Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 55
Текст из файла (страница 55)
ТЬе Вепогпе от" йеяе ЪассепорЬа8ея ь -20;~о йогсег йап йас ог Р)ъ)А от ъч(1д-суре ЬассепорЬа8е ) Ьеса|ье гпапу от" йе Вепея йаС аге поС геъ)шгед Сот 1у6с ВгоъчСЬ Ьаче Ьееп гетпочед. 1пяег6оп от" ап арргорпасе яе8шепс оу Соте(8п Р)ъ)А !псо йе с!оп(пц яье геясогея йе Вепоше то яошесЬ|пц 1|Ке |ся 6|11 !еп8|Ь ап|1 гас!11сасея рас)ъа8(пц )псо !птессюия раг6с1ея (п чдсго (Мшгау ес а1. 1977; ЕсегпЪег8 ес а1.
1977; ъ'ъЧ111ашя апд В1аьпег 1980). ТЬе тиахипшп я(ге от" Р)ъ)А сЬас саи Ье ассопнподасед )и ап !пяегбоп чессог чапея ггош 5 )ъЬ со 11 )ъЬ, дерепйпц оп |Ье дея8и о1 |Ье рагс|си!аг чессог. Кер/асегпегИ Ьесгогя ВасСепорЬа8ея йаС Ьаче а ра|г оу с!ошп8 ятея ВапЫпц а яе8шеит от" попеяяепт(а! Р)ъ)А аге 1|почни ая гер1асешепс чессогя. Р18еясюп о11(пеаг чессог Р)ъ)А ъч(сЬ йе арргорпасе геяспссюп епгушея Вепегасея съчо аппя — 1етс апд 68Ы вЂ” йас со8есЬег саггу аН от |Ье Вепея тес!шгед гог 1у6с (пуесбоп.
Кегпоча1 оу йе сепсга!, попеяяепба1 "ясисуег" Сга8шепс гедисея сЬе Вепоте от' |Ье ъессог со а яхе сЬас саппос Ъе егТ|с)епс1у рас(са8ед шсо ЬассепорЬа8е раг6с1ея. ъг(аЫе ЪасСепорЬа8ея сап оп!у Ье гогшед Ъу 118ат!п8 а яе8шепт ог" Соте)8п Р)ъ)А Ьетъчееп СЬе рипВед 1еК апд щЬ| аппя (ТЬоп|ая ес а!.
1974). ТЬе !аг8еяс яе8шепс от' Р)ъ)А йас сап Ье с1опед ш а гер!асе|пепс чессог чапея Сгогп 8 (сЬ со 24 )сЬ, дерепйп8 оп йе нес|от. С!оп(п8 ог" 1оп8ег Р)ъ)А сга8шеися тес!шгея де!ес!оп оуеяяепс(а! ЬассепорЬаце цепея, ъчЬояе ргодпсыпияс йеп Ье япрр11ед |п тгаия. 2.20 СБартет 2: ВастетЕор)|а8е ).
аптЕ Етт Ъестотт ТЬеге Ь по ып81е Ьассег|орЬа8е т,честит аи)таЫе Еог с1ошп8 а11 РХА Ета8шепты ТЬеге!оге, а сагери1 сЬо)се шиы Ье шаде апюп8 йе ача|1аЫе честить !ог |Ье опе Ъехт аи)те6 |о йе раг|ки1аг саа)с а| Ьап|1. Р)че оЪнбогь сопяс1егат!опх !пйиепсе |Ь!х сЬоке: ° йе гех|пс|юп епхугпеЬ) |о Ье ешр1оуе|1 ° йе ыге оЕ йе Ега8шепт оЕ Еоге)8п РХА со Ье 1пхегсес1 ° ъчЬе|Ьег |Ье нес|от ыо Ье |ье|1 |о ехргехх с1опед Р!ъ)А хеъ!иепсеа ш Е.
со!1 ° ъчЬейег |Ье Еоге|8п РМА Ь то Ье геасие6 !гош |Ье Ьас|епорЬа8е нес|от 1п йе Еопп оЕ а р1аы гп1|1 ог рЬа8егпЫ ° ъчЬейег йе Еоге)8п Р)ъ)А сагпе6 !п |Ье чес|ог ыо Ье аххешЫе6 ш|о а 1аг8е очег1аррш8 соп- 68 оЕ с!опт РХАа ТЬе Вече!оршепс оЕ чес|оь сопса|шп8 пш!6р1е с1ошп8 ятеа апт! |Ье ача11аЬ|Ьгу оЕ а ча6- есу оЕ геа|пс|юп епхушеа йа| с!еаче РЕъ)А |о ргобисе согпра6Ые соЬеяче сегпип1 Ьаче Вгеабу яшр!!Веб |Ье п|есЬашсх оЕ с!ошп8 ш|о Ьас|егюрЬа8е ) чес|огы Ноъчечег, йе яхе оЕ |Ье шхегт геша)па ап ипрог|ап| Еас|ог |о Ъе сои|!Веге|) ъчЬеп сЬоояп8 а чес|ог. Оп!у -6098 оЕ |Ье ч)га1 Вепогпе (|Ье!ей апп, -20 1|Ъ |п !еп8|Ь, !пс1игВп8 |Ье Ьеа|1 ап|1 |а!1 Вепеа А-Е, ап6 |Ье 68Ьг апп, 8-10 1|Ь |п!еп8|Ь, Етош р |ЬгоиВЬ йе соЖ я|е) Ь песехаагу Еог!у|к Вгоъчй оЕ йе Ьас|епорЬа8е; йе сеп|га1 опе |Ь)гд оЕ |Ье Вепоше сап Ъе гер1асе|1 Ьу Еоге|8п РХА.
Ноъчечег, йе ч)аЪВВу оЕ Ьас|епорЬа8ех Весгеахех |1гагпа|ка11у ъчЬеп |Ье 1еп8|Ьа оЕ йе!г Вепотпех аге Вгеа|ег йап 1059о ог !еаа йап 789а оЕ |Ьа| оЕ ъч11|1-туре Ьас|егюрЬа8е Х. ТЬе сошЬ)па|юп оЕ чес|ог ап|1 Еоге18п РХА шиы гея|1| 1п а гесошЪ|пап| Ъас|епорЬа8е |Ьа| Еа11| ъч1|Ь)п ассер|аЫе яхе 1пш|ы 1п йе 1а|е 1970| апд еаг1у 1980Ы ъчЬеп с1ошп8 !п Ьас|епорЬа8е честогх ъчаа ай!1 ап абчеп|ше, ййки1|у ъчаа |оше|ипех ехрепепсе|1 1п сопыгист)п8 чету!аг8е 11Ъгапех оЕ гесотпЪ|папьс чЧЬеп йе а|поип| оЕ ыагт)п8 Р)ъ)А ъчаа 11ш1|1п8, йе ВЬгапех оЕ|еп соп|а)пе|1 а ЬтВЬ ргорогтюп оЕ "еп|р|у'* с1опеы То а!1еч!а|е |Ь)х ргоЫеш, Вепе6с тпаг)сета |неге шсогрогасед ш|о йе чессогх |о а1!оъч тар16 ае!ес6оп ог хсгеегбп8 Еог гесошЬ|папь ап|1 е!ипшабоп оЕ еп|р|у с1опех сопяя!п8 оп1у оЕ чес|ог хеъ!иепсеы Весаихе оЕ агеаду ппргочешепга 1п 1|Ъгагу сопыгис6оп, ратг!си1аг1у 1п еЕВс!епсу оЕ рас)са81п8 оЕ Ьас|епорЬа8е ).
раг|к!ех ап|1 ш йе ргерага6оп оЕ 1аг8е |рлап6- 6ех оЕ РЫА Еог с1ошп8, |Ьехе Вепебс шаг!сета аге по!оп8ег |ьед оп а гоиппе Ьаяы Но|нечет, |Ьеу аге |61! оЕ |юше ча!ие ънЬеп |Ье хтаг6п8 ша|епа1 Еог с1оп)п8 ь !п аЬогг хирр1у, е.8., ъчЬеп Вепопнс Р)ъ)А ь гесочете6 Егогп Воъч-хогте6 сЬгопю|юшеа ог Егогп писго61ххессе6 6яие ог ъчЬеп сР!ъ)А ь ргераге|1 !гош шК)ь)А ехтгасте6 Етош а Ееъч Ьипдгес1 сеПы ТаЫе 2-2 1ЬЬ хоше оЕ |Ье Вепе6с гпаг)сета |Ьат Ьаче Ьееп |ье6 |о хе!ест ог асгееп Еот тесотпЬ|папьс !п асЫ)тюп |о йе шаг)сета Вхгеб !п ТаЫе 2-2, сег|а!и честит| Ьаче Ьееп Вея8пе6 со |а1|е абчапта8е оЕ йе Касс |Ьас Вгоъчй оЕ ън116-туре Ьас|епорЬа8е Х Ь гех|пс|ед ш 1у|ю8епх сатгу|п8 ргорЬа8е Р2. ТЬь рЬепо|уре Ь са!1е|1 Яр)' !хепя6че |о Р2 |псегЕегепсе). Ночнечет, ыгаша оЕ ЪассепорЬа8е Х!ас1ап8 ьчо 8епех тпчо)че6 и| гесошЪ|па|юп !те|! апд дапт) Вгоъч ш Р2 1ухо8епх ап|! йхр1ау |Ье Яр) рЬепо|уре (Ъа|1ег е| а1.
1971) аа 1оп8 аа |Ьеу сапу а т я|е апд |Ье Ьоя ыгаш Ь тес . Венега! гер1асегпеп| чес|огы |исЬ аа 12001, )ъРАЯН, ап6 |Ье ЕМВЬ аепея саггу |Ье ге|1 апс)!от тат Вепеа |п йе хтийег Ега8тпеп|. Кер1асешепс оЕ |Ье атиЕЕег Ега8шепт ън1|Ь а р|есе оЕЕоге18п РХА гехи!|а |п гесогпЬ|пап| ЪассегюрЬа8ех |Ьа| аге Вр) ап|1 йгь аЫе |о Вгоъч 1п р2 1ухоВепа оЕ Е.
соВ !Кати е| а1. 1980, 1984). Веса|ье гесошЬ|пап| Ъас|епорЬа8еа ои|8гоьч |Ье рагеп|а1 чес|ог 1п Р2 1у|ю8епы В ъчоиЫ хееш |о Ье иппесеххагу |о |а1|е яерх |о ш)п)ш)хе |Ье пшпЬег оЕ попгесошЪ|папь Еоппе|1 ъчЬеп сопхтгисг!п8 Вепопис Р!ъ)А 1|Ьгапеы е.8., Ъу рит)Еу)п8 |Ье!ей апд пВЫ атша оЕ йе честит Егош йе атийег Ега8шепт. 1п ргас6се, Ьоъчечег, гешоча1 оЕ |Ье атиЕЕег Ега8шепт Ьах Ьееп Еоип|1 |о ипргоче йе еЕВс!епсу ъч1|Ь ъчЬ)сЬ Ега8шепь оЕ Еоге)8п Р!ъ!А сап Ъе с1опес! апъ) ргора8асе6 |и Гпстойис6оп 2.21 00 О о 3 о с о 3. --О О, 3 3 С \ оа О' 3 Г О о сД— а с О3 0 0 .а 00 о 0 0 >3 3 3 >3 00 3 03, .3 3 О 3 О О 3 00 О О Зь с с 3 'с с О '3 ЗСМК 33 00 О О 3 'с м с 0 О Х 3 0 О С ю Ы3 Х 03 3О Ы3 й3 М 3 о 3О 30 О >3 3 ~о Ы3 %> < О3 О О С Й Й И ~Х ЕЕЕ 00 С м О с„ о.
Я 3 О' О а 00 Е 'л 3 с с й о ОО >3 О .3 со' О' м сЕ СО О а л '.о оо 3, Я 3 с а с Е с и Э ОС к ( к % О О 03 ОО 3 с О :0 3 и с 0> 0 О. О 00 О 00 О 03 3- О к >3 Х О. х 3 33 о о 0 и О 3О О > '0 "О о О х 3 О .М й .а а О и О ОО й О3 с 3.
о ОО 3О И3 33 3О >3 а й3 00 О а 00 о :0 ОО С Э а3 3О л с. с 3 Э о а Ой 3 с с Э Э 3 о 3/3 с и Э Э 3а с "с Ю а а Э И и Э с Э Я О3 Ы3 ° О с о с 00 О 3 о~ о о ас 'О Я > > о 00 > 00 а а о с а Д о -о с 3 ОС с с 3, 3 с 'О С .О о 30 3 3 Д о 0 — .а О о "' О 00 0 и а ) О с '.О о 'о .О о .Я о 0 О' > 0 о о 3Ц о о 3Л 3' о о > и о о > о сс о с >. с о о 00 '33 С о,с О с Е „о 3 о с Е 0 о с О 00 3, 00 .с а о о .х а я .с с 33 33 3 О о о с оо о 3 >3 О 3 ) :Н Е о' 3 а .и Я с О с" О С 3.
о ) о2 с % о 00 ц 3 .с 3 О„ . о 3 3. о 30 .о .а с †.О с 33 3 о д а С 3 3 .с .с а о ос 3 о,а с о о с .с о 'с- '00 3 .а л 00 ' БО Я с 3' с о о и й О О 00 а ' „о о с о о с о о Е' о с о 00 3 с о 3 а с о Б а Е с ОЯ о о> о ОС о '3 с О' "д Е 33 .с о 3 о 3 а .О о 3 О 0 л с 0 ,С -С .О 3а О 00 с Е'с Р и с о с О О и С'Ой> О О.а 00 о а с >. с„ооа 00'а ' О О .С:0 Я а й >О,О и.а С 00.С О3 -С< О Е.
а С 3 О 0 о ,х. 00 О аЕсо о33оо 0 С и 0 О. В О о 3 ХС3 0 С 3 о о с О Е Е 0 с х о о ) о 3 о :а с Е „00 О' с.а 00 Ис са с и 3 3 00 3 с 'О О.'-" о с .- о „" Я О3 0 с ООО о О О о оС о о " 'а " о 0 о о ))о с о О О".'с о ОО "с> а 30 'О Е с о О о 30 О 3Ц о о 3 О 00 а~ с 3 с .а с С 3 о с о о о О 00с "„Я'.-. ~ О Оо о а о -'- ) О О О 00 и О3 о ) С о О„.аа х о .с с 'И -.О>о 3 3 О3 > с о „о'с с о о Я о) .а оса сйоа О, >3О~ 2.22 Отартет 2: Вастегтор)таге Х апд 1ь Ъестогт честога оЕ йь туре (РгьсЬаиЕ ет а!. 1983). ТЬе пш16р!е геатПстюп ятеа сопгашес1 тп йе ро!ус!огдп8 ятеа оЕтЬе ЕМВ1.
аедеа оЕчестога (апд ш апа1о8огь честогя ) 2001 )Кагп ет а1. 1984) апт1 ).РА5Н [5ог8е 1988] ) реппи йе агийег Ега8шепт то Ье еая1у гепдегет1 ипс1опаЫе Ьу г68еадоп тч)тЬ ттчо д)ЕЕегепт геатдсдоп ептушея ТЬе ппргочед еЕПстепсу оЕ с!ошп8 тп чессога ет)и)рред кдтЬ йе 5р) ауатеш сошеа ат а ргке. Аа птептюпет1 еагПег, гесоптЬтпапь сопатгистед тп тЬеае честога!ас)т йе гед апт1 чаттт Вепея тчЬкЬ сап Ьаче дьадчапса8еа ипдег сегта)п с)гсишатапсея 1п Ьассепа )пЕестед Ьу еаттт ЬассепорЬа8е, йе оп1у Р14А пю1еси!еа ачадаЫе Еог рас)та81п8 аге ге1адче1у гаге, ехопис1еаае-геяатапт, с1оаед с)гси!аг сПтпега Вепегатес1 Ьу 0-Еопп гер1катюп апд аиЪает)иепт гесотпЬ)падоп !сага)ухед Ьу тЬе ргодиста оЕ йе ЬассепорЬа8е )т тед Пепе ог тЬе Ьоат гесА Пепе). Нотчечег, тЬе ргеаепсе оЕ ап асдче Ъастепа1 гесотпЬтпатюп ауатеш оссаяопаПу 1еада то геаггап8ешепь (1п рагдси1аг то т1е1едоп) оЕ ае8- тпепь оЕ Еоге)8п РМА тЬат саггу гереатес1 ает)иепсеа (е.ц., р1еаае аее 1.апет ет а1.