тЬат 8)чеа гье то рас)та81п8 аиЪатгасея Аа а геаи!т, тЬе р!ат)иеа Еоппед Ьу гед рати )т ЬастедорЬа8еа аге а1пюя аа 1аг8е аа тЬоае Еоппет1 Ъу гед' чаттг' ЬастедорЬа8ея Весаиае пюя ЬастедорЬа8е гер1асешепт ). честога аге гед еаттт тчЬеп йе атиЕЕег Ега8шепта аге гешочес1, гесотпЪшапта тчои!д погшаПу Ъе ехрестет) то д)ар!ау йе япаП-р!ат)ие рЬепотуре.
Нотчечег, еи1сагуотк РЫАа соптатп тес)иепсеа тЬас сап тпишс у ятея ТЬия гюше гесошЬтпапс ЬастедорЬа8еа ич11 сапу шаегтюпа оЕ Еоге)8п РХА йат сопта)п у аес)иепсеа апт1 отЬега кдП пот. ТЬе гесошЪтпапь тЬат сопта)п 7 ает)иепсеа М11 8гоъч то Ьт8Ьег тиег, Еогш 1аг8ег р1ат)иея апс1 Ьесотпе очеггергеаептед сЬлпп8 атпр!16садоп оЕ ПЬгадея ТЬь ргоЫепт сап Ъе очегсоше Ъу ачо)гПп8 честога (аисЬ аа СЬагоп 28 апд 30) йат 81че г)ае то чаттт гесошЪтпапь тЬат до пот соптатп а 7 яте. ТЬеае честога зЬои1д оп1у Ье иаед Еог сопягистюп оЕ ПЪгадеа тЕ йе гесогпЬ)пап! ЬастедорЬа8ев аге ргора8асед оп гесВС ог гесР Ьоатя Рог сопатгисдоп оЕ Вепош)с РЫА ПЬгадея тче гесопипепд честить аисЬ аа ) 2001, ) РА5Н, ) Р)Х, апд йе ЕМВ1.
аедея тчЫсЬ соптатп ч ятеа )п тЬе аппя ог СЬагоп 32 — 35 апд 40, тчЬ)сЬ Вепегате гед 8ат' гесошЬтпаптя АП оЕ тЬеае честога 8)че гье то гесошЬтпапт р1ас)иеа оЕ ге1адче)у ип)Еогш яхе. Ехргеьяоп ЪесЕогх Ве81ппш8 тп тЬе тпгд 1980а апд сопдпшп8 то тЬе ргеаепт с1ау, аечега! ЬастегюрЬа8е ехргеяюп честога Ьаче Ьееп дече1оред тЬат регпит пот оп1у йе ргора8атюп оЕ Еоге)8п ает)иепсея Ьит а1ао йетг ехргеяюп тп Ъастепа1 сеПя тЬетг тгапасдрдоп ш чПго тпто КХА, апд, ит аоше сааея тЬе)г аитотпадс гесочегу аа аитопошоиа!у гер1кадп8 рЬа8етп!Пя ТЬе ргототуре ) ехргеаяоп честог ь ) 8!11 (Уоип8 апд Рачь 1983а; НиупЬ ес а!. 1985), тчЫсЬ сагПеа а рогдоп оЕ тЬе Е.
соП !)-Ва!ассоядаае Пепе, тпс!исПп8 йе иратгеаш е1етпепта йат аге еааепт)а) Еог 1ь ехргеаяоп. ТЬе сагЬохутегш)па! сосПп8 ге8)оп оЕ тЬ)а Пепе сои!а)па а яп81е ЕсоК1 яге )пто тчЬ)сЬ Еоге)8п Р)4А сап Ъе )паегтед. ) Пт!8 — 23 аге дедчадчеа оЕ )т8т11 йат сап ассерт 1аг8ег 1паегта апд тЬат аПотч тЬе иае оЕ ир то Еоиг аддПюпа! геягкдоп епхушеа 1Нап апд Киттег 1987, 1988). 1п арргорпасе 1удс ог Енггодисбон 2.23 1укоПеп!с ЬокыЬе сЬлшепс Пепе сап Ье !пдисед, геки!гш8 ш йе купйеык оЕ а Еияоп ргоге!и сопякбп8 оЕ гЬе анино-гегпнпа1 роггюп оЕ гЬе (3-Ва!асгок!даке Пепе Еикед го кес)иепсек епсос)ес1 Ъу гЬе доччпкггеаш ореп геасПп8 Егаше, сРЬ)А ПЪгапек сопкггисгед !п ОП!11 апд ОП!18-23 нлау Ъе ксгеепед ппшипо! о8!саПу Еог ехргеяюп оЕ крее!Пс апг!Пепк !п П.
со!П ТЬгк арргоасЬ Ьак Ьееп геплаг)саЫу киссеккПл! апд Ьак!ед го гЬе !ко!а!!оп оЕ плану Пенек епсогПп8 ргоселпк Еог лчЫсЬ по ргоЬек огЬег йап крее!Пс апг!кега лчеге ачаПаЫе. ВасгепорЬаце ) чесгогк кисЬ ак ИВ!11 апд ОП!18-23 саггу гЬе с1гк857 пшга6оп лп адсП6оп Го ап аплЬег пшгабоп лп гЬе 5 (1уяк) Вене, 5алп7. Аг 42 С, ъчЬеге гЬе с16857 гергекког гк оп1у раг6аПу Еипс6опа1 (ЫеЬ 1979), йеке чесгогк Еопп р1асрлек оп яга!пк оЕ Е. со!1 (ялсЬ ак 'л'1090ЬЙ~) гЬаг саггу йе ашЪег ялрргекког кнрлч.
Аг гегпрегагигек ъчЬеге гЬе гергекког !к асбче (32"С), йеке Ьасгег!орЬа8е кгга!пк сап Еогш 1уко8епк. 1п гЬе ог!8!па! декспр6оп оЕ ИВ!11 ( лоип8 апд Рач!к 1983Ь), сРЕ4А!лЪгапек сопягисгед !п ИВ!11 лчеге ксгеепед ак Ьасгепа1 1уко8епк. ТЬе со1ошек лчеге лпдисед Ьу Ьеагш8 апд ксгеепед нпшипо1о8!саПу Еог ргодисбоп оЕ Еоге!Вп ргоге!пк епсодед Ьу гЬе с!опед сРХАк.
Ргора8аг!оп апд ксгеепш8 оЕ ехргекк!оп 1лЬгапек ак 1уко8епк арреагед го ойег глчо рогеп6а! асЬ апга8ек: 18111 Вепошек шЬепгес1 ак рагг оЕ гЬе Ьокг-сеП сЬгопюкопле лчои1д регЬарк Ье нлоге кгаЫе Пепе6саПу гЬап Пепогпек ргораПасед Ьу 1у6с лпЕес6оп, апд гЬе гергекк!оп оЕ кунгЬеяк оЕ ролепглаПу лохк Еиыоп ргогешк пщЬг Ье нюге согпр1еге ш сеПк сопгашлп8 оп1у опе шге8гагед сору оЕ йе гесошЫпапг Пепоше гЬап !п!угкаПу !пЕесгес1 сеПк йаг гарЫ1у ассипш1аге Ьипдгедк оЕ сор!ек. РекрПе йеке аррагепг адчапга8ек, ПЬгапек сопклгислед лп ХВГ!1 аге по 1оп8ег ргора8алед ак !укоПепк пог ксгеепед аЕГег шс1ислюп Ьесаике коше гесошЬлпапгк аге ипаЫе го Еопп клаЫе 1укоцепк (НиупЬ ег а!. 1985). ЕиггЬегшоге, лчЬеп р!ас)иек, гагЬег йап со1ошек оЕ !пдисед!уко8епк, аге ксгеепед ъч!гЬ !шшипо1о8!са! ог пис!ек асЫ ргоЬек, гЬе яПпа1-го-попке га6о !к гписЬ ЫПЬег.
РегЬарк гЬе гпокг чегка6!е чесгог сиггепс1у ачал1аЫе В ХАР Ехргекк (5ггагаПепе). сРЬ(Ак ир Го 12 1сЪ лп 1епПГЬ сап Ье с1опед ишсПгеслюпаПу лпло ГЫк чеслог, аилогпалкаПу ехс!кед Ъу кирегшЕес6оп ъч!гЬ а Ел1ашепгоик Ье1рег ЬасгепорЬа8е, апд геслгси1апхед го Еопп а р1аяпЫ йаг лчП! дглче ехргекяоп оЕ йе с1опед сРЬ)А !п ЬогЬ Ьасгепа (ч!а гЬе 1ас ргошогег) апд лпапнпаПап сеПк (ч!а йе сугошеу1оч!гик нгнпесПаге еаг1у ргопюгег).
ХАР Ехргекк сопла!пк ке1есгаЫе шаг1сегк Еог ЬогЬ рго!сагуог!с апд еи)сагуог!с сеПк апд сагпек а роггшапгеаи оЕ сопсгоПш8 е!ешепгк с1епчес1 Егош аг 1еакг е!8Ьг с1ПЕегепг ог8ап!япк (5'кг40, сугоплеПа1оч!гия Е, со!П Ьасгег!орЬа8ек Е1, ТЗ, апс1 Т7, чапоик р1аянЫя апд ЬасгепорЬа8е ) нке1Е), ак лчеП ак а гпесПеу оЕ купгЬегк с1оп!п8 ягек апд Пп1сегк. АЫюиПЬ гЫк купйе6с Пепоше шау 1ас1с гЬе е1еПапсе оЕ кчПд-гуре Х, П 1к киге!у а гекгнпопу го лЬе лп8епшгу апд дехлепгу оЕ Пк сопкггисгогк апд ло йе сопл!пи!п8 го!егапсе оЕ йе ЬаслепорЬа8е Го йе ъчог)ск оЕ Мап. СЕОМ!МС 1М ВАСТЕК!ОРНАСЕ Х 'ч'ЕСТОКй ВасгегюрЬаПе Х Ьак гпапу икек ак а с!оп!пц чеЫс!е, гап8!п8 Егопл киЬс!оп!п8 оЕ Пепошк Р!чА кес)иепсек !и!г!аПу с1опед лп чесгогк лч!лЬ 1аг8ег сарасПу (е.8., Ьасгепа1 аг66сла! сЬгогпоколпек ог Р1 ЪасгепорЬа8ек) Го сопкггис6оп оЕ солпр!ех сРЕ4А ог Пепош!с РМА 1лЪгапек.
С!оп!п8 ш ЬасгепорЬаПе Х лпчо!чек кечега) клерк йаг аге кнпнпаггеед !п йе Полч сЬагг ргекепгед !п р!Пиге 2-9. ТЬе ргогосо!к лп гЬлк сЬаргег декспЬе шегЬодк го ргераге апд Секс ЬасгепорЬа8е Х чесгогк Еог с!опш8 апс1 го сопкггисг Пепопнс РМА 1лЬгапек лп гЬеке чесгогк. Регадед ргосес1игек Еог йе ргерагалюп оЕ сРМА !лЬгапек аге 8!чеп ш СЬарлег 11. Р!айпи Вас1епорйаде Х д РтАс)тте туев!Уев Рвом !тчеестютч ое А 5!ттсте ВАстев!ттм Ъу а диВ1е ЬастепорЬаце рагбс1е. ТЬе ргорепу ч!гия раг6с!еь ьуитЬеяаед Ьу 1Ь1ь Вгьт !иЕесиоиь сеп1ег адяогЬ то аит1 шГест пе)ВЬЬоппц Ьастепа, ччЬ1сЬ ти тигп ге1еаье апотЬег цепегабои оЕ даиаЬтег ч1гиь рагбс1еь.
1Е Ьастепа аге Втой)пи !и а яепиьо1тд тпед!иги (е.ц., сопта101иВ ацагоье ог аВаг), йе дЕГГиь!ои оЕ йе ргоаепу чдгия рагбс1еь гя 1пидед. 1)идег 1Ьеье с!гсшия1апсеь, йе геьи11 оГ яиссеьь)че гоипдь оЕ тпГес6ои тя а ьргеад1пц коие оГ Ьас1епа1 1уяь йа1, аГтег яечега! Ьоигь оЕ !псиЬабоп, Ьесотиеь ч1ь1Ые то йе па!тед еуе аь а ге)абче1у с!еаг, с!гси1аг агеа !и ап ойегтч1ье тигЬтд Ьас!сВгоиид оЕ Ъастепа1 дгоъчтЬ.
Весаиье еасЬ р1ат!ие сои!а!пь 1Ье ргоВеиу оЕ а я!иа1е ч1гиь раг6с1е, йе ЬастепорЬацеь депчед Егот а ь!ид1е р1атрле аге еььеп6а11у цепебса11у гдеп6са1 то опе аиойег. А гпейот1 Еог цепегабпц тпасгор1ат)иеь оЕ ЬастепорЬаце ) 1я В1чеи ат 1Ье епд оЕ йть рготосо1. ВастепорЬаВе ).честогь 1Ьат саггу 1Ье Е. сой !асЛ депе тау Ье апа1укед аь деьспЪед тп 1Ье раие1 оп АОО!ТтО!чтАЕ РКОТОСОЫ РЕАОт) Е А55АУ ОЕ ВАСТЕКЕОРНАСЕ5 ТНАТ ЕХРКЕ55 Д-САЕАСТО5!ОАВЕ а1 1Ье еид оЕ й1ь рготосо1. тч1АТЕ 141А1.$ САЕ)Т!О!чтт Р1еаье ьее Аррепд!х 12 Еог арргорг!а1е Ьапд!!пВ оЕ пта1епа!ь птаг!тед чч!й <! >.
ВттЕГегв апе! 5о!ибопв Р!еаье ьее Аррепд!х 1 Еог соптропеп1ь оЕ атос!т ьо106опь, ЬиЕЕегь, апд геаВепть. О!!01е ь1ос!т ьо!ибопь 1о 1Ье арргорпа1е сопсептга6опь. М55О4 Е70 гим) 5М аис! 5М р!иь Ве!атти Мее!!а 1В ог тч)ЛСУМ Е50-ги! а)щиоть гп 250-ги! сои!са! т!аь!сь) ТЬе сЬогсе Ьеттчееп тЬеяе тччо отей!а ы !атье!у а птаттег оЕ ретяопя) ргетегепсе.
ХЕСУМ, тЬе исЬег от тЬе пчо отей!а, тчая !птгойосей тп тЬе 1970я Ьу 1Ье ЪЧ!ясопя!и РЬаье тчогттегя !В!аттпег ет а!. 1977) то Вготч тЬе ептееЫей ятгатпя от 5. сов тпапйатей Ъу с!оп!пВ теВо!адопя тп Еогсе ат йат Ьпте. ТЬе отей!шп Ьая !опВ оо1!Ней тЬе геьп!адом апй гетпа!пя !и тч!йе ые тойау. 1В ог ХЛСУМ аВаг р!атея ЕгеяЫу рошей р!атея ате тоо тчет Гог ые тп р!аттие аяяауя. То ргечепт гопптпВ апй яптеаг!пВ оГ р!аттоея, ятоге тве р!атея Гог 2 йауя ат гоого тептрегатоге Ъеуоге ояе. ТЬеу сап тЬеп Ье тгапяуеггей то р!аяпс я1еечея апй апогей ат 4'С.
Р!атея ятогей ат 4'С явоо!й Ье р!асей ат гоотп тегорегатиге Еог 1 — 2 Ьоигя Ьетоге ияе тп втер 10 Ъе!отч. Ъуагпт!пВ тве р!атея тп твтя тчау тейосея ртоЫептя от сопйепяаиоп апй а!!отчя тЬе тор аВат яиЬяет)иепт!у то яргеат! асгояя тЬе епдге яитуасе от тЬе р!ате Ьетоге тт яеп. Еог ЕогтЬег !птогптат!оп, р!еаъе яее поте то втер 12. 2.25 2.26 СЬаргег 2: Васгег(орЬаее Х апй Еп Ъесгогь АОО!Т1ОЬ$ ОЕ МАЕТО5Е ЕОК СКО1й(ТН ОГ Ь 5огпе $пчеь1$5асогь асЫ гпааоье со гпесйа иьес! со Вгою апй р$асе Ьассег$орЬаае ~..
ТЬе рг Соье $еасЬ со а ьиЬьсап($а! $псЫспоп оЕ 1Ье гпа11оье орегоп $пс!ий$пе 1Ье lагпВ Вепе, юЬ илг(асе гесерсог со ччЬ!сЬ Ьассег$орЬаВе А Ь$ айь (5сЬнчагск 19Ел7). ТЬ1ь 1пйиспоп ьаоиЫ 1 1Ье е(Вс$епсу о( $п(есйоп апс$ Ьепсе ЕЬе у1е!й о( Ьассег$орЬаее. ТЬе иье оЕ гпа!соье Ь а с$ Ьоюечег, япсе Яог$й егоюсЬ оЕ ьогпе ь1га$пь оЕ Е. соа $п ылсЬ псЬ спей!ига гпау $еай 1о се1! $уыь апй 1Ье ассигпи|айоп оЕ се$!и!аг йеЬпь !ас$еп ю$1Ь 1Ье 1агпВ ргосе$п.
В$пй$пВ о( Ьассег$орЬаее рагйс1еь со 1Ыь с$еЬпь 1еайь со Ьл0$е ге1еаье оЕ $Ье ч$га! ОЕ4А апс! ап ипргойисйче 1п(ессюп. $п оиг Ьапйь, (Веге Ь $$п$е й$Е(егепсе $п Ьас1ег$орЬаее у$еЫ Егогп си!сигеь Вгоюп $п 1Ье ргеьепсе ог аЬьепсе о( гпааоье. ЕВ ог $ч'аСУМ Еор айаг ог аВагоье (0.77Ы Ме1с сае сор аВагоье лиьс Ье(оге иье Ьу ЬеаппВ и ш а шкгоюаче очеп $ог а ьЬогс репой о(сапе. 5соге а!к!пои оЕ сае гпеаей ьо!иВоп $п а 47'С ЬеайпВ Ыос1с ог юасег Ьаса со ргечепс сЬе аВагоье Вош ьп!Ы- $(71пц ипи1 пеейей 1п 5сер 10 Ье!ою.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
