Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 62
Текст из файла (страница 62)
Ргососо1 Бл РиП)кадоп о1'Вассег(орЬаее Х Рагдс1ел Ьу 1лорусп(е Сепсг()йонас!оп (ЬгоиБЬ СзС1 угад(епсл 2.51 АЕТЕКЫАТ1л(Е РКОТОСОЕ: Рс)К1Г1САТ1ОЫ ОГ ВАСТЕК(ОРНАСЕ ). РАКТ1СЕЕБ ВУ 1БОРУСЫ(С СЕЫТК1ГС)САТ1ОЫ ТНКОс)СН СБСЕ ЕЯС)1Е(ВК(С)М СКА0(ЕЫТБ (4)Ьеп деаИпц чч|й агпаИ-еса)е ргерагаВопе о1 Ьас(ег(орЬаБе Х (га1ес(ед си!Сигея о1 ) И(ег ог )еее), йе СьС! ьсер Вгад)епс (Ргососо! 8) сап Ье огп|ссед апд гер|асес1 Ьу а япц|е гоипд о1 ел(иИ)Ьг(игп сепсг)(иеас(оп. ТЬе гееи1дпц ргерагаСюп о1 ЬасСег)орЬаБе рап)с!еа ь еааеп(|аИу 1гее о1 соп(ап ипаИпд Ьас(епа! пис|ек ас(дь.
Адд!С!опа( МаСеиа15 ! С5С) 1501)д1 БМ сои(а)и)иВ С5С( Слле а ЫИЬ л(иаИ(у (гпо|еси|аг Ыо)оИу Игаде) о1 лорд СлС! со ргераге а ло|идоп о1 0.75 фп! Ьу адд)пИ воид СлС! Со 5М. 5|оге СЬе лоюдоп а| гоопл Селпрегаюге. Ме1Ьод С. Меаьиге йе чо|игпе о1 (Ье Ьассег(орЬаБе аиарепа(оп апд адд 0.75 И о1 сю|к1 СьС! рег пс! о1 Ьассег)орЬаБе аиереие)оп. М|х йе аиерепа(оп Беп(!у Со дВею|не СЬе С5С!.
2. Тгапа(ег йе ЬасСег(орЬаИе аиьрепа|оп Со ап и(Игасеп(г((иБе СиЬе йа( ИС5 а Вес(оиап Тл50 ог 5И'50.) го(ог (ог ес|иЫа!епС). ГИ! йе СиЬе чч)СЬ БМ соп(а(п)пВ О. 75 В)пл! С5С! апд сеп(г(1иБе И аС С 50,0005 (4),000 гргп, |и а Вес(оиап Тл50 го(ог) (ог 24 Ьоиге а( 4чС ог а( С 60,000е (36,000 грпс |и а Вес1ипап 5(4/50.1 го(ог) Сог, 24 Ьоиге а( 4"С. 3.
СоИесс йе Ьассег(орЬаБе раи(с(еа Ьу риис(опор йе Еде о( йе сиЬе аь 1оИоччк а. Саге(иИу чч)ре йе ои(5(де о(йе СиЬе чч(СЬ е(Ьапо! Со гегпоче апу Бгеаее ог оИ, апс! йеп аиасЬ а р|есе о1 5соссЬ Таре со (Ье оиЫ|л(е о1 йе ЬлЬе, )ече! чч|(Ь йе Ьапс! о1 Ьассег)орЬаце рагдс|ек ТЬе саре ассе ал а леа! со ргечепс )еаКаИе агоипд йе пеед)е. Ь.
С)5е а 2) -Баице Ьурол!еггпк пеесИе (зуг)пБе-Ьагге! ордопа!) (о рипссиге (Ье сиЬе йгоиБЬ (Ье саре апд соИес( йе Ьапд о( Ьас(ег)орЬаде рагй(с)ее (р(еаье аее Г)Биге 2-1 С ). Кеер ИпИегл аъчау 1гогп йе рай о1 йе пеелйе |и сале йе пеед|е репесгасел сЬгоиИЬ йе илЬе. Та$се саге иос со сопсагп|пасе сЬе Ьассег)ориаИе раи)с)ел лч)(Ь гпасепа! 1гопл ойег ЬаплЬ йас аге ч)л)Ые лп йе Игайепс. ТЬеле Ьапдь сопла|и чаг)оил сурел о( Ьассепа| деЬг|ь апд ипаалеплЫед Ьассег)орЬаце соплропепь. 4. 5(оге йе ЬасСег(орЬаБе еиарепе(оп а( 4"С лп СЬе С5С! 5о!и()оп |и а С)БЬС!у сарред СиЬе. ВассегюриаИе х (лЫА гпау полч Ье ехсгассед Вогп йе лиьреплюп ал деьспЬед |и (лгососо! )с.
Рго1осо! 9 Риппсабоп о1 Вас1епорйаце Х Раг6с!еь Ьу Сегйг!1ица6оп Йгоыдй а С!усего! Мер Сгайеп1 нь моо1нслтюн ос тне улмлмото Рик1нслтюч Ркосеоике (8еаспЬе8 ш ргогосо1 8) !пчо1чея гЬе иае оГ а ц!усего! аргер цга8!епг ш р1асе оу йе гтео СаС1 сепгг!Еицаг!оп гипа ('гтапс!е апис!е ес а1. 1979). А11ЬоицЬ йе иае оЕ 81усего! цгас!!епга го рипуу ЪасгепорЬаце )с !а а с!и!с)сег ргосес!иге, Ь с1оеа пог у)е!д ЬассепорЬаце оК ЬгцЬ рипгу апс! аЬои18 по! Ъе иаес1 го ргераге агогаце а!ос)са. ТЬ!а ргогосо1 !а аи!гаЬ!е Еог ргераппц ЬасгегюрЬаце рагггс1ея йас тг!)) у!е!8 РЬ)А со Ье иаес) !ог аиЪс1оп!пц, Еог ша)с!пц ЪасгегюрЬаце атос)са, ог !ог ргерагшц ЬасгепорЬаце л агта.
МАТЕК!Асй Войег5 апг! Бо!66оп5 Р!еаае аее Аррепг))х ! 1ог согпропеп!а о1 а!ос)с ао1ипопа, Ьийегь, апг) геацеппс Р!1и!е а!ос1с ао1и!!опа 1о !Ье арргорпа1е сопсеп!гапопа. ЕР1А 10.5 М, рН 8.0) С)усего1 157а апс1 40;4 г)г) 1п 5Л4 584 Еп2угпе8 апг! Войегк Рапсгеапс Р1Чаае 1 Л тц)т1) Рапсгеа6с Рсс)аде 1п ТЕ 11 тфп1, рН 7.6) Сеп$г!йее8 апг! Ко1огь Вес)стап 5Иг41 ог 5Ис28 гогог ог ес)ива)епг, ьигЬ с1еаг сепгпгице гиЬеа 1е.ц., Весктап Е)11га-С1еаг ГиЬеа) т1ес$ог8 апг! Васют!а! Яга!п5 5иарепсооп о1 ЬасгепорЬаце К раг6с1еа Ргераге8 аа 8еасг!Ьед !и Ргогосо1 6 оЕ г!Ва скаргег.
2.52 Рго1осо! 11 Ех1гасиоп ог Вас1епорЬаце Х Р!ЧА 'ггогп магде-ьса!е Си!аггея Выпь Рго1е~паье К апд 5Еб а ЫА ь вввт сбогата уком саксе-вслсе ран лклтюсев ое влстевюрнлое Х Ъу йаеас)па сЬе у)га1 соас ргосе!па ссс17Ь а росеегЬс! Ргосеаае епсЬ аа ргосешаае К, 701!осеес1 Ъу ехсгас6оп ъчсЬ РЬепоЬсЫого1опп. ТЬ)а ргосес1пге а!ао шау Ъе ас1арСес! 1ог пае ичСЬ япа1!ег (50 — 100 пс1) ргерага6опа, аь поСес1 сп сЬе ргососо1.
Ргососо! 12 с1еасг1Ьеа ап а!сегпа6уе, пюге гарп1 шесЬод со 1ао1асе ч)га! 1)1 )А Егош Ьассег)орЬаае раг6с1еа рппйес1 Ьу 1аорусп1с сепсг16сца6оп сЬгопаЬ СкС! ага61епса. 'сссЬеп рпг17у)па ЪассепорЬаце Х Е7Ь)А, 1сеер ш ш1пд сЬас уесСог апд гесогпЬспапС аепоспеа гапае Ьессчееп 43 ЬЬ апс1 53 !сЪ ш !епасЬ апс1 аге сЬпя ьпасер6Ые со аЬеаг1па. ТаЬе саге со аъо1с) сгеа6па аЬеаг1па Еогсек сараЫе оЕ Ьгеа!с!па сЬе !3Ь)А сЬлг1па ехсгассюп (р1еаае аее сЬе 1пуогшаСюп рапе1 оп М!М!М!2!ЬСС 77АМАСЕ тО САВСЕ ОЬСА МОСЕСС)ЕЕ5), МАТЕИАьй СА!)т!ОНс Р1еаае аее Аррепс!!х 72 Сог арргориаСе Ьапс!!!пе о1 та!ела!а таг!сес1 се!СЬ <!>.
Вийегв апг! йо!и6опв Р!еаае аее Аррепб!х 7 !ог соспропепСа от аСосЬ ао!01!опа, Ьпйега, апс7 геавепСа. О!!осе асосЬ ао!пс!опа со све арргорпасе сопсепсгапопа. СЫоготогт <!> Е))а)уяа Ьиууег 70 гпм Ыас) 50 тм Тпа-С) !рН 8.0) 70лмМ8С), Тсчо сопсаспеге от еВа1уяь Ъоттег аге геоцсгес1, еасЬ сопсаспспВ 1000 богем сЬе ео!шпе от све ЬассеггорЬаае со!обоп, бсосе ас гоопс сеспрегасше цога пеессесс. ЕРТА ГО 5 м, рН 8.0) Егвапо) РЬепо7 < ! > РЬепо)ссЬ)огоуогт !7с7, ч)у) <!> 57)5 7707ге и')е) 5ос)шт асегаге ТЗ М, рН у.
0) ТЕ !рН 7.б апг) рН 8.0) 2.56 Ргогосо! ! 1| Вхггасбоп оу Васгег1орПаВе Х О)ъ!А ггот Ьа |ее ьса!е Си!|иге| Юып~ Ргогетаье К апг! Я!5 2 57 Епкупъеь апг! Впггегь Ргогетаье К Р!еаье ьее гЬе еп|гу оп Рго|е|паье К ю Арреойх 4. ВеялсВоп елс1опис)еаьеь СЕ!5 Аеагоье Ве) 10. 7;4) саьг т 0.5х ТВР, солга1п)лВ 0.5 РВ)т! егП|йит Ьгот)де < ! > Сеп$г!гпдеь апг! Воппгь 5огыа11 55-34 гогог ог еди)ыа1епг йреси! Ес!и!рпъеп1 ВогоыВсаге Раьгеиг р1регге гьеа!ес0 ог 5ПерПегс1'ь сгоо!с О|а)уяь ГиЬ)пВ, Ьо11ег! Рог ргерага6оп ог" йа!уяыиЬ|п8 гог ые ъе!|Ь О!ъ!А, р!еаье ьее Аррепйх 8. Яаеег ЬаГП ргеье| Го 56 С Чес1ог5 апс! Васгег|а! Яга!пь Васге|1орПаВе Х раппс1еып СьС1 ьиьрепиоп Риг!1у аы)еьсг!Ье|! |и Рго|осо! 8, 9, ог ! 0 о! |!Вь сЬар|ег. МЕТНО0 01а!уь!5 ог Вас1ег!ор!ъаре 508репь|пп 1.
Тгапыег РЬе ргерагес) Ъас!ег)орЬаае ьиьрепяоп !о а ьес6оп ог" йа1уяь !иЪ)па ьеа1ег! аг опе ел|1 ъъпгЬ а )иъо! ог а р1аьпс с1оьиге. С! оье гЬе огЬег епд ог" гЬе йа1уяь гиЬе. Р1асе ЪЬе ьеа1еъ! гиЬе 1п а йаьЬ сопса)п)па а !000-го!6 чо1шпе ехсеьь ог йа!уяь Ъийег ап|1 а таепег)с ь6г Ьаг. Иа!ухе РЬе Ъасгег)орЬаае ьиьрепяоп гог ! Ьоиг аг гоот гетрегагиге ъч)гЬ 8!лье ьг)гг)па. ТЬе ршроье ог |А| ыер Ь го ге|!осе |Ье сопсеп|га|юп ог" С|С! |и |Ье ргерага|юп. Веао06|! 5сЬ!!егеп рапегпь сацье|! Ьу |Ье гарЫ еьсаре ог сеяюп 'юпь |го|и |Ье йа!у|ЫоЬе ъч!!! арреаг ъеЬеп |Ье йа!уяь ьас !ь «)ип!ъе|! !п|о |Ье Ьцпег, 2.
Тгапыег |Ье с)1а1уяь гиЬе го а !геьЬ Ваь1| ог" Ьийег ап|1 йа1уке гЬе Ъасгег)орЬаае ьиьрепь!оп !ог ап аг)д16опа! Ьош. 3. Тгапьгег гЬе Ъасгег)орЬаае ьиьрепяоп 1пго а ро!ургору1епе сепгг)уице гиЬе. ТЬе |оЬе ьЬоо!д по| Ье пюге гЬап опе-|Ь!гг! 6|11. 4. То ГЬе йа!угед ЪасгепорЬаце ьиьрепяоп, а|Ы 0.5 Ь! Е!хТА (рН 8.0) Го а 6па1 сопсепггапоп о! 20 п|М. Ех$гас1|оп 01 Вас!ег!ор!ъаде Раг6с!е5 5. То гЬе ьиьрепяоп, аИ ргогешаье К го а 6па1 сопсепгга6оп ог' 50 )гцйп1. 2.58 СЬаргег е5 ВасгепорЬауе ). апс).Ъ | есгоп 6. АсЫ 5Р5 ло а Епа1 сопсеплга6оп ол 0.5%, апс) ппх йе во1шюп Ъу депл1у 1пчегг!па йе гцЬе вечега! Л!шев. ТЬе во!цлюп ъв!!! сЬапае гарЫ!у !и арреагапсе Копл а ЫювЬ вцврепяоп оу Ьасгег!орЬаае рагс|- с!ев го а с!еаг ю!цгюп сопла!пюд ига! РЬЛА апс! гЬе ргоацсц ол рголео!ув!в о! гЬе в !гв! соас ргосе!пв.
7. 1псцЬале йе с)1аев6оп пцхлцге гог 1 Ьоцг ал 56"С апс! |Ьеп соо! |Ье ппхгцге со гоопл гетрегалцге. 8. Ас)6 ап е9ца1 чо1шпе оу е9ц!1!Ьгалес! рЬепо1 ло йе с)!аев6оп ппх|цге, апс) пцх гЬе огаап!с апс! а9цеоцв рЬавев Ъу депл1у !пчегл!пК |Ье шЬе вечега1 |ппев цп61 а сошр1еге ешц1е4оп Ьав !оппей 9. 5ерагале |Ье рЬавев Ьу сеплпуцаабоп а! 3000д (5000 грш лп а 5огчаП 55-34 го|ог) !ог 5 пцпцгев ас гоолп легпрега|цге. Рве а вч!с!е-Ьоге р!репе со лгапвгег |Ье ас)цепов рЬаве ло а с!еап ПлЬе (р!еаве вее Йе !пгоппаг!оп рапе1 оп М!!в!!М!2!ЫС РАМАСЕ ТО ИКСЕ РЫА МОЕЕСРЕЕ5). 10. Ехггасл йе асрлеоцв рЬаве опсе лч!ГЬ а 1:1 ш!хлцге ол е90!11Ъгагес! рЬепо1 апс! сЫогоуопп.
в-ОК 5МАЕЕЕК-5САЕЕ ОЕЛАХТ!Т!Е5 (ВАСТЕКЮРНАСЕ ЕКОМ 50- ТО 100-МЕ СРЕТЛЛКЕ5) а. Кесочег йе ЬасгепорЬаВе РХА Ъу влапс!агс! ейапо1 ргеслрЬа6оп. Ь. 5логе йе во!ц6оп лог 30 пцпц|ев а! гоош сешрегалцге. ТЬе Ъаслег!орЬаВе Х Р|4А сап овца!!у Ье веео ав а лЬгеас)!!)се ргес!рЬале айег ас!4!л!оп оу елЬаоо|, вчЫсЬ сап Ъе р!цс!сес! Усово гЬе во!цлюп оп гЬе оп!в|с!е ог а веа!ес! Кр ог" а Ьогоя!лсале рамецг рлреце ог 56ерЬегсрв сгоо!с.
с. Кес)!вво1че йе РЫА ш ап арргорг!а|е чо1шпе оу ТЕ |рН 7.6), апс! ргосеес1 со 5лер 14. гсегтлоча! ог СВС! Тгапвуег |Ье а9цеоцв рЬаве ло а с!!а1ув!в вас. Р!а!ухе Йе ргерага6оп ог" Ьаслег!орЬаае Р!в)А очегп!аЬ! аг 4'С ааа!пв! йгее сЬапВев оу а !000-То!6 чо!шпе ау ТЕ |рН 8.0). Меавцге йе аЬвогЬапсе ол' йе во106оп аг 260 ппл апс1 са1сц!але йе сопсеплга6оп ог' |Ье РЫА.
! ОР = 50 00!го! о!с)ооЫе-влгапслес! РЬЛА. А в!па!е рагцс!е о!Ьассег!орЬаее сопла!пв -5 х |О " лвв !ла ог" РЬЛА. ТЬе у!еЬ4 ог" Ьассег!орЬаЕе РХА овца!!у гапаев !сосо 500 !ла го вечега! пьВ рег !Ьег, аерепсВпд оп йе цгег ог" лЬе Ьаслег!орЬаЕе !и лЬе !увел! со!логе. СЬес1с |Ье !пгеаг!лу ол Йе Р!в)А Ьу апа1ух!пВ а1нрло|в |05 )ла) |Ьа! аге цпс)|цевлес) ог Ьаче Ъееп с1еачес1 Ьу арргорпаге гевгг!сбоп епкуше(в). Апа1ухе гЬе Ров Ьу е!еслгорЬогев!в лЬгоцКЬ а 0.7% аВагове ае1, цв!па шаг!сегв ог" ап арргорпале в!ке.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
