Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 37
Текст из файла (страница 37)
Ртогосо1 3!т йулпе Со!оп!ег апт! Втйтте оу ОХА го Р11гетг 1.137 7. 1Згу ГЬе 6!Гега пяп8 опе от'гЬе тпегЬосЬ Ье1ои. 1~1Ье РХА Ь го Ьерхет! го гЬеЯ1гетг Ьу Ьа1стет Еау гЬе 61гегя со1опу в!т!е пр, оп а аЬее! от с!гу ЗММ рарег апс! а!!ото гЬегп го с1гу ас гоогп гепгрегагпге гог аг!еая 30 ппппгея 1! гЬе УХА и го Ье тхет! го гЬе Я!гетз Ьу стоя-1т!сте гч1гЬ 1тЪт 11! Ьгт 1ау гЬе 6т!гегь оп а аЬеег ог 2х БЯРЕ-ппргецпасет! ЗММ рарег ог оп т!гу рарег, с!ерепс!!п8 оп гЬе гпаппгасгцгег'а гесогппгепт!аГ!оп. 8.
Р!х гЬе 1ЗХА Го ГЬе 61гега пяп8 опе от' ГЬе пгеГЬосЬ Ье!отч. Рот Вайль: Запт!тч!сЬ !Ье 61гега Ъегтчееп пчо аЬеега от" с!гу ЗММ рарег, апт! 6х гЬе 1ЗХА го ГЬе 6!Гегк Ьу ЪаЫп8 Еог 1 — 2 Ьопга аГ 80'С ш а часпшп очеп. ОчетЬа!т!па сап саше тЬе 6!тетя то Ъесотое Ь630е. Хптосе!!о!оте 6!гетт тЬат Ьаче по! Ьееп сотр1ете1у пеотта1таед гшо уе!!отт от Ьтожп т!от!оа Ьа!т!па апт! сЫр чету еая1у. ТЬе Ьас!татооот! от' попзрес66с ЬуЬтЫгеа6оп а!ао !пстеатеь йтатпапсаПу !и гЬта птоа6оп.
Рот стоя-1пйтч гчггЬ 1Лг 1гчйгт Ео!!ою гЬе гпаппгасгигег'а тпягпс6опа Гог 6х!п8 1ЗХА го 61- гега пяпа а сопппегс!а1 с!еч!се тот 6г!а ршроае. 9. НуЬг!с!!ге гЬе 1ЗХА !гппгоЬ!6гет! оп гЬе 61гега го а 1аЪе1ес1 ргоЬе аь с1еаспЪет1 ш Рго!осо! 32. Апу 6!геть пос пьет! Ьптпесбаге!у Ы ЬуЬт!т!!таг!оп теас6опт аЬоо!д Ье ътпет!еате6 Ьептееп ЗММ 6!гать апй зтотет! сочетет! Ы а!опнпотп Ео!! ат тоотп теторетатоте. Рго1осо! 32 НуЬпйкабоп о1 Вас1епа! 0МА оп Гйегь т неь Ркотосос ркоч!0еь Ркосе011кеь то нчвк!О!хе ОЬ)А ггош ггапьгогшес) со1ошеь пшпоЪ|- 1)хес) оп!о 6)сегь тч)гЬ гайо)аЪе)ес) ргоЪеь апс) го гесочег ггош а гпаь!ег р1аге гЬе соггеьропйпВ со!ошеь гЬа! ЬуЪпйге ьресгбсаНу го гЬе ргоЪе.
ТЬеье !есЬпп)иеь аге с)еыВпес) го Ье пьес) тч)гЬ ргоЪеь ЕЬа! аге оп ачегаВе )опВег !Ьап 100 пис1ео!Ыеь )и )еп8!Ь. Ме!Ьос)ь гог ьсгееп)п8 Ьас!е6- а1 со)ошеь мл!Ь ьЬоггег гайо!аЬе)ес) о!18опис!ео66еь аге 8)чеп ш СЬар!ег 10. ТЬе рипгу о) а гайо)аЪе! ес) РЫА ог В ХА ргоЬе )ь ппроггап! счЬеп ьсгееп)пВ р1аыпЫ-соп!а)п!пц Ьасгепа) со1ошеь. С)опес1 РХА )га8шепгь ехс)ьес) 6ош р1аяиЫь аге сопипоп1у пьес) !о ргераге !Ье ЬуЬпйха6оп ргоЬе. Ногчечег, ечеп а япа)) аиюип! оК соп!аиппабоп Ьу чес!ог ьеопепсеь гч)П Вепегасе ргоЬеь !Ьаг ЬуЬпйхе го Ъассепа1 со)ошеь сгаиьгогшес) Ъу апу р!аяиЫ пьес) )и пю1еси1аг с)ошпц. ТЬгь!ас)с оГ ьресгбс!гу сап аЬо оссиг гчЬеп иь!пц ргоЬеь ргерагес) ггош ЬасгепорЬаВеь то ьсгееп р)оп)6ь (ог ч!се чегьа), япсе шапу чесгогь сои!а)п ггаВшепгь ог ЕЬе )асс, цепе.
То епьпге ЕЬа! а ))ХА Тгакшеп! гЬа! гч)1! Ъе пьес) го ргераге а ЬуЬг)йгабоп ргоЬе с)оеь по! соп!аш чесгог ьес)пепсеь, юе гесопппепс) рип)уш8 гЬе )1)х)А гЬгоикЬ гьчо Ве)ь (а8агоье ог ро1уасгу1агиЫе) аь с)еьсг)Ьес) гп СЬаргег 5, Ье!оге саггу)п8 ои! !Ье гайо)аЬебиц геас6оп. ТЬе го!)отч!иц ргогосо) гь с)еь)Впес) гог 30 с)гсп1аг п)!тосе)!и)оье 61сегь, 82 шш !и йагиесег. Арргорпаге ас))ияшепгь Со гЬе чо)шпеь ьЬоп!6 Ъе шас)е гчЬеп саггу!и8 ои! ЬуЪпйха6оп геас!юпь тч)гЬ с)!)Тегеп! пипзЬегь ог ь!хеь ог 61гегь. МАТЕИАЕ5 СА)!Т!ОН: Р1еаье ьее Аррепйх 12 1ог арргорпа!е Ьапг)1)ик о! пса!епа1ь шаг)сед сч!!Ь <1>.
Впйегв апд 6016))опв Р!еаье ьее Аррепйх ! 1ог сошропеп!ь о1 ь!ос)с ьо1и6опь, Ьи!)егь, аис) геакеп!ь. О!!и!е ь!ос)с ьо1и6опь !о ЕЬе арргорпа!е сопсеп!га6оиь. согтагп!с!е <! > Орг!опа1, р1еаае ьее гЬе раис! ои РКЕН'г'ВК!О!УАТ!ОХ АЫ0 НУВК!О!а.АТ!ОЫ 5ОП1Т!ОЫ5 уо)- )оийив Яер 5. Маиу ЪассЬеь о! геавеиг-ксиве уопиаиггае аге ьитвс)епс1у риге со Ье паев члгЬои! ТиггЬег ггеагсоеиг. Ночгечег, 1)апу уе11о1ч со!ог и ргеьеиг, гЬе Гоггпагигае ьЬои!д Ъе с)е)ои)аеа !р1еаае ьее Арреийх 1). РгеЬуЬпсйхапоп)ЬуЬпс)Уха!!оп ьо!ипоп Р!еаье аее ГЬе раие1 оп РКЕНУВК!О!ЛАТ!Он АЫ0 НУВК!О!УАТЮН 5ОШТ!ОЫ5 го1!ой)ив 5гер 5. Ргогоси! 32: НуЬгаЫ(гас(оп ОГ Вас(ег(а! РХА оп Р!!сесе 1.139 7х ВГОТТО <1) 1х В1.ОТТО (Воч)пе Еасго ТгапвГег ТесЛшцие ОРВтпег 31оЛпвоп ег а!. 1984)) В ав епесВче а Ыос1сЫВ аПепс ав РепЛагй'в геацепг, Ьиг гписЛ !евв ехрепяче.
ВВОПО,В И. В .а" Во.р ВВВ(ВВ ° . В ВВОВ, ВЯВ И~ . В ХГВ .~ се!па !о ргес)рПа(е. К Ьас)сВгоипс) ЛуЬгЫ)аабоп В а ргоЫегп, Л(Р-40 гпау Ье асЫег( (о (Ле ЛуЬгс)аа()оп юПи (юп 1о а Ппа) сопсеп(габоп оГ 7%. ВЮТТО аЛои!д по! Ье иаес) аа а Ыос(с)ОВ геаВеп( ивЛеп гас))о(аЬе1ес( ЮЧА )а иаес) аа йе ЛуЬпе))хаВоп ргоЬе, Ьесаиае о( йе роаа)Ь)П(у !Ла( йе е3пее1 гпПЕ гпау соп(а)п а(ап)Гвсап( атоипга о1 КГ4аае асВИ(у. (п (ЛВ я(иабоп, 5х ОепЛагс)1'а ю)и(юп (р!еаае аее Аррепе()х 7) аЛоиЫ Ье аиЬаП- (и!ес( Гог ВЮТТО. РгегчаьИ(пВ ю!ипоп бх %С ог бх %РЕ ЯаьИ ю!иВоп 7 2х %С 0.1% (вч)ч) 5Р5 ИгааИ ю!ипоп 2 1х %С О.!% (вч(ч) 5О5 ИгазИ ао)ипоп 3 0.1х %С О.!% (вч(н) 57)5 Мес1!а ГВ, у7, ог Тенгпс ВгогИ соп(а(п(пВ ГИе арргорпа!е ап((Ьго!(с Нос!е)с Ас1((15 ап(1 О11копос1ео6(1е5 Рг!Гегь гЫГИ гттоЬг(саес! 73)в)А Ггот Ггапауогтес( со!оп(еь Ове Гв!геев ргерагев) ав в(евсг)Ьее) )п Ргогосо! 31.
РУОЬЕ5 аеР-!аЬе!ес( с)оиЫе-а!сапе)ес) 73А)А ргоЬе ог 5уп!ИеВс о!(Вопис3ео!(с)е ргоЬеь Ргераге йе ргоЬев ав в(евсг!Ъев) (п СЬаргег 9 (Гог в(оиЫе-вггапг(ев( ЕЗУСА ргоЬе) ог СЛаргег 10 (Гог о135опис!еогЫе ргоЬев). Рог а ГиггЛег г)(всивяоп оГ ргоЬев Гог со!опу ьсгееп(пй р!саве атее гЛе ргогосо) !пегов(исгюп. Вегвчееп 2 х 10в апв) 1 х 10в сргп оГ вор-1абе1ее( ргоЬе (врес(6с асс(ч!гу -5 х 10г сргп/)гП) вЛои1д Ье ивов) рег гпПППгег оГ ргеЛуЬгЫгеаВоп во!ибоп. ИвЬеп вор-)аЬе1ее) со)4А ог КМА Ь ивев) ав а ргоЪе, ро!у(А) ас а сопсегигаВоп оГ! РВ т1 вЛои)О Ье !ос!ив(ев) !п йе ргеЛуЬг(в)(гаг(оп апв) ЛубгЫиаВоп во!сиюпв со ргечепг гЛе ргоЬе 1гогп Ь(псПпП го Т-псЛ вециепсеь гЛаг аге соинпоп вп еи(сагуоос Ег)в)А.
прес)а1 Ецо( рспепЕ Во(!(пд чча(ег Ьа1И Сlааа Ьа)г(ОВ с()зИ Н5 х 7.5 х 5 сгп) ог огИег ИуЬггс)(ла!(оп сИатЬег (псиЬа(огь ргеае1 10 42 "С (гу ргеИуЬггс((агпе т Гогтатгс(е), 50"С, апс( 6В" С К)х)АТ!вгЕ НУВК101УАТ1ОЛ( СНАМВЕК5 )пчеа()Ва!Ога рге(ег 1о )псиЬа(е Гв((ега )п Леа(-аеа)аЫе р1аа()с ЬаВа (5еага 5еа)-А-Меа) ог ес)Ыча(епо г)иге ргеЛуЬгсиа(оп апс1 ЛуЬг)В(аа((оп а(еря гайег (Лап )п сгуа(аП)хабоп с)(аЛея ТЛе Гоппег тейос1 ачок)а егпа гч)й ечарога1юп апс), Ьесаиае йе аеа)ес) ЬаВа сап Ье юЬтегВес! )п а ъча1ег Ьа(Л, епаигеа (Ла( (Ле ! га!игеа г)иппВ ЛуЬпсйгабоп апс) ччааЛ)пВ аге соггес!. ТЛе ЬаВа гпип Ье орепег( апе( геаеа(ПЫ ивЛеп 3 пВ ЬиВегя То ачо)с) гас))оас()че соп(апмпабоп оГ (Ле вча(ег Ьай, (Ле геаеа)ее) Ьац спаса)п!пВ гасйоасичои)с) Ье ьеа)ег( )паЫе а ьесопе3, попсоп(ат!па!ее) Ьай оп1у а ьгпаП пигпЬег о( Я!!ега аге юЬ)ес!ее! со ЛуЬпс))аа!)оп, йеп а В)ааа ессеи-!ор Ьо(33е йа( йа йе ' ! ~ гоПега о1 а ЛуЬг(е)(аа()оп очегв сап Ье иаес! )п р)асе о( а с~уа!аПыа()оп с()аЛ ог 5еа1-А-Меа! ЬаВ.
ТЛеае Ьои)еа апс) очепъ Лане (Ле ае(чап(аВе йа( япаП но1игпеь оГ ЛуЬг)с))табоп ю)ибоп сап Ье иьег) апс( йе ЛуЬг(е(иа((оп (егпрегаигге сап Ье ассига(е)у соп1гоПес). Еог Гиг(Лег де!я)я р)еаае аее йе рапе) оп НУВК)О!ЛАТ(ОЫ СНАМВЕК5 )п СЛар1ег 6, Рго1осо! 7 О, 1.140 СЬаргег 1: Р!алтЫл апс7 ТЬегг 1Ле~и!пелл гп Мо!еси!аг С!олЕлц Касбоас77че Ел!с <1> ВешаЫе а1гегпабчех ло гайоасцче !п7с аге сЬеш1!иш1пеьсенг шаг7сегл ача!1аЫе Егош цлгалацене !С!оцоо.
ТЬе шаг1сеп сап Ье ше6 гии!Вр1е л!шел апс1 лЬои16 Ъе ехроле6 го 6иогелсепг 1!цЬг лия ргюг ло а пе1ч гнипс7 оЕ аигогац!оцгарЬу. ~Яагег-ьо7иЫе 81ие хг707с Еог ехагнр!е, 77НЛ7 цг!с, Йллг!Ьилес7 Ьу ЕаЬегСалге!1. 'чуЬагтал ЗММ рарег ог едигча7елл ууоосЕел гоогЬрус7сх ог Елоси1аплц леес77е Адййопа! КеарепЕ5 57ер 75 оЕ ГЬ7х ргогосо! гедиугеь ЕЬе геаделгл 71ллес7 т Рголосо! 7 ог 4 оЕ ГЬЕл сЬаргег. 57ер 75 тау а7ю гедшге ЕЬе геацелп 77лгес7 т 'СЬаргег 8, Ргогосо! 72. МЕТНО0 Ргела7ацЬлщ апс! РгеЬуЬг!йка6оп оЕ ЕЬе НЕегц 1.
р!оал ЕЬе Ъа1сес1 ог сголю!!01сесЕ 6!гега оп гЬе югЕасе оЕ а ггау оЕ 2х 55С цпл!1 ЕЬеу Ьаче Ъесоиле лЬогоццЫу лчепес1 Егот ЪепеагЬ. 5цЬплегце ЕЬе 6!гега Еог 5 пшшлея Весаиле логпе ЬалсЬел оЕ ппгосе11и1оле Ецлегх ыче1! апд Вьгогс с7иг1пц ЬуЬлйгагюп апс! ьиЪвес!иепг Вгу!пц, 6 Ьесошел с7!Ебси!с ло а7!цп гЬе опепгалюп с1оь оп йе аилогайоцгарЬ аис7 61гег ог ацаг р!але. ТЫь ргоЫеш сап Ье а11ечлаге6 ло югпе ехгепл Ьу ашос!ампц лЬе с7гу 6!села Ьеичееп р!есел оЕ с7ашр 3ММ рарег ЬеЕоге иле Е! 0 ря !О 70 1сцлсшл! Еог 10 ш1 пилах он 1гдш6 сус!е!. 7чу!оп 60егл с7о пог юбег 6ош лЬ1л ргоЫеш. 2.
ТгапаЕег лЬе 61легх ло а 81ала ЬаЫпц сЕ!аЬ соплаш1пц ал 1еаал 200 пл! оЕ ргелчаауппц ю!цлюп. цлас1с ЕЬе 61гега оп гор оЕ опе аполЬег !и лЬе ю!цпоп. Сочег лЬе йьЬ лч17Ь Яагап Хгар апс! ЛгапаЕег Ь Ло а голаппц р1аЛЕоггп 1и ап 1псцЬалог. 1псцЬаге ЛЬе 61гегз Еог 30 ш!пцгех ал 50'С. ТЬ!х ргелчалЬшц хлер гегпочеь Ьассепа1 со1ону ВеЬгЬ аис7 сап юЬяаппа1!у гес7исе Ьас1сцгоинд ЬуЬпйхапон, еьрес1а1!у лчЬеп лсгееп!нц со1ойеь ас Ь1цЬ пепл!гу.
!и лЬ1а аи6 а1! лиЬьедиенг яеры йе 61!ела лЬои16 Ье л1нлг1у ац!!асей со ргеченс гЬенл Егош лпспнц ло опе апогЬег. Ро пол а1!олч гЬе 61легл го Вгу ал апу лгаце Виг1нц гЬе ргеъчаьЫпц, ргеЬуЬпйхагюп, ог ЬуЬгйгеагюп игера 3. Сепг!у легаре гЬе Ьаслепа! с1еЬНз Егош 7Ье ялгЕасеа оЕ 7Ье 61лега цяпц К!шлч!реа юа1сес1 1и ргелчаауоиц хо1цбоп. ТЫа хсгар1пц епялгеа гешоча1 оЕ со1опу с1еЬНа аисЕ с1оеа иол айесл ТЬе !пгепягу ог аЬагрпеаа оЕ роя6че ЬуЬНйгагюп яцпа!я 4. ТгапьЕег лЬе 6!гела со 150 гп1 оЕ ргеЬуЬНйкагюп ло1цлюп 1и а 81ааа ЬаЫпц сЫл. 1псиЬале ТЬе 61гегл лч!7Ь ац1лаг!оп Еог 1 — 2 Ьоцга ог 7иоге ал лЬе арргорпале лелпрегалцге (Е.е., 68"С лчЬеп ЬуЬНйгапоп ь ло Ье сагпес1 оцл 1и адцеоца ао1шюп; 42'С ъчЬеп ЬуЪгЫ!хагюп ь ло Ъе сагНес1 оцг ш 50нуо ЕогшагпЫе; р1еахе аее рапе1 Ье!олч).
ТЬе 61гегв хЬои!д Ье сошр!еле1у сочеге6 Ьу йе ргеЬуЬпйхаиоп ю1ипнп Ер1еале лее ЕЬе ране! оп АЕТЕВНАТ!УЕ Нг'ВВ!О!2АТ!ОН СНАМВЕВВЬ Оиг!нц ргеЬуЬпйхапоп, л!Лег оп йе шлгосе1- 1и1оле 6!гег йал поплрес!6са11у Ь|пд ыпц!е- ог доиЫе-ллгаиией ОНА Ьесогне Ынс7се6 Ьу ргоге!па 1н йе В!.ОТТО. Ац!гал!нп еплнгел лЬаг ЕЬе Ел!гегл аге сопл!пиона!у ЬагЬе6 1и апс1 ссчейу снагес1 Ьу лЬе ргеЬуЬг16!айаг!оп Вшс!.
0епаЕпгабоп оЕ ЕЬе РгоЬе аплЕ РегЕоггпапсе оЕ НуЬг!ЕЕ!Еабоп 5. Елепалцге ллр-!аЬе!ес1 с!оцЫе-ягаис1ес! Е71чЕА Ьу Ьеаппц ло 100"С Еог 5 пшшлеы СЬ711 ТЬе ргоЬе гарЫ1у ш ке лчалег. А!легнапче1у, йе ргоЬе шау Ье депагигес7 Ьу анонц О. ! чо1игпе оЕ 3 лл НаОН. Айег 5 ш!оплел аг Ргогосо( 32: Нубг|д|алт(оп о! Вастег!и! 0ИА оп Р!!тест 1.141 РКЕНУВК!13!ХАТ!О1Ч АЫО НУВК!13!ХАТ!ОЬС 5ОЕС)Т1ОЫ5 'чнЬейег ог пос со иае а ргеЬубпд!гас!оп со!ис!оп списал!лц Еоггпалиде В !агце!у а гпаиег о( регятпа! ~ ргетегепсе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
