Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 61
Текст из файла (страница 61)
Р1асе йе сеп!пйг8е Ьои!еа оп ЕЬегг аЫеа аГ гоогп гегпрега)иге Еог 1 Ьоиг ю ГЬа! йе 5М сочега апс! аоайсч !Ье реПегя )ЧааЬ ЕЬе чга11а оЕ йе сепгпги8е Ьоп!е 8епг1у Ьш ЕЬогои8Ыу, аа йе ргесграаге оЕ ЪасгегюрЬа8еа аг)с)са го ЕЬегп, еаресга11у !Е ЕЬе Ьосс!е Ь о18 апс! Рпгей ТЬе саг1а сап Ъе аЬеагег) Егосо ЪасгегюрЬа8е а раггк1еа Ьу ло!епг ргрегпп8. Ехггасг йе РЕС апс1 сеП сйеЬг!з !гот йе ЬасгепорЬа8е аиарепяоп Ьу ас!сПп8 ап ес)иа! чо1- шпе оЕ сЫогоуопп.
Чоггех йе пихгиге Пепг1у Еог 30 аесопсйя 5ерагаге йе ог8апк апсй ас)пепит РЬааеа Ьу сепгпуи8аг!оп а! 3000е (4300 гргп ги а 5огчаП САЛА гогог) Еог 15 пипи!ее ас 4 С. Кесочег ЕЬе асйиеоиа РЬаае, ччЬкЬ сои!а!па ЕЬе ЬасгепорЬа8е раг6с1ея То с)егегш)пе у)е!й апа1уае ЕЬе ЬасгепорЬа8е аырепяоп Ьу 8е1 е!есггорЬогеяа Ергогосо! 7); Ь гпау Ье аиЪ)есгес) го ЕипЬег рипйсаиоп Ьу сепгпги8агюп ияп8 опе оЕ гЬе гпегЬос)а с)еасг)Ъес) )п Ргогосо!а 8 йгои8Ь 10 оЕ йы сЬаргег. 2.46 СЬарсег 2: Вагсег)ор)саче ).
апг) 1п Ъесгогз )ч1ЕТНОО !. Ма1се а счогЫпц 50!и!)оп оЕ рапсгеас)с Р)ч)аае 1 (1 )са)ш1) аа Ео11осчя Р!)исе 1 )с! оЕ сЬе а!ос)с ао!исюп оЕ РЬ)аае 1 сч)сЬ 1 гп1 оЕ ке-ео14 Ратасе 1 с)1!ис)оп ЪиЕЕег. 2. Мпс сЬе 50!и!!оп Ьу аепс1у !пчегс!па сЬе с1оаес) сиЪе аечега! сипея Та1се саге со ачоЫ ЬиЬЫеа апс! Еоаш. йоге йе 501исюп ш ке ипс)1 пеес)ес). Р!аеагс) йе счогЬ!па 501шюп аусег иае. Сгпс)е р!асе )уса!ее ияса))у у)е!с) а с)еап Ьапс! оЕ ЬассегсорЬаае )с ТС)4А. Носчечег, )уса!ее оЕ ))с)о)с) со1шгеа а)гпосс а)счауа сопса)п ап аЬопс)апсе оЕ Егахгпепса оЕ Ьассепа! )))4А сЬас гпау оЪасше йе Ьапс) оЕ Ъасгег)орЬаце )))4А ю СЬе ааагозе це!. ТЫе ргоЫесп сап Ье ачо)с)ес) Ьу сгеаг)пц а)нрюгс оЕ сЬе сгос)е )уса!ее сч)сЬ рапегеассе ЕгЬ)аде ! 15сер 3) Ьеуоге ге)еас)пц ЕЬе Ьаесег)орЬаце Х Тс)4А Егопс сЬе Ьаесег)орЬаае рагис1ес сч)сЬ 5Ес5 апс) Б)3ТА Е5сер 4).
3. Тгапауег 10 )с! оЕ сгис)е ЬасСегюрЬаде 1уааге ог а!ос)с Со а писгоуиае СиЬе. АсЫ 1 )с) оЕ СЬе ъчогЫпа ао!ис)оп оЕ рапсгеас)с Ратасе апс) шсиЪаге сЬе пах!иге Еог 30 ш)пи!ее ас 37"С. 4. Аг)д 4 )с1 оЕ 2.5х ВР5-ЕРТА с)уе пихсиге апс) спсиЬасе сЬе с1оаес) сиЪе Еог 5 пипшеа ас 65'С. ТЫс ргосес)оге сгас)се сЬе Ьассег)орЬаце соаь, ге)еаза сЬе чпа! Е)Ь)А, апс), ас сЬе сапсе сапе, )пасссчасес )3)4аае. 5. аспас) йе аашр1е оп!о ап 0.79о адагоае ие1 сопсаш!пц 0.5 )са)ш! есЬ!4!иш ЬгошЫе. Ас сап!го!я ые мапср)ес сопса)п)п5 5, 25, апс) )00 пд оЕ Ьаесег)орЬахе )г ))Ь)А. 6. Рег!опп е1ессгорЬогеа)5 ас <5 Тг/сш ипс)1 сЬе ЬгоспорЬепо1 Ыие Ьаа пщгасес) 3-4 сш. ТЬе ЬапсЬ оЕ )5)4А п ))! Ье япеагес! сЕ сЬе чо!саде Ь соо Ь)аЬ.
7. Ехапипе йе ае1 ипс)ег Ксу 1!1иш)пас)оп. )Ухе сЬе спсепясу оЕ Яиогеасепсе оЕ сЬе РХА агапе)агс)а аа а ци!с)е со еагипасе сЬе апюипс оЕ ЬассегюрЬаее ). Р)ч)А сп йе сеас аашр1е. А Ь)цЬс)сег )усасе ! ! 0 а!) сЬоп!с) сопсасп Ьессчееп )0 пц апг) 50 пц оЕ Ьассег)орЬаае )55)А. 2.48 СЬаргег 2: Вас!ее)орЬаце 7 алг! Еь Уесгогх Сеп1г!йде5 апе! Ко1ог5 Вес)стлал 5!4|47 ог 5ИГ28 го!от ог ег(и!на(елг Вес)гтал у!50 ог 5)4|50.
7 гогог ог ег(и!на!ел!, нн!ЕЬ с)еаг селгг!Еице 10Ьех (е.ц., Вес)стал (71!та-С)еаг гиЬеь) прес!а! Ег!о1ргпеп1 Нурог(егт!с леег(!е (27 цаице) Чес1ог5 апе! Вас1ег!а! Яга!п5 5иарела1ол о( ЬастелорЬаце 7. рагпс1еь Ргерагег) аа деьегЕЬегЕ ш Рггаосо! 6 о! й|а еЬаргег. |ЧЕТНОО 1. Меааиге йе чо1шпе оуйе ЪасгегюрЬаце аиарепяоп, апг( а|Ы 0.5 ц о( |ю1Ы СаС! рег пт) о(ЪасгепорЬаце хиарепа!оп.
Р!асе йе анрепа!оп оп а госЫпц р1агуопп ип11! йе СаС! |а сотпр1еге1у йаао1чед. 2. Роиг епоицЬ СаС! атер цгаг)!ел!а го Егаспопасе йе ЪастегюрЬаце аиарепяоп. ЕасЬ цтаг!(епг сап ассопппос!ате -16 ш! оЕ ЬастепорЬаце аиарепяоп. ТЬе пшпЬег оЕ 61ер цгаг(1епта гег)шгег! ег!иа18 тЬе йпа1 аг!иеоиа чо1шпе (Втер 1) г)(чЫег! Ьу 0.4 х гиЬе чо1шпе (р1еаае аее поте Ье!о|ч).
(Ле с!еат р1аагк сепгпйце тиЪеа (е.ц., Вес)опап !Лгга-С!еаг тиЬеа) йат й 1Ье Весйпап 5%41 ог 5'|1!28 го!от (ог ес)шча!епг). ТЬе егер цгайепгв шау Ье шабе еЬЬег Ьу еагейНу 1ауеппц |Ьгее С|С1 ао1шюпа о! гЕесгеаяп8 гЕепягу оп |ор оЕ опе апо|Ьег ог Ъу 1ауеппц ао!шюпа оЕ шегеаап8 гЕепягу ип|1ег опе апо|Ьег. 5огпе !урез оЕ сепгпЕице |иЬеа (е.8., И|та-С!еаг) аге Ьу|ЕгорЬоЬ1е, |чЬ1сЬ саше| |Ье С|С1 ао!ибопа го п|п аогчи |Ье шЪеа аз агор!ега га|Ьег |Ьап |и а сопгшиоы аггеа|п, |ЧЬеп ияпц гиЬех оЕ |Ьга гуре, и ы Ьег|ег |о Еопп а |Ееиягу цгаг11еиг Ъу иигЕег1аушц га|Ьег |Ьап очег!ау|о8 |Ье |о1ибоп.
3. Ма(ге а шаг)с ъч(гЬ а реппапепт Ее!т-11ррег) шаг)гег реп оп гЬе оигаЫе оЕ йе гиЪе оррояге йе роятюп оЕ ЕЬе шгегуасе Ьетъчееп йе р = 150 ц(пт) 1ауег апг! йе р = 1.45 цйп1 1ауег (Р(Вите 2-10). ТЬе С|С1 яер 8гаг11епга гЬои14 осеиру -60% оЕ йе чо!шпе оЕ |Ье и!|гасеи|пгице |иЬе. рог ехашр!е, 1и а Вес!опас 5Х28 шЬе (ог егги1ча1еиг), игЬкЬ Ьо14 38 ш1, |Ье егер цгаг!1епга сопя|| оЕ 7.6 ги1 оЕ еасЬ оЕ |Ье |Ьгее С|С! ао1игюпх. Ва1апсе гиЬеа аЬои!г! Ье росте|1 ичгЬ |Ье ватле С|С! |1епягу |ю1ибоия Ье1оге септгаиоатюп агтег септг!Еиоа!!оп р = 1.15 дугп! |1еЬла ч!п|в рап!с!еа р = 1.45 01ш! р = 1.50 0/ш! р = 7.70 01ш! г|енкгг.|осе|а й~~~ | ||| В | г А(тег септг!Еицат!оп, йе ЬастелорЬаце рал!с!еа Еопп а н16!Ые Ьапг( ат йе !птег(асе Ьегнчеел 1Ье 1.45 фп! апг! 1.50 ц7ш! СаС! !ауегя Ргогосо! 8: Ригфсасгоп о7' Васгегсорйаде ).
Рагдс1ек Ьу Екорусгг!с Сепсгг)ада!|оп гБгоидй СкС1 Сгад|еигк 2.49 4. СагеЬаду 1ауег йе ЬассегюрЬаде юкреияоп очег йе ксер дгад|епск. СепспЕиде йе дгад|епск ас 87,0008 (22,000 грги Еи а Вес)сгпап 5'ъъг28 госог) Еог 2 Ьоигк ас 4'С. СкС| 5ТЕР СКА01ЕМТ5 ТЬе СкС| ксер дгад!епск керагасе йе ЬассепорЛаде рагйс|ек 1гогп пюкс ос сЛе сейи|аг ргоге|пк, )пс)ид)ид Мга| ргосе|пк йас аге икес! со расходе СЬе ЬассегюрЛаде 0МА апд йас аге купйекйег! |п |псессед сейк : |п |агде ехсеяс Сейи|аг апд ч|га! ргосе|пк Лаче а г1епк|су о1 — 1.3 дгпг!.
Съг)сд-Суре ЬассегюрЬаде П Лак а депвсу о1 -3.5 дгпс), апс! сЛе рагйс|ек йегесоге Ьесогпе сопсепсгасед |и а ч)к)Ые Ьапд ас сЬе |псегсасе | Ьесънееп сЬе 1.45-8)гп! |ауег апд сЬе 3.50-8)ги! |ауег. 5огпе гесогпЫпапс н|иьек Ьаче а Л38Лег с1епяъу ! Ьесаике йеу саггу |пкегь о1 1оге|дп 0МА ъч соке СС сопсепс 'ь Л)дЛ ог Ьесаике йе агпоипс ос 0МА |и | сЬе гесогпЫ пап! рагс|с|екдк |агдег !Лап сЬе депогпе о1 сЬе рагепса| чессог. Оя|айу йе ЫЫкй Ьапд ос Ьас- / сегюрЛаде рагйс|ек 'ь сЛ|с)ь !3-2 пнп) апд чегу еаку со кее.
6 йе у)е)д ос ЬассегюрЬаде рагдс|ек 'ь )оън, р|асе йе дгад1епс ада| пкс а Ыас1с Ьас)гдгоиод апд ай |пе а 68Лс !гоги аЬоче со |осаге йе Ьапд ос рагдс|ек. 8 йе у)е!дк о1 рипйед ЬассегюрЬаде аге сопк|яепду )оъч, сЬе пипъЬег о1 )псесссаик ЬассепорЬаде рагйс|ек кЛои)д Ье гпеакигед |п кап|р|ек сасъеп ас напоик ксадек диппд йе рипйсайоп со дегепп|пе ън сеге |оккек аге оссигппд. А|гегпайче|у, пюпйог йе апюипг ос н|га| 0МА ргекепг аС дсйегепг кСадек Ьу де| е|есСгорЬогеяк.
ТЛ|к гар)д апд )пехрепк)че |пейо|3 Ле|рк Со |осаСе ргоЫе|п агеак апд, ъМСЬ ргасйсе, сап Ье икед гоис)пеЬ со десепп|пе ънЛесЛег йе у)е)д о1 ЬассепорЛаде рагдс|ек 'ь кой|с!епс со )иксду ргекк)пд аЛеаг| ън|сЛ |чай-кса|е рипйсасюп, ТЬе де| аккау 'ь дексиЬед |п Ргососо| 7. Гайиге со |пс|ис|е адегсиасе сопсепсгас|опк ос Мдг' |п ю|и6опк икед г|иппд йе рипйса6оп о1 Ьас- ! , СепорЬаде ), сап дгакс)саду |оън|ег Мгик у|е|дя ТЛе Мгик рагдс|ек аге ехсеесйпд|у кепяйче со Е0ТА ап|1 ойег сЛе|асогк, апд |с ь еккепйа! сЛас мдг+ |1 0 — 30 псм) Ье ргекепс ас ай ксадек о! сЛе рипйсасюп со рге- ,' чепс д)к)пседгассоп о1 сЛе рагйс|ек. 5.
Содесс йе ЬассепорЬаде рагдс!ек Ьу рипсшппд йе яс1е оЕ йе сиЬе ак ЕоПоънк. а. Сагеуиду ъчсре йе оп!яде оЕ йе сиЪе ъч)й ейаио1 со геточе аиу дгеаке ог ос1, апд йеи ассасЬ а р|есе оЕ 5соссЬ Таре со йе оиск)де оЕ йе сиЬе, 1ече! ъч)сЬ сЬе Ъаис1 оЕ ЬассегюРЬаде рагдс1ек. ТЬе саре ась ак к кеа! са ргечеис 1еа)саде агаапд сЬе пеед!е. Ь. с)ке а 21-даиде Ьурос1еппк пеесПе (по куппде-Ьагге1 гес)шгед) Со риисгиге йе СиЬе сЬгоидЬ сЬе саре аид соПесс сЬе Ьапд оЕ ЬассегюрЬаде рагск1ек (р)доге 2-11). съеер йпдегк аьау Его|и сЬе расЬ аЕ сЬе пеесйе |и саке сЬе пеед1е репесгасек сЬгаидЬ сЬе сиЬе.
Та)ъе саге пас са сапсап||пасе сЬе ЬассеиарЬаде ркгс|е1ек ъниЬ гаасепа1 Егагп асЬег Ьапдк сЬас аге н)к|Ые |п йе дгкдсепс. ТЬеке Ьапдк сапса|п чапана сурек аЕ Ъассепа! деЬпк апд ипаыеп|- Ыед ЬассепарЬаде саиърапепск. 6. Р1асе сЬе кикреияоп оЕЬассегюрЬаде рагск!ек |и аи и1сгасеиспсдде сиЪе сЬас Пск а Вес)ипап Т|50 ог 5'ъъг50.1 госог (ог ег)и|ча1еис) аид ПП йе сиЬе ъч)сЬ СкС1 ю!шюи (р = 1.5 цггп! ш 5М). Сепспуиде ас 150,0008 (41,000 грп| си а Вес)сисаи Тс50 госог) Еог 24 Ьоигк ас 4'С ог ас 160,0008 |36,000 грсп Еп а Вес)сгпаи дъъг50.1 гоСог) Еог 24 Ьоигк аС 4'С.
СкС| ЕС1ъ)!Е|ВК!С)М СКА01ЕМТ5 ТЬе кесопд СкС| сепгпсидагюп (5сер 6) ь ап егсий)Ьпипь дгад)епс йас керагасек йе ЬассепорЬаде 1гогп сопсагп|пайпд КМА апд 0МА. Мис1е)с ас|гЬ чдй пос согпе со ЛП| егсий)Ьпигп диппд ап онеги)дЛс сепсп1идайоп |и СкС| апг! йик гегпа|и сйкспЬисед сЛгоидЛоис сЬе СиЬе. ТЛе геко|ыюп о1 СЫк кесоп|1 сепспй|дасюп ь Л38Лег сЬап сЬас оЬсагпед |п йе ксер дгад)епс Ьесаике сЬе Мгик рагс|с|ек геасЛ егсий)Ьг)ипь |и а чегу кйайоъч с|епяъу дгад)епС П.е., йе с|епяСу гййегепсе Ьеинееп йе Сор апс! Ьог|оп| ос йе дгагйепС ь г|ийе япай).
Ак а сопкессиепсе, сЛе кесопс! сепспйддайоп сап ойеп гею|че Ьно рори3асюгь о1 ЬассегюрЬадек йас гййег |и йе агпоипг ос 0МА ЬагЬогес| |и йе Мга! депоп|е. |и а с)акк)с рарег |п Ьи|пап п|о|- еси|аг депейск, саиег ес а!. |С 980) ехр|о|сед СЫк гею|мпд роъчег со кйоъч| йас Ьас|егюрЛаде с|опек ЬагЬоппд дъе Леп|од|оЬ|п и депе ойеп геаггапде ирои ргорадасюп |и Е. сой со ргодисе ехасду йе ка|пе де|есюп п|исасюпк 1оипд |и сегса|п киЬ)есск ън)й и-йасаккепсса.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
