Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 57
Текст из файла (страница 57)
АВагоье 1ь ргеЕеггей со аВаг (п ЕЬЬ ргососо1 $п огйег со пипипгье сопсапипасгоп югсЬ гпЫЬгсогь сЬас сап (псегЕеге юЬЬ ьиЬьециепс епьугпаск апа!уыь оЕ Ьассег1орЬаВе $3ХА. ТЬ$ь ьо1ийоп Ь а!ьо $споюп аь ьой аВаг!ацагоье. СепТг!ЙВе5 апд КоТог5 5огнаИ 55-34 ог ес(и(на!еп1 прес!а! Ес!о!рьпепТ Е(1(ег рарег с(гс!еь ((о ВЕ Ре(г( с((ьЬ1 Орс(опа1, р1еаье ьее пасе со 51ер 12. Неа((пВ Ыос(с ог нна1ег Ьа(Ь ргеьес (о 47'С ЧесТог5 апс! ВасТегьа! Яга!п5 Вас(епорЬаВе Х ь(ос(сь Е. со!$ ьсга(п Ве ьиге со иье ьсгашь о( Е. соВ ЕЬас Ьаче Ьееп арргорпасе!у йеь$5пей со ьаррогс 1Ье роюсЬ оЕ сЬе чессог. Еог а сошр!есе 1ЬсгпВ оЕ ге1ечапг Е. соВ Вепеск шаг1сегь Еоипй (п ьсга$пь иьей со ргораВасе Ьассег$орЬаВе 1., р1езье ьее ТаЫе 2-3.
Ве(оге иыпВ а рагйси1аг Х чессог, сопьи1с ЕЬе 11сегасиге апй(ог Ьеей сае гесогпгпепйасгопь ргочЫей Ьу сопипегсга1 ьирр11егь геВагй(пц сЬе сЬоке о( а ьшсаЫе ьсга(п о( Е. го!0 МЕТНО0 РгерагаТ!оп оТ Р!абпд ВасТегьа 1. 1поси1асе ХХСУМ ог 1.В спей!ига (50 сп1 1п а 250-гп1 сопка1 ($аь$с) ю11Ь а ь!пи1е Ьассепа1 со!опу о(1Ье арргорпасе Е со1т' ьсга1п. Сгою ЕЬе си!сиге онеги!ВЬ1 ас 37 С ю!ЕЬ и юдега1е аа11а11оп. Вопле ргососо1ь гесопипепй ВгочйпВ сае си!сиге ас 30'С 1пьсеай о( 37'С. СгоюсЬ ас сЬе 1оюег сегп. регасиге Епсгеаьеь сЬе сЬапсе ЕЬас сЬе се11ь чйН посЬаче геасЬей ьасигабоп йиг(пВ сЬе очегпЕВЬс ВгоюсЬ регюй, Ьепсе гейисшВ сЬе агпоим оЕ се1! йеЬпь ш сае гпей1ипс Аь посей еаг1гег, Ьассе. г(орЬаВеь аййей со ьасигасей си!сигеь сап айьогЬ со сае ЕашВ ргосеш ргеьепс оп сеПи!аг йеЬпь, ВЬегеЬу гейис(пВ сЬе йсег о( сЬе Ьассег(орЬаВе !поги!игп.
Ргогосо! 1: Р!асгич Вас!ее(орЬаче ), 2.27 Сеиспбтие йе се11з ас 4000ч (5800 гри| и| а 5огча!1 55-34 госог) !ог 10 ииитез ас гооп| сет- регагиге. 13(зсагг) йе зирегпасапс, апс( гезизрепг( сЬе се11 ре11ес !и 20 т( оЕ 10 тМ МВ5О4. Меазиге йе О(3 оЕ а 1(100 6!)ис(оп оЕ йе гезизрепс(ес( се!1з аи|1 с6!исе сЬе се11з со а 6иа1 сопсеисга6оп оЕ 2.0 ОЕ)зоо ю!1Ь 10 т!чс Ми504.
То ииргоче йе ч4аЬ~1!су оЕ сЬе р!аВиВ Ьассепа ъсигсиВ зсогаВе, !иснЬасе сЬе се11 знзреияои !и а 100-ги1 зсеп!е Паз)г Еог 1 Ьош ас 37'С ю|й шоъ!егасе аВиаВои, Рог шаиу ига|из оЕ Е. со)0 1.0 ОО Еш! Ь арргохниап4у еъСиа! со 1.0 х 10| Ьассепа! се!!з(ш!. Ноюечег, |Ье ге1а6оизЬзр Ъесчееи сЬе ОО аиг(сЬе ишиЬег о(ч|аЫе се!!з/иъ! чапе|!тон| зсга|и со |стас и аиг( 'ь аЕЕессег( Ьу сЬе соийиоиз оЕ роюсЬ.
1| Ь аъсчсзаЫе со саггу ош а са1|Ьгас|ои ехрег'ниеис со и|еазнге сЬе ОО оЕ а сн1снге оЕ сЬе рагско1аг зсга|и оЕ Е. соЕ ас 01ЕЕегеис зсацез Еи |сз Вгою|Ь сус!е аиъ) со сонис сЬе ишиЬег оЕ ч!аЫе се!Ь ас еасЬ оЕ сЬезе сниез Ьу р!асшц й1ш|оиз оЕ сЬе сн!шге ои 1.В аВаг р!асез. 5соге йе зизреияои оЕ р!а6пц Ъассепа ас 4'С. 5нзреияоиз оЕ гоЬня ига!из оЕ Е, соВ и|ау Ье нзеъ( Еог нр со 2 — 3 ъчее(гз. Ноъчечеи зечеге1у еи(ееЫег! зсга|из оЕ Е. соИ (е.ц., гесчС зсга|из) 1озе чсаЪ|1иу ъ)шс(г)у юЬеи |соте|1 ни|1ег соийВоиз оЕ зсагча6ои ас 4'С. Бзе 1тезЬ сн1снгез оЕ знсЬ зсга!из Еог р!аВиВ ЬассегсорЬаце з. Ме1с сор айаг ог ацагозе Ъу Ьеас(ии 6 !и а иисгоюаче очеи Еог а зЬогс репо|1 оЕ 6те. Всоге а1и!иосз оЕ сЬе те1се|1 айаг ог аВагозе (3 т1 Еог 100-пии р1асез, 7 т1 Еог 200-иии р1асез) ои а Ьеас(иу Ыос1| ог |и а ъчасег Ъай ас 47"С со 1сеер йе зо!тюп то!сеп. !ОЕес1!оп о1 Р!а1!пц Вас1егса Ргераге сепЕ016 зепа! с61тюпз оЕ йе ЪассепорЬаце зсос1|з (т 5М р1из ие1ас(п).
Мсх еасЬ с6!и6оп Ьу чеиг!е чогсех!ии ог Ьу сарр!иа оп сЬе зЫе оЕ сЬе сиЬе. ТЬе Ве1аВи Ье1рз со зсаЬ1!1хе сЬе Ьассег!орЬаВе рагис!ез. Ехсезяче чогсехсиВ ъсашаВез йе саВз о( Ьассег!орЬаВе съ рапк!ез. (3(зреизе 0.1 и|1 оЕ р! ас!иц Ьассепа !гоп| 5сер 4 тсо а зепез оЕ зсег!1е сиЪез (13 ог 17 х 100 пип). А|Ы 0.1 ги! оЕ еасЬ с6!и6ои оЕ ЪассегюрЬаВе зсос)с со а ыЬе оЕ р!ас!пи Ьассепа. М!х сЬе Ьас- сепа аиг) ЬассепорЬацез Ьу зЬаЫиц ог деи6у чогсех!иц. 1псиЬасе йе пихсиге Еог 20 иииисез ас 37'С со абою сЬе Ъассег!орЬаае раг6с1ез со адзогЪ со йе Ьассепа. Рето ге йе сиЪез Егот йе юасег Ъай апг( аПо|ч сЬеис со соо1 со гоои| сегпрегасиге.
А!юауз сис!и|се а сои|го! шЬе сЬас сои!а|из 5М Ьнс ио ЬассепорЬаВе х. Л|Ьогрс|ои оЕ ЬассепорЬаВе Х со |ь гесерсог !з Еа|г!у з!оъч, Ьеисе сЬе гег)шгешеис Еог 20 иииисез |исиЬаиои. 1О. Кер!асе сЬе 1Ыз оп сЬе р1асез. А!1ож йе сор аВаг!аВагозе со Ьагс(еи Ьу зсап6!05 йе р1асез Еог 5 ииписез ас гоот се|прегасиге.
1ичегс сЬе с!озе|1 р1асез аис1 |исиЪасе йет ас 37'С. 'ъъ|1|Ь хогне Е. соП ягашз аиг( Ьассег!орЬаце чессогз, Ъессег р!а|Снег аге Еогшеъ( юЬеи йе р1асез аге шснЬасег( ас сешрегашгез ойег сЬаи 37'С. Рог ехашр1е, юЬеи нз!иВ сЬе 5сгасаВеие Е соВ зсга!из 5КВР аиг( 5ВВ(Р2)р аз Ьозь, аи 1исиЬасюи сегирегаснге оЕ 39'С ы гесоиниеидей 1и а0йиои, зВС10 чесеогз ргой|се Ьеегег р!аг)нез ои Е. сей 7ф з|гашз юЬеи |исиЬаее|! аС 39'С (Еог г(егас!з, р!еазе зее сЬе шсгоднссюи со СЬарсег 11). АсЫ аи а1!с)иос оЕ |по!сеи айаг ог аиагозе со йе 6гзс сиЪе. М|х сЬе соисеий оЕ сЬе сиЬе Ьу цепс!е сарр!иВ ог чогсех!иВ Еог 6че зесоис(з аис), ъч(гЬои с|(е1ау, роиг сЬе епссге соисеисз оЕ йе сиЪе оисо йе сеисег оЕ а 1аЪе1е|1 аиаг р1асе.
Тгу со ачоЫ сгеас!ии а|г ЪиЪЫез. 5ю!г! ЕЬе р!асе цепс!у со еизнге аи ечеп йзспЬи6ои оЕ Ьассепа аис) сор ацагозе. Кереас йе ргосег(иге ип61 сЬе сопсеисз оЕ а11 сЬе сиЬез Ьаче Ъееи сгаизуегге|1 со зерагасе 1аЬе1е|1 р1асез. 2.28 СБарЕее 2: ВаееепорЬа~е Х апб2 Ы 1беееоге и с о 4 б л \ о о с С с Я б а 'о б а о .-2 Ь 'о ,а 'Э о о о о .о б с б а О о б о о о с б б с о а Я аЬ б о о 'а с с .а а о бб н Е бб Ф бб ОЕ .а .с а Э о Э о .о с .а с ба .а Е б у! о .с о бб .с о,б Б 'Я с Б Е а о.
Э о бс < к о с а а- 'Е о Е М с бб о с 'а ю бс в бб 1 О. а бс б" Ф, о к У. бо бс $ а с бс б Е о бс 'Я б с Е бо Е о б.б а о с с„ о О > бб ОЕ "бб л 'и о о, с бс а б ба сб бс .Е ,Я с бо Е л б бс бс -В 'с а ба' бо ~Ч Ыб б ЕО < и Б Я с сб х а б О б Э оэ бо .О О. О б Э Э Ю со Э а ОО а О. О, с. О 'О Э а Р а О Ю сб О Э с о а о И о о Д 1 бб о а .с Р.
а ь Е с, о. Э < Е о Е с Е о Е Я б а .о Е Е бо .а с Е б б» б о а о о о о Е .о с Е о. о а о. с' о .о Е ( к с о о о с б Е .а ,» .а о Е Е— а о Е Е Е ба .а Е а у с Еб Е о с ) а -а Яа :а О о Е Е— о Е бс Е о о .о О Е а с 8 О Е о с а Р Е о Š— ' о. щ -с а о О с а И а о а о -с Е Ж У э' Е бс % бб .с а.
иб о Е о, о с а с б 'а .а о о Е, .а о "О бб о $ бб .с о. о с .а бб с с о о Е" - Еб о < Е С о с а .о ф о о Е Б с о а Е бо Е .с б Б о о о а о о с .Е о. ~ «С к В а .а о Л а б Е о с Мь о с о о с а сб Я :а а о Е Е БЕ бс о бс к о Ф о б: о с а а с о ф Е о Л Е Ф 'о бе З б бс Е бб о с о а "Е Е Бе < Е б о .с 5 ОЕ Е о 'а Е оо с 'о а Е о о 'с Е к с С с о :б с о Я о Е О с д о ) о ) 'бб а .ю о ŠŠ— Е а л о. Ртотосо! 1: РЬ|т~ ВассепоРЬсце О 2.29 О л О с .с х О о с .с о х с с Е .с И~ О О Б .о с .с ОО О о ~Р л л О ОЛ 'о с О .с о х л О о с О .с о О О ОО М О Е 4 е о 'О О О с ,с И и .с о с Гс О .с о О ОО с х ОО с 'ОО О О О. о Р с ОО О О 5 О о с в о О С О л Е Е С С Е б о о Е с Ы с к с Я 1 сс О а'й~ о '4 а '-' а О ОΠΠРΠ— "с, а а Л а О„ О о О а с С О 'О~ 1 а О, С а О о, а с 'О О, с а Л 'О О 'О 'О О с о О 3 'С - О с 'О 1 ОО Е ~ к2 о с о \ ) О О.
„ΠŠŠŠ— Е О о д й. Е О о с о О о Е с О. Я о с с о Е с о О "О о Е ОО с л с о с о О а Е 0 о с Е Е О а а л о йс ОО о с о Е О. Я о с с Е' ЬО с о о с с ОО Е .о ОО Е с с :О о Е о с о с О 'Р О ЬО ° ~ О О О О и о О О й с Я Д м О о ~с О .О С с 1 ) о о ~О ОО с о О с Е .с .о Е ОО ; 1 ОО с Е Г 3с с о 'с о о :О Й о с ~ЕО о а с, о - о е1 и о О О Я Ы О 'О Е '-л С с Ь о о " 4' 'с о Е Я о Е— а с о О Я ОС Я М1 ;- С о О о о '$ Е ц о с, Š— ' ОО З Й ОО О О. о к .о о о с с о 'с О ) .О о Е 'и = ю% с о Е Л Е 3 ОО с 'л о о Е О.
В о Е ОО .с оО Е 'с К ОО о о о О ОС о с О .О о х ОО 'ОО .с О. О О. О о 'с в Е Б 14 А о О 2.30 СЬаргег 2: Васгеггорцаце Х аий 1|з \гесгош 12. Соп6пие !псиЪас!пц 1Ье р1асез онеги!ВЬТ, йеп соипс ог зе1ес1 (рсс1с) !пй)ч(йиа! р1асрлез.
Р1адиез Ьед!п со арреаг айаг -7 Ьоигз оГ шсиЬасюп апй зЬои1й Ье соипсей ог рацей айег 12 — 16 Ьоигз. Ву сЫз Вше, йе р)ас)иез Гоггией ои гоЬизс ягашз оГ Е. сод зЬои!й Ье 2 — 3 шги лп гцапксег. ! Е сЬе р1асез аге соо с1гу йе р1аг)иез зч!!! дгочг лиоге з!озч!у апй чй1! пос геасЬ сЬелг Вл11 ясе. РгезЫу рошей р1асез Ьаче гцйегепс ргоЫегпз. Рапид |псиЬа6оп ас 37'С, йгор1есз оГ лпоЫсше ззчеас опсо сЬе зшЕасе оЕ сЬе сор адаг апй саспе сЬе йече|оршд р!ал)иез со зсгеа)с апй гип шсо оие апосЬег.
ТЫз яиеапод саи Ье ачогйей Ьу яоппд сЬе р!асез |ог 2 йауз ас гоогп сегирегасше ЬеГоге ше ог Ьу йгулпд сЬе р!асез чйй сЬе 1гйз а)аг Сог 2 Ьошз ш а 1апл!иаг-Возч Ьоой ог (1езз йезпаЫе) а 37'С лпсиЪасог. 1и ап елпегдепсу, лчЬеи йеге и по Вгпе со йгу (Ье р1асез, гегпоче аиу йгор|есз оГ зчасег Ггош йе Вйз оЕйе р1асез айег сЬе сор адаг Ьаз зес апс! |пзегс а р!есе оГ(зсеи1е) слгси!аг 61сег рарег лиса еасЬ 1пд Риппц |псиЬадоп оЕ сЬе 1пчеяес| р!асез ас 37'С, сЬе 61сег рарег аЬзогЪз ишсЬ оГ сЬе ЬшпЫЬу апй 1сеерз зсгеацйпд со а пииопшп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
