Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 66
Текст из файла (страница 66)
ТЬеье сап Ье ессЬег оЬса/пес3 согпгпегс(аПу ог аепегагес( 3и 1Ье (аЬога1огу. Ве/оге иь!пе а ргерага1юп о/ еепот/с 0г(А, !1 Ь а еоос( (с(еа 1о ьес ир а гпосЕ епхуте с(3ееьс(оп 1Ьас (пс(иг(еь пепит(с 034А апс( 3 х геьгга Воп епгугпе Ьи//ег, Ьиг по епсуше. (псиЬаСе СЬе ьо3и6оп Сог 1-2 Ьоигь ас сЬе ор6гпиги с(/пегас!оп сегпрегасиге lог 1Ье рагВси(аг епгугпе апсс сЬеп ехагвпе йе 0С(А Ьу е(ессгорЬогеьа 1ЬгоиаЬ а 0.5% ааагоье ае! ог Ьу рисьес(-1/е(с( ае( е(есггорЬогеяь. Сотраге йе гпос(с-с/3ееьсес( 0ЫА со а ьагпр!е о1 0ЫА йас Ьаь Ьееп /псиЬасес( 3и ТЕ lог сЬе ьагпе регюс( оl йие апс( 1о а ьатр(е пос ьиЬ!ессеи со !исиЬа6оп.
ТЬеге ьаои1с( Ье по с(1//егепсе 3и йе яае оl 1Ье 0ЫА ргеьепс !и йе 1Ьгее ьатр(еь. В с(ецгас3а6оп Ьаь оссиггес( /и йе ьагпр(е (псиЬасесс (и геписсюп епхуте Ьи//ег, йеп йе ьсаиспе 0(4А Ь ргоЬаЬ3у сопсат3 пассе( сч(сЬ а попьрес(ас 0(4аье сЬас Ь ас6часес3 Ьу йе ргеьепсе о1 йе МВс+ 'юпь /и йе Ьи//ег. ТЫь суре о( сопсагп(паис сап Ье гепючег( Ьу еепс(е ехсгассюп чч31Ь рЬепоЕсйого1оггп апс( с/(а(уьсь ааа(пьС ьечега! сЬапаеь оlТЕ !рН 7.6). МАТЕК1АЕЬ САС(Т10(х(: Рсеаье ьее Аррепс(!х 12 1ог арргорпа1е Ьапс(1(пе о1 тасепа1ь таг(сес( сч!1Ь <! >.
Воггег8 !сеьсг/сс/оп еис/опас/еаьеь ТЬе Ьеьс геьи1п аге оЬса!иегс 31 сЬе ьагпе ЬассЬ о/!ох Ьиаег Ь иьег3 ги ЬосЬ сЬе рг!ос геассюиь апгс йе !агре-ьсасе геасОои. Епкуспеь апс1 Се18 Адагоье Веl !0.6%( саьс гп 0.5х ТВЕ, сои!а/и/ие 0.5 РВ/т( есЬ/с//ит Ьгот/с/е <1> ог АВагоье Ве( /ог ри/ьег/<Вге/с( Ве( еlессгорЬогеь/ь Рсеаье ьее ьсер 8, Рог шсогшаиои ои рисьегс-Оесгс ье! е1еесгоР!гогеяь, р!еаье ьее СЬарсег Ь.
(х(ос1есс Ассс18 апд О13еоппс1еоТ141е8 Сепот/с 0А/А, Ь/еЬ то/еси(аг сче/ВЬ1 О/гВотегь о/ Ьассег/орЬаВе !с 0(ь/А апс/ р(аьт/с/ь Бье аь 034А яке ьсаигсаггсь гсиг!и8 8е1 е!ессгорЬогеш. Р1еаье ьее Арреийх 6. Бресса! Ецо1 ргпеп$ Сар/(/агу сиЬе, ьеа/ес( О/а/уь/ь сиЬгиа, Ьо/(ес( Рог ргерагапои о/ гс/асуьсь сиЫи8 (ог иье часЬ И /А, р! еаье ьее Арреийх 8. Масег Ьа(Ь ргеье1 со 70 С УИ'г/е-Ьоге ргрепе Врь Вп(гег8 апд Ьо1ойоп8 Р1еаье ьее Аррепспх 1 1ог согпропепсь о1 ьсос(с ьо1и1гоп, Ьийегь, апс( геаеепсь. О!!исе ьсос(с ьо1иоопь Со СЬе арргорла1е сопсепсгаоопь.
5исгоье Ве(-(оас//пВ Ьи//ег Рсеаье ьее ТаЫе 5-4 ш СЬар1ег Ь, Ргоюсо1 1. Тг/ь-С( /70 тм, рН В.О( 2.78 СЬартет 2: Вастет(орЬаце ). апт( Етя Ъестотя МЕТНО0 1. 5ес ир рцос геасПопя ия!пц сЬе яапте ЬассЬ оЕцепопис РЬ(А йас М!1 Ье спет! со ргераге Егацгпепся Еог с!ошпц. а. РПисе 30 рц о(Ь(цЬ-шо!еси1аг-тче!8ЬС еи1тагуопс РХА со 900 Сс1 тч!сЬ 10 гпм Тпя-С! (рН 8.0) апт) асЫ 100 )т! оЕ сЬе арргорпасе 10х геяспссюп епгутпе ЪиЕЕег.
Ь. Т)яе а яеа)ет! 81аяь сартцагу со ппх йе яо!иПоп цепс1у. ТЬь ппхшц епяпгея йас сЬе ЫцЬ- шо1еси1аг-ъче(цЬс РХА ь т)!яспЪисет! ечеп1у сЬгоицЬош йе геяспссюп епгуспе Ьийег. с. АЕсег пихшц, ясоге сЬе гП1шет1 Р)я(А !ог 1 Ьоиг ас гоош септрегасиге со аПочч апу геяЫ- иа1 с1шпря оЕ РХА со йярегяе (р!еаяе а1яо яее сЬе посе со цсер 8, Ье1отч). !Е йе соисепттасюи оЕ тЬе Ь!8Ь-шо!еси!ат-тче!8Ьт РМА ы !отч, Ь и Ъеп со тистеаяе сЬе чо1- шпе оЕ сЬе рс!ос теасиоия аитС соисеистасе сЛе Р14А аусет йцеяиои Ьу ясаит(аттС есЬапо! ртес!ртсасюи, ТЬтя арртоасЬ ти!иип!гея сЬе рояиЬт1Ьу оЕ яЬеат!иц сЬе ЫВЬ-шо!еси!ат-тче!8Ьс РС4А, тчмсЬ саи оссит тЕ тс ы соисеистасет! ЪеЕоте йцепюи.
ЕасЬ рт1от теасиоп яЬои!тС сопса!и ас !еаяс ! 08 оЕ РсСА со а!!отч сЬе Ьесетоцеиеоы ртойтсь оЕ йцеиюп со Ье тСесессетС Ьу яса!шпц тч!ЕЬ есЬтйши Ьтошме. 2. 1аЪе1 а яепея оЕ шкгоЕице сиЬея 1 йгоицЬ 10. !.)яе а ччЫе-Ъоге 81аяя сартПагу ог сцярояаЫе р!аякс р!репе Пр со сгапя(ег 50 Ет! 0ЕсЬе РХА яо1ицоп со а пасто(ице сиЬе (ТиЪе 1). ТгапяЕег 30 Сс! оЕ сЬе РЬ(А яо!иПоп то еасЬ оЕ п!пе атЫПюпа! 1аЬе1ет! писгоЕице сиЪея. 1псиЬасе йе сиЬея оп ке. 3. АтЫ 2 ипця оЕ сЬе арргорпасе геяспссюп епгуше со ТиЬе 1, Ряе а яеа!ед 81аь сар!1!агу со иих йе теяспссюи еигуше тч!сЬ тЬе РЬСА.
Ро иос а!!отч сЬе сетпретасите оЕ сЬе теасиои то пяе аЪоче 4 С. 4. Ряе а ЕгеяЬ р!репе Пр со сгапяЕег 30 )т! оЕ тЬе геасПоп Еготп ТиЬе 1 со сЬе пехс сиЪе Еп сЬе яепея. М(х ая Ье(оге, апс1 сопПпие сгапяЕегппц сЬе геасПоп со яиссеяя(че сиЬея. Ро пос атЫ апусЬтпц со сЬе сепсЬ сиЬе (сЬе по епгугпе сопсго1), Ъис т!Еясагт! 30 Ст1 Егош сЬе шпй сиЬе. 5.
1псиЬасе йе геассюпя Еог 1 Ьоиг ас 37"С. 6. 1пасичасе сЬе геяспссюп епгугпе Ьу ЬеаПпц йе геассюпя со 70'С Еог 15 пипшея. рот яоите еигутпея, Ь и иесеяяату со Ьеас сЬе теассюи со 80 С Еот 20 ииишея. СЬес)т сце ртотСисс тСосишеисас!оп ти сЬе шаииЕасситет'я саса!оц от 'тчеЬ я!се. 7. Соо1 сЬе геассюпя со гоош сешрегасиге апт1 атЫ сЬе арргорпасе апюипс оЕяисгояе це1-1оай шц Ьийег.
Стяе а яеа!етт 8!аь сарт!!агу со иих тЬе яо!шюия Веит!у, 8. Уяе ччЫе-Ьоге р!аяПс ртрессе бр ог а т)!ярояаЫе тчЫе-Ъоге 81аяя сартцагу со сгапя(ег сЬе яо1иПопя со йе ччеця оЕ а О.Етцц ацагояе це1 ог, ечеп Ьепег, со йе !апея оЕ ап ацагояе це1 Еог ри!яет)-Пте!д е!ессгорЬогея(я (р1еаяе яее СЬарсег 5). РегЕопп е1ессгорЬогея(я. Ъй~еи яератаии8 сЬе рагс!а1 йцеяИоп ртотСисся Ьу ацатояе це! е!ессторЬотея!я, Ь Ь еьеииа1 со пти йе це! иит(ет соийс!сия оЕ тиахипшп теяо1шюи.
Ряе сЬе яаше ЬассЬ оЕ ЬиЕЕет со саяс сЬе це! апт! со 6!! сЬе це! тап1т рпот то е!ессторЬотея!я. ТЬе це! яЬои!тС Ъе тип я!отч!у (<! Ст!сш) ас 4'С со ртечеис яшеапиц оЕ йе Оацшеиь оЕ РЬСА. Отсах!опа!!у, ртоЫешя апяе т(ит!иц 1оайиц оЕ йе це1 Ьесаияе сЬе РЬСА яо1исюп тч!!1 иос я!и)т со сЬе Ьоссоти оЕ тЬе чте!!. Т!Пя йоа6иц оссшя тчЬеи чету Ь!8Ь-шо!еси!ат-тче!8Ьс РЬСА ь ртеяеис ш сЬе ртератаиои.
То пишииге сЬе ртоЫеш, тиа1те яше тЬас сЬе РссА Ь Ьошоцепеоы!у тС!яретяет( аит( !оатС тЬе яашр!ея чету я!отч!у тито тЬе тче!!я оЕ тЬе це!. АЕсет 1оайиц, а1!отч сЬе це1 то ясаитс Еот а Еетч иииисея ю йат сЬе РссА саи ййые ечеи1у сЬтоицЬоит тЬе тче!!я. Ртососо! 17: Рать!а! РЕееьс1оп оу ЕиЕсатуоггс РЕчгА Тот Еуье гп Сенат!с ЕгЬтагсеь: РЕ!ог рсеассгопь 2.79 9. Соисраге йе яке оЕ йе йцеьсес1 еиЬагуос1с РХА счссЬ сЬас оЕ РМА ьсапс!агс1ь сопсроьес1 оЕ о!1еопгегь оЕ Ьассег1орЬаее ! РМА апс1 р1аьгп1с1ь. 1сЕепс1Еу йе рагс!а! йаеьссоп сопйссопь йас геьп1с 1и а пга!опсу оЕ сЬе иепоиск РХА ппигас1пи 1и йе с1еягес1 яге гапее.
Весите рагпа1 йаеьссоп оЕ аепопнс РХА МсЬ сЬе сСеягегс геьсиссюп епгугпе, сЬеге ьЬои!д Ъе по 1оиг-гпо1еси!аг-ьчесаЬс РХА гсесессаЫе гп йе ргерагасюп. СьгссЬ спсгеаяпа снпе оЕ йаеьсюп ог спсгеаяпа агпоипп оЕ геьсиссюп епгупге, сЬе пютуа! яге оЕ РХА ьЬои10 гсесгеаье гпопосошса11у, г.е., Маете ьЬои!гс Ье по геяг!иа1 гпасеиа! ас сЬе сор оЕ сЬе ае! апс1 по ьсап оЕ а геьЬсапс Егассюп оЕ РХА. Орпгпа1 сопйиопь оЕ йаеьссоп ьЬои!д усе!И а рори1асюп оЕ РХА пю1еси!еь сЬас гпсагасеь аь а Еасг1у сопграсс Ъапгс оЕ сЬе сСеягесс яге.
!Е сЬе РХА япеагь спсо сЬе 1оччег рагс оЕ сЬе ае1, гсо пос ргосеег! ЕигсЬег. 1с Ь 11!се!у йас сЬе РХА Ьаь Ъееп аьупсЬгопоиь!у йаеьсегС Ьу ЕЬе геьсиссюп епкугпе, ъий ьоспе тпо!еси!еь гп сЬе ьсагсспа рори1ассоп Ьеспа с1еачегС гпоге !тес!иенс!у сЬап ойегь. ТЬсь рЬепогпепоп сап оссиг сЕ сЬе геьсиссюп ЬиЕЕег апд епгугпе аге пос йьсгсЬисегС Ьогпоаепеоы1у сЬгоиаЬоис сЬе РХА ьо!исюп ас сЬе ьсагс оЕ сЬе геассюп. С!ширь оЕ РХА аге ге1апче1у спассеы!Ые со геьсиссюп епгугпеь апг1 сап Ье йаеьсегс оп!у Ьотп сЬе оисягсе.
!1п1еы сЬе РХА Ь ечеп!у йьрегьей сЬе гасе оЕ йаеьссоп саппос Ье ргейссей ог сопсго1!ей Опе ьо!исюп со сЫь ргоЬ1епс Ь со йа1уге сЬе РХА со Ье иьегС Еог сЬе рг!ос апсС 1агае-ьса1е гС!агась Еог ьечега! Ьошь аааспьс а 20-ЕоЫ ехсеы оЕ сЬе арргориасе 1х геьсисиоп епгупге ЬиЕЕег. А1сегпасп е!у, а11огч сЬе РХА со ьсапгс Еог ьечега! Ьошь ас 4'С ассег сИисюп апсс аггйссоп о! 10х геьсгтесюп епгугпе ЬиЕЕег. Сепс!у ьог сЬе РХА ьо1исюп !гоги алисе со сапе ияпа а ьеа1ес1 а1аьь сарг!1агу шЪе, Рго1осо! 18 Рагба! 0~цеь6оп о1 Еи1агуобс 0МА аког Нее ~п Сепот>с Ыэгапеь: Ргерагабче Кеас6оп~ н !сн-мосесиье-чче!снт 0МА слм ве гвлсмемтс0 Ьу рагда! йцеяюп чч!1Ь геасг!сс!оп епхупсея (1п рагдси)аг с!гсшпяапсея и шау Ъе деягаЫе со регуопп а сошр!есе д!Веас!оп ос 1Ье 0ХА; 1ог ЕпгсЬег д!аспас!оп, р1еаье атее сЬе рапе! оп СЕОМ!МС 5РЕС!Е!С ГКАСМЕМТ5 ОЕ СЕМОМ!С 0МА.) ТЬе арргорпасе сопйдопа Тог рагда1 д!Веасюп аге еасаЫ!аЬед !и р!1ос ехрегппепп !Р1еаае аее Рго1осо1 17).
ТЬе геап11а о1 1Ье рдос ехрегпиепп десеппше сЬе спид!с!опа Тог 1Ьгее!агйе-аса!е геасдопа Тог ргераппц репою!с 0МА Тог с!оп!ий, ргеаепсед Ьеге. ТЬе геасВопа пс!!!се 1Ье геап!са цепегасед !и Ргососо! 17 аь а асаг1шй рошс апд ша)се япа11 ад)пасшепса !и 1Ье гас!о оГ епхуше со 0МА апЬасгасе агоппд сЬе ешр!пса11у десегпппед орсппшп. Вгас)сес!65 1Ье спид!с!опь сЬас аге ргейссед со счог)с сче!1 оууега аоше шапгапсе айа!пас ргоЪ1еша сЬа1 сап апае дпг!п5 аса!е-пр ос р!1ос ехрегппепся МечепЬе)еьь, !с !а ипрогсапс со епаиге сЬас сЬе сопйдопа 1ог 1Ье 1агйе-аса1е йцеадоп аге аь !депс!са! аь роаа!Ые со сЬоье пьед !и 1Ье р!1ос ехрепгпепс ш Ргососо1 ! 7.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
