Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 58
Текст из файла (страница 58)
И'лй ехрепепсе, йе яхе о1 р1ас)иез сап Ье ай)излей со зшс йе саз)с ас Ьаий. Рог ехашр1е, лчЬеп зегееи|пд 1|Ъгаиез Ьу ЬуЬпгцхасюп, Ь ь ойеп йеыгаЫе со гезспсс сЬе ыхе оЕ сЬе р!ал)иез зо сЬас сЬе гиахлшшп пшпЪег оЕ ЬассепорЬадез сап Ье зсгеепей рег р|асе. 1п сЬлз сазе, ые лче11-адей р!асез апй изе зцдЬ11у пюге Ьассеиа сЬаи изиа! Еог еасЬ 1асчп.
Упйег осЬег спой|с!опз, е.д., зчЬеп ияпд епЕееЫей гей дат зсгализ оЕ ЬассепорЬаде Х, Ь плау Ье песеяагу со гейосе сЬе Ьассепа| шоси!ши апй)ог со спе а 1олчег (0.646) сопсепсгасюп оЕ сор адаг)адагозе со оЪса|п р!аг)иез оЕ ап ассерсаЫе ясе.
ВассепорЬаде Л р)аг)иез йо иос 1псгеазе лп яее айег |Ье Ьассепа! !алчи !з Ги11у дголчп апй сЬе се!Ь Ьаче геасЬей зсайопагу РЬазе. АОЕ)1Т1О)з(АЕ РКОТОСОЫ РЕАОЕ)Е-А55АУ ОЕ ВАСТЕК1ОРНАСЕ5 ТНАТ ЕХРКЕ55 (1- САЕАСТО51Е)А5Е Маиу Ьас(еиорЬаце Х чесСогз сои!а|и а сору о1 йе Е. со!! !ас2 цеие, шЫсЬ еисос1ез В-ца!ас(оз!йазе. И Ьеи йезе нес(ага аге р|асей |и сией!а сои!а!и|иц Х-ца| (5-Ьгоило-4-сЫого-Зйийо)у1-В-о-ца1ассоругаиоз!йе), а сЬю- ! илоцеи!с зоЬзсгасе Гог В-ца1ассоз!йпзе, а Ьг!цЬ( ииц о1 Ыие с|уе 'ь соггиес| агоиий (Ье р|ас!иез. )М(Ь дгие, (Ье | еидге р1ас)ое азяипез а Ыие Вице. И(Ьеи зецгиеисз о1 Гоге!ци ОЫА аге с!оиес| |и!о йезе нес(ига, сЬе !асг депе, аис| Ьеисе йе сЬгопюцеи|с геассюи, ь с|ьилрсес| аис| йе р!ас!иез аге ио!оицег ессЬес| !и Ыие.
Рипиц соизсгиссюи о1 сРЫА аис1 цеиопис 1|Ьгаиез ги Ьассег!орЬаце Х нес|оса, йе ге!адче ииилЬег о1 Ыие аий ччЬ|се р1ас(оез !ий!салех (Ье ргорог|юи о1 егирсу нес|огз (Ыие р(ас(иез) аис| росеида! гесогиЫиаип (со|ог1езз р)ас(оез). Ас(сГ!1!ипа! Ма1еиаЫ СА()Т1О)ч: Р|еазе зее Аррепб!х 12 1ог арргориа1е Ьаийдпц о1 шасеиа|з шаг(сей ийй <! >. ГВ ог Ч2СуГМ Сор ацаг ог ацагозе, спаса!и!лц Ху! <1> ЕОГ 3 ГИ| О1 СОР адаГ, ОЗЕ 40 О) ОГ 2% Х-да). АС й Х-да| СО аЮ(Ей (47чО СОР адаГ |ОЗС ЬЕ1ОГЕ ШЕ.
Е. со|1 р(адиц Ьассепа Озе аиу зсга|и о( Е, со!! йа| ы)! зиррогс |ус|с дгозчсЬ о1 йе раи!си)аг зсга|и о1 ЬассегюрЬаде л (р|еазе зее ТаЫе 2 3), аз |оид аз д )ыюс аи очегргойосег о1 !)-да)ассоз!йазе. ТЬе ргезеисе о1 а з!ид!е сору о( йе (ас2 депе |и |Ье Ьассеиа1 сЬгоилоюгие йгюз ио| |иСег(еге чай йе аззау. Р|еазе зее СЬе |и1оииаСюи раие| ои а| СОМ РЕЕМ Ей(ТАТ! Ой( (СЬар!ег 1). Ргераге СЬе Ьассеиа аз йезсиЬей |и Ргогоеа| 1.
МеГЬос1 1. О!1оле С!ле ЬассеиорЬаце з(ос1с |и 5М р1оз це!аои. 2. !и(ес( 0.1-ил! а(!с(иосз о1 р|а(|иц Ьассеиа чя|ГЬ 1О р| о( йе арргориа(е й!!одопа о1 ЬассеиорЬаде, 1исиЬаСе (Ье !иГессес1 си!(игез 1ог 20 пииисез ас 37чС. 3, Айй 3 ги! о1 гпо!сеи сор ацаг (ас 47'С) сои!а|п|иц Х-да! со йе бгзс соЬе.
М|х йе сои1еи|з о1 йе 1оЬе Ьу сарр|иц ог цеице чог|ех|иц. Роиг (Ье соисеисз о1 (Ье сиЬе оисо ап ацаг р|асе. 4. Кереас 5(ер 3 ийй йе гегиа|ишц й!)одопа о1 йе Ьас(ег!орЬаце зсос|с. 5. И)Ьеи 1Ье сор ацаг Ьаз зе(, |ичег| йе р|асез аий !исоЬасе 1ог 15-1 8 Ьоогз а1 37'С. ~ 6. Региоче йе р1асез 1гоги (Ье 37'С |исиЬасог, р|асе ас гооги сегирегаьлге Еог а длг|Ьег 2 Ьоигз, аис| йеи гесогй йе со|ог о1 йе р)ас(оез. Рапид |исоЬасюи ас гааги сего регашге, |Ье |и|еия|у о1 йе Ыое со|ог Ь еиЬаисес|.
Еог ассигасе саги ран юи, сЬе |исеиз|су о1 со|ог |и сЬе р!адоез зЬои!й Ье гиассЬей со со|ог зсаийагйз |Ьас саи Ье оЬ|а|ией (гоги дсга|адеие. Ртогосо! 2: Р!с)с!п5 Васгет!ор)ъа5е ). Р!ат)иеь 2.33 ()ье а Ьогоя!касе Раяеиг р!репе ес(и!ррес! ъч!(Ь а гиЬЬег Ьи!Ъ, ог а пгкгорсрепе, со ьсаЬ сЬгоиВЬ йе сЬоьеп р!ас)ие оЕ Ьассег!орЬаВе ). шсо сЬе Ьагс( аВаг ЪепеасЬ. Арр!у пп! й ьиссюп ьо сЬас !Ье р1ас)ие, со5есЬег ъч!(Ь йе ипс!ег!у!пВ аВаг, ть с(гаъчп (псо сЬе р!рессе. Весаые Ьассег!орЬаВеь сап с((ЕЕцье сопят(егаЫе тВьсапсеь сЬгоцВЬ йе 1ауег оЕ сор аВаг, сЬооье ъче11-ьерагасеь) р1ас)цеь. Рог сЬе ьаъпе геаьоп, Ь В Ьеьс, ъчЬегечег роьяЫе, со рк)с р!аъ)иеь ьЬогс!у а(сег сЬе Ьассепа1 )аъчп Ьаь Вгоъчп цр апъ( сЬе Ьассег(орЬаВе р!аоиеь Ьаче Вгьс арреагей Р!с)с(п5 р!аъ)иеь еаг1у !и йетг с(ече!оргпепс а1ю геъ1цсеь сЬе цпъче1соъпе роя1Ьс1пу оЕ оЪсаш! пВ а ЬассепоРЬаВе ьсос1с сЬас сопсаъпь яВшйсапс пшпЬегь оЕ ипс(еягаЫе шцсапсь. А! сегвассче1у, р!аъ)цеь гпау Ье рк1сес) Ъу соисЫп5 а яеп1е 8-сш ъчооъ(еи ьск1с (а1ьо са11ес( ав арр11- сасог ог огапВе ьс!сК) ог а ьсеп1е соойръсК со сЬе ьцгуасе оЕ сЬе сор аВаг!адагоье сп йе сепсег оЕ сЬе сЬоьеи р!аъ)це.
1пииетВасе!у р1асе сЬе ьпс1с иъ 5М(сЫого(огш ъп а 13 х 100-пнп сцЬе апс! пцх сЬе сопсепп оЕ сЬе сцЬе Ъу чогсех(пВ со с)(ь1ос(5е ЕгаВшепсь оЕ аВаг!а5агоье соисашшВ сЬе Ъассег!орЬаВеь. 5опъе йчеьВВасогь ргеуег со ые сЬе ъчЫе епс( оЕ ьсеп!е Ьогоя!стасе Раьсецг ръревеь (ъчпЬоцс со!- сои р(цВь). ТЬе аВаг р!ц5 яауь сп сЬе р(репе апс( сап Ье ехре11ес( (псо а ьсеп1е ро!ургору1епе сиЬе Ьу а Епср оЕ сЬе ргасс!сес) мгпс. Вассах!орЬаВеь сап Ье ьсоге0 ш сЬеье р1цВь Еог ьечега1 ъчеерь ас 4'С ъчКЬош яВшпсапс 1оя оЕ ч(аЬ!1(су, аь 1оп5 аь сЬе р!иВь ъ(о иос Ьесотпе с(еЬуъ)гасеъ). 3.
ЧтаьЬ оис йе ЕгаВшепсь оЕ аВаг Егопг йе Ьогоя1касе Раьсеиг рсрепе шсо йе шЪе сопсаш!п5 5М/сЫогоЕогш (ргерагес1 сп 5сер 1). 1.ес сЬе саррес! сиЬе ьсапс1 Еог 1 — 2 Ьоигь ас гоош сегпрегасше со а11оъч йе ЬассепорЬа5е рагс!с!еь со сИЕиье Егогп сЬе аВаг. То аьяьс йе е1иВоп оЕ йе ч!гиь, гос1с йе сиЬе Кепс!у оп а гос!с!п5 р!асЕопп.
йоге йе Ъассег!орЬаВе ьиьрепяоп ас 4"С. Ап ачсгаВе Ьассег(орЬаВе р1а0це у(е!ъ(ь -1оь (в(есс(оиь ЬассепорЬаВе рагис1еь, ъчЬгсЬ сап Ъе ьсогес( !въ)ейп(се!у ас 4'С 1п 5М/сЫого(огш ъч(сЬоцс 1оя оЕ ч(аЬг!иу (р1еаье ьее сЬе раве! ои ЬОМС-ТЕКМ 5ТОКАСЕ ОГ ВАСТЕК!ОРНАСЕ Л 5ТОСК5 ш Ргососо13). ТЬе ч(гць гесочегег) Егогп а р!аоие сап Ье пьес( аь с(еьсг(Ьег( ш Ргососо!ь 3 апс) 4 со ргераге 1агВег яос1сь оЕ ЪассепорЬаВеь Ьч сЬе р!асс!уяь ог йе!(с)ц(ь( сц!сиге гпесЬос)ь.
Рог ьсгеев!п5 гесошЬгиавс р1аоиеь, р1еаье ьее сЬе раие! оп АМАПХ!МС КЕСОМВ1МАМТ5 051МС РСК. АМАЕУХ1МС КЕСОМВ1МАМТ5 051МС РСК 'ччЬеп ьсгееп)п5 с0МА ВЬгапеь сопягиссес1 !и а Ьассег!орЬа5е ). чеесог ьисЬ аь ) 5110 о(сеп ыей! со еьсаЫ!ьЬ сЬе !еп5сЬ оЕ а с0МА ЬагЬогес( !и а ЬуЬг(с(!хас!оп-роь!с!че Ьассепо ВгочМп5 ир а ьгпа(1-ьса!е ргерагасюп оЕ сЬе Мгиь. )Мй Ьассег!орЬаВе ) чессогь ъчЬоье ьес)иепсе В (споъчп, ог Еог сЬоье !и ъчЫсЬ ас!еая йе 0МА ьес!иепсе (шшес(!асе!у ас( с!оп!п5 яге В !споъчи, ро!упъегаье сЬа!и геасСюп (РСК) сап Ье сагпес! оиг с!!гесС!у оп йе р!ас!ие !уьаСе со Весегтше сЬе ь!хе о( сЬе с0МА !пьеп, Тъъю о!!Вопис!еос!Ве ргцпегь сотр!ешепсату со ЕЬе чессог 0МА Е!ав(с(п5 сЬе с!оп1п5 ь!се аге иьес! (и РСК, соВесЬег ъч!ЕЬ ап а!)срюс оЕ ЕЬе Ьасгег!орЬа5е е!ивсе !и ' 5М/сЫого(оггп.
А согпр)есе ргогосо! Еог с(!гесс РСК апа!уяь о( Ьаесег(орЬа5е ). е!иасеь В с(еьспЬеъ! !и ' СЬаргег 8, Ргогосо) 12. Рго1осо! 3 Ргераппц Мосе~ о1 Вас1епорйаце Х оу Р!аде Еуыь апд Е!ибоп т ио метно05 лке соммомл тя5ео то Ран Аке 5тоскь Еготп ыпц!е р1ас)иея оЕ ЬасгепорЬаце Х: р!ате 1уяагея (с1еяспЬед 1и Ргогосо1 3), 1и ягЫсЬ йе ЪассепорЬацея аге ргорацагед ш Ъассепа цгоясп ш гор ацаг ог ацагояе, апд яиа11-яса!е!1с)и!д си!!отея (Ргососо! 4), ти яоЫсЬ йе ЪастепоРЬацея аге ргорацагед ти Ъастепа цгоясшц ти 1нрлЫ мопед)иш.
АЬЬоицЬ Ьой тпейодя уте1д ияеЕи! ЬасгепорЬаце атос)ся, тЬе 6гя Ьая йе адчаптаце оЕ а11оссшц йе 1пчеят!цатог то дегегпппе ягЬетЬег ог пот йе ЬасгепорЬацея Ьауе цгояси яиссеяяЕи!1у гпеге! у Ьу 1ооРдпц ат йе децгее оЕ сопбиепсе оЕ 1уяя. 1п асЫпюп, йе 6гег оЕ р1аге атос!ся тя ияиа1!у ЬтцЬег гЬап тЬат оЕ ятос1ся ргерагед 6отп 1тсрпд си1шгея. А сцяадчапсаце оЕ тЬе 6гяг шегЬод, Ьоягечег, 1я йат ЬастепорЬаце РХА 1яо1агед 1готп р1ате ятос1ся шау Ье сопгапппагед ъс)гЬ ят!Еатес1 ро1уяассЬапдея апд ц1усапя йаг !еасЬ 6 опт гЬе сор ацагlацагояе.
Моте ойеп тЬап пот, йеяе ро1уяассЬапдея аге шпосиоия апд саттяе по ггоиЫе. 5ошетппея, Ьоъчеуег, йеу шЬтЬ11 епаутпея ияед го апа1уге ог тпап)ри1асе ЬасгепорЬаце )с Р!я!А. ТЬтя рготосо! с1еяспЪея а ге!тайе шейод Еог ргераппц р!аге !уяатея апд тесоует!иц ЬастепорЬаце Ьу е1игюп 6ош йе гор ацаг со!16 5М. А)тегпаг!че1у, йе ЬасгегюрЬаце шау Ье гесочегед 1тош "яой" (1ояг сопсепггадоп) гор ацагояе Ьу ясгар)пц йе тор ацагояе ипо 5М !Р!еаяе яее йе рапе! оп А001Т1О!ЧАЕ РКОТОСОЕ: РКЕРАК1ХС 5ТОСК5 ОГ ВАСТЕК1ОРНАСЕ Х ВУ РЕАТЕ ЕТ515 АН0 5СКАР- ! я!0 ат йе епс1 оЕ гЫя рготосо1).
МАТЕК!АЕй САЕ1ТЮ!Я1: Р1еаяе яее Аррепд)х 12 Еог арргорг)а1е Ьапд11пц оЕ гпа1еда!я шаг)сед едй <! >. ВпЕЕег5 апг! Ьо!0Е1005 Р!еаяе яее Аррепд)х 1 Еог сошропеп1я оЕ МосЕ яо1и6опя, ЬиЕЕегя, апд геацеппи 011и1е я1осЕ яо!и6опя го 1Ье арргорпа1е сопсеп1га6опя. СИогоЕогт <! > 5М Мейа ЕВ ог НЕСУМ ацаг р!атея ЕгеяЫу роогед р1агея !10-сто ог 15-сто сцагоегег) тЬас Ьаге Ьссп ецгд1тЪгасес1 го гоотп сеторетатиге 5!ге йе Ьсяг гсяо1ь 1и тЬсяе тпегЬодя ТЬе о1дег тЬе р1агся, гце!осгет гЬе г1гет оЕ тЬе теяо1с!оц р1ате ясос1с. 2.34 Ргогосоl 3: Ргераг!пн ВгосЕг оу" Васгег!орЬане Х Ьу Р!иге йуго аиг( Е1иВол 2.35 иаге у)е)сЬ о( пюП я)га)пь о( Ьас)ег)орЬаВе ), сап Ье оЫа)пег) Ьу иа)пВ !В ог Ы2СУМ Ьоиош аеас аа Ьег) аЬоче.
Ногчечег, В ргоЫепь апае, 'ппргочег) у)е!Вь сап о(геп Ье оЫа)пед Ггот (В Ьоиогп аеас йас ееп аирр!егпепгес) |ч))Ь: 3% (|ч)ч) В!исоье 075 гпм СаС! 004 шм ГеС), щм МВВО ье гергеааев |Ье )атВ Вепе апг) саиь гег)осев )Ье агпоигп о( ЬасгепорЬаВе |Ьаг 'ь !ов! Ьу аг)гогрг)оп |о )а! ВеЬгь (р!еаье все |Ье рапе! оп АОО!Т!ОЫ ОГ МАЕТО5Е ГОК СКОч|ГТН ОГ Х |и Ргогосо! 1).
и| )опт аЬо гег)исе )оаа Ьу геас)аогрг)оп, ъчЬегеаь гегпс )опыпау ьг)ши!аге гор)гаг)оп апс1 аирргеаа |Ье п|с ра)Ьчау о) Ьасгег)орЬаВе г)ече!оргпепг (АгЬег ег а!. 1983). ЕВ ог ХЛСУА4 Гор аВагоае (0.7%) Лаагаке ы рге(еггег) |о аааг !и гЬ)ь рго|осо! |и огг)ег го пипппие соп|апипа|юп |ч)гЬ )пЬ)Ь)гогг |Ьаг сап )пгег(еге ча|Ь гшЪ|ециеп| епгуп|а||с апа1у|Ь о( Ьасгег)орЬаее )3Г)А. Сеп$г!Яцек апс1 !соЕогь БогчаП 55-34 ог ес)игча)елс прес!а! Еоо!ргпепЕ Неас(лВ Ыос)г ог счасег Ьай ргеяе! Го 47 С Бсге|ч ог ьлар-сар ро!ургору)еле ГиЬеь (73 х 700 тт ог lагдег) АЕЫ16опа! Реа~епЕВ 5|ер 9 оу ГЬ(а ргососо! гес)и)геь йе геаВелсь lьсес( т Ргососо! 1 оу ГЬ)а сЬарсег. ЧесЕогь апс! ВасЕег!а! Яга!пВ Вас(ег(орЬаВе Е в)ос)с Ргерагег) аз г)еясг)Ьег) |и Рго|осо1 2.
А!|егпа||че1у, |Ье юшсе о( Ьасгег)орЬаае гпау Ье а шасгор!аг)ие (р!гав атее |Ье рапе! оп АОО!Т!ОХАЕ РКОТОСОЕ: МАСКОРЕА(2~ЗЕВ ш Рго|осо1 Ц. Е. со!| Р)аппо Ьасгег(а Ргерагег) аг г)еьсг)Ьег) |и Рго|осо! ! о( |Ь)я сЬарсег. МЕТНО0 1. Ргераге шуессес) си1)игера Гог р1аг!прр| Рог а 10-ст г(!атегег Реги' г(!зЬ: М|х 10| руи оГЬассепорЬаде (иаиа11у -1)10 оГ а геаиврепс)- ес1 !пс))ч!г)иа! Р1аг)ие ог 1)100 оГ а шасгор1ас)ие нч!ГЬ 0.1 гп! оГ р)а))пц ЪасгеПа). Рог и !5-ст Регг|' г(ггЬ: Мпс 2 х !0~ рпг |ч()Ь 0.2 ш1 оГ р1аг)пВ се1)а. А1|чауз аег ир аг!еааг опе сопсго1 шЬе сопсаиипВ ип)пуесгес! се11ю 1псиЬасе )Ье )пуесгес) ап|1 сопсго! си!сигея Гог 20 пппигея аг 37'С со а1!онч йе ч!гиа со аггасЬ го )Ье се!1а.
ЪЧЬеп ргераг)па к)ос)гг о( )ао!агег) Ьасгег)орЬаае Х |Ьа| агоъч роог!у, )псгеаяе |Ье шоси1шп |о )иг руи рег О.! ш! о( р!аг)па Ъас|епа. 2. А|ы 3 |п1 оГ то!геп гор ааагояе (47'С) (10-сш р!аге) ог 7.0 ш1 оГ гпо11еп сор ааагояе (47'С) (15-с|п р1аге) го гЬе Гггьг сиЬе оГ )пуессес) се11ю Мис )Ье сопсепгя оГ йе шЬе Ьу цепс)е гарршК ог ногсех(пВ Гог а Ге|ч аесопг)а, апс), |ч)гЬоиг Ие1ау, роиг йе епг)ге сопгепо оу )Ье гиЬе олго йе сепгег оГ а 1аЬе!ег) аКаг р!асе. Тгу го ачо(с) сгеаг)пц а(г ЬиЬЫея. Яъч)г! йе р1аге Вепг!у го 2.36 СЬартег 2: ВасгепорЬа8е Х ап|1 Етт 7естогт епанге ап ечеп т))атпЬнт)оп оЕ Ьастепа апт) тор а8агоае.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
