Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 68
Текст из файла (страница 68)
вав дече1ореб еаг1у 1и 1Ье Ь!вгогу оу пю1еси1аг с!оп!па Ьу Вепгоп апд 1)ач!в ( 1977). ТЬе ргосебиге, вЬ!сЬ гегиа)пв )и согпгиоп иве, !пчо1чев гиавв всгееп!пд оГ р1аг!иев Ъу ЬуЬг!б!забои ги яги впЬ ЯР-!аЬе!ег1 ргоЬев. 'нн'11Ь ргасбсе, Ь 1в ровяЫе го Ыепбгу а в!пц1е гесогиЬ)папг ЕЬа1 сагпев 1Ье бев!ген гагдег вег!иепсе оп а р1аге сопга!п!пд 15,000 ог июге р1аг)иев. Рог а гиегЬо31 Гог аптр11- 6сабоп ог" Ьасгег!орЬаде рагггс!ев оп 6!гегв, р1еаве вее 1Ье рапе1 оп Ей ЯТ13 АМРЕЕЕЕСАТЕОЬЕ аг 1Ье епб оу 1Ьгв ргогосо!. ТЬгв ргогосо! девспЬев Ьов р1ас)иев аге 1гапвуеггед еп гпавве 1гоги Регб гбвЬев го пбгосе1!и1ове ог пу1оп 611егв. ТЬе вег)иепсе оу ечепг в 1в ргевепгед ги Р)доге 2-14.
Р)а1е Ьас1епориаде а1 ап арргорпа1е бепвау. МаКе 'нирпп1 о1 йе ра11егп о1 р!адиев Ьу деп1!у р)ас3пд а п31госе33и)ове 1331ег !ог пу)оп гпегпЬгапе) оп йе вигЕасе о1 йе 1ор адагове. А)3ов йе Ьасгепориаде рап)с)ев апб 03)А го Егапв1ег 1гогп йе Еор адагове 1о йе Е3аег рарег Ьу сер!3)агу ас1)оп. Тие раггегп оп йе 1331ег в!33 Ье ап ехас1 гер3!са о1 йе раиегп оЕ р|ациев оп йе р)а1е. Тгеа1 йе 631ег в3й а)Ка3! Ео бепа1иге йе Ьасгепориаде ЮйЕА. В!пб йе бепагигеб Вй)А 1о йе 1331ег Ьу ЬаКЕпд, гп3сговаяпд, ог аи1ос3ан3пд ог Ьу огоев-33пКЕпд в3й 1)н' КВП1.
Е!СЕЕКЕ 2-14 НоънсЬаггг 5е иепсе оЕ Тгапвтег вге в 2.90 Рго1осо)21: Тгапфег о~Васгепорйа~е РЕЕАЯот Р!ас)иех го Р)!1егх 2.91 МАТЕИА! о Вобеуй апд Ьо!п6опй Р!еаае нее Аррепгпх ! Еог сотропеп18 оЕ 81ос)с хо!ипопх, ЬиЕЕегх, апд геаееп)х. Ю))и)е х!ос)с хо)ипопх )о ЕЬе арргорпа)е сопсеп1га)1опх. Оепа1иг)пВ хо1и1гоп Е)ерепй)и8 оп |Ье пшиЬег оЕ Ег)сеча со Ье ргосемей 1 1йег ог |ноге и|ау Ье гес)шгес).
АЕеи1гайчдпВ хо)и1|оп Оерепсйпй оп йе пшпЬег оЕ 6!сеча со Ье ргосеьей 1 1йег ог |ноге тау Ъе гег)шгес). 5М р)их Ве1абп 2х 55РЕ 13ерепсйп8 оп |Ье пшиЬег оЕ Ес)сага со Ье ргосеье|1, 1 )нег ог пюге гиау Ье гег)шгес). Мейа 18 ог АЕЛСУМ айаг р)а)ех 1Е сЬе р)асса аге пос |чей-с)г)ес), сЬе 1ауег оЕ сор айагоае |чай рее) ой сЬе айаг Ьаае |чЬеп сЬе 61сег и геточсй !)шайу 2-|1ауоИ р)асса йас Ьаче Ьееп йпе|1 Еог аечега! а|ЫЫопа! Ьо ига ас 37 С |чнЬ сЬе П|Ь а68Ь|)уорен |чог)с |чей. 1п ЬшпЫ |чеайег, Ьосчечег, шснЬайоп Еог 1 |)ау ог пюге ас 41'С тау Ье песеыагу. 1п сЬе 1970| апс) 1980я |чЬеп асгеешп8!агйе пшпЬега оЕ р)ас)неа, й |чае Еа|ЬюпаЫе со сье )агйе Ругех й|Ье| )пасса|) оЕ |сапйаЫ Респ' й|Ьея ТЬь чойне ччаа |)г|чеп пюге Ьу епегйейс |ичевийасога оЕ |Ье снпе йап Ьу сопниоп аспас.
Рог п|оя )аЬогасопея Ругех сй|Ье| аге ап нпргасйса) орсюп. ТЬеу аге Ьеачу, Ьгеа)саЫе, Ьаче )агйе Еоосрппся гес)шге аписе югс оЕ сетрогагу сочеппй йш)пй |пснЪасюп, апс) пиес) пйгосейн)оае ог пу1оп айееса йас Ьаче Ьееп арес)айу сш со 6с. Тойау, гпоас )аЬогасог)еа сье енЬег сЬе агапе)агс) 100-тт р)асса ог о| егяхе Е)30-тгп) р)асей ТЬе сЬоке Ьеьчееп сЬет ь ойеп с)есегт)иес) Ьу |Ье яхе оЕ сЬе шчеаййасога Ьапйя 1В ог ЕчхСУМ 1ор айагохе Рог Песайв оп няий сор айагоае, р!еаае аее Ргососо! 1 оЕ |Ьь сЬарсег.
Айагоае Ь рге)еггес) со айаг |и сЫ| ргососо) |п огйег со папиные сопсапнпасюп |ч)сЬ ьпЫЬ|соь йас сап |псегЕеге |чнЬ анйаег)непс епхуп|аск апа)уяа оЕ ЪассепорЬайе. 1п айсйсюп, сор айагоае |а ргеуеггей Ьеса|ье сор айаг ойеп рее!а )гоги йе р1асе |чЬеп йе п)сгосейн)осе ог пу)оп Ег)сеча аге гегиочей Ме!с сЬе сор айагоае)сьс ЬеЕоге |ье Ьу Ьеайпй )с |п а иного|чаче очеп Еог а айогс регюй оЕ сние. 8|оге |Ье 3- ог 7-гп) а1нрюь оЕ спе)се|1 ао)шюп |п а 47'С Ьеайпй Ыос)с ог |часег ЬасЬ со рге| еис |Ье айагоае Егоп| зо1кПЕу)п8 нпй) пенс)ес) )и 3сер 3 Ье)очс орес!а! Ее)о)рп)епй Сгохх-!Еп)с)пе деч)се Ее.е., 51га)а!Еп)сег, 51га)айепе7 С5 Сене Ет)сег, В)о-Кад), М|сго|чаче очеп, ог Уасиит очеп ргехе1 1о 80 С Нуродегтк пеед)е апд хугтйе Е27 Ваийе) А211госе)!и1охе ог Ху)оп И1егх Есесегйепс-Егее пйгосейн)оае ЕМППроге НАТЕ ог ецшча1епц ог пу)оп Ес)сеча аге гег)шгес).
'1о гейнсе сЬе роаяЬПну оЕ сопсапнпас!пй сЬе тавсег р!асей и ь Ьеас со асепйхе сЬе Ес)сеча ЬеЕоге сье аа |)еаспЬе|1 )и 3сер 1. 11 йе Ег)сага |чий Ье ЬуЬпйхей аейоепиайу ю а ппгиЬег ну и)ЕЕегепс ргоЬея й Ь Ьепег со оае пу1оп гасЬег сЬап шсгосейн1оае 6)сегя )су)оп Ег)сега аге |ноге рйаЫе йап п|сгосейн1о|е Ег)сага ап|1 аге пюге геяасапс со гереасес) ехроаше ю ах!гете| оЕ сеп|регасше. Ху)оп Ес)сега аге а!ао ргейшгей |чЬеп ЬуЪпйхасюп ь со Ье сап|ей ош ш го1чепь сопсаш|пй Еогтат)йе ог сесгагпейу)агпп|отнп| сЫогЫе Ер)еаае аее СЬарсег 6).
Но|сече|, сйгуегепс Ьгап|Ь оЕ пу)оп 61сеь чагу ш |Ье|г аЬ|1ну со Ь|пй Е))4А, |п йе саге чйй |чЫсЬ йеу сап Ье асг)ррес) оЕ гасйо!аЪе)ей ргоЬея апс) |п йе с)ейгее со |чЬкЬ |Ьеу й|соп йнпп8 гереасес) гонпйа оЕ япрршй апг) геЬуЬгЫйайоп )КЬапс)))ап 1987). )с |чин)й йегеуоге Ье аепяЫе со сйес)с йе ргорегйеа оЕ пу1оп 6)сега оЬ|а)пес) Его|и гйЕЕегепс тапнуасснгега ЬеЕоге ассеп|рйпй )агйе-аса)е асгееп)пй о! ЪассепорЬайе Х ПЬгапея Ройо|ч сЬе спаиоЕасснгегй гесопнпепйайопа с)оае)у, аа |Ьеу ргеашиаЫу Ьаче Ьееп |Ьо|чп со )еаг) со орсона) геги1ся 1п онг Ьап|Ь, Ьо|чечег, йе 1у|Ь аий ЬуЬпсйхайоп ргосес)нгеа йе|спЬей )и Ргососо1 22 |чог)с |чей чйй пюя сопнпегс)а) Ьгап|Ь оЕ п|сгосейн!оае ог пу)оп 61сегя ЪЧагег ЬагЬь ргеье! Го 47оС алг) 65оС йасегргооЕ и!ас(г с(гачч(пц !п!с ()пс((а !л!с) ИгЬастал ЗММ рарег И)Ьастап ЗММ Е()сег рарегь (85-тт с((ате!ег) я!есТог5 апд ВасТег1а! Яга1п5 ВасгепорЬаце Х ВЬгагу Ргерагед ая с1еясг!Ьеб си Ргососо1 19 оЕ сЬся сЬарсег ог ршсЬаяе Егош а сопипегс(а! яопгсе.
Е. со!! р!аопц Ьассепа Ргерагеб ая деясг(Ьед (и Ргососо1 1 оЕ сгбя сЬарсег. МЕТНО0 а. ХисиЬег йе с)гу 61сегь чч!1Ь а яой-1еас) репе!! ог а Ъа11-роси! реп. Ргераге епопВЬ ЬТсегя со пса1се опе ог са о (с1пр1касе) гер!кая Егош сЬе ьсагбпц ацаг р1асе. 1п сЬе 1апег саяе, пшпЪег пчо яеи о( 61сегя 1А, 1В, 2А, 2В, есс.
Ь. 5оа)с йе 61сегь си псасег Еог 2 пиписеь. с. Аггапце йе 61сегь 1и а ясас1с сч(сЬ еасЬ 61сег ьерагасес( (гоги 118 пе(цЬЪог Ьу ап 85-пппйатесег Ъйьасгпап ЗММ 6!сег рарег. д. Хгар сЬе ясас1с оЕ 61сегь ш а1шиспшп Еос1, апг) ьсег!1!ге йесп Ьу аисос1ачспц Еог 15 пипшеь ас 15 ря1 (1.05 1сц)ст') оп!(с)иЫ сус!е. 2. Ма1се а с61исаоп (ш 5М р1ия це1аоп) о( йе рас1сацбпц пихшге, ЬассепорЬаце ьсос1с, ог 1гЬгагу. М(х а1н!иось ОЕ сЬе 6!1исес( ЬассепорЬаце ьсос1с чч(сЬ сЬе арргорпасе а!поил( оЕ ЕгеьЬ1у ргерагес) р1аопц Ъассепа (р!еаье ьее ТаЫе 2-5).
1псиЪасе йе !п(ессес) Ьассепа1 си1сигеь Еог 20 пиписеь ас 37'С. ТЬе й!шег1 ясос1с (! 00 Сс!) яЬоо!д сопсасп -15 000 шЕеспопя ЬассепорЬацея счЬеп пап8 100 ппп р!шея ог 50,000 спЕесбопя рагбс1ея счЬеп ышц 150-гиги р!асея. СагЬеп ясгеепспц ЬассеггорЬаце 1сЬгаиея, Ь ы Ьеяс со шЕесс сЬе се1!я ая а я(пц!е роо1. Рог ехаспр!е, счЬеп пя(п8 сеп 150-спсп р!асея, 1 пс1 оЕ й1псес1 ЬассепорЬаце я!ос(с сопсаспсп8 500,000 р(п ъчоп!с1 Ье а66е6 со 3 гп1 оЕ СгеяЫу ргерагес) р1абп8 Ьассепа. А(сея 20 иппшея ас 37'С, ес)иа! чо1шпея оЕ сЬе (п(ессе6 си1шге аге сЬеп йппЬшед шсо 17 х 100-спш сиЬея Еог р!абп8. ТЬся ргосес(пге епяогея сЬас еасЬ р1асе сопса1пя арргохппасе!у йе яаспе пшпЬег оЕ р!асспея.
ТАВЕЕ 2-5 Сч(вгпЬег оЕ Р!ас)пея 1п Сиоиге ФЭ(ьЬея оЕ сгаг!Оиь 5схеь 2.92 СЬаргег 2г Васгег(орлице ). ассг( )!ь Ъесгогь Ргерага11оп оТ' Г1Вег5 ап(1 ТгапВТег о1 Р!а(1ое5 1. Ргераге йе 6!сегь Еог сгапьЕег: 5(ае о(респ йяЬ Тога! агеа о( йяЬ Сго)шпе оЕ ЬоССопс ацаг 'чго!шпе о( р!абп8 Ьассепа СгоЬппе оЕ сор ацагояе Махспшгп пшиЬег о( р!ас)пея)6(яЬ 90 шш 63.9 сшс 30 ш! 0.1 ш1 2.5 ш! ! 5,000 150 ипп 176.7 сшс 80 гп1 0.3 гп1 6.5-75 ш! 50,000 Ргососо!21: Тгагс~ег оЕВассепорБаае РЫАЕгот Р1ас)неь со Р!1сегь 2.93 То Еяпь! а Ьассег!орЬаае сЬас сагпея а рагски1аг аепош!с яес!пенсе, и шау Ъе песеыагу со ьсгееп опе пнПюп ог гпоге гесошЬспапь сп а аепопнс ОНА 1сЬгагу.
ТаЫе 2-5 яЬоъчь йе шахнпшп пшпЬег оЕ р1ассиеь йас сап Ье еЕЕсс!епс1у ясгеепесс !и си!сше ъ!!ьЬея оЕ йбегепс ыгеь, И сЬе ЬассепорЬаПея аге р!асеь! ас соо Ь!аЬ а ПепьПу, сЬе р!ас!иеь чВП Ье сгоъчс!есС апс! Ьепсе ипаЫе со ехрапс) со йеи ЕиП ыхе. Ая а геви1с, йе ЬуЬпйха6оп яапа! чВП Ье ассепиасес1. Еп ас1гПпоп, ъчЬеп сЬе Ьассег!орЬаае р!аниеь Еопп а сопбиепс шаьь, сЬе сор ааагоье сепг!ь со рее! Егопь йе р1асе Пнг!па геспоча! оЕ сЬе пагосеПи1оье ог пу1оп 6!сег. АЕсЬоиПЬ сЬся Ь пос а соса! гПьаьсег, сс сегсасп!у пъа1сея сЬе саь1с оЕ !ъ!епс!Еу!пц апсс сю1асяпП с!еь!гесС гесопсЬспапы Еаг гпоге 6!6!си!с.!с Ь сЬегеЕоге нпрогсапс со спеаяиге сЬе Псег оЕ сЬе ПЬгагу Ьесоге р!аПпП со епяиге йас сЬе писпЬег, ыхе, апс) яраг!пП оЕ р!анись аге соггесс.
3. АсЫ со еасЬ а!ъсрю! оЕ ъпЕессес! се!1ь 3 гп! ог 6.5 ш! оЕ шо1сеп (47'С) сор абрагове. Роиг сЬе сопсепсь оЕ еасЬ снЬе оп!о ьерагасе, пшпЬегес! 90-ппп ог 150-ппп айаг р1асеь. Ачосяб ЬиЬЫея ыпсе сЬеье ъчсП йяр!асс йе 61сег апс1 сап аепегасе Ьас1сагоипъ) с)иг!па йе ЬуЬпгПхаПоп ясер. 4. С!оье сЬе р1асеь, а!!оъч йе сор абрагове со Ьап!еп, апс! спсиЪасе ас 37'С ш ап шчегсес) роысюп ип6! Р!ас)иеь арреаг апс1 аге !ия! Ьеа!пп!пн со ша1се сопсас! ъч!ЕЬ опе апосЬег (10-12 Ьоигь).
То пнпнпие р1асе-со-р1асе чапасюп, и Ь сенс!а1 сЬас еасЬ р1асе Ье Ьеасеь! со йе ваше ехсепс ъчЬеп р!асес! ш сЬе !пснЬасог. 1Е рояыЫе, аггапае сЬе р1асея сп а ь!па!е! ауег гасЬег йан !и всас!ся, !Е сопяспссюпь оп !псиЬасог враге Еогсе ясас)с!па, ясаааег сЬе р1асеь оп сор оЕ еасЬ осЬес со епЬапсе ехроьиге со йе аи !и йе спсиЬасог. ОиНпц шсиЬасюп, )сеер а с!оье еуе оп сЬе р1асеь со гпопссос р!ание Еоппассоп апсС ыхе. Ноъчечег, геыьс сЬе сегпрсасюп со ореп йе шабе шсиЬасог Понг соо псапу Ппъеь ыпсе сЬЬ чпП а!сег йе сешрегаснге оЕ сЬе спсиЬасог апс! ге!ась! р!асСие Соппасюп. ТЬе сСепь!су анъс ыге оЕ р1аниея аге сбеа1 ъчЬеп а ъч!ьру ЕсПагее оЕ Ьассепа! Пшъчй Ь ч!ь!Ые Ьеичееп ас!)асепс р!аь!иеь, ъчЬояе сПашесег ьЬоо!сС пос ехсеед !.О шш.
ТЬе у!е1с! оЕ чнияеь Ь ойеп 1оъч Егош р1асеь йас ьЬоъч сопбиепс!уыь чбсЬ по гПыЫе гепспапо оЕ сЬе Ьассепа1 1аъчп, ыспр1у Ьесаиье оЕ а яЬогсаае оЕ Ьассепа Еог шЕессюп. ТЬе ъпсепяссу оЕ сЬе ЬуЬпсПхассоп ь!Пна! Ь сЬегеЕоге гессисеъс апс1 Ь Пес!иепс1у Ье1оъч йе 1нпн оЕ с!есесс!оп. 5. СЬ!11 йе р1асеь Еог а! 1еаь! 1 Ьоиг а! 4'С со а11оъч сЬе сор ааагоье со Ьасс!еп. 6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
