Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 51
Текст из файла (страница 51)
Но|нечет, шитаптх о( ЪассепорЬаде Х йа| саггу а де1е6оп оу т сап дгоъч (а!Ьед роог!у). 5исЬ ЬастепорЬадех аге )споъчп ах итп (Х-тидерепдепт) ппиаптх (Соигт ап|1 дато 1969). ТЬе и)п5 пппатюп (р!еахе хее Р(дигех 2-2 ап|$2-3), ъчЬ|сЬ В сагг|ед |п тпапу ЬастепорЬаде ). честогя )х а де1ебоп оу 2800 Ьр Ье|ъчееп депеь Р ап|$ О |Ьат гетпочеь г апд юше депех ге1енапт то гесошЬ~па6оп Ьетъчееп р1ахш)дх апд ЪастепорЬаде $3МА. $п$ес11оп $хеас$)ей ап!птрог1ап1 Сгоййгоаг$ ТЬе оитсотпе о( ш(ест)оп — 1утюдепу ог чедета6че дгоъчй — гепташх ипге|ю1чед ип61 |Ье епд о( |Ье де1ауед еаг1у РЬахе.
Ву тЬ)х а|аде, |Ье ЬастепорЬаде рготе)пх тес)и)гед )ог йе пехг итера ш Ьой ратЬънаух аге ргеьепт )п |Ье !п(естед се1!я ъчЬ~сЬ аге тЬеге)оге роьед |о Ео1!оъч е|йег соигхе ах сисишхтапсех йста|е. 1п ъч|1д-туре Е. со(т', йе дес)яоп Ьегъчееп !уходепу апд йе 1у6с сус1е ь шйиепсед Ьу йе пш!6р!кпу от" !п(естюп апд Ъу йе пи|п6опа1 яате оу |Ье се11. ТЬе Ь(дЬег |Ье пи|1- 6р!к)ту (Воу|1 1951; Е(еЬ 1953Ь) апд йе ъчогхе |Ье питпбопа1 яате о( се11 (Коип1х)су 1973; Нега)соъч)тг ап|1 Надеп 1980), йе Ь|дЬег йе $геср|епсу оу )уходеп)гатюп.
ТЬе ЬюсЬеписа1 шед)- а|от оу 1утюдепу шау Ъе 3'-5' сАМР, ъчЬоье |птгасе!101аг сопсептгабоп а!сегх )п геьропье со сЬапдех )п питгиюпа1 сопсд6опх (Нопд ет а!. 1971; бгодгк)сег ет а!. 1972). ТА)Ьеп Ьассепа аге дгоъчп |и псЬ тпедштп, |Ье |птгасе1!и!аг сопсептгатюпь оу сАМР аге !оъч, апд |Ье 1утк ра|Ьиау (х тачогед. 1п пштапс се11х |Ьат 1ас1| сАМР, йе !у||с райиау 1х Ьеач)1у Гачогед.
Весаые попе о( |Ье 1|поъчп ЬастепорЬаде ргопюсел аге гехропх)че то сАМР, Ь хеетих 11)се!у йас йе дес|яоп Ъепчееп !уходепу ап|$1утк (п(естюп Ы )пйиепсед |и рагс Ъу а Ьастепа! депе ог депев |Ьас аге геди1асе|$ Ъу сАМР. А $|еу е!етпепт ш йе с)есидоп Ьетъчееп !уях ап|$!у|юдепу ь тЬе ЬастепорЬаде-епсо|1е|1 С11 рготеш (р!еахе хее |Ье рапе! оп СИ РКОТНМ), |Ье ас6ча|ог о( тгапхспрт)оп о( Х депех |Ьат (1) С11 РКОТЕ! М ° ТЬе СИ ртоте|п 'ь хуптЬеъ)гед аъ а 97-атп)по-асЫ ро)урерйде.
А(тег гетпоча1 от йе а|и|по-|егтп)па) пъетЫо- ,' п|не апд йе ъиЬ|ептъ)тъа) чайпе, йе ро1урер|Ые ахъос)атеыпто ап ас|гче те|таптепс йтпл. ° 1т 'ь а $3МА-Ыпд)пд рто|е)п |Ьат )птегасть хрес)йсайу апд их)тЬ теаъопаЫе а(йп)ту (3 х |0 ' М) иЧ|Ь а 20-25- 1 Ьр тед)оп о( йтее 1ейъчатд рготпотегя р„, рх апд р . ТЬе сопъепхиь хсх)иепсе (ог Ь)псйпд )х ! ТТССМ„ТТСС. ° СИ апд КМА ро!уптетаъе )п|егаст ча|Ь |Ье |Ьгее!ейъчап$ ргоп|о|ет|пп а сооретайче тпаппет, |юсЬ йа| й|И ! ас|Ыатюп о( ттальст)ртюп осситх и Ьеп йе сопсепи айоп о(сй )х теп(о!д )еъх (3 х |0 а м) йап |Ьа| гет)и)тед ~ (ог тпахипа! Ыпд)пд о( сй а!опе. ° ТЬе СИ рготе)п 'ь ипхтаЫе (Ьадаце = 2 тп)потех) Ьи| 1ь рагбайу яаЫ1ыед Ьу йе ЬастегюрЬаце С18 рготе|п, 1и а|ЫЖоп, )тх пати|а! гаге о( децтадайоп 'ь д)тп)п)хЬед ог епЬапсед Ьу ьечета) Ьастепа) депе ртод ис|я Митатюпх )п И|е Е. сой lоп апд суа депех )пстеаъе йе гаге о( дед|а|)атюп о( СИ апд, тЬегеГоге, тач йе!уйс гехропье, ъчЬетеаь тпита|юпь )п йе )т))А апд )т)$8!Ыа ехтепд |Ье Ьа)дй(е о( йе рготе|п апд (ас тате йе )уюдеп)с теьропхе (Ноут е| а).
1982; Вапиеи ет а!. 1988; (ог гечеъчя р)еаъе атее Гпедптап е| 1984; Но апд КохепЬегд |988). Сйар|ег 2: Вассег(орйаде ) алг(16 Ъессогг |пг пп и| Я |а|и цепев Г!С()КЕ 2-4 ТЬе Вас|епорЬаде х СП Рго(е|л !ь а Тгаласг|р6ола| Ас6ча|ог ТЬе ргог|вс( о( |Ье сП деле (галасгЗЬегЗ (гоги |Ье рх рголю|ег 'ь а (галвсг|р(Зола! ас|Ыа|ог |Ьа| айглн|а|еи Зе((ъчаг|! |галислрйол (йгс|г аггоъчз) (гот рч р „ал|$ р, . ТЬе ргол|о|ег р сол(го!а ехргеяйол о( йе С| (гергеииог) рго|е|л, ъчЬегеаа р, сол|гоЫ ехргеы|ол о( |лг (елсосЗЗлд Злгедгаье). ТЬе рголю|ег р, |$$гес(а |Ье иулйеяа о( ал ал|Ыелае КЫА йас ь Ьейечед |о ге||осе ехргеаа|ол о( йе (3 (ал|дегаипа|ог) деле ргог|ос(, ТЬе ргос|ис(в о( еаг|у |галаслрйоп |л|йа|ег$ (гоги йе ргото(еги р алгЗ р аге гергеиел(егЗ Ьу |Ыл аггоъчя (Мог|1(|е|З, ипй реггпьиюл, (гога Но алгЗ КоиелЬегд 1988.) гергеааеь 1у6с Гопс6опа апд (2) са(а!ухеа |п|едгаг|оп оГ |Ье ч|га1 Р)ъ)А (п|о |Ье Ьоа( сЬгогпоюше (ЕсЬо!а 1980; Неги)со|и|(к ап6 Надел 1980; ЪЪн!(Т ап6 КоьепЪегд 1983).
А Ь|дЬ гп|гасе11н!аг сопсепсгабоп о1 С11 Тачоги!уюдепу, ъчЬегеаа а 1оъч сопсеп|га6оп 6ра йе Ьа1апсе |п Тачог оу 1уяя ТЬе С11 рго|е|п слог|!!па(е!у гедн1а(еа |гапаспрг|оп Егот |Ьгее зерагасе 1ейъчагг$ ргопю|егя р рн апг$ р, (р1еаае аее Бу|ге 2-4). ТЬня иЬеп а ан(Т)с|ел( сопсеп|га6оп оТС11 Ы ргеаепг (п |Ье шоссе|( се11, |гапьспр|юп ауглг ап6 с1 депеи ь ас6ча|ей ТЬе ш|едгаае (1пс) рго|е|п, ауп(Ьеяке|$ Тгогп рн са(а1ухев а Ьгеа)бпд апс))ошшд ечеп| |Ьа| 1еаг)а со шиег||оп о1 йе ч|га1 Р)ъЗА |п|о йе Ьоя сЬгогпоюгпе. ТЬе ргоъ)нег оу |Ье с1 депе — )ъ гергекюг — Ъ|пг)а со |Ьгее 17-Ър орегагогь |п еасЬ оу |Ье еаг1у ргошо(еги ри апг( р, йегеЪу г|епу|пд ассеаи оу К)ъ)А ро1угпегаае |о |Ье ргото(ега апг$ Ьепсе Ыос)с|од |гапьспр6оп оурЬаде еаг1у депеш Х, сго, О, Р, апс) О, и Ьоае ргоднсЫ аге еиаеп6а! Гог опъчагс$ ргодгеьяоп оТйе 1у6с сус1е (р1еаье аее йе рапе1 оп С! РКОТЕЗЫ).
ТЬ|ь ьггапд1еЬо1|$ сап Ье Ьго1|еп Ьу апо|Ьег сгапьспр6опа! гергеиаог — Сго — ъч)дсЬ сошре(еа ъчЬЬ С1 рго|еш Гог осснра||оп оу |Ье орега|ог О (р1еаае аее Буне 2-5). ТЬе он|согпе оу й|ь сотре- С! РВОТЕ!Зъ| Вас|елорЬаде )ъ С| рго|е|л (236 агп|ло ас|г|я ЗИ, = 26,228) 'ь ал |лас|Ые л|олол|ег а| чегу |ои солсел|гайола (с10 | м), Ьнг а| рЬуь|о|од|са! солсеса аболя К (олпи (нлсйолаЗ Ьотог||тегя АИЬоидЬ соглгпол|у сайег! ) гергеаюг Ьесаиае о( $(и ледайче геди|а|агу Ылсйоли а| о„алг! о, С| рго|ею 'ь а|ю а рои||Ые геднЗа|ог о( деле (галисг|рйол ал|| сал асйча|е (галисг|ргюл о( |Па ои и деле. ° ТЬе РЫАЬ~лг$$лд г|ота|л о( С! рго|е|л 1$еа и |(Ыл |Ье алило|еглила1 герои о( Вге то|есЫе (Ванег е| а1. 1979) алгЗ сол(а|ли йне и(ге(сЬеь ог' а-Ьейх, о( и ЫсЬ (ио (Ьейсеи 2 алг$3) (оггп а Ьейх-|оор-Ьейх то(З( апгЗ аге 'ечояе6 |и хе||пенсе-ирес|йс Ылгйпд |о |Ье гпа)ог дгооче о( (3ЫА (РаЬо ал|$ сеъч(ь 1982; Веагпег алг! РаЬо 1992; (ог тоге г|е(а|!В р|еаъе иее ггчеъч Ьу НосЬасЫЗ|$1994).
ТЬе СЗ рго|е|л Ь~лг|и ьулипе|л'- саПу |о РЫА, ю Фа| еасЬ ат|ло-(егт|лаЗ г|ота|л сол(ас(и а ятйаг ие( о( Ьаиея ° ТЬе сагЬоху-|епп1ла! г!оп|а|и о( йе С1 рго|е|л сои(а|ли |Ье гла|ог ьЗ(еь (ог г(!тес|ха((ол алд ойдотепга- йол (РаЬо е| а!. 1979). ° о ал|$ о Ьой сон|а|и йгее Ь~лг||лд аЗ(еи (ог СЗ рго|е|л. Зп еасЬ саче, ийе 1 (|.е., оц алс$ о„„) Ьаи а -10- (о|с! дгеа|ег ай) о||у |Ьал | Ье ойег иЗ(еа (ог С| р гоге| л. ТЬе гергеаюг, йеге(оге, а|игауи Ыл|Ь йги( |о оп ал|$ о, алг$ |Ьел Ыл|Ь (о |Ье о|Ьег иЗ(еь Зл |Ье орега|ог |и а соорега((че л|аллег ПоЬлюл е| а!.
1979). Ссюрега(|ч|(у 'ь тегЗ|агег$ Ьу |Ье сагЬоху-|егпила1 г|ота|ла о( гергеииог г|Зтеги. ° (4|Ьел |лсоЬа|е|$ а| ЫВЬ рН |и чего, СЗ рго|е|л нлг|егдоеь ал аи|оса|а|уйс с|еачаде а| а О|у-А|а рерйг|е Ьолг| !оса(е|$ Ьепчеел йе Ьчо догла|ля Зл мчо, аи|оса|а|у||с с|еачаде осснги |и |Ье ргеаелсе о( Ьас|ела| КесА рго|е|л, ъчЫсЬ ас(и аъ а сорго(еаае ($381е 1984; (ог геч|еьч, р|еаъе аее $|ФЗе 1993). 1пггодисг|ои 2.9 Сепее Сго ргоселп Сиргоге~л С ргогвлл НС(1КЕ 2-5 Вас(едорЬайе х Ре|ауеб Еаг1у Тгапеспрдоп Х рго(е|п (игпь оп Вепее со (Ье |ей о1 Х, 1пс!од|ой с10 апд Велел 'тчо|че6 $п гесоплЫпайоп апд, |и адсй(юп, Велел (о !Ье с|ВЫ о1 сго, !ос|од|па сП апд Фе 0ЫА герйса(юп Велел О апд Р апд йе рое1$!не геци|асог о1 |асе (гапеспрйоп, О.
Риг!пц (Ье де|ауед еаг|у рЬаее о1 сгапесг|рйоп, Фе 1а(е о1 Фе п бес(ед сеП гета|пе ипдес|дес1, апд !п1ес(юп сап ргойгеее е!(Ьег со !уеойепу ог со а сус|е о1 чеце(а(Ые цгоъъиЬ. Ву йе епс| о1 |йе де|ауед еаг|у рЬаее, ап 1ггеносаЫе с$есьюп Ьаь Ьееп (а|сеп со ргосеед донни опе ра(Ьъчау ог (Ье о(Ьег. (5Ьадед Ьохел) ТЬе ргодис(е о1 (гапьспрйоп; (ф$) (гапесг|рс|оп (еггпта(юп е!(ек ТНЕ 015СОЧЕКУ ОГ ВАСТЕК|ОРНАСЕ Х Вас(ег1орЬайе Х йге( арреагед $п (Ье |аЬога1огу |и 1951, ъчЬеп Еейлег ЕедегЬегй 1оипс| |йа( сег|а|п гпи(ап(е о( ЕлсйепсЫа сой К-)2, ънЫсЬ ыгМнед 1ойочдпВ (геа(гпеп( ъч4|Ь !и(епь!че и||геМо|ес (0Ч) йгасйайоп, цгеъч погплаПу !п риге си!(иге Ьи( сйед о1 а Ьас(ег!орЬайе |п1ес|юп айег соп|иеа$!оп (о одлег Ьассег|а| е(га|пь. ТЬе ,' рагеп(а| ъчйд-гуре К-12 е(ге|и, !!!се гпое( о(Ьеге |и иле а1 гЬа((ппе, ъчае пасигаПу |уьойеп|с 1ог Ьас|ег|орЬаее ' Х.
Ехроюге (о РЧ |ггасйайоп сигес3 !Ье югч|н|пц Ьас|епа о1 ргорЬайе, Вепега(!пц Ьассеиа1 есга!ие (Ьас ъчеге ,.' по 1опеег |гптипе со ех(егпа$ |п1есйоп Ьу |йе ЬассепорЬаце. 5(ге|па "сосед" |п (Ыя ъчау (еП Мкйгп (о |уе!х Ьу | Ьас(ег|орЬайе ), ($ ) ъчЬеп |псиЬа(ед ъчлй !уюееп|с е(ге|их, ъчЬ|сЬ крои(апеоие|у ргосЬлсе $п(есйоие рЬаде ,' рагйс|ее а( а |оъч гасе, ог (2) ъчЬеп сйлг!пй соп)ийа(1оп, (Ье 0$ъ|А о1 а |уьойепк есга|и ъчае (гале(еггед (о а ,' поп|уюйеп|с гес|р|еп(.
1п Ьой самее, йе !осот|пи Ьас(егюрЬайе Вепогпе епсегед а гергееюг-1гее сей апд | еесаЫ|еЬед а сус|е о1 $уйс Вгоъч|Ь, цепегайпй а Ьа(сЬ о1 ргойепу раг(!с|ее (Ьас соЫВ |уйса|$у |п1ес( йе гегпа|п- ,' 1пй поп1уюцеп|с сеПе !п дле ол|(иге. $.уеойепу ъчае по( а пеъч рЬепогпепоп, Ьаипй а|геас|у Ьееп ь(ид|ед очег йе соигее о1 40 ог гпоге уеаге | Ьу ап П|ие(гюие сас!ге о1 рЬаце ъног|сеге !ос|од|од Мас1аг|апе Вигпе|, Еийепе апд ЕПхаЬе(Ь 'ъуойтапп, !и!еь ,' Вогдес, апд Ее|$х 0'НегеПе (1ог а гечеъч о1 еаг|у ънодс оп |уюйеиу, р|еале еее Вгос$с 1990).
Ноъчечег, попе $ о( йле|г ехрепгпепге ргоис$ес! а ьа($е(у|ой ехр|апайоп о1 |йе соле(аи( ргосйлсйоп о1 мпаП атоип(е о( 1п1ес- | ' Поил ЬассегюрЬадея Ьу риге си1(игея о( Ьас(епа апс! Ейе ер!под|с апс$ ипргед|с(аЫе оссипепсе о1 таль!не $ |уяь. 'Ъуог(Ыеее" ъчае Мах Ре|ЬгйсП'е юсс|пс| дееспрйоп о1 а Ьа|(сеп(игу о1 Ьопее( ейог|. АП (Ыь сЬапеед аъ а гею|с о1 Апдге Ьчой'ь е!ееапс ехрепгпеп(е йоъчппй йге( йа| ехроюге со ьтаП ,' ! атоип(е о1 0Ч $ггад|айоп гергодис|Ыу саиеед ап еп(|ге сийиге о1 |уюйеп|с Вас)!|ил тееасег)ит (о ПЬегасе | 3 Ьассег!орЬайе рад|с!еь $и а ьупсЬгопоие 1айюп (Ьчой аид Си(гпапп 1950), апд еесопд йа(ечегу сей о(|йе $ сийиге сагпед а ргорЬаце (|дг ген!енс р|еаъе атее Ьчой $955).
ТЬе д|есочегу о1 |пдисйоп ннае о1 Вгеас |гпрог- ~ ~ |апсе Ьесаиее 1$ таде роее|Ые Ьо|Ь Вепейс апд ЬюсЬеппса| е(од|ел о1 (Ье ргодис(юп о1 сегпрегасе Ьас|е- $ гюрЬайек Ьчой'е рареге саиеед (гетепдоиь ехсйеплепс |и (Ье рЬаце ъчопд апд ъчеге еий|с!епс (о регюаде $ , есер($сь йа( (Ье рЬепотепоп о1 !уюеепу ънае Ьой геа1 апд ассеее!Ые. ъЧп(1пй 15 уеаге |а(ег 1и ргоье (Ьас $ ' ънаь еПП раееюпа(е, Ьчой ($955) деьсг|Ьеь йе 61ьсочегу о1 !пдисйоп аь йе ЫВЫ!ВЬ( о1 Ыь ьс|епййс Ие.
Ву ,' сои(сап(, ЕыЬег (едегЬегц'ь рарег — (аг пюге |асоп|с апс| ра$йд — В|нее по е|йп (Ьас йе Ьад д!есочегес$ йе | Ьассег|орЬайе Фа( ънае (о Ьесогпе дъе дейл!пц спк|Ые 1ог пло|еси1аг есид|еь о( рго|сагуо($с депе соп(го|. 2.10 СЬаргег 2: Васгег!орЬасе ). апд Есь Сгесгогь НСС)КЕ 2-6 ЪЧ!г!п8 О!а гага о( йе 5|н!СсЬ Ье|и|ееп Ьу6с спсес6оп апд суьо8епу С))|пегь о( йе С! гергеььог Ь|пд пюя с(ВЬ|(у со о, апд !еаьс с(8Ь|!у со о . Сго Ьаь сЬе орроясе ге!адне аЕВп(деь, Тгапьспрдоп а| ргоп|осег р В гергеььед снЬеп р, В осетр(ед Ьу С); Сгапьспрдоп ас р В гергеььед ьнЬеп о и ассар(ед Ьу С!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
