Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 64
Текст из файла (страница 64)
ТЬе пшпЬег аид у|е|д оЕ (Пеле япайег Егайшеисл лйои)д Ье ехапииед сагеупйу со еилиге йас по рагба! гййелсюп ргодись аге ргелеис. РппЕу 1Ье 0ХА Ъу ехггас(ш8 Пч|се ичй рЬепойсЫогоЕоггп апс1 опсе ичй сЫого(опп. Кесочег сЬе 0ХА Ъу асапдагд есЬапо1 ргес!р!гас|оп.
ТЬе с)май(у о( йе | зЬгагу апд сЬе е(Езс)еису о( с|ой п8 Сагйе( 0Ь(Аа дереида ои 1Ье е((ес6непеаа о( д)8ея 1юп ичй ген(г|сС)ои еихугиеа |и 5сера 5 аид 7. |с Ь йегесоге зчоиЬ (ичеас)п8 гюгие ейогс со гиа|се апге 1Ьа1 д(8еас)оп Ьаа |лееи соизр|е1е, ТЬе е(Езс(еису о( д(8еас)оп саи Ье гиоийогес| |и ъечега! иауя ТЬе Ьеас о( 1Ьеае (ичо(чу аеас)и8 ор а аеиеа о( Сеас геасбоиа (5сер 10 Ье1озч) со согираге йе е(йсзепсу о( рас|са8)и8 д(8еасед аис| оид(8еасед чессог 0ХАа, Ье(оге аид айег 68абои, |( сЬе иишЬег о( иоигесоизЫпап( Ьассег)орЬабеа ь ииассерсаЫу Ь~ПЬ (> З О р(сби8 о( деачед чессог 0Ь(А), йеи йе д(8еас(ои аид аиа|уа|а аЬои)д Ье гереасес|.
А|1егиабче|у, йе ЬюсЬегика| гие(Ьода оосйиед Ье)озч саи Ье иаед со гпеааоге сЬе е(йс)епсу о( д)8еа((ои. Ноччечег, ЕЬеае ялггойа1е аааауа аге (ела лаз|а(ассогу Ьесаоае йеу до по1 д)гесс(у гиеасюге йе аЬ| Псу о( йе 0Ь(А ргерагабои со релЕогиз ач а чессос ° А агиаб Егассюи оНЬе ргосйлс| оНЬе й гас д)8еа((ои саи Ье еид-|аЬеЫ (р(еаае аее СЬар1ег О, Ргососо| 10 ог 11); йе гасйо|аЬе! саи сЬеи Ье иаед 1о гиопйог д(8еас)оп Ьу бзе аесоид геа(пес)ои еилуизе. |Е СЫа гпесЬод (ылаед, П 'ь (изрогсаи1 со ййасе йе соЬеяче сеги|гп! о( сЬе чессог 0)4А Ье(оге сййеябоп ичй сЬе Езгас геасг|сс(ои еихуше (р(еаае аее Ргососо! 15).
ТЫа 68ас)оп ргечегыисогрогасюи о( я8- ' и)Езсаис агиоииЬ о( гасйо|аЬе! зи1о 1Ье соЬеа)че сегичи|. Айег еид-|аЬейи8, аг 8 а агиай с!паис|(у о( 1Ье гад|пасс(че 0|чА (О.ОЗ-0.1 )л8) 1о йе Ьийс о( 1Ье чессог ргерагабои. 038еябои ъи1Ь йе аесопд геяисбоп еигупзе аЬои!д геао(с |и сулаийа1гче лпонегпеи1 о( йе |аЬе3 Егоиз йе |агйе яобег Егабгиеис аид агша |иго 1Ье аизай ро|ус|оп|и8 а)се; йь иючеизеис саи Ье геасй|у гиоийогед Ьу Пе| е|ессгорЬогеаса аид аосогагйойгарЬу ог рЬгьрЬог(ша8)и8. ° РСПл саи Ье аес ир ояи8 аеса о( ргаиега сЬа1 йе со йе (е(с аис| г(8Ь( о( йе саг8ес геасг|сс)ои а(сел (р(еаае аее СЬар1ег 8, Рго1осо! з ).
С|еача8е о( йе геасг|сс(ои а)сеа зчй( ей и диасе (ог 8геас(у гедосе) 1Ье РСК ргодисЬ. То оЬ1а|и аи еас)спасе о( йе е(йс)еису о( с)еачабе, П ылаоайу песеааагу 1о сопзраге СЬе агиоогп о( агирййег3 ргос|ысЬ Пепегазе|3 |п а вег)еа о( о( иид)8еасед чессог 0)4А аид д)8еасед чессог 0счА. Ргогого! 14: Ргерагаг!оп оЕВаггег!орЬа8е Х ОЕ4А С!еачег( гч)гЬ Тсчо Кеггг(гг(оп Епхугпег 2.67 7. ссес((хао!че СЬе Е)ХА !и ТЕ (РН 8.0) аг а сопсепСгабоп оЕ 250 Сс8(ш!. АсЫ йе арргорПаге 10х геасПсПоп ЬиЕЕег апс! с!!аеас йе ЕгХА сч(сЬ сЬе хесопс( геасПссюп епхуше.
()ае а ЕоигЕо18 ехсеаа оЕ епхуше апс( (пспЬасе сЬе геасПоп Еог 4 Ьопгы 8. РпНЕу сЬе Е)ХА Ъу ехсгасс(п8 сччке ичсЬ РЬепоЬсЫогоЕогш апс! опсе сч(сЬ сЫогоЕогш. Кесочег сЬе ЕЕХА Ьу асапс)агс( есЬапо1 ргес!РЬайоп. Я1огс Егааюепсс саггуспх сЬе ро!ус!оп!па Псевд сап Ье гепючег( Ьу ьоргорапо! ргес!риаиоп Ьу ьрЫ со!шпп сЬгопгасохгарЬу (Аррепйх 8). 9. Вес)!ххо!че СЬе суй !и ТЕ (РН 7.6) ас а сопсепсгас!оп оЕ 300 — 500 Сс8/ш!. 5соге ап а1н)пос (0.2 )с8) ас — 20"С. 10. То с(есегпппе сЬе еЕЕесс!чепеаа оЕ йе йцеьсюп ргосес(пге, вес пр сПа1 118асюп геасПопз ие4пц 0.2 Сс8 оЕ с1се чессог с(18еасес) МЕЬ оп1у сЬе Вгяс еплуше (йе а!н)пос вес ааЫе ас 5сер 4 аЪоче) апд 0.2 )с8 оЕ йе 6па1 ргерагасюп (5сер 9). Рас)са8е ес)шча!епс ашоппсх оЕ Е)ХА (0.1 )с8) 1госп еасЬ 118ас!оп ппхспге апс! йгасе йе шЕесПчпу оЕ сЬе геап!Ппц ЬассегюрЬа8е рагсЫ!еы а.
Ас!)иас йе чо!ишез оЕ йе ссчо РХА ао!ис(опя со 17 ф чч(сЬ Н,О. Ь. АсЫ со еасЬ аагпр!е 2 Сс! оЕ !Ох 1!цасюп ЬпЕЕег апс1, ЕЕпесеааагу, 1 р1 оЕ 10 шм АТР. Опш АТР !Е цыпа а сопппегсса! !!аагс Ьассег сЬас сои!а!пи АТР. с. Кешоче !О-Сс! а!!с!иосх оЕ еасЬ оЕ йе пнхспгеа ргерагес1 сп 5сер Ь апс( а!иге сЬе а1)с!писа оп ке. й АсЫ 0.2 — 0.5 чСге(аа ип(сх оЕЬассеПорЬа8е Т4 Е)МА 1(гааге со йе гешашс)ег оЕйе шсхсигеа (5сер Ь) апг) ЕпсиЬасе сЬе геассюпа Еог 2 Ьопга ас 16"С.
е. (Ле а сошшегс!а! ЬассейорЬаце ). Рас)са8!п8 геасйоп (р!еаае аее сЬе !пЕогпаПоп рапе1 оп ПЧ чстКО РАПСА! 4С) со рас)са8е 0.1 Сс8 оЕ сЬе 1!8асес( апс1 пп118асег) хашр1еа апс1 0.1 Сс8 оЕ сЬе ппй8ехсес1 чессог Е)ХА Сгопс 5сер 2. Е)есегш(пе йе Шег (РЕи/ш1) оЕ еасЬ рас)са8ег( геассюп аа с)еаег!Ьес! ш Ргососо1 1. ТЬе Ьас!сагоапг( оЕ р!а9 пей оЬса!пе4 айег Ьеачаце оЕ Ьассег!ор!саче Х чессогь ас а геыгкиоп ысе Ь ьошешпеь апагсерсаЫу Ь!аЬ Ьесааье оЕ сЬе асгогпн!аиоп оЕ гпшапсь !и йе ог!а!па! роро!аПоп сЬас саппос Ье с!еачес( гч!сЬ сЬе геьсгкПоп епхугпе. ТЬЬ ргоЫегп сап Ъе гес!гке4 !Е сЬе ЬассегюрЬаае Х чессог и р!а9ае-рипйе4 Егециепс!у.
ТЬе рас(сааспа еЕПссепсу оЕ сЬе чеесог 4!цессес( и!сЬ оп!у опе епгугпе ьЬосг!с( !псгеаье Ьу пеаг1у йгее огс(егя оЕ таап!сог(е ассег !!цас!оп. ТЬе рас(саа!па еЕПйепсу оЕ сЬе !саасед аатр!е ьЬоа!4 Ъе -спою оЕ сЬас оЕ ипй8еясес! чессог РХА, ТЬе ейксепсу оЕ рас(гааспц оЕ сЬе доиЫу с(саегсес( чессог яЬои!с( Ье ьчо со йгее огс(его оЕ пьаап!спс)е !еы йап сЬас оЕ сЬе чессог ЭХА йцеьсе4 МЕЬ оп!у опе гезспеиоп епхуюе.
Рго1осо! 15 А!1а! ~пе Рпоьрйа1аье Тгеа1гпеп1 о1 Вас1епорЬаце Х ~/ес1ог 0МА емочАЕ от тне 5 -рно5рнАтт охот)р5 таом тне 1ттттаттАЕ теам1тт! оЕЬастепорЬа8е ). атша сап еууесттче(у ртечспт те1(-118атюп апт) ге|1псе |Ье Ъас)с8гоппт) оу попгесоп|Ъ|пап| Ъас|егюрЬа8ея ТЬ)х шетЬот) |а пает! |о тпрргеах |Ье Ъас)|8гопп|1 оу попгесошЬшаптт ччЬеп паш8 штегт!оп честоть йат сопта!и а яп81е яте Тот с1оп(п8 (е.8., ).8110, Х8т! 1, апт( ).Оттр8) ог |чЬеп пяп8 ап |пхегтюп честог тч)тЬ а ро!ус!оп!08 яте (е.8., ) 8118 — 23 апт! ).КАР) апт! сш6п8 тч!1Ь а яп8)е ептутпе. ТЬе ргосет!пге а!то |а еууест(че |чЬеп 118атюп то а ттп(уег Ега8шепт саппот Ье тпрргетае6 Ъу РЬуяса1 ргосет!пгет (р1еате тее тЬ!т рготосо! апт! Рготосо15 13 апс1 14).!т 15 чету ппрогтапт |Ьат |Ье соЬеяче (сот) тепшш о( йе чессог Ье геаппеа1ет( апт! 1!8атет( то8е|Ьег Ье(оте тгеатшепт ъч)тЬ аП|а1)пе рЬохрЬатате.
()п!еах йе сот теппш( аге рготесте|1 1п |Ьга |чау, |Ье аЪ|16у оЕ |Ье чешот атшз то Еопп сопсатешегв чч)тЬ таг8ет Е))х)Ах ч611 Ье цгеат!у гет)псе|1 ог е1|пппате|1, чч!|Ь т!)аахтгоцт ейестх оп |Ье еубтс)епсу оГрас)са8!08. МАТЕК1А1.$ СА7)Т101|1: Р!еаае аее Аррепт)!х 72 1от арргорг1а!е Ьапт)1108 о1 ша!ег)а!а шаг1сет) тч!1Ь <!>. Вопет5 аттт! Ьо!66о|75 Р!еате тее Аррепб)х 7 Еог сошропеп15 о15!ос)т ао!и6опя ЬоНегт, апт) геа8епоп 01!и!е а!ос(т 50106опт !о |Ье арргорг!ате сопсептга6опя 7. Аппеа11п5 Ьиуует 100 шм Тпт-С! (рН 7.6) 10 м М8С), АТР (70 тпм) Опш АТР (тото 5|ер 2 11 |Ье 1|8а6оп Ъайет сопта|от АТР. СЬ)отоуотт <!> ЕОТА (0.5 м, РН 8.0) Ейапо1 РЬепо/:сЬ)отоуоттп (7:7, ч)ч) <1> 5О5 (70% тч)ч) 5от)1ит асетате (3 ы, РН 5.2 апд рН 7.0) 1| Ь опрот|ап| |о оте а тойшп асс|а|с то!шюп еош!1Ь|ате|! |о РН 7.0 а| 5|ер а |и й|т ртососо1, та|Ьет |Ьап |Ье пюте сопппоп рН 5.5 то1оооп.
ЕРТА, тчЫсЬ ьт же|1 |о |пасоча|е |Ье теяпс|юп ептутпе айет т)18еттюп, ртес(раатет Оо|п |о1шюп а| рН 5.5 тчЬеп ртетеп| а| сопсеп|та|юпт 1п схсетт о(5 — 10 |пм. ТЕ (рН 7.6 апс1 рН 8.0) Тт15-С! 170 тМ, рН 8.3) 2.68 Ргогосо!!5: АПса!Еие РЬоярЬасаяе Тгеасгиеис о~Бассег(орЬаПе 7. Сгессог РсчА 2.69 Епкуспе5 апс! ВоЕЕег5 Вастег(орЬаВе Т4 РА(А ПВаяе Са!Е сисеяпиа1 айа(те рЬоярЬасаяе Са1Е |псеяппа| аПсаПпе РЬоярЬасаяе (С1Р> шау Ье ригсЬаяес1 ая ап аоиеоия яо1ипоп; -0.01 оп|с о( С1Р чч|П гешоче сЬе сеппша! РЬоярЬасея Егош ! Рпю1е оЕ 5' сегпиш о( ЬассепорЬа8е > РС4А (! Ршо1е оЕ 5' Сепспп| о(а 40-1сЪ!шеаг РС(А ся 16 и8>. АПсаПпе РЬоярЬасаяе епгугпея Егош Ьассепа! ог сгиясасеап яоигсея сап Ье яиЬяс(ситес( Еог С1Р. Рог а с(сясияя(оп оп сЬе ге1асгче шег(ся о( сЬеяе епгугпея, р!еаяе яее СЬарсег 9, Ргососо! ! 3.
70х РерЬоярЬогу(акоп ЬиЕЕег 100 гпм Тпя-С! (РН 8.31 ! 0 гпм 2пС1 |0 пм мПС|, РгоСегпаяе К Р!саяе яее |Ье епсгу оп Ргосеспаяе К сп Аррепсах 4. Кеяпспоп епс(опис(еаяея (Чос!е!с Асп!5 апс! О1!Попос1ео1!е!е5 Вастег(орЬаВе К РА|А Ргерагес( ая с(еясг(Ьес> ш Ргососо! 1! ог 12 о( сЬЬ сЬарсег. ьрес!а! Ес!о!ргпеп$ РоВ Сое-па(1 с1>ррегя ог УУ(с(е-Ьоге ргреое Пря Яатег ЬасЬя ргеяет Со 76 С, 42оС, 56оС, апс( 6ВоС Ас!Йбопа! Веакеп75 5сер 73 оЕ СЬ>я ргососо! гес|и(гея сЬе геаВептя 1(ятес( гл Рготосо(я 7 апс( 74 оЕ сгпя сЬартег. Уес1ог5 апс! Вас1ег!а! Яга!п5 ВастеггорЬаВе Х рас(саВ!иВ гп(хсигея Рас(са8!п8 пихспгея гпау Ье ригсЬаяес( |и |Пс Еопп Егопс апу оуяечсга| сопппегсса! гпапи(ассигегя (е.8., 5сгаса8епе, Ргоше8а, апс( 1.сЕе ТесЬпосо8!ея>.
Рог 1с8аПоп сопйс(опя, р!еаяе яее сЬе шгоппасюп рапе1 оп ПЯС Ч!ТКО РАСКАС! йС. МЕТНОО 1. Р|яяо!че 50-60 С>П оЕ РХА оЕ ЕЬе арргорпасе ЪассепорЬаВе Х чессот |п а Впа! чо!игпе оЕ 150 С>1 оЕ >с аппеа1|пП Ъссйег. 1псиЬасе ЕЬе РХА Еог 1 Ьоиг ас 42'С со а11осч сЬе епс(я оЕ сЬе гага1 РЬ(А сопташ|пц СЬе соя ятея Со аппеа1. 2. АсЫ 20 Сс! оЕ 10х!|Пахе ЪиЕЕег, 20 Сс! оЕ 10 шМ АТР (>Е песеяяагуЬ апс! 0.2 — 05 'яСге|яя ипй оЕ ЪассегюрЬаце Т4 РХА ПВаяе(>сП оЕ РХА. 1псиЬасе сЬе геассюп !ог 1-2 Ьоигя ас 16"С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
