Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 72
Текст из файла (страница 72)
Рог ехагпр1е: ° Мапйо|е| 8 апг( 5сЬпеЫег (Л 988) с(еьспЬе а чапа8оп оЕ йе аЬоче теЕЬгх(е |и ъчЫсЬ ОЕАЕ сеПи|оае ог (пе(Ьуагп1пое(Ьу! сеПи|оее 'ь Кгя иеес( го гепюне ро(уап(опе 1гогп (Ье (уеале. Ргоге(пахе К апс! ЕОТА аге ГЬеп иеег) Ло ге(еаъе йе 0)4А Егот йе ч)пза рагис(ея апл( ПпаПу, ГЬе Ьасгег)орЬа8е ОНА 'ь ргес)рйа(ес) ънПЬ Ьехас(есу)(глгпе(Ьу) агппюпвгп ЬгогпЫе (С |АВ).
° ТЬе рго(опалес| Еоггп о1 ОЕ52 сап а!ял Ье иеег( ае а сЬгогпаго8гарЬу геяп (о риг!Еу Ьаегег(орЬа8е ), рагПс!ее (гоги!кулЫ сЫ(игее ог р|але )уха(ее (Не!та ел а1. ) 985, 1987). ТЬе пе8аиче|у сЬаг8ел) Мпь рагй)с!ее Ь|пс) Го СЬе геа)п |и !оъч сопсеп(гал(опе оЕ М8л' апс| аге е|илес| |и Ьи((ега сопШ(п(п8 ЫВЬ сопсеп(га((опа о1 М8л".
ТЬе Мга! ОНА 35 ех(гас(ес( Ьу г)38ее()п8 йе ЬасСег)орЬа8е рап(с(ее ъчЕЬ рголе(пахе К |п (Ье ргеьепсе о( а с|егег8епг ялсЬ ае 505. ТЬе ОНА 'ь йеп ргес|рКасес! гМй )еоргорапо). ° 5ечега! согпрап(ее ееП )с|ге го ргераге Ьаелег(орЬа8е ОНА (гоги р!асе ог Пг(иЫ 1уаа(ея ТЬе ЪН(лагг( (г(л гпаг(се(ег( Ьу Ргопле8а 'ь Еа|г1у (урлса! апс1 )пчо(чеа г(38ехг(п8 (Ье !увале ъи(Ь пис1еаъе го геточе соплат!паг!п8 Ьас(ег(а! ОНА апс! К)ъ(А, ргес(р!Еаг!п8 йе Ьасгег)орЬа8е раи)с(ее (гоги ЕЬе ялрегпагапг ън|(Ь РЕС ог а гее(п, апс3 ПпаПу риг((у)п8 йе Мга! ОНА оп апойег геяп. ТЬеее Ыгь ъног(г ъчеП К (Ье гпапи(аслигегь' )паггисПопа аге ЕоПоъчес! (о йе |еиег.
Ноъчечег, ППе аП сопъгпегЫа| ргойлс(я йеу аге ехрепяне апс! аге йеге|оге Ьея иеес( ах а (ае( гееогг К о(Ьег гпегЬос(е Ея|!. Ртсосо) 237 )сар(г(Апа3ул(л о)Вассеггор)лауе А Тло3асел: Ригг)!со!|оп о) )ъ ОХА Тгот Р|асе Еуласел 2 705 АМАЕЧ515 ОЕ СЕОМЕВ 051МС РСК А вгпр|е арргоасЬ !о апа|уае СОМА с|пиеа $5 !о сье РСК 1о атрИу СЬе |паегС (р1еаае аее СЬарСег 8, Рго!осо| 12). В СЬе о118опос1ео!3де рг|псега аге ъче33-деа|дпед, йе апсрИес| ОМА сап Ье д|це51ед ъч$1Ь а геа!пс1юп епаугпе апд 3|еасед |п1о а р1аст|д чессог, ог В сап Ье с|опес$ д|гесс1у чч|!Ьоос геаспссюп (р|еасе аее СЬарсег 8, Рго1осо| 5). САгг!Ь 3опцег СОМА с|пиеа апд Велит|с ОМА 3паепа, 1Ьгее асгасеВ|еа йои|д Ье сола)де!од.
ТЬе ВгаС 'ь Со оае а чегаюп о( 3опВ РСВ (Вагпеа 1994) со апсрйу йе $паег| Ье(оге апа!ух|5 ог аоЬс|оп(пВ (СЬарсег 8, Рго1осо| 13). ТЬе аесопд В 1о геесое йе |паегс ас а рЬаВет|д ОМА (5Ьоп е1 а|. 1988). ТЬь орсюп гес|Ыгеа 1Ьа1 а Ьассег|орЬаВе чессог ъч|1Ь ап 3псеВга!ед рЬаВет|д Велите (е.В., 5!га!аеепе'5 )УАР ог ВКГ5 2$рЬох чесСога) Ье иаес|! и йе сопасгосС)оп о( йе ос|В|па! 1|Ьгагу. А !Ь|гд 5!га!еВу 'ь !о д)Веа! йе гесопсЫпап1 Ьас!епорЬаВе ОМА ъч|сЬ а геаспсбоп епаугпе со ге|еаае йе Тоге|Во ОМА (гоп! сЬе ). алла апд 1Ьеп со юЬс|опе йе гпаегС д|гесС1у гпСо а р|аюск| чесСог. 1п телега!, по роп6садоп о( йе геа!псдоп д|Вей 'ь гесрагед рпог 1о 3|Васюп, 5|псе чессог агги-р|ааги|с| 3|Ва!$оп ргодос$5 аге роог сапдЫа!еа Еог !гала(оста!3оп о( Ьас!епа. СЧЬеп аес- !)пВ ир йе 3|Ва!$оп геассюпа, а|гп Еог ап есрпгпо|аг гпо|аг гасю о( спаегс со р|аагп)д чессог апс$ иае а Ь|ВЬ-Егес|оепсу !гала(оггпас|оп ргососо| (р!еаае аее СЬар1ег 1) со гпсгосЬлсе 1Ье ОМА!и!о Е.
со(Е Еог |агВе еепогп|с ОМА!паег15 о( 15-20 $сЫ1 'ь о(Сеп песеааагу 1о асгееп со|оп|ее о( !гала(огтед ЬасСепа Ьу ЬуЬг|д|ха!$оп, аа ! йе Ьас|сцгоопд ос' епсрсу со|оп|ее сап Ье МВЬ. Опсе йе СОМА ог еепоппс ОМА |паег! 'ь с|опес$ !псо а Ь|ВЬ- сору-погиЬег р1аяпк3 чессог, июсЬ |агеег срлапй|еа о( ОМА сап Ье ргерагес$ Еог с|еса|ед геаспсСюп тарр|пц, ехоп ЬопдпВ, апд ОМА аес|оепсе апа|у535.
А001Т!ОМАЕ РКОТОСОЕ: КЕМОЧ1МС РОЕЧВАССНАК10Е5 ВЧ РКЕС1Р1ТАТ|ОМ ЧЧ|ТН СТАВ В йе Ьассег|орЬаВе ОМА ргерагасюпа оЬсапес1 гп Рго!осоВ 23 апд 24 аге геВВсап! со ЫеачаВе Ьу геаспссюп епаугпеа, йе ОМА сап Ье рип8ед Ьлгйег Ьу ргес!рВадоп ъч|й сЬе садопгс де!ессеи! Ьехас1есу|сптесЬу! ! агпгпопвги ЬгогиЫе (СТАВ). ТЬга ргоседоге ей|с|ел!|у геточеъ ро|уаассЬалс3еа, ъчЬ|сЬ аге Егес|оеп!|у сЬе ' саоаео(йергоЫепс. Адд|Нопа| Ма1епа|5 САОТ|ОМс Р1еаае аее АррепсВх 12 Еог арргорла!е ЬапсВ|пц о( спа1елаВ сиаг1сед ъчпй <3>. Вас(ег)орЬаВе ОХА Ргерагед аа деасг|Ьед |и Ргосско| 23 ог 24 оЕ сЫа спарсег.
СЫогоЕогтдюатуЕ а|соЬоЕ (24г 7, чМ <! > СТАВ (7 ОУч чМ ли О. 7 М ХаСЕ <! > Осьоме 4.1 В оЕ МаС! )п 80 пъ$ о( Н О апд а|оъч|у асЫ 10 В о( СТАВ пгЫ|е Ьеа1|пВ йе союдоп 1о 55~С апд адгггпВ, Ад)иас спе Впа! чо1игпе со 100 гп|, апс$ асоге аЬаче 15'С со ргечепс СТАВ (гоги ргесгркаипВ.
СГАВ, аЬо Ьюъчп аъ сесппсЫе, В ача($аЫе Еюгп 5$8гпа. Р(еаъе аее йе |п(оггпадоп рапе! оп СТАВ |п СЬарсег 6. ХаСЕ (5 м) ТЕ (РН 7.6) Иласег Ьа16 ргеаег Ео 66 С Ме(Ьос$ 1. Ргес|р|1асе 1Ье Ьассег|орЬаВе ОМА чд1Ь ейапо| апд д$55о!че |с |и 300 р| о(ТЕ (рН 7.6).
Веяьрепд йе ОНА Ьу сарр|пВ оп йе а)де о( йе сиЬе. Тгу со ачоЫ чопех|пВ. |Е йе ОМА ргочеа д((В!и|с 1о дьао|чс, |псиЬалс СЬс СиЬс Еог С 5 гп|пиСса ал 50 С. 2. То йе Ьас|ег)оРЬаВе ОМА Ре||еС, асЫ 50 О3 о( 5 М МаС|, Ео||оъчед ЬУ 40 Р| о( СТАВ)МаС3 ее|ос|оп. ! |псиЬа1е 1Ье ОМАЕСТАВ/МаС3 ю|идоп Еог 10 псспи1еа а1 68'С. 3. Рип(у !Ье ЬасСепорЬаВе ОМА Ьу ехсгасдоп ъчсй сйого(оггп:ьоагиу| а!соЬо|, апс| йеп сел!с!(оее йе ' ето35|оп Еог 3 пипи!есНп а т|сго(оде !о аерагасе 1Ье рЬааеа.
4, Тгапа(ег йе (иррег) ас|оеооа рЬаае 1о а Егей ЬлЬе, апс| ехсгас! чч)!Ь рЬепоЕсЫого(огпс. 5. Сеп1гйлде йе епсо|аюп Еог 3 иппо!есНп а гп(его(оВе 1о аерага1е йе рЬасеа. 6. Тгапа(ег йе (оррег) ас|иеооа рЬаае со а Егей |иЬе, апс$ ргес|р|сасе сЬе Ьассег|орЬаВе ОМА ргорапо! а1 гоот !егпрегаСиге. 7. Реаоарепд 1Ье ре||е1 о( ОМА гп 100 р| о( ТЕ (рН 8.0). Веасьрепд спе ОМА Ьу сарр|пВ оп йе а(де о( йе ЫЬе. Тгу со ачоЫ чопех|пВ. В спе ОНА ргочеа д|В)с ю|че, |псиЬа1е йе 1иЬе Еог 15 гп(пи!ее ас 50'С.
Рго1осо! 24 КарЫ Апа!увы ог Вас1епорЬаце Х Ьо!а1еь: Рипшса6оп о1 Х 0МА ггогп БсрлЫ Си!Ыгеь В летев!орнлсе 2. О)4А млт ве Риа!г!ео ел5!1т гаом влстекюрнлсе 5гои и !п 1!ои!с) си!1игеа аа г!еасг!Ьег! Ьеге. ТЬе ргесег!!па ргогосо! ргеьеп1ег! а тезис) 1ог риг!Гу!пд Ьасгег!орЬаце ). УХА Егот р!аге !уьа1еа. 1п оепега1, Ъас1епорЬаце ) г!оеа пог агом ак не!1 гп япаП 1щшг! си11игея ая !п р1а1е 1уяагеа ТЬе 1011оичпе тегЬог! 8Ьои1г) 1Ьеге1оге Ъе иаег) оп1у май гоЪиаг 81га!пв оЕ йе Ьасгег!орЬа5е, ьисЬ аь Хцг ! О, 2.5111, ) ХАР, ог г.!ражих гесотЪ|папга.
Рог апа!уа!пц с1опеа ияп5 РСрс, р1еазе аее 1Ье рапе! оп АНАЕг5!5 ОЕ СЕО)хЕ5 1)5!ГхС РСК !и Рго1осо! 23. МАТЕК1А15 САЕ)Т!ОН: Р!еаае атее Аррепг!!х 12 1ог арргорпа1е Ьапг!!!пд 01 гпа1ег!а!а гпаг!гег! и41Ь <! >. Вийегв апе! '>оМгоп5 Р!еаье аее Аррепг!!х 7 !ог сотропеп18 о! 8!ос!г ао106опа, Ьи!Еега, апг! геааеп18. ОН01е 8!ос!г ьо1и1гопь 1о 1Ье арргориа1е сопсеп1гаНопа. СЫоготогт <1> ЕгЬапо! Н!5Ь-аа!1 607Еег 20 гам ТгхеС! !рН 7.4) 1.0 М ХаС! 1 гпМ Е))ТЛ (рН 8.0) )аоргорапо! Еои -за !1 6иЕЕег 20 тМ Тгь-С! !рН 7.4) 0.2 м НаС! 1 гаМ Е))ТЛ !рН 8.0) РЬепо!:сЫого!огт !7:7, г)г) <1> 5М 1Е !рН В.О) Мее11а Л)ЛСУМ тес))ит 2.706 Ргогосо! 24г Аар!л) Аиа(ул(л оЕВасгег!орЬаее ), Ело!а!ея риг(Глсапоп оЕ)с 0А(А Егои Е!г)илг( Си!гигех 2.107 СепЕг!Еоде5 апд КРЕог5 5огча!! 55-34 го(ог ог ес)и!ча!еп( прес!а! Ецо!ргпепЕ ВогояВса(е Рах(еиг рлрес(е Е!и(!р-с) ео!итпь (ВсИ!екЬег & 5ОЬие!!) И'а(ег ЬаЕЬ ог Ьеаппц Ь!ое)с ргехе( (о 47"С ИЛЬастап РЕ52 РЕ52 'ю а ргерагапоп оГ РЕАЕ-сепо!оле, ап ап!оп-ехсЬапНе геяп, сЬас ь охел1 !п сЬи ргогосо! го геточе Ьогг 014А апН К)4А Вот р1асе ог!гашН !угасал.
А ргеячоаеп чегхюп оЕ РЕ52 ь ачаааЫе Егопл )агЬагтап апс) иог)сч ехсеесапц!у лчеН )п ЕЫх ргососо1. Рог еасЬ 15О-пип р1асе!уласе со Ъе рипйей 1О т) оГ а 2:1 х1иггу оГ РВ52 !и 1В тейшп ь гес!нией ЧесЕог5 апд ВасЕег!а! Яга!п5 Ваесег!орЬаВе гесотЬгпап(, Вгосчп ах хгпВ!е гне!1-!хо!а(есГ р1ас)иех оп а !агни оГ Ьас!епа Ргерагел) ах л)ехсг!Ьеа !и Ргососо1 1 оГ ЕЫг сЬарсег. Е. соН воат, дгосчп ах чче!1-лао!аГес(, х!пВ!е ео!оп!ех оп ап аВаг р!а(е 1поси!асс а япН)е со!опу оЕ ап арргорпасе Е.
соН ягаш шсо 25 т! оГ ЕЛХСУМ тейит апд шсиЬасе онеги!НЬс ас ЗО'С Меахиге гЬе 00 оЕ сЬе очегп)НЫ си1илге апс) са!си1асе сЬе пигпЬег оГ сеог)пл! няне СЬе сопчегяоп Еассог:! ОР = ! х )О сеахйп!. ОгонпЬ ас ЗО С !псгеахеь сЬе сЬапсе йас сЬе сепг лчН) пог Ьаче геасЬес) гасигаооп диг!пН сЬе очегплНЬг НгочпЬ репой ТЬе агпоипс оГ сеН НеЬгь лп сЬе тейшп ь )Ьеге(оге )серг со а пншплшп. ВассепорЬаНех асЫес) со а хасигасес! сн1гиге сап апасЬ сн ЕЬе Ма1В ргосеш ргегепс оп сеНи1аг с)еЬг!х, 1еайпН го а попргог)нес!че !пЕессюп. МЕТНО0 1.
0хе а Ъогоя1ка(е Раасеиг р!рес(е Со рк1с а х!пН1е иге!1-!хо!а(ес) Ьас(ег!ОрЬаНе р!ас)ие ш(о 1 ш1 оЕ ЯМ сои(а!и!пН а йор оЕ сЫогоЕоггп ш а япа11 аселН!е ро!ургору1епе (иЬе. 5(оге йе аихрепяоп Еог 4 — 6 Ьошх а( 4'С Со аПочч йе Ъас(егНорЬаНе раг(!с1ех со с)!ЕЕихе Егогп СЬе Сор аНагохе. 2. )п а 25-гп1 сиЬе, пих 0.5 пг! оЕ (Ье Ьас(епорЬаНе хихрепх!оп (-3 х 10х Ьассег!орЬаНех) лч!(Ь 0.1 ш1 оЕ ап онеги!НЬ! си!сиге оЕ Ьас(ег!а. 1псиЪа(е (Ье си1(иге Еог 15 ш)пи(ее ас 37"С.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
