Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 63
Текст из файла (страница 63)
5логе Йе в!ос!с оу Ьас!ег!орЬаКе Р!в)А а! 4 С. 12. 13. 11. Кесочег йе асрлеоцв рЬаве ав с1евспЬес| аЬоче |5гер 9), апс! гереа! Йе ехггасг!оп вч!гЬ ап есрла1 чо1шпе оу сЫогоуопп. Еог !агае-вса1е ргерагабопв, ргосеес1 |о 5лер 12. Рго1осо! 12 Ех1гасбоп ог Вас1епорйаде Х 0МА ггогп магде-ьса1е Си!Ыгеь Выпь ГоггпатМе окмлм!ое ме ве г!5ео !гевтеао ое 5О51ркоте!ееаве к (р!еаае аее Рго1осо! ! ! ) 1о гегпоче йе Ъас1ег1орЬаае соага Егот рцг!йес! Раг1!с!еа А!1ЬоццЬ пог аа еЕЕесг!че, йыпегЬос! !а аотеыЬа! с!и1сЬег 1о рег1опп йап йе ргесегппв гпейой Р!еаае аее йе !пбогтаг!оп рапе! оп М!Л!!М!Х!Л!С ОАМАСЕ ТО ЕАКСЕ ОЬ!А МОЕЕСЕЛ.Е5. МАТЕК!А15 САЕ!Т!О1х: Р!еаае аее Аррепс!!х 12 1ог арргорпа1е Ьапг!!!пе о! та1ег!а!а таг!сес! се!1Ь <! >.
Войегв апс! Бо!оЕ!опв Р!еаае аее Аррепс!!х 1 !ог согпропепга о! агосЬ ао!и1!опа, Ьи!Еега, апе! геаеепга. О!!и1е а!ос!с ьо!ипопа 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1гаг!опа. ЕОТА !0.5 м, рН 8.0) Ейа по! Еогтат!г!е, с!е!оп!тес! <! > ХаО !5 м! ТЕ !рН 8.0! Тг!а-С1 !2 м, рН 8.5! Епгугпев апе! ВоТТегв Вез!пспоп епс!опис1еааез Се!в Аеагоье ее! !0.7уе! саьГ !п 0.5х ТВЕ, сопеа!и!пе 0.5 Щ1т! еГЛ!с!!ит ЛготЫе <! > Врес!а! Ег!о! ргпеп$ Вогоа!1!саге Рая1еиг р!репе !аеа!ес!! ог 5ЛерЛегс!'ь сгоо!с ЧесЕогв апе! ВасЕепа! Яга!пв Вас!ее!орЛаВе Е рагпс1еь рог1Егаа с!еаспЬес! !и Ргогосо! 9 ог !О оггЬ!а сваргег. 2.59 2.62 СЬаргег 2: ВасгеггорЬаее )с апг! Вь 1 есгогь 5осйигп асесасе ГЗ М, рН 7.0! 1г Ь ииропапг го иье а ьо!сиюп оЕ ьойипа асегаге ьо1сиюп йаг Ьаь Ъееп ег!и111Ъгагег1 го РН 7.0 гагЬег гЬап йе гиоге сопппоп РН 5.3. ЕРТА, нгЬ1сЬ 1ь иьег1 го гегпоне йна!епг сагюпь Егогп гЬе геьгпсгюп ЪиЕЕег айег й8еьбои, ргес1Р1гагеь Егогп ьо!ибоп аг РН 5.3 юЬеп ргеьепс аг сопсепсгагюпь 1и ехсеьь оЕ 5-!0 гим, 5исгоье Ве)-!оасбпВ ЬиЕЕег Р!еаье аее ТаЫе 5-4 1и СЬаргег 5, Ргогоса! 1.
ТЕ ЕрН 7. б апс! рН 8.0) Епкугпеб апг! Войегб ВассепорЬаВе Т4 РЫА !!Вахе Веьгг!с!!оп епсЕопис!еаьеь нчЕЕЬ арргорпаге ЬиЕЕегь Се!5 АВагоье Ве! ВЬ 7;4) саьг т 0.5х ТВЕ, сои!а!и!пВ 0.5 щ/т! егЬ!гЕЕит Ьгот!г)е <1> )х)пс1е!с Ас!ЕЬ апг! О1!еоппс!ео64!е5 ВассепорЬаВе х РЫА Ргерагег! аь с1еьспЬе8 гп Ргогосо! 11 ог 12 оЕ ггаь сЬаргег. прес!а! Ег!шргпеп1 Игасег Ьагб ргеьеГ Го 68'С АЕЫ!бопа! КеаеепВ 5гер 7 !рагс е) оЕ ЕЬЕь ргогосо! гес)и!геь ЕЬе геаВепгь !!ьгесЕ т Ргогосо! 7 оЕ ЕЬЕь сЬаргег. Месгогб апг! Вас$ег!а1 Яга!пб Вассег!орЬаВе Х рас)сацЕпВ т!хгигеь Рас1са81п8 пихгигеь гпау Ье ригсЬаьег1 гп а 1иг Еогги !тоги апу о! ьенега1 согпгпегсга! гпапиЕасгигегь Ее.8., $ггагахепе, Ргогпеха, апгЕ Е1Ее ТесЬпо!о81еь). Р1еаье ьее ЕЬе !пЕоппаггоп рапе! оп !Х Ч!ТКО РАСКАС!НО.
МЕТНО0 1. М!х 25-50 1г8 оЕ Ьас!егюрЬа8е Х Р)х)А гн!1Ь ТЕ !рН 8.0) го 81че а Егпа1 чо1шпе оЕ 170 р1. 2. АсЫ 20 1г1 оЕ ! Ье арргорпаге 10х геьггк!юп епхугпе ЬОЕЕег. Кегпоче гого а1щпо!ь, еасЬ сопгагшп8 0.2 1г8 оЕ ипй8еоес1 ЬасьегюрЬа8е Х РХА. В!осе !Ье а1щиогь оЕ ппй8еоес$1>1хА оп ке. ТЬеье а1щиогь оЕ ипйцеьгед Рг14А ипИ Ъе иьегЕ аь сои!го!ь г1ипп8 гЬе ахагоье це! е1есггорЬогеяь !Егерь 4 апгЕ 7). 3. АсЫ а 1Ьгееуо18 ехсеьь (75 — 150 ип)гь) оЕ!Ье арргорпаге геьгпс!юп епкугпе апс) гпсиЬа!е !Ье й8еьпоп пнхгиге Еог 1 Ьопг а! ЕЬе Еегпрегасиге гесотгпепс)ед Ъу !Ье тапиуасьигег. Ргососо! 13: РгерагаВоп оЕ Вас!ее)орЬа8е Л РсчА С!еачегЕ счгсЬ а Вгп8!е Кеггигйоп Епхуте 2.63 Соо) йе геасс!ои со 0'С ои !се.
Решоче аиосЬег а1н!иос (0.2 Сс8).!исиЪасе сЬ!а а!н)иос апс) опе оЕ сЬе ссчо а!!с)иосх оЕ иий8еасес) РХА (5сер 2 аЬоче) Еог 10 пииисеа ас 68'С со г!)агирс йе соЬеяче Сегииш оЕСЬе ЬасСепорЬа8е РХА. АИ а яиаП асиоипг (1О Сс!) оЕаисгоае 8е1- 1оайи8 Ьийег аис1 !шшес)!асе!у !оас) ЕЬе катр!еа оисо ап 0.788 а8агоае 8е!. 1Е сЬе гессе!сг!оп епхуте е88еаиоп ь согпр1есе, сЬеп по РЬСА чч!11 т!8гасе ас сЬе рояиоп оЕ йе ппй8еасесс сопсго! ЬапсЬ. !пасеай сгчо ог гпоге ЕсгерепсС!п8 оп сЬе пшпЬег оЕ с!еача8е аиеа гп йе чессог) япаПег РЬСА Ега8тепга сч!!1 Ье аееп.
Сагеуп!1у ехапппе сЬе пшпЬег апгС у!е!0 оЕ йеае япа11ег Ега8тепса со епгпге сЬас по рагиа1 с08еаиоп ргосспсса аге ргеаепс. ТЬса яер ь пог аа еаау аа и аоипйа. ТЬе 1еус апгс п8Ы аппа оЕ ЬассепорЬа8е Л РХА саггу сотр1егпепсагу сеппгт 12 Ьааеа т 1еп8сЬ йас сап геаппеа! члсЬ опе апойег. ТЬе геап!сгп8 Ьугсго8епЬопсСесС РЬСА аресгеа сап Ье еая!у сопупаегс гч!ЕЬ ппс1еачегс ЬассепорЬа8е Л РС4А. рог йЬ геааоп, и Ь ппропапс со 1оасс апсс гшг гЬе 8е! гпппейасесу ассег сЬе РС4А хатр!еа Ьаче Ъееп геточегс Егогп сЬе 68аС счасег ЬасЬ. 1Е 6!8еас!оп ь шсопср1есе, счагт йе геасиоп со сЬе арргорпасе сегпрегасше, ас)0 тоге геаспссюп епгугпе 150-! 00 пшь), апсС сопиппе сЬе гпспЬаиоп ас сЬе орВгпа1 сегпрегасше гесопппепссесс Ьу сЬе гпапоЕассшег. МЕЬеи Й8еасюи !8 сошр1есе, ас)с) 0.5 м ЕРТА !рН 8.0) со а Впа! соисепсгас!ои оЕ 5 спм, аис1 ехсгасс йе с)!Вехс!оп пихшге оисе ччсй рЬепоЬсЫогоЕопи аис) оисе чч!ЕЬ сЫогоЕопи. йесочег йе РХА Егогп йе ас!иеоиа рЬахе Ьу ейаио! ргес)р!сас!ои ш йе ргеаеисе оЕ 0.3 м аос)!иш асесасе (рН 7.0).
Со11есс сЬе ргес)риасе Ьу сеиспЕи8!и8 ас шахииши хреес) Еог 2 пииисеа ас 4"С си а ш!сгоЕи8е. ТАгахЬ йе ре!!ес !и 7088 ейаио! аис) гес)!8801че йе РМА си 100 )г! оЕ ТЕ (рН 7.6). Ресепи)ие сЬе соисеисгасюи Ьу шеахипи8 аЬаогЪаисе ас 260 ши. йешоче аи а1!с)иос оЕ РХА 105 Ег8), аис1 сеас Еог !18 аЪс!1су со Ье 1!8асес) аз Е011оччя а. Ас))иаг СЬе чо!шие оЕ СЬе РХА ао!иг!оп Со 17 р! чч!СЬ Н„О.
Ь. АсЫ 2 Сс! оЕ 10х 1!Ваг!ои ЬиЕЕег аид, !Еиесеааагу, 1 Сс! оЕ 10 шм АТР. 5огпе сопппегсга! 1г8аае ЬпЕЕега сопсагп АТР. реп пяп8 гасЬ ЬпЕЕега, сЬе аггйс!оп оЕАТР Ь по !оп8ег гес!шгей с. йешоче 5 )с! оЕ сЬе пихшге ргерагес! си Всер Ь аиг! а!иге ои !се. й Ас)с) 0.2 — 0.5 ччге!88 иии оЕ Ъассег!орЬа8е Т4 Р)ч)А 1!8ахе со сЬе гегпа)ис)ег оЕ йе ппхсше (5сер Ъ), аис) шсиЪасе йе геассюп Еог 2 Ьоигь ас 16 С.
е. Т)ае а соппиегсса)!у ачас1аЫе ЪассепорЬа8е Л рас)са8!08 геассюи !р!еаае аее сЬе шЕогшаСюи раие1 ои 1ЬС СГ1ТйО РАСКАС!ЬСС) Со рас)са8е 0.1 Сс8 оЕ СЬе 118агес) аис) ип1!8агес) кашр1еа аис1 0.1 Сс8 оЕ йе ипс)!8еасес) чессог РХА Егоис 5сер 2. Ресегпиие сЬе с!сег (рЕиуш!) оЕ еасЬ рас)са8ес) геасг!оп ах с)експЬес) Еи Ргогосо1 1. ТЬе Ьасгс8гоппгс оЕ р1аггпеа оЬга!пес! айег с!еача8е оЕ ЬассегюрЬа8е Л чессога ас а яп81е геасг!сс!оп ясе и аопсеитеа ппассерсаЫу Ьг8Ь Ьесаые оЕ йе ассшпп!аиоп оЕ пгисапса гп сЬе ог!8!па1 роро!акоп йас аге геяасапс со с1еача8е ъч!ЕЬ сЬе геаспсиоп епгугпе.
ТЬЬ ргоЫегп сап Ье гесЬлсесС !Е сЬе ЬассегюрЬа8е Л чессог Ь р1ацпе-рпг!Вес! Егецпепг!у. ТЬе расСса8!п8 еЕЕгс!епсу оЕ йе 0!8еасегг чессог аЬопм !псгеаае Ьу пеаг1у сЬгее оМел оЕ та8- и!сосге айег 118аиоп. ТЬе расСса8!п8 еЕВсгепсу оЕ сЬе 1!8асесС аатр!е аЬоп10 Ье — 10% оЕ йас оЕ ппй8еагег) чесСог РЬСА. Ргерагабоп о1 Вас1епорйаце Х 0МА С!еред ЫЙ Тч~о К.еь|псбоп Епкугпея аког Нее аь а С!оп~пц Чес1ог ЕРГАСЕЬ4ЕНт ЧЕСток5, 50Сн АЗ 12001, гб3А5Н, тне ЕМВЕ веПЕЗ, ЗПЙ СЬагоп 34, 35, апй 40, сопга1п а зег1ев 01 гевгг1сг!оп ягев, аггапВей гп оррояге ог1епгагюпв, аг еасЬ епг! 01 гЬе сепгга! згпйег 1таВгпепг 1рг1всЬапЕ ег а!.
1983Ь 1п ЕМВЕЗА, Еог ехагпр1е, 1Ье огдег 01гевгг1с11оп ягев гп 1Ье 1ей ро1ус1001пд яге 1в 5а11-ВатН1-Есой! апй 1Ье огдег 1п 1Ье г!ВЬ1 ро1ус1001ОВ яге 1в ЯсоК1- !чЕМВСЗЯ ф~+ В ~ В ' Еу+ депот!с ОНА бдП! апп !еа аггп вгиеег 1гадгпепг | рагба!!у б!дев! и!!П З ЗА! в!сбег 1гадтеп! гевгпсиоп 1гадгпеп!в о1 б!Ьегеп! в!ввв 15-20-ЬЬ !Ьввбв гегпоче тпад ро!удпаег 1гадтеп!в Ьу бгаегепба! ргес!р!1апоп ЗаиЗА! соЬевче епб ЯвиЗА! соПевче епб ~* согпрабте пгт ВатН! соЬевгче епб ВатН! соПев Н! соЬевтв епб !еа апп пдп! апп Ида1е идпд Т4 ОНА !!даве г!9П! аггп 15-204гЬ !пвег!в !еа апп Е1С13ЙЕ 2-12 С1еач1п а Васгепо Ьа е А Ке 1асегпеп1 Чесгог ччИЬ Кев1гк6оп ЕЬ41опис1еавев Р!еаве все 1ех1 1ог бе1а!Ря Ф' !еа апп ф"' | бгдев1 ччаП ВатН!апбЕ В! ФФ' Ргогосо1 14| Ргерага6оп о) ВасгегторЬаВе Х РХА С1еачег( тчтгЬ Ттчо Вет|псйоп Епаугпет 2.65 ВатН1-5а!1.
Р)йеаг(оп оЕ якЬ а чес|от ипй| Ьо|Ь ВатН! ап|1 ЕсоК! у|е!|Ь 1ей ап|1 г)ВЬг агтрк |Ьа| саггу ВагпН! |егппш, а атпйег Ггайшепг саггу!пй ЕсоК1 |еппш|, апс) кЬогг кейшепта оу |Ье ро!ус1опшВ ягеа саггушц ЕсоК! ап|1 ВатН1 |егппп! (р1еаае аее р)Впге 2-12). ТЬеае аейшепга сап еая1у Ье гетпочег) Ьу сййегеп6а1 ргес)рйа6оп тч)гЬ Ьоргорапо! ог Ьу ьрпп со1шпп сепгттТийа|юп (р1еаае аее Аррепсйх 8). ТЬе агша сап Ье еййс|епйу 1!Вате|! |о тагйег РХАк |Ьа| саггу |егппп| сотпра6Ые ит)гЬ ВагпН1 Ьп| аге ппаЫе |о !!Васе |о ЕсоК1 |епшп! оу |Ье атийег Егайшепт. Ву апрргеаа!пц 1!Ватюп со |Ье япйег Ггайшепг |п |Ьгх и ау, |Ье ргорогбоп оГ попгесотпЬ)пап| ЪассегюрЬаВеа ш сР!4А апг! Вепош)с 1!Ъгайеа сап Ье г)есгеааед Ьу гтчо огс)ега оу гпайпйпде.
|т(Ьеп |Ь!з "ЬюсЬеппса! ае!есгюп" 15 иаед !п согпЪ|па6оп ипгй а Вепет)с ае1есг)оп (е.В., Вр!), |Ье ргорог6оп оГ попгесотпЪ|пап| Ьас|епорЬайеа сап Ъе гег)псе|) Ъу а Гпг|Ьег 100-Го1г). Непсе, тч)гЬ |папу гер1асетпеп| чес|огя |йеге 15 по пеег) |о ге|поче |Ье агиГЕег ЕгаВшепт ог |о рипуу |Ье 1ей апд пВЫ агшх Ъу Ве! е1есггорЬогеяа ог ьпсгоае г!епяту сепггтупйагюп. МАТЕК1АЕЬ СА|)Т)ОЬ|: Р!еаае атее Аррепгйх 12 1ог арргорпа|е Ьапд!1пй о1 та1ег!а1ь таг!|ег) ач11Ь <! >. Впйегб апг! Ьо!пт!оп5 Р1еаае аее Аррепсйх 1 (ог сотропеп14 о( атос)г ао1и6опя Ьийегя апг) геадепгя Р11и|е атос)т ао1ийопа |о |Ье арргорпа|е сопсептгайопя АТР ЛО тМ) Опп| АТР (гога 5|ар | О !( |Ье 1|хат|оп Ъпйег сои|а|па АТР. СЬ!ого(ого| <1> Е|Ьапо( РЬепо(|сЫогоуогт (7:Ь ч)ч) <1> 5ог()ит асетате ГЗ М, рН 5.2) 5исгоае Ве(-(оасйпВ Ьийег Р!еаае аее Тайе 5-4 гп СЬар|ег 5, Рго|осо! |.
ТЕ (рН 7.б апс( рН 8.0) Епгугпеб апг! Войегб ВасгегторЬайе Т4 Р!чА ВВаае Веттггс6оп епг(опис(еаьеь Се!5 АВаготе Ве! (0. 7;4) саьг т 0.5х ТВЕ, сопга(п(пд 0.5 Рфтl егйтсйит Ьгот(г(е < ! > Нос!е!с Асп!5 апг! О!!еопос!ео1!г!е5 Вас|епорЬаВе ) (гер)асетеп| честог) ()|чА Рте рагс|1 аа гтеасг|йеа |и Рго|осо! | | ог | 2 оГ |Ьь сЬар|ег. прес!а! Ес!о!ргпеМ Игатег Ьа|Ь ргевет Го б8'С АгЫ!г!опа! КеацепЬ 5|ер 10 (рая е) оГ гйта ргогосо( гес(и(ген (Ье геайепга Вагес( |и Ргогосо( Т оу (Ь)а сЬаргег. Чес1ог5 апт! Вастег!а! Юга!п5 ВасгепорЬаВе Х расЬаВ(пВ т(хгигез Рас1|ах|пц пт|хгпгеа п|ау Ье ригсбааетт |и (г|т (оггп (гоп| апу о( ьечега1 сопппегс!а1 шапа(асшгега (е.а., 5|гагацепе, Ргоптеаа, Еркептег ТесЬпо!оа|еа, апд !2(е ТесЬпо!оа|еа).
Р1еаае аее |Ье |п(оппайоп рапе1 оп 1Х Ъ'|ТРО РАСКАС!ЫО. 2.66 Сйарсег 2: Васгег(ор)ладе Х апд Еь Тес(игл МЕТНО0 Млх 25 — 50 П8 оЕ Ьассег!орЬабе )с 0)ч(А рппЕзед Егогп а гер1асегпепс зессог ич1Ь ТЕ (рН 8.0) со 8!че а Впа! чо1шпе оЕ 170 р!. Адд 20 р! оЕ опе оЕсЬе сзчо арргорпасе 10х геаспсс!оп епхупзе ЬОЕЕегя Пепзоче сзчо а!|с)иося еас1з сои(а|и(п8 0.2 р8 оЕ ппсП8еасед ЬассегюрЬабе Х 1ЭлчА. 5(оге 1Ье а!|с)носа оЕ ппеППеяед Л)ч(А оп ке.
ТЬеле а)|л)посл оЕ иисййеяед 0)4А ичП Ье плед ал соисго(л дпппй сЛе айаголе Пе! е|ессгорйогеял ш 5сер 4 апс| зи сйе зевс Пйасюп ш йер |О. Адд а ЕопгЕо1д ехсея (100-200 ппзь) оЕ опе оЕ 1Ье ьчо арргорпасе геягкдоп епхушеа апд |пспЬасе сЬе д)8еас!оп пзЬсгпге Еог 4 Ьопга ас 1Ье сегпрегаспге гесопппепс1ед Ъу 1Ье пзаппЕасспгег. Соо1 сЬе геасс!оп со 0"С оп ке. Кепзоче сзчо а1п!посо (0.2 р8). 1пспЬа1е опе орсЬеае а)!с)поза (Паче йе осЬег Еог апа!уяа зп 5(ер 10 Ье1озч) апс| опе оЕ йе сзчо а1н)поза оЕ ппд|8еасед 0Ь)А (51ер 2 аЪоче) Еог 10 пз)пп(еа аС 68"С Со д|агпрг йе соЬеяче Сеппйч! оЕ СЬе ЬасСепорЬа8е 0(з)А.
АсЫ а япа11 агпоппс (-10 р!) оЕ апсгоае Ве1-1оасйп8 ЬОЕЕег апд апд Еттег(лаге!у е1есСгорЬогеае йе аапзр1еа СЬгопВЬ ап 0.7% айагоае Пе1. )Е йе геяисдоп еигуше сййелсюп Ь созпр|есе, по 0)(А мчй иийгасе ас сЬе рол(с(ои оЕ йе ипдр Пеяед сопсго! Ьапдя |плсеай йгее ог гпоге (дерепдзпй ои сЬе пшпЬег оЕ с|еачайе ясел зи сйе чессог) ятзайег 014А Пайшеиь ичй Ье лееп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
