Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 53
Текст из файла (страница 53)
сой. Ноиечег, еихагуойс ! ОНАл соп1а|п лес(иепсел (Ьас сап |п(гп(с х я1ея ТЬия |югпе гесогпЬ|пап1 Ьассег(орЬайел ъчй! сапу )плед(опл о( (иге|Во ОНА йаС сопййп Х лес)иепсел апд осЬегл ъчй! по1. ТЬе гесо|пЫпапЬ Сйа1 сопСа|п йе Х лес)иепсеа ~ ~илй цгоъч 1о ЫВЬег йсег, (оггп !агдег р|а||иев апд Ьесопъе очеггергелепсед диг(пд агпрййсасюп о( ПЬгапея , ТЫл ргоЫегп сап Ье очегсопъе Ьу ачо(д(пй час|игл (|всЬ аа СЬагоп 28 апд 30) ъчЫсЬ ВЫе гье соВапс гесогп! Ыпапсл сйас до пос сопса|п ах ясе.
ТЬеле чессога лЬои(д оп|у Ье плед (ог гоплсгисйоп о(ПЬгаг(ел ((1Ье гасит- ! ЫпапЬ аге ргорайасед оп гесВС ог гес0 Ьол1я 2Л4 Огаргег 2: Васгепор)|л8е Х апд 1ь Ъесгогг 1.аде Тгап8сг!р6оп Аа д!аспааед еагПег, |Ье шКХА ауп|Ьеяхед угош ра епсодеа а гергеааог, Сто, |Ьа| сошрегеа ъч!|Ь С1 ргосеш Рог Ъ|псПп8 |о |Ьгее ягеа |и еасЬ оГ |ъчо орега|ог ге81опя о, апд оа !)оЬиаоп е| а1. 1978, !979; Гог геч)еъчя р!еаае аее Спаа!п е| а1. 1983; Рга|Ьпе !992). В!псПп8 оу Сто |о о, ргечепь 6|г|Ьег ауп|Ьеа!а ог" С1 рго|е!п апд ша)сев |Ье соппппгпепг |о йе 1упс райъчау !ггечегяЫе.
Ву ГЬ!а Яа8е, ап|6с!еп| а|поипЬ оУ апо|Ьег роядче сои|го! рго|еш, епсодед Ьу депе О, Ьаче Ъееп ауп|Ьеыгед Го епапге е|6с)еп| |гапаспрпоп оГ 1а|е ч|га1 Вепеа (!)оче !9оо; 1оупег е| а1. !9оо). ТЬеае 8епеа епсоде рго|е!иа йа| ъч61 Ье аааешЫед ш|о Ъас|епорЬа8е Ьеада апд |аПя 1п аддПюп, РС) ге8п1асеа Вепеа гес)шгед !ог сеП !уяя ЕПъе р!ъ), РС! ь ап ап6|египпа|ог йа| гпойПеа К)ъ)А ро1ушегаае ао йа| йе епхугпе по 1оп8ег гесо8п)кеа доъчпаггеаш |египпа|огя !)пП)се РМ, ъчЬ!сЬ Ь!пда |о а ппи)пе Ьа!гр)п !и паасепг КХА, РС! Ь!пда |о а арес!6с !)ХА аеъ)пепсе, диг, |Ьа| очег1ара ъч!|Ь р„,. Ргоп| |Ыа я|е апд ъчЬ|1е |Ье епкугпе ь яаПе|1 а| йе |гапаспр|юпа1 ра|ье я|е, РЯ |тапа!огша КХА ро1ушегаке !п|о ап апмепгппапп8 яа|е. ТЬ!а |под!6саг)оп, ъчЬоае па|иге ь ип1|поъчп, гпау 1оъчег |Ье К ог" йе епкугпе Рог ппс!еояде |НрЬоарЬа|еа ()ъ)ТРа) !УагпеП апд КоЬегь !992).
Рппспопа ехргеааед 1а|е ш Ьасгег!орЬа8е Вече!оршеп| аге соп|гоПе|1 РПшап!у |ЬгопВЬ |егпппа|юп апд апйегпппа|юп ог' |га|ьсдрбоп (КоЪегга !975). р, — |Ье зо1е ргопю|ег цаед Рог |гапаспрпоп ог' |Ье еппге 1а|е ге8)оп — |а асдче а| еаг!у гппеа дппп8 !игесг!оп. Ноъчечег, и| йе аЬ|епсе оГ рф йе |гапаспрдоп согпр1ех ра|ьеа гог аечега! ш!ппгеа а| Ьаае ра)г 16!17 ог' йе |гапаспр| апд йеп гегпппагеа а| а аггоп8 |егпппа|ог, | ., 1оса|ед а| Ьаае ра|г 194 (СгауЬас)с е| а!. ! 985; Рог ген|еъчя р!еаае аее Рпейпап 1988; !)аа !993).
Упдег йе !пйпепсе о1 РЯ апд ш |Ье ргеаепсе ог'гЬе Ьоаг уасгог Хи|А, |гапаспрь шша|ед а| р, аге гарЫ1у ехсепдед |ЬгопВЬ Ьо|Ь гЬе рапае я|е а| Ьаае рап. !6 ап|1 йе |египпа|ог а| | .. Тгапаспрпоп |Ьеп ргосееда агоппд йе с|гсп1аг Вепоше йгоиВЬ йе 1а|е 8епеа апд гегш)пагеа ъч)й|п |Ье Ь ге8!оп (р1еазе аее Р18пге 2-6). ОНА Рас)сарщ апг! А58егпЫу о! Вас1ег1ор1|аее Раг6с!е5 !п йе !а|е а|а8еа оу !у|к шуесдоп, дир!ех сопса|ешепс !3)ъ)А !а рас)са8ед |иго а !3)ъ)А-ггее ргоЬеад ассогсПп8 |о |Ье всЬеше оп|Ппе|1 ш Р!8пгеа 2-7 апд 2-8 (Рог геч!еъчя р1еазе аее В1ас)с 1988; Саа)епа апд Непдпх 1988). Ап еаг1у ргеспгког ш йе ра|Ьъчау 1еасПп8 |о Ьеад аааешЪ|у !а а асаВ уо!дед ргеЬеад.
Рпг|Ьег ша|пгаиоп, ъчЬ|сЬ !пчо1чеа гешоча1 ог |Ье асагТо1д!п8 рго|е!п апд рго|ео1упс ргосеаа!п8 ог' о|Ьег со|пропепгя дерепда оп а рго|е|п (|Ье рго|1пс| о1 роЕ Пепе) я|рРПед Ьу |Ье Ьоаг. ТЬе геап!г!п8 аггпсгпгеа аге саПед ргеЬеадя Рас)са8!п8 йе Ъас|епорЬа8е 8епогпе !п|о ргеЬеада геърнгеа ьчо РЬа8е-епсо|1е|1 рго|е|пя Мп! апд А, ъчЬ|сЬ Ъ|пд |о |Ье сопса|епасед Ппеаг 13)ь)А пеаг!ей сог ягеа (р1еаае аее |Ье рапе1 оп ). ТЕКМ||ъ|А5е). Тъчо ад)асепг сог ягеа ог |Ье сопсасепасед Ппеаг )3)ъ)А аге Ъгоп8Ьг с1оае |о8ейег аг |Ье еп|гапсе |о йе Ьеад, ъчЬеге |Ьеу аге с!еачед |и а кга88егед уааЬюп Ьу |Ье гегш!паае 6|пспоп оГ |Ье А рго|е)п го 8епега|е йе !2-ппс!ео|Ые соЬеа!че |епшш.
ТЬе с1еачед )3ХА-ргоге!и сошр!ех йеп Ъесогпеа апасЬед |о а дебпед агеа оп |Ье ргеЬеад !РгасЬпап е| а1. 1984). 1п йе ргеаепсе оу рго|еш Р1, йе 13)ь)А, 1ейЬапд епд 6гас )а ршпред ш|о йе ргеЬеад Ьу ап АТР-дерепдеп| ргосеаа (Епппопа !974; Ка!аег е| а1. 1975; Наа!о апд В1ас!с !977; Непдпх 1978; гог геч)еъч, р1еаае аее В1ас)с !988). !3пг!п8 6П- ш8, |Ье ргеЬеад !псгеааеа !и а!ке Ьу -! ! — 4598 (НоЬп !983). Р!паПу, йе 13, ог "десогапоп," ргосе!п аггасЬеа |о йе оиьЫе ог |Ье 6Пе|1 сара!д, 1осЫп8 йе Ьеад |п р1асе агоппд |Ье !3)ъ)А !5|егпЬег8 апд 'ъъге)аЬег8 1977).
ТЬе Ьеа|1 )а а!|ю а|аЬ|!ехед Ьу |Ье адсПбоп ог" опе 6па1 рго|еш, йе рго|1псс оГ репе Я!, ъчЬ|сЬ !огша а|!еааг а рогпоп оу|Ье а!ге |о ъчЬ!сЬ йе |аП| Ь!п|1 !Саз)еиа е| а1. !972; Тап! ап|1 Непдпх !980). !пггос|ипгоп 2.15 л ТЕКМ!МАВЕ 'х (еггп| паче ь а рас(сад(пд есугае йа( йьйюпа сопса(егпегь о( ч га| ОМА |п(о и п(с-(епд(Ь депопъеа ъч(Ь ргосгид(пд 5 (еггвп|, 12 Ьр |п )епд(Ь (гог ген(еънд р(еаае аее Ге(гь апд Вес|сег 1983; Ге)гь 1988; Вес|сег апс1 Мипайо 1990).
ТЬе я(е о( асдоп о( Геггп)паае 'ь саИес! йе сойеаяе епд ясе ог ссь (Егппюпа 1974; Геье апд СагпрЬеИ 1974). Оп(с-)епд(Ь ), сйгогпоаогпеа аге (Ьеге(оге поппаИу депегасед Ьу с|еачаде о( Ипеаг сопсасегпега а( (ъно соа а(геа ърасед опе депогпе )епдГЬ арак Теггп)пахе 'ь а Ьесего-о||допъег о( ро1урер(Ыеа епсодед Ьу сйе (ъно (ейгпоаг депеа оп йе Ьасгегюрйаде Х депогпе: йе Ми1 депе (ънЬ|сЬ епсодеа а 181-апдпо-асЫ ро|урерйс1е) апд гйе А депе (ънйкЬ епсодех а 641 -агп|по-асЫ ро|урерйде) дог ген|еън, р(еаае аее Ге(гь апд Весйег 1983).
Во(Ь еиЬип|ь сап Ьус|го|И ае АТР (Раггь е( а|. 1988), апс! гпи(апь о( еййег депе с|ьр|ау (Ье аале рйепо(уре, |.е., (Ье ассигпи|а(юп о( сопса(егпега апс! егпр(у ргойеада (Мипа|с$о апс$5(пд|пон(гсЬ 1972). ТЬе ОМА аес)иепсе йаг 'ь гесодпиес! апд с|еачед Ьу гегпйпаъе сопъд(х о((ьно еиЬягех, (Ье ссьХ (сов п(с)дпд) а(ге, ргечось(у садес| соя апд йе ад)асеп( соаВ (сох Ь|псИпд) яге. Бпс$ег поггпа| сопсййопя с|еанаде а( соаь( 'ь сагпес$ ош Ьу ГЬе |агдег еиЬип|Г о( геггп)паче (дрА) апд В ассогпрап)ед Ьу Ьудго)уад о( АТР (Со|д апд Вес|сег 1983), ънЫсЬ асЫюй аъ ап адоагепс ейесгог о( (егпд пахе апс$ (о гпе|С йе сох епсЬ айег с|еанаде (Н(дд(па е( а!.
1988; Сие апд Ге(гь 1993). ГоИоъчпд п)с)дпд а( сохсъ), (еггп)пасе гегпа|па $)дЬ((у Ьоипд со йе |ей епс$ о( йе ). сйгоспоюгпе |п а согпр|ех саИед согпр|ех ! (Вес1сег е! а|. 1977; 5(рру апс$ Реда 1992; Сие апс$ Геьа 1993). Согпр|ех ! (Ьеп Ь|псЬ (о йе рог(а! ргоге|п (епсодед Ьу йе Ьасгегюрйаде Х 8 депе), а аъ йе а)ге о( ОМА епсгу |п(о йе ргойеад (гео апд Геьа 1995). Тепп|пгье гегпа|па Ьоипс! (о (Ье п аа ОМА 'ь гее1ед (гогп йе с$еанес| сопса(егпег (п(о йе ргойеад. Рас(сад(пд сегьеа ънйеп сегодисеа агаддегед п|с|ь а( Йе пех! сох 4$(е, Ьу ъчйкЬ бгпе (Ье ргойеас$ сои(а)па а согпр|еге |гпеаг де Х депопъе — 50 )сЫп |епд(Ь. ТЬе ИИес! Ьеада сйеп аъаоаасе ън|(Ь рге(оггпед га)! ипйя ънЬ|сЬ аахегпЫед Ьу а аерагаге рагйъчау.
ТЬе попсопсгас61е (а|1 аЬай о( ЬасгепорЬаде ). сопа|ага оГ -32 пода оГ'ъг ргогеш, еасЬ сопсаш!пд ях ро!урерсЫе аиЬип!(а (Гог геч!еън, р!еаае аее Саа)епа апд Непдпх 1988). ТЬеае аиЬии(га Гогш а Ьо1!оъч гиЪе 9 пгп |п д)ашегег (ЬгоидЬ ъчЬЫЬ йе ОМА ь ш|есгед оп (иуесг(оп. 'ъгегу 16(1е 14 )споъчп аЪош (Ье ягиссиге о( гЬе ргохипа! епс| оГ (Ье (а|1 ехсерс гЬас аша11 пшпЬега оГ йе депе (7 апд рояяЫу депе Л ргоге!па аге 1осасед йеге. 11 14 пог ипдегагоод Ьоъч (Ье ргеГогшес1 са|! апд (!!!ей ЬеасЬ аге агьешЫед шго ЪассепорЬаде рагбс|ея ТЬе д!4(а! 6р о( (Ье га!1 сои(а(па ас !еааг ях ййегепг ро!урер(Ыея (пс1ид)пд гъчо ог (Ьгее шо!еси1еа оГ (Ье депе ! ргосеш (Ьа(14 шчо|нед ш апасЬшепг со йе 1агпВ гесергог с1иппд асЬогЬ((оп (р1еахе аее (Ье аес6оп еий!ес1 Адаогрг(оп, р.
2.4). ЬУ515 Ьуяа оГ гЬе Ьоаг Ьасгепшп Ьу ЬассепорЬаде ). гес)и)гех ргоге(па епсодед Ъу йе Гггаг (Ьгее депеа ш ГЬе |асе Ггапаспрй 5, К, аид Кх (Гог геч)еъч, р1еаае аее го иод 1992) . ТЬе ! Ьпс6опа оГ СЬеае йгее депеа апд йе ргорег6еа о( йе ргосе)иа (Ьеу епсоде аге ашшпапхед !и ТаЫе 2-1. Мапу о( (Ье ЪасгепорЬаде ) асса!иа гьед ги йе!аЬогасогу саггу ап ашЬег пшгасюп 5аш7 ш йе 5 депе. ТЬ|а ишгабоп ргенепса ог де1ауа 1уяя аПоъч|пд (Ье агьегпЫу оГ ргодепу раг6с!еа со соп6пие Гог ап ехгеис1ес1 репос1 о( 6гпе.
ТЬе ассшпи1агес1 |псгасе11и1аг раг6с1еа сап Ъе 1гЬегагес1 аг66сга1|у Ъу !уяид йе (пуессед се1! чдй сЫого(опп. 1ХЬОСЕМ)У Оп!у а (гас(!оп о( ъчг1д-гуре се)(а !п(ессеи ъчйЬ ЬасгепорЬаде Х иис1егдо а 1у6с сус1е оГ шуесг!оп. !пасеад, ш а 1агде ргоропюп о( гЬе гп(ессед рори1а6оп, йе 1убс сус1е ь аЬоггес1, апс1 (Ье аигч)ч(пд се1!а йегеайег саггу а сору оГ йе ч|га1 О)ъ)А |пседгасед |иго (Ье|г депоше. ТАВЕЕ 2-1 ЕуяЫ Сепея о( Вас1едорЬаВе л 5|ее Амп РЕОГеат!еь Еимст|ОН ОГ с)еме ОГ РЕОтегм И/(еп"тчРе Рапте(м РнемптчРе ОГ Митамть ап 8.5-)сО (107-геядие) шпет гпешЪгапе рготе|п, 5 Ь 1ейа! реп ехргеыед ат рЬуядо1о8!са) 1ече1я Ъошо-оППошегя оГ 5 |оип Ьо!ея ш |Ье гппег шешЪгапе, гчЪ|сЬ аПоъч П рготе|и го епсег йе репр1аяпис ярасе атгасЬ 81усоясПс Ьопдя |и йе рер|Ыо8!усап сеП ччаП, Пепег- ади8 а 1,б-д!яассЪаг(де ргодист 1уяя Ь аЪо1ЬЪес1 Ъит |Ье шГесгед сеПя д|е ас |Ье ияиа| гипс оГ 1уяя а яо1иЫе 17.5-)сО ггапь- 81усоьу1аяе а гпегпЪгаие рго1еш оГ -|9 Ю роягЫу ап епдорер|Ыаяе |Ъат с|еачея о!г8орер|Ые сгояя-! ш)ся ш (Ье рер|Ыо81усап сеП ччаП 1уяя ш!и!шд сиЬиге Ь ииаГГесгед ип1ен 5 — 10 шь( сПча1епг садопя аге ргеяепт, ш НЫсЪ саяе, ярЬегор1ая|я Гоип ас |Ье погша! |иие Гог!уъЬ Пг Гог гетегеисея, р|еаяе яее геч(ечг Ъу Уоииь ( ! 992).
! пТедта6оп Тччо рто1е!пя — йе Ьас1еПорЬа8е-епсодес1 Ьпе8гаяе (!п1, Гдп8егу апс1 ЕсЬо!я 1967; Х|яя!ег 1967) апс1 Ьоят-епсодес! !пте8тат!оп Ьоьт Еастог (!Нр, М!!!ет апс1 ЕПедгпап 1977; МаяЬ ет а1. 1977; ХаяЬ апс1 ПоЬеттяоп 1981) — ате гег)и|сед Гог ТЬе !п1е8гат!оп оГ ЬастеПорЬа8е ОМА !пто 1Ье Ьоят сЬгопюяотпе (р1еаяе яее 1Ье рапе1 оп 1МТ АМО АТТ).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
