Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 67
Текст из файла (страница 67)
АТсег ргерагас!че ййеабоп, сЬе ргойкп оу 1Ье !ага-аса!е рагс!а! д!Веас!оп аге Тгасс!опасед Ьу аистихе Вгад!епс сепспйг5адоп, апд сЬе Тга5шепса оу 1Ье деягед а!хе аге гесочегед. ! СЕОМ!МС 5РЕС!Е!С ЕССАСМЕМТ5 ОЕ СЕМОМ!С 0МА 1и гюгие саьея сЬе а!хе о! сйе сагдес 0МА 1гайгиеис !и а Веиоги!с 0МА ьагир1е 'ь )сипаи. Еог ехагир!е, а геасг!с6ои Тгайгиеиг Ы а йиои и яхе гиау Ье гег)и! ед Со й!! а Вар !и а с!оиес1 ген!ои, 1ог соиЯгосйид а йиосЬоог чессог, ог 1ог 'ьо!айий а цгоаа!у геапаицед а!!е!е о1 а !агнес цеие. !и свею ясиапоия еиг!сЫиц сйе роро!а1юи ос' цеиоги!с 0МА сог 1гайгиеиса !и сйе деа!гед а!хе гапке десгеачеа сЬе агиооис о1 асгееи!ид о1 гесогиЬ!иаип аид !исгеачеа сЬе сЬаисе о1 вю!або сЬе с1еягег1 с!оие. ТЬе ргососо! 1ог рагйа! рог!йсас!ои !а !деис!са! со сйас деасг!Ьед аЬоче ехсер1 СЬаг СЬе цеиопйс 0МА 'ь аоЬ)есС 1о согир!еге гййеиюи хч!СЬ СЬе геагг!сС!ои еисугпе !иьсеад о! а рагйа! д!Веас!ои, Ве1оге госгоае йгад!еис сгасйоиас!ои, сйе йцеьсед 0МА саи Ье ьоЬ)ассад со 5оиСЬеги Ыогйиц Я аи арргориаге ргоЬе ь ача!!аЫе) 1о еиаоге СЬаС СЬе д!Веаг !а сигор!еге.
1и адд!С!ои, !са ргоЬе 'ь ача!!аЫе, а 5оисйеги Ыос ос сйе айагоае Ве! оьед 1о аиа!ухе сгасйоиь 'ьо!асег! Тгоги све аосгоье цгасйеис (5сер 5) саи !деис!Су своае соиса!и!ив све ЫВЬезс соисеииа6ои о1 све сагйес сгайгиеис. ТЬегеайег, сйе роо!ег! 1гассюиа саи Ье д!а!ухед аиг! сйе 0МА гесочегес! Ьу яаидагд есйаио! ргес!Рйайои Ьесоге ййас!ои !исо аи арргориаге чесгог.
Ргососо118: РагНа! Е)!цезНоп о1 ЕиИагуоггс ОХА Еог ЕЕзе т Селит!с ЕГЬгагЕезг РгерагаНче ВеасНопз 2.! МАТЕК!АЕЬ САЕЕТ1ОЬС: Р1еазе зее Аррепйх 12 Еог арргорпасе Лапа!спц оЕ та1епа!з гпаг1сед ил1Ь <! >. Вийегц апе1 Ьо!и6опц Р1еазе зее Аррепб!х 7 Еог сопсропепсз оЕ зсос!с зо1пбопз, ЬиГГегз, ап8 геацепсз. О!1и1е зсосЬ зо1ибопз Ео ЬЬе арргорпасе сопсепсгаиопз. Аттопгит асеСасе Г70 М! ЕЕЛапо! и-Ьисапо! <! > РЛепо1:сЛ!огоуогт 77:7, чуч1 <1> 5оеВит асесасе ЕЗ м, РН 5.21 5исгозе Ве1-!оагВпц ЬиЕЕег Р!сазе зее ТаЫе 5-4 сп СЬарсег 5, Ргососос 1. ТЕ ГрН 8.01 Тпз-С1 770 тм, рН 8.01 Епкугпец апе$ ВиЕЕегц КезсгссЕЕоп епсЕопис!еазез ТЬе Ьезс гези1сз аге оЪсашес1 К йе загие ЬассЬ оЕ 10х Ьипег Ь изей ги ЬосЬ сЬе рс!ос геассюиз ап6 сЬе 1агце-зса1е геассюи.
Се15 Яцагозе де! Р!сазе зее гаер 2. Ацагозе Ве1 Г0лц'.4! сазс и 0,5х ТВЕ, сопга7псп8 0,5 Ссцут! есЛ!с7!игп ЬготЕЕЕе <1> Р!еазе зее Епер 7. Ацагозе Ве! Еог ри!зесЕ-ЕЕе!ЕЕ Ве! е!есггорЛогесиз Р1еазе зее цсер 12. Рог спЕоппа6ои оп ри!зев-Ве16 це! е!ессгорЬогеяя р!еазе зее СЬарсег 5. !91ис1е1с Ас!415 апд О1!еопис!еоЕЫец Сепотсс ОАсЯ, ЛЕВЛ то!еси!аг и еЕВЛЕ О!!Вотегз оЕ ЬассегЕорЛаце 2 ОсзЕА апсЕ р!азтсс75 Ссзе аз НМА з!ге зсапбагбз 6иппц це! е!ессгорЬогеяз. Р1еазе зее Аррепйх 6. СепЕг17иеец апд Ко$огц Вес!стал 5И728 го!ос ог есЕиЕча!епс >рес1а1 Е41и1ргпеп$ О!а!уз!з гиЬгпц, Ьос!есЕ рог ргерагасюп оЕ йа1уяз тЪспц Еог изе чбй РХА, р!сазе зее Арреийх 8. СгасЕГепс Ьас77опастц сЕеч!се ЕорСгопа8 Р!еаза зее 5сер 4.
ТЬезе дегбсез аге гасЬег Ьагц со соте Ьу, Ьис сЬеу цепега11у сап Ье Ьоггосчед Ьот аце6 ЬюсЬепизь. 1Е а!1 е1зе Гас!з, йе цга6!епь сап Ье Егассюпасес1 Ьу рипссипиц сЬе Ьоссопс оГ сЬе сеиспйце тЬе члсЬ а 21-цаице Ьуробегт!с пее6!е Гпо зупице Ьапе! гег!и!геа и 5исгозе ВгаеВепсз Ргераге ичо юсгозе ю1и6опз, опе сопсасшпц 1094 Езч1ч) зисгозе ап6 апосЬег сопсасшиц 4094 Гзч7ч) юсгозе т а ЬиГГег оЕ 1 м Хасс, 20 псм Тпз-С1 ГРН 8.01, ап6 5 тм ВОТА ГРН 8.0!, гаеп1пе сЬе ичо ю!и6опз Ъу 8!!гас!оп сЬгоицЬ 0.22-рт п!сгосеБи!озе 61сегз.ТЬе цгайепь аге ргерагед аз 6езсг!Ъеб !и упер 1. А1сегпабче!у, 1спеаг зисгозе цгайепь сап Ье Гогтеа Ьу ййияоп ГВгаИсе 1958!.
Мапу гпчез6цасогз ргеЕег со изе йь тесЬо6 счЬеп 1агце пшпЬегз оГ цга6!епсз аге гецшгей Роиг яеп!е зисгозе зо1ибопз аге гегси!ге6 1109о, 20"уо, 30чо, аи6 409о 1зч1ч! зисгозе1 1п 1 м 74аС1, 20 спм Тгь-С! (рН 8.01, апд 5 гпм ЕРТА ГРН 8.01. То Еопп а 38-гп1 цгайепс !и а Вес1ипап Яхг28 сепспЕице ыЬе !ог еци!ча!епсц 9.5 пг! оЕ 2.82 СЬаргег 2: Васгег(орЬа8е Х апг( Егг 'честогг еасЬ оЕ ЕЬе Еопг епсгоге ео!пОопг и гпссея1че!у 1ауегед оп гор оЕ еасЬ огЬег.
Мог! !пчегг!8агогг ргеЕег го р!асе тЬе 40% чистого сю!пВоп тп тЬе Ьоггогп оЕ гЬе гнЬе апг( гЬеп го очеаау сагегп11у ьпЬ гЬе гЬгее гешаш!п8 ао!пОопг ш огг(ег оЕ г!есгеаг!п8 ггепягу: 3096, 2096, апг) Впа!1у 1094 гпсгоге. Нотчечег, гЬе 8гайепь сап а1гю Ье Еогшегг Ьу р!асгп8 гЬе 1еагг г!еже гостье го!пгюп (10%) гп гЬе Ьоггопт оЕгЬе гпЬе апг! ппг!ег!аутах тч1ЕЬ ргохгея1че!у гпоге ггепае гпсгоге го1пгюпя А11отч гЬе яер 8гайепь го тгапгг ппйггпгЬег( Еог 2.5-3.0 Ьопгг ас гоопт гегпрегагпге, Р1асе еасЬ 8гаг!!епг гп а Ьай оЕ ке тчасег ш соо1 Еог 15 ппппгег ЪеЕоге сепгг1Епхагтоп. Ыатег ЬатЬ ргехет то 68 С МЕТНО0 Ргерагайоп оК 411е Сгаг11еп1 1.
Ргераге опе ог тоге 38-пт1 (10 — 40ой ччЧч) якгоае Вгайепь (и с1еаг 01тгасептпуи8е тиЪея 5тоге ЕЬе Вгайепь Еог 1 — 2 Ьоига ат 4'С ш а г)шет р!асе ип81 йеу аге пеес!ег) (Втер 5). Сопг!ппогь гпсготе г!епягу 8гайепгт аге Ьея шаг!е тп а 8гайепг-ша!с1пц ггеч1се г псЬ ат гЬоте ырр11ег! Ьу В!о-айаг! ог ТесЬтчаге. ЕасЬ Вгайепг гЛопИ га!ге 10 — 20 ппппгег го рош аг гоопт гептрегагпге шшц а 8гайепг гпа)гег.
ЕасЬ 8гайепг сап ассопитюг(аге 60 — 75 р8 оЕ йхеггег! Ъасгег1орЬаце х 135!А. 2. 5ет ир а аепеа оЕ й8еатюпя еасЬ сопсатпш8 100 )г8 оЕ Ь18Ь-то!еси1аг-тче(ВЬт Р!ч)А. а. ЕЛе тЬгее г(1ЕЕегепт сопсептгаВопа оЕ геатпст(оп епгутпе ЕЬат 51гасЫ1е ЕЬе ортииа1 сопсептгатюп с1етегпипес1и! тЬе р11от ехрегипепь (Рготосо1 17). Ь. 1псиЬате тЬе геастюпа Еог тЬе арргорпасе типе тч(тЬ йе геатпст(оп епхуте. с. Апа!ухе ап а1н)иот оЕ тЬе рагВа1!у й8еаГег! РЫА Ъу Ве! е1естгорЬогеяа то епапге йат йе й8еат(оп Ьаа бачит)сег) ассогйп8 то ргейсВоп.
(Тпт(1 йе геаи115 аге ачат1аЫе, а!иге йе гетпашс1ег оЕ тЬе аатпр1е ат О"С. 3. Сепг!у ехтгаст тЬе й8еатег1 РХА тчч(се чч(ЕЬ РЬепоЬсЫогоуопп. 4. Ресочег тЬе РЫА Ьу атапг!агг! Ргес)р(тат(оп тч(тЬ ейапо1 апс( йгьо!че и ти 200 р! оЕ ТЕ (рН 8.0). Ь!ке Ггас6опат1оп о1 ГНЧА 11тгощЬ йе СгайепФ 5. Неат йе РХА аатпр1е (100 )т8) Еог 10 гйпитеа ат 68'С, соо1 то 20'С, апг1 Вепт!у!ауег йе аагпр!е оп 1Ье тор оЕ тЬе Вгайет. Септпй8е тЬе Вгайепта ат 83,000д (25,000 три! (и а Вес!ипап ЯАт28 гогот) Еог 22 Ьопга ат 20'С.
Сепгагоцагюп ь сагпеа ош ат гоопг гегпрегашге гагЬег ГЬап 4'С го гпрргея гпгга- апгт гпгегпю!есп1аг аппеа!ш8 оЕ соЬеяче септппт. 6. ~чае а 21-Ванде пеег)!е ог а 8гайепт Егастюпабоп г)еч(се то рипстше тЬе Ьогтот оЕ йе шЬе апг1 со1!ест 350-)т! ЕгасВопя 7. Мтх 10 )т! оуечегу ойег Егастюп тч(тЬ 10 р1 оЕ Н,О апг1 5 р1 оЕ ятсгоае Ве1-1оайи8 Ьийег. Апа1ухе йе яхе оЕ йе РХА ш еасЬ Егасооп Ьу е!естгорЬогеяа тЬгоиВЬ а 0.6ого а8агоае Ве1, ияп8 о!!Воптега оЕ р1аяиЫ РЫА ог ойег Ь18Ь-то!оси!аг-чче(ВЬт агапе!агсЬ аа тиаг1сегя Аг!)иат йе якгоае апг! аа11 сопсептгатюпа оЕ йе тат(сета то соггеаропг) то ЕЬоае оЕ тЬе аатр1ея 8.
Ро!1отчш8 е1естгорЬогеяя роо1 йе Вгайепт !гасоопа сопташш8 РХА Ега8тепта оЕ ЕЬе г(еягег! же (е.8., 35-45 1сЬ Еог сопатплсооп оЕ 11Ъгапеа ш соатн)а апг! 20-25 1сЬ Еог сопатгисНоп оЕ 11Ьгапеа 1п ЬассепорЬа8е Х честога). Рго1осо! 19 Ыца6оп о1 Вас1епорЬаде Х Аггпь 1о Егацгпепй ог Гогефп Сепот~с РМА счо !мвовтлс~т влвлмвтввв мьвт вв соняюввю ччнв!ч нслтьс ЬаесепорЬа8е ). агша со аевшепсв ог" гоге!Пи РМА: сЬе гпо1аг тасю ог" агшв со росепспП !паете апд йе сопсепсгас[оп ог" еасЬ РХА арес[ев 1и сЬе геас6оп инхшге. Орснпшп ча!неа гог Ъой ог" сЬеае рагашесега сап Ье еа6- сиасес1 ггош сЬеогеска1 сопядегас)опа [Рн8а!гху)с ес а1. 1975). Ву песея[су, Ьоъчечег, якЬ са1сн1асюпъ аяшпе сЬас аП сЬе РМА пю!есн1еа ш йе ППас[оп геае6оп аге реггесс.
Аа сЬЬ и!гчапа Ь гаге1у асса)пей П Ь а6ч[ааЫе со саггу опс рПос геасс)опа со сЬес)с сЬе еП)с[епсу ог еасЬ пеж ргерагасюп оЕ агпь ап6 росеппа1 !пасется ТуркаПу, спа1 ПВас!опа сопса[п -0.5-1.0 )г8 от Ьаесег)орЬа8е ). агиь апд ййегепс аиюнпь ог" Сиге)8п РМА. ТЬе ию!аг гасю ог агша со росепба1 !папесса ш йе сея ПВасюпа аЬон16 гаи8е ггош 1:4 со 8:1 [р!еаае аее ТаЫе 2-4) ап6 йе чо)шпе ог" сЬе ППас)оп пнхснге вЬон16 Ье аа япаП ав роя[Ые !10 )г! ог !еы). ТЬе агпонпь ог шаегса гесошшепс1ед си ТаЫе 2-4 Ьаче Ъееп са1сп)асе6 оп сЬе аааншрс[оп сЬас сЬе 1фасюп геас6опа сои!а[и 1 )г8 ог" ЬассегюрЬаце ) аппя 40 1сЬ си яхе. 1п сЬе ППа6оп геас6опа сопсашшц йе 1осчеас гесопнпепбе6 агпонпс ог' гоге!Пи РХА, йе ЬассепорЬа8е ) аппв ччП! Ье ргеаепс ш е[ПЬсЕо!6 шо1аг ехсеая ш пшсспгев сопса)и)п8 йе агеасеас аиюнпс ог" росеп6а1 !пвегс, йе 1паегс ОП! Ье ргеаепс ш ЕонгЕо!6 пю1аг ехсеяе 1с ь екпс)а! со а1ао шс!нбе ссчо еопсго!а сои!а)п)пц [1) Ьассег)орЬаае Х агиь Ьнс по 1паегс ап6 [2) шаегс Ьш по ЬасСегюрЬа8е ) апик Опсе аыешЫед, СЬе Пца6оп геасг[опа аге сьнаПу шснЪаСе6 гог 4 — 1б Ьонга ас 1б'С.
ТЬе апесеаа ог" сЬе ПВа6оп геас6опа сап Ъе еас)шасе6 Ьу е1ессгорЬоге6с апа1уяа ог" япаП а!и!нося пяп8 а 0.59о арагоне ае!. 1г" сЬе Пва6оп геассюпа Ьаче Ьееп анесеягн1, сЬеп а1шоас аП о1 йе РХА аЬоп16 Ъе ас!еавс ав !агае аа 1псасс Ьассег)орЬаае Х РХА. Нохечег, П ь 61йкн1с со )лосч счЬесЬег а !аг8е РМА арес[еа оп ап ацагоае це1 ь согпроае6 ог" сЬе Пеягеб чеесог-шаегс сошЬ1- пасюпз ог осЬег нпдеягаЫе сошЫпасюпа (е.а., [чессог]„, [шаегс[,). А Ъессег шесЬо6 ог')нба)пП СЬе анесеы ог" СЬе ПВагюп ь Со распахе а ргорог6оп ог" СЬе Пца6оп ргобпсга [1Π— 2590) спСо ЪассегюрЬа8е раг6с1еа сп ч!сто.
ТЬе ППа6оп геас6оп сопса)шпа сЬе орснпшп га6о ог" агша со шаегга аЬон16 у[е!6 аг!еааС 1Оа Со 10' гесошЫпапМ)г8 ог ЬаегегюрЬа8е л. Айег СЬе гаСю ог агшз со ньегс йас а)чеа сЬе 1агаеас пшпЬег ог гесошЫпапс ЬассепорЬа8е Ьаа Ьееп еасаЫьЬей а661- сюпа1 ППасюп апс1 рас[га81п8 геассюпа шау Ъе вес нр со Вепегасе а !сЬгагу ог с1опе6 гга8шепся ТЫв ргнпагу 1сЬгагу сап сЬеп Ье р1асе6 апд гкгеепед Ьу ЬуЪпйхасюп гПгесс1у Сог гесошЬшапс Ьассег)орЬацеа ог" шсегеас, ог сЬе ПЬгагу сап Ъе ашрППей сПчЫе6 1псо а1щнося ап6 яогей 2.84 Рго1осо! 21 Тгапйег о1 Вас1епорЬаце 0МА 1гот Р!ас~иеь 1о Ейегь д МЕТНОВ тО ВЕГНТЗГЧ ЛЕНГ3 3ЮЕАТЕ ВРЕСЗГЕС КЕСОМВЗГЕЛЕЕТЬ Егоги 1гЪгапев оЕЪасгег!орЬаце ).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
